P2 purinoceptors signaling in fibroblasts of rat subcutaneous tissue

Mestrado em Biologia Molecular e CelularO tecido conjuntivo parece estar envolvido na génese de diversas condições patológicas. O aumento da rigidez do tecido conjuntivo, resultante da fibrose, pode constituir um factor importante no mecanismo patogénico da dor crónica resistente a fármacos (Langevin & Sherman, 2007). Por outro lado, os nucleótidos extracelulares parecem estar envolvidos na fisiopatologia da dor crónica (Burnstock, 2001). Assim, este estudo teve como objectivo averiguar o efeito dos nucleótidos de adenina e uridina na proliferação e síntese de colagénio tipo I de fibroblastos do tecido subcutâneo de rato em cultura. Os resultados obtidos mostram que a incubação com UTP (0.3-100 M, n=5) induz um aumento da proliferação e da produção de colagénio tipo I, o qual é dependente da concentração. Contrariamente, o agonista selectivo dos receptores P2Y2, o MRS 2768 (10 μM, n=3), não teve qualquer efeito no que se refere à proliferação, mas diminuiu significativamente (P<0.05) a síntese de colagénio tipo I. Uma vez que o aumento da produção de colagénio induzida pelo UTP (100 μM) foi proporcional ao aumento do número de células (proliferação celular),podemos especular que este aumento se deve ao aumento do número de células per si do que a uma maior actividade sintética de cada célula. Assim, ao normalizar os valores do colagénio tipo I em relação aos valores obtidos do MTT para os mesmos momentos/dias, deixamos de observar diferenças estatisticamente significativas entre o controlo e as células expostas ao UTP. Uma vez que os receptores P2Y2 não parecem estar envolvidos nesta resposta do UTP (100 μM), esta poderá estar a ser mediada pela activação dos receptores P2Y4 e/ou P2Y6. Considerando que o RB-2 (10 μM, n=5), um antagonista não selectivo que actua preferencialmente no subtipo de receptores P2Y4, não foi capaz de modificar a resposta induzida pelo UTP (100 μM), os receptores P2Y4 parecem também não estar envolvidos. Por outro lado, o MRS 2578 (100 nM), um antagonista selectivo dos receptores P2Y6, atenuou de forma significativa o aumento induzido pelo UTP (100 μM). A corroborar os nossos resultados, uma análise imunocitoquímica mostrou uma imunorreactividade positiva contra os receptores P2Y2 e P2Y6, mostrando um padrão de marcação citoplasmático/membranar, o qual é típico para este tipo de receptores, ao contrário do padrão nuclear exibido pelo anticorpo contra os receptores P2Y4. Relativamente ao envolvimento dos receptores sensíveis ao ADP, os resultados obtidos mostraram que o ADPβS (10-100 μM, n=3-6), um análogo estável do ADP, não parece induzir efeitos significativamente diferentes (P>0.05) na proliferação celular. Contudo, a sua incubação continuada aumentou a produção de colagénio tipo I de forma dependente da concentração (P<0.05). De modo a identificar os receptores purinérgicos envolvidos neste efeito, testamos o ADPβS (100 μM) na presença do MRS 2179 (0.3 μM), do AR-C 66096 (0.1 μM), e do MRS 2211 (10 μM), os quais antagonizam selectivamente os receptores P2Y1, P2Y12 e P2Y13, respectivamente. O efeito facilitatório induzido pelo ADPβS (100 μM) foi atenuado de forma significativa na presença do antagonista dos receptores P2Y1, o MRS 2179 (0.3 μM, n=3), sem ser afectado pelo antagonista dos receptores P2Y12, o AR- C 66096 (0.1 μM, n=3). Pelo contrário, o MRS 2211 (10 μM, n=2) potenciou o aumento da produção de colagénio induzida pelo ADPβS (100 μM), indicando assim que a síntese de colagénio tipo I induzida pelo receptor P2Y1 pode estar a ser parcialmente influenciada por uma activação síncrona do receptor inibitório P2Y13. Por último, uma análise por imunocitoquímica mostrou que estas células apresentam imunorreactividade positiva para os receptores P2Y1 e P2Y13, exibindo um padrão citoplasmático/membranar, contrariamente ao padrão nuclear dos receptores ostentado pelo anticorpo contra os receptores P2Y12. Concluindo, a remodelação da fáscia superficial induzida pelos fibroblastos parece ser regulada por um balanço entre a activação dos receptores P2Y2 e P2Y6, assim como dos receptores P2Y13 e P2Y1. Clarificar as vias que conduzem ao processo de fibrose pode representar uma oportunidade para esclarecer o seu envolvimento na patogénese da dor crónica musculo-esquelética, bem como ser útil no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas.Connective tissue may be involved in the pathogenesis of a wide variety of disease conditions. Increased connective tissue stiffness due to fibrosis may be an important link to the pathogenic mechanism leading to drug-resistant chronic pain (Langevin & Sherman, 2007). In addition, extracellular nucleotides seem to be involved in the pathophysiology of chronic pain (Burnstock, 2001). Therefore, we aimed at investigating the effect of adenine and uridine nucleotides on the proliferation and synthesis of type I collagen by rat fibroblasts from subcutaneous connective tissue. The results showed that continuous incubation of UTP (0.3-100 M, n=5) concentration-dependently increased fibroblasts proliferation, as also increased the synthesis of type I collagen above the control levels. Conversely, the selective P2Y2 agonist, MRS 2768 (10 μM, n=3), was devoid of effect in what concerns proliferation, but significantly (P<0.05) decreased type I collagen synthesis. Since the increase in type I collagen synthesis induced by UTP (100 μM) was proportional to the increase in the amount of cells in the culture (fibroblasts proliferation), we speculated that such an increase could be related to the increase in the cell number rather than a higher synthetic activity. Thus, we performed a more detailed data analysis, in which we normalized type I collagen production taking into consideration the MTT values obtained at the same time points, and we observed no longer significant differences between control and UTP-exposed cells. Discounting the contribution of MRS 2768-sensitive P2Y2 receptors, UTP (100 μM)-induced increase in cells proliferation could be due to P2Y4 and/or P2Y6 receptor activation. Since RB-2 (10 μM, n=5), a non-selective antagonist that acts preferentially on the P2Y4 subtype, did not modify the effect of UTP (100 μM), P2Y4 does not seem to be involved. In turn, MRS 2578 (100 nM), which is a selective P2Y6 antagonist, significantly attenuated UTP (100 μM)-induced increase. To corroborate our results, an immunocytochemistry analysis showed a positive immunoreactivity against the P2Y2 and P2Y6 receptors exhibiting a cytoplasmic/membrane labeling pattern, which is typical for those receptors in many different cells, conversely to the nuclear labeling pattern exhibited by the antibody against the P2Y4. To investigate the involvement of ADP-sensitive P2 receptors on cell proliferation and extracellular matrix production, fibroblast cultures were continuously incubated with the stable ADP analogue, ADPβS (10-100 μM). Results obtained with ADPβS (10-100 μM, n=3-6) showed no significant (P>0.05) differences in fibroblast cells proliferation. However, a continuous incubation with ADPβS (10-100 μM, n=2-5) concentration-dependently increased type I collagen production by fibroblasts (P<0.05). In order to identify which purinoceptor(s) that could be mediating this effect, we tested ADPβS (100 μM) in the presence of MRS 2179 (0.3 μM), AR-C 66096 (0.1 μM), and MRS 2211 (10 μM), which antagonize selectively ADP-sensitive P2Y1, P2Y12 and P2Y13 receptors, respectively. The facilitatory effect of ADPβS (100 μM) was significantly attenuated in the presence of the P2Y1 antagonist, MRS 2179 (0.3 μM, n=3), without being affected by the P2Y12 antagonist, AR- C 66096 (0.1 μM, n=3). In contrast, MRS 2211 (10 μM, n=2) potentiated the effect of ADPβS (100 μM) on type I collagen synthesis, thus indicating that the P2Y1-receptor-induction of type I collagen synthesis may be partially counteracted by synchronous activation of the inhibitory P2Y13 receptor. Finally, an immunocytochemistry analysis showed that these cells exhibit immunoreactivity to P2Y1 and P2Y13 receptors with a cytoplasmic/membrane staining pattern, conversely to the nuclear pattern of P2Y12. Concluding, a delicate balance between the activation of P2Y2 and P2Y6, as well as P2Y13 and P2Y1 purinoceptors, might regulate fibroblast’s induced superficial fascia remodeling. Targeting the pathways leading to fibrosis may represent an opportunity to clarify its involvement in the pathogenesis of musculoskeletal chronic pain and it may be useful for designing novel therapeutic strategies to overcome this disease

Using Six Sigma to improve complaints handling

Currently, companies are in increasingly competitive environment in which customers’ satisfaction and loyalty are vital factors in the success of any organisation. This requires the use of continuous improvement methodologies, such as Six Sigma, which enable companies to improve customer satisfaction and meet their expectations. This paper describes a case study carried out in a company from the automotive industry that has selected a Six Sigma project to respond to a decrease in customer satisfaction regarding the response time of the complaints. The objective of the project was to improve the process of analysis of defective products through the identification of the variables that influence the process and proposes improvements to reduce the time of analysis to defective products. Results are positive and can encourage managers from other industry sectors or even services to improve their customer complaints handling process using Six Sigma.FEDER - Funds by Programa Operacional Fatores de Competitividade – COMPETE, Projeto FCOMP-01-0124-FEDERFundação para a Ciência e Tecnologia (FCT

Preparação, caracterização e modificação estrutural de materiais de carbono mesoporosos para aplicações em adsorção

Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 200

Marketing turístico internacional : uma análise sobre as estratégias do Plano Aquarela

Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Centro de Excelência em Turismo, 2014.O fluxo de turistas estrangeiros no Brasil cresceu a partir da promoção internacional do país, porém, nem sempre as estratégias adotadas foram eficazes e acabaram não gerando os resultados esperados. A mudança das estratégias de promoção, observando os cinco segmentos turísticos (sol e praia, ecoturismo, cultura, esporte e negócios e eventos), e selecionando os produtos brasileiros a serem inseridos de forma estratégica, ampliou o número de mercados que o país poderia atingir. O objetivo deste trabalho foi descrever as estratégias governamentais de promoção e de marketing internacional do Brasil como destino turístico. Para isso, este trabalho dividiu-se em três partes. A primeira parte tratou-se de uma análise do conteúdo histórico-evolutivo de criação do Instituto Brasileiro de Turismo (Embratur). A segunda expôs as estratégias de promoção adotadas no decorrer do processo de inserção do país no mercado externo. Na terceira parte foram apresentadas a estrutura metodológica (análise exploratória e descritiva, e entrevista semiestruturada) de realização do trabalho e a discussão dos resultados alcançados. ______________________________________________________________________ ABSTRACTThe flow of foreign tourists in Brazil grew from the international promotion of the country, however, the strategies adopted have not always been of great value and it was not yielding the expected results. The change of promotion strategies by observing the five segments of interest (sun and beach, ecotourism, culture, sports and business and events) and selecting the brazilians products that would be strategically inserted increased the amount of countries that Brazil could achieve. The aim of this study was describe the promotion strategies that were used to promote Brazil in the foreign market as an tourism destination. This monograph was divided into three parts. The first part was an analysis of the historical evolution of Instituto Brasileiro de Turismo (EMBRATUR). The second part exposed the promotion strategies adopted in the process of inserting the country in international market. The third part were evidenced the results achieved through the defined strategies

Desafios da transcrição e tradução de audiências jurídicas

Mestrado em Tradução EspecializadaA transcrição é uma atividade geralmente subestimada, que surge muitas vezes aliada, numa fase posterior, à tradução. O presente projeto apresenta a transcrição e a tradução como duas tarefas que se complementam, quando aplicadas à área jurídica. Por outro lado, aborda os tipos de transcrição, bem como o recurso aos softwares de reconhecimento de voz para efetuar esta tarefa. Nele se reflete, ainda, sobre os desafios da tradução jurídica e, mais concretamente, sobre as dificuldades encontradas por quem traduz um texto cujo ponto de partida é a transcrição.Transcription is an activity extremely underrated and often is, at a later stage, combined with translation. This project presents both transcription and translation as two complementary tasks, within a legal scope. Besides that, it also presents the types of transcription, as well as the use of voice recognition softwares to transcribe. Moreover, this project establishes the challenges of the legal translation and more specifically, the obstacles for those who translate a text that was a previous transcription

Controlo de custos na Moldegama Moldes Técnicos S A

O presente relatório enquadra-se no estágio curricular da parte não letiva do Mestrado de Controlo de Gestão, do Instituto Superior de Contabilidade e Administração de Coimbra, que ocorreu nas instalações da empresa Moldegama - Moldes Técnicos, S.A e teve a duração de 960 horas, com início em Janeiro e término em Julho de 2014. A escolha do tema recaiu principalmente numa área que me suscitasse interesse e que fosse simultaneamente ao encontro às necessidades da empresa. O relatório tem como objetivo primordial dar a conhecer a importância da Contabilidade de Gestão e mais especificamente do Controlo de Custos (CC) para uma empresa de moldes, que apresenta vários centros de custos, e contrapor o método das Secções Homogéneas ao Activity Based Costing (ABC). A metodologia utilizada para a elaboração deste relatório foi essencialmente a pesquisa de artigos em revistas científicas e em teses/dissertações que explorassem e descrevessem o CC e suas implicações e o método descritivo para apresentar as tarefas realizadas durante o estágio. A principal conclusão retirada da teoria é que um adequado Controlo de Custos é fundamental para o sucesso de uma empresa. No entanto, na empresa acolhedora é um processo ainda em desenvolvimento. O estágio foi uma oportunidade para criar algumas rotinas de CC e permitiu o primeiro contato com a realidade empresarial, desenvolvendo capacidades de trabalho em equipa e em open space e estabelecer ligações entre teoria e prática

Alexitimia e implicações no processo terapêutico : a visão do terapeuta

Tese de mestrado, Psicologia (Secção de Psicologia Clínica e da Saúde, Núcleo de Psicoterapia Cognitiva-Comportamental e Integrativa), Universidade de Lisboa, Faculdade de Psicologia, 2016A alexitimia é definida de acordo com três elementos fundamentais: dificuldade em identificar emoções, dificuldade em comunicar emoções e pensamento orientado para o exterior (Taylor, Bagby, & Parker, 1997). Foram realizados estudos que demonstram algumas conclusões acerca do impacto que um nível elevado de alexitimia pode ter no processo terapêutico, demonstrando que este tipo de funcionamento pode estar associado a piores resultados terapêuticos e a sintomas residuais após a terapia (e.g., Ogrodniczuk, Piper, & Joyce, 2004). O presente estudo, exploratório e qualitativo, visa potenciar o aumento da compreensão das implicações de um nível elevado de alexitimia no processo terapêutico, de acordo com a perspetiva do terapeuta. A recolha de dados baseou-se na realização de entrevistas semiestruturadas a sete participantes (membros efetivos da Ordem dos Psicólogos Portugueses). A análise temática dos dados, através da utilização do software QSR NVivo 11, permitiu a criação de um sistema hierárquico de categorias. Os resultados permitem perceber que os terapeutas estão, de forma geral, familiarizados com a alexitimia e que têm este conceito em conta na sua prática terapêutica. As principais implicações de um nível elevado de alexitimia parecem estar ao nível do estabelecimento inicial da relação terapêutica, da manutenção do processo terapêutico, da dimensão dos resultados terapêuticos e do impacto no próprio terapeuta. Foram salientadas estratégias de intervenção da área Cognitivo-Comportamental, da Terapia Existencial-Humanista e algumas estratégias transversais a diversas orientações teóricas como potencialmente úteis neste contexto. Finalmente, apresentam-se algumas limitações do presente estudo e sugestões para investigações futuras.Alexithymia is defined by three main elements: difficulty in identifying feelings, difficulty in communicating feelings and externally-oriented thinking (Taylor, Bagby, & Parker, 1997). Studies show an impact of a high level of alexithymia in the therapeutic process, with worse therapeutic results and residual symptoms after therapy (e.g., Ogrodniczuk, Piper, & Joyce, 2004). This exploratory and qualitative study aims at increasing the understanding of the implications a high level of alexithymia has in the therapeutic process, from the therapist’s perspective. Data was collected by conducting semi-structured interviews to seven participants (full members of the Portuguese Order of Psychologists). A thematic analysis was done with QSR NVivo 11 software and enabled to create a hierarchic category system. The results allowed to conclude that therapists are generally familiarized with the alexithymia concept and take this concept into account in their therapeutic praxis. The main implications of a high level of alexithymia seem to be related to the establishing of the therapeutic relationship, to the maintenance of the therapeutic process, to the size of the therapeutic results and the impact on the therapists themselves. We highlighted intervention strategies in the cognitive-behavioural area, in existential-humanistic therapy and some transversal strategies to several theoretical orientations as being potentially useful in this context. Finally, some limitations of this study are referred and future investigations are suggested