Characterising the formation and functional role of vesicular clustering during Influenza A virus infection

Tese de mestrado em Microbiologia Aplicada, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2017Os vírus Influenza, que pertencem à família Orthomyxoviridae, estão divididos em quatro tipos A, B, C e D (Hause et al. 2013; Hause et al. 2014). Entre estes, o influenza A (IAV) é o vírus que causa maior impacto na saúde pública. O seu reservatório natural são as aves marinhas, no entanto possui a capacidade de gerar infeções zoonóticas encontrando-se disseminado em muitas espécies de aves e mamíferos (Acheson 2011; Taubenberger & Kash 2010). Nos seres humanos, o IAV é o patógeno responsável pela gripe, uma doença aguda respiratória associada a alta morbidade e mortalidade (Lofgren et al. 2007). O IAV é composto por um invólucro viral derivado da membrana plasmática da célula. Este envelope é revestido por uma camada externa de proteínas virais, designadamente hemaglutinina e neuraminidase. O interior do virião contém o genoma viral, constituído por oito complexos ribonucleoproteicos (vRNPs). Cada vRNP é composto por um dos oito segmentos de ácido ribonucleico viral que codificam para diferentes proteínas virais. Os vRNPs funcionam como unidades independentes sendo necessário um conjunto completo de oito vRNPs diferentes para a montagem de uma partícula infeciosa (Fields et al. 2007). Os vRNPs são transportadas por piggyback em vesículas destinadas à periferia da célula através da interação entre a polimerase 2 viral e a GTPase Ras related in brain 11 (Rab11) (Amorim et al. 2011; Eisfeld et al. 2011; Momose et al. 2011). Em homeostasia, o Rab11 está envolvido na reciclagem de proteínas endocitadas. Regula a formação, movimento e fusão de vesículas originárias do compartimento de reciclagem de endossomas e encontra-se espalhado pelo citoplasma (Grant & Donaldson 2009). Em células infetadas, o Rab11 acumula no citoplasma formando agregados vesiculares. Sabe-se que estas vesículas são heterogéneas, compostas por membrana simples e dupla (SMV e DMV, respetivamente), o que indica que o IAV conduz não só ao agrupamento vesicular mas também ao rearranjo das suas membranas (Vale-Costa et al. 2016). Este trabalho permitiu fundamentar um modelo alternativo para a montagem genómica do IAV, em que o agrupamento vesicular pode funcionar como uma plataforma induzida pelo virus para a criação de hotspots de vRNPs. A alta co-localização entre o conjunto de todas as vRNPs permitiria a ocorrência das interações RNA-RNA necessárias à junção do genoma completo composto pelos oito vRNPs. O agrupamento vesicular surge assim como um passo essencial no ciclo replicativo do IAV. Pelo que, a definição da cronologia de eventos que levam à sua maturação e as alterações na composição vesicular tornam-se fundamentais para compreender os mecanismos de montagem genómica do IAV. Neste trabalho experimental foi aplicada uma multi-metodologia de crio-microscopia eletrónica (EM). A razão da escolha dos métodos de crio-EM baseia-se na capacidade que estas técnicas têm para preservar os detalhes ultra-estruturais sem introduzirem os artefactos morfológicos de volume, forma e desnaturação de epitopos associados aos métodos cuja abordagem é puramente química (Studer et al. 1989). No entanto, para a sua aplicação, estes métodos tiveram que sofrer otimizações. Os mesmos permitiram elucidar o modo como a agregação vesicular se forma em células A549 que expressam constitutivamente GFP-Rab11 durante a infeção e qual a função das vesículas agregadas no ciclo replicativo do IAV. A metodologia de crio-EM usada incorporou duas técnicas conhecidas na área: a técnica de congelamento de alta pressão e de fixação química por substituição a baixas temperaturas e a técnica de Tokuyasu. A primeira utiliza a baixa temperatura do azoto (-196ºC) e alta pressão (aproximadamente 2000 bar) para crio-imobilizar as amostras. A técnica permitiu a preservação celular para análise morfológica e a quantificação vesicular (sem introdução de artefactos de fixação química). A segunda técnica, Tokuyasu, também tira partido da baixa temperatura do azoto para crio-imobilizar as amostras e permite manter as estruturas hidratadas para uma imunomarcação ótima. Esta técnica foi usada para discernir a origem das estruturas vesiculares em estudo. As metodologias usadas neste trabalho foram alvo de diversas otimizações, com o intuito de preservar as características ultra-estruturais o mais próximo possível do seu estado nativo (McDonald 2007). Na otimização da técnica de congelamento de alta pressão dois parâmetros foram avaliados: a vitrificação e a preservação morfológica das células GFP-Rab11. A vitrificação refere-se ao processo de transformação de um liquido em sólido sem cristalização. A cristalização induz artefactos nas células, reconhecíveis sob a forma de redes interligadas de espaços vazios onde outrora expandiram os cristais de gelo. Ambos os parâmetros de vitrificação e preservação morfológica são afetados pelo tipo de suporte de amostra utilizado para congelar, bem como pelo tipo de enchimento escolhido para preencher o espaço livre entre a amostra e o suporte. Os tipos de suporte para congelamento de amostras testados foram os discos planos e os suportes côncavos. O primeiro tipo – discos planos - permite o congelamento de células em camada única e foi testado em combinação com três tipos de enchimentos (hexadeceno, dextano a 20% (m/v) e albumina sérica bovina a 20% (m/v)). O segundo tipo – suportes côncavos – permite o congelamento em pellet e foram testados em combinação com hexadeceno. Estabeleceu-se que o melhor protocolo para processamento de células GFP-Rab11 por congelamento de alta pressão tendo em conta o objeto de estudo (a ultra-estrutura vesicular) foi alcançada ao usar a combinação de discos planos com hexadeceno. Para a otimização da técnica de Tokuyasu, quatro marcadores: Golgi Marker (GM) 130, calnexina, nucleoproteína (NP) e GFP-Rab11 foram estudados em células infetadas com IAV para a capacidade de manter sua imunorreatividade em diferentes condições de fixação. Três fixadores foram usados durante o teste: formaldeído a 2% (v/v) com glutaraldeído a 0,2%, 0,1% e 0,05% (v/v). Como controlo foi adicionado o fixador de referência em imunocitoquímica: formaldeído a 4% (v/v). O formaldeído permite a manutenção da imunorreatividade celular, no entanto o glutaraldeído conduz a uma melhor preservação morfológica da ultra-estrutura. O fixador que permitiu a preservação da imunorreatividade de todos os marcadores foi o formaldeído a 4% (v/v) e, como tal, o fixador usado no estudo. A combinação entre as técnicas de crio-EM, congelação por alta pressão e Tokuyasu, permitiu quantificar o número de vesículas de membrana simples e dupla (SMV e DMV, respetivamente) durante a infeção por IAV. Foi possível determinar que o número de SMVs - utilizadas como veículos para o transporte de vRNPs - aumenta durante a infeção por IAV e que as membranas destas vesiculas de membrana simples são reorganizadas para produzir as DMVs. Desta forma, é possível afirmar que as SMV juntamente com as DMVs parecem constituir os agregados vesiculares formados durante a infeção e que permitem a convergência espacial dos vRNPs. Para além das técnicas de crio-EM descritas, também a técnica de correlação entre microscopia de luz e eletrónica (CLEM) foi desenvolvida e otimizada para pesquisa da função dos agregados vesiculares. A técnica de CLEM aplicada combinou as técnicas de hibridização in situ fluorescente (FISH), microscopia estocástica de reconstrução ótica (STORM) e EM e contribuiu para uma caracterização adicional do papel das SMVs e das DMVs dentro dos agregados. A técnica FISH em conjunto com a técnica de STORM permitiu a identificação específica de segmentos do genoma do IAV em agregados de Rab11, enquanto a EM forneceu o contexto ultra-estrutural da célula. No entanto, a precisão da correlação alcançada foi baixa, não tendo permitido a identificação do conteúdo genómico transportado por cada vesícula dentro dos agregados. Neste sentido, podemos afirmar que, apesar de poder ser combinada com outras técnicas, a técnica de CLEM integrando FISH, STORM e EM é uma técnica ainda em desenvolvimento e que requer melhorias adicionais. Em resumo, o trabalho aqui descrito conduziu à conclusão de que as vesículas de membrana simples e dupla, portadoras de vRNPs, são originárias do compartimento de reciclagem de endossomas. Ambos os tipos de vesículas foram encontrados nos agregados e identificadas com os mesmos marcadores imunes. A sua relevância funcional para a montagem dos vRNPs continua por inferir, sendo necessária a contínua otimização da combinação das técnicas de microscopia de luz e de microscopia eletrónica para determinar um método de CLEM funcional.Influenza viruses, from the Orthomyxoviridae family, are divided in four types A, B, C and D (Hause et al. 2013; Hause et al. 2014). Influenza A (IAV) as the capacity to generate zoonotic infections and is widespread in many mammalian and avian species. (Acheson 2011; Taubenberger & Kash 2010). In humans, IAV is the pathogen responsible for flu, a respiratory acute disease associated with high morbidity and mortality (Lofgren et al. 2007). IAV as a segmented genome divided in eight different viral ribonucleoprotein complexes (vRNP). Each vRNP complex is composed by one of the eight viral ribonucleic acid segments. The vRNPs function as independent units and a complete set of eight different vRNPs is required for assembly of an infectious IAV particle (Fields et al. 2007). It is known that vRNPs are transported by piggybacking in vesicles destined to the cell periphery via interaction between the viral polymerase basic protein 2 and the host GTPase Ras-related in brain 11 (Rab11) (Amorim et al. 2011; Eisfeld et al. 2011; Momose et al. 2011). Also, it was stated that during infection there is an aggregation of vesicles creating clusters. The clusters were composed by vesicles with single and double membranes (SMV and DMV), indicating that IAV leads not only to clustering but also to the rearrangement of vesicular membranes (Vale-Costa et al. 2016). This work substantiated an alternative model for IAV genomic assembly in which vesicular clustering can function as a viral induced platform promoting the creation of vRNPs hotspots. The high co-localization among the pool of all vRNPs would allow the establishment (or completion) of the RNA-RNA interactions necessary for assembly of the eight RNA segments before budding. Vesicular clustering thus emerges as an essential step in IAV lifecycle. In this work, a multi electron microscopy (EM) cryo-methodology was not just applied but also optimized and developed to elucidate how vesicular clustering is formed in A549 cells constitutively expressing GFP-Rab11 during infection and what the vesicles functional role in the lifecycle of IAV. The EM cryo-methodology incorporated the High Pressure Freezing – Freeze Substitution (HPF-FS) and Tokuyasu techniques. The first permitted the morphological analysis of cells and vesicular quantification (without introducing chemical fixation artifacts) and the second enabled the immunolabeling of structures to discern their origin. Also, to further investigate the functional role of clusters a correlative light electron microscopy (CLEM) method that combines Fluorescent in situ Hybridization (FISH), Stochastic Optical Reconstruction microscopy (STORM) and EM was developed. The optimization of HPF-FS technique established that the best vitrification and morphological preservation of GFP-Rab11 cells was achieved when using flat disks, as specimen carriers for the freezing process, filled with 1-hexadecene, as a cryoprotectant. For Tokuyasu, 4% (v/v) formaldehyde was the fixative to enable the best preservation of immunoreactivity. Together, both techniques, lead to conjecture that the number of SMVs - used as vehicles for vRNP trafficking - increase during IAV infection and are modified to rearrange membranes and produce DMVs. Both Rab11 SMVs and DMVs seem to constitute the clusters formed during infection that enable the spatial convergence of vRNPs. The CLEM technique incorporating FISH, STORM and EM contributed to a further characterization of SMVs and DMVs role within the clusters. The FISH technique allowed the identification of IAV genome segments on Rab11 clusters imaged by STORM, whereas EM provided the ultrastructural context of the cell. A low accuracy of the achieved correlation did not allow the identification of the segment content of each vesicle within the clusters. This combinatorial but powerful method thus requires further improvement. In summary, the work herein described led to the conclusion that vesicles of single and double membrane, carrying vRNPs, originate from the endosomal recycling compartment. Both types of vesicles were found in clusters. Their functional relevance for vRNP assembly remains to be determined, as the CLEM method developed for its study needs further optimization

Campus Criminal Victimization among Higher Education Students: A Diagnosis of Local Security in Porto

This study addressed and characterized direct and indirect criminal victimization among college students and examined the associations between victimization and other variables. The participants were 775 students of both genders with a mean age of 21.76 years. Data were collected through self-reports using the “Diagnosis of Local Security Questionnaire”. Overall, 8.6% of the students reported direct victimization, and 39.7% reported indirect victimization. The most reported crimes were robbery and theft, while the least prevalent were sexual offense, domestic violence, and fraud. Most incidents involved a stranger and occurred at night in the street. Direct victimization was associated with gender, age, marital status, student level, attendance status, and institution domain. There were significant associations between indirect victimization and nationality, student type, attendance status, and institution domain. The perception of (in)security was significantly associated with victimization. Therefore, physical and social measures are necessary to reduce crime and increase security.FCT (Foundation for Science and Technology)info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Estereótipo dos ‘alunos do fundão’ no curso de graduação em ciências contábeis

This study aimed to analyze if the 'students who sit in the back of the classroom' are stereotyped negatively regarding the academic performance by the professors of Accounting Sciences course of the Brazilian universities. In order to accomplish this, the descriptive research, of quantitative approach, was used and the data collection procedure was the survey, with a questionnaire application. The sample is made up of 471 professors. For the analysis of the data, we used the descriptive analysis and the statistical test of the exploratory factorial analysis. It was verified that the professors do not evaluate negatively these students’ performance, that is, the position occupied in the classroom does not influence the performance, nor the participation of these students in the classroom is negative. For professors, they seek to achieve success in individual activities and can achieve good results in evaluations outside the Institution, such as Enade or an examination of Conselho Federal de Contabilidade (CFC). The exploratory factorial analysis resulted in four factors that explain 61.4% of the data variation. These factors were denominated: 'Performance and negative performance of the students in the back of the classroom', 'Disinterest of the students in the back of the classroom', 'Performance and positive performance of the students in the back’ and 'Professors’ attitudes to involve the students who sit in the back of the classroom, in the class activities'. According to the results of descriptive statistics, participating professors agree that the student's position in the classroom does not influence in academic performance.Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Este estudo objetivou analisar se os ‘alunos do fundão’ são estereotipados negativamente quanto ao rendimento acadêmico pelos docentes do curso de Ciências Contábeis das universidades brasileiras. Para isso, utilizou-se a pesquisa descritiva, de abordagem quantitativa, sendo o procedimento de coleta de dados o levantamento, com a aplicação de um questionário. A amostra é composta de 471 docentes. Para análise dos dados, utilizou-se a análise descritiva e o teste estatístico da análise fatorial exploratória. Verificou-se que os docentes não avaliam negativamente o rendimento dos alunos do fundão, ou seja, a posição ocupada em sala não influencia o desempenho, tampouco a participação desses alunos em sala de aula é negativa. Para os professores, eles buscam alcançar êxito nas atividades individuais e poderão obter bons resultados nas avaliações externas à Instituição, tais como, Enade ou exame de suficiência do Conselho Federal de Contabilidade (CFC). A análise fatorial exploratória resultou em quatro fatores que explicam 61,4% da variação dos dados. Esses fatores foram denominados: ‘Rendimento e desempenho negativo dos alunos do fundão’, ‘Desinteresse dos alunos do fundão’, ‘Rendimento e desempenho positivo dos alunos do fundo’ e ‘Atitudes dos Docentes para envolver os alunos do fundo nas atividades em sala’. De acordo com os resultados da estatística descritiva, os professores participantes concordam que a posição do aluno na sala de aula não influencia o rendimento acadêmico

Experiência Profissionalizante na vertente de Farmácia Comunitária e Investigação

Este trabalho encontra-se dividido em dois capítulos que incluem a minha experiência profissionalizante na vertente de investigação e farmácia comunitária. O primeiro capitulo corresponde ao projeto de dissertação de mestrado, da componente de investigação. Este trabalho teve por objetivo a realização de uma revisão da literatura atual sobre os excipientes e outros compostos que modulam (potenciam ou reduzem) a permeação de substâncias ativas em formulações tópicas. Os potenciadores da permeação na pele são substâncias adicionadas às formulações tópicas e transdérmicas de modo a melhorar a penetração dos fármacos através da pele. Podem atuar por: alteração do funcionamento natural do estrato córneo (SC) de barreira; manutenção da concentração de fármaco no veículo; alteração da natureza do solvente da membrana cutânea; promoção de um reservatório do fármaco na pele; interação com as proteínas intracelulares e os lípidos ou por diminuição da espessura da pele. Foram identificadas várias classes de promotores de permeação com resultados comprovados em associação com fármacos específicos e diferentes perfis de eficácia em fármacos hidrofílicos e lipofílicos. A sua utilização como excipientes de formulações pode promover a eficácia de formulações destinadas a ação terapêutica mais profunda na pele. Contudo, é necessário ter em consideração que a utilização destes excipientes pode também estar associada a problemas de segurança, tais como os efeitos secundários sistémicos dos fármacos quando atingem a corrente sanguínea. Por isso, é essencial que também os profissionais de saúde possuam um conhecimento mais profundo acerca dos modificadores da penetração. O segundo capitulo diz respeito ao estágio realizado em farmácia comunitária, na Farmácia Machico, sob a orientação da Dra. Rita Bela Calaça, onde é descrito o funcionamento e organização de uma farmácia comunitária bem como as competências profissionais que foram adquiridas ao longo das 20 semanas de estágio.This work is divided into two chapters that include my professional experience in the area of research and community pharmacy. The first chapter corresponds to the master's thesis project, the research component. This study aimed the accomplishment of a review of the current literature regarding the excipients and other compounds that modulate (potentiate or reduce) the permeation of active substances in topical formulations. Skin permeation enhancers are substances added to the topical and transdermal formulations in order to improve the penetration of drugs through the skin. They can act by: altering the natural functioning of the stratum corneum (SC) barrier; increasing/maintaining the concentration of drug in the vehicle; altering the nature of the solvent of the cutaneous membrane; promoting a drug reservoir on the skin; interacting with intracellular proteins and lipids or decreasing the skin thickness. Several classes or permeation enhancers were identified and studies were reviewed on their efficacy in combination with specific drugs and relative efficacy on hydrophilic or lipophilic molecules. Their use in formulations intended for deeper therapeutic activity in the skin may be essential for efficacy. On the other hand, it is necessary to consider that the use of these excipients may be associated with safety issues, such as systemic side effects of drugs once they reach the bloodstream. Therefore, it is essential that health professionals possess a deeper knowledge of penetration enhancers. The second chapter concerns the internship held in community pharmacy in Machico Pharmacy, under the guidance of Dr. Rita Bela Calaça, which describes the operation and organization of a community pharmacy and the professional skills that have been acquired over 20 weeks of internship

O impacto da Lei de Responsabilidade Fiscal (LRF) sobre o endividamento dos estados brasileiros (2000-2010)

Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Departamento de Economia, 2014.Muitos países na década de 1990 reformularam suas instituições orçamentárias com o objetivo de conter os desajustes fiscais provenientes dos déficits excessivos e do endividamento público. No caso do Brasil, a Lei de Responsabilidade Fiscal, LRF, criada no ano 2000, foi a principal ferramenta adotada para conter a crise fiscal que se desencadeou nesse período. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho é analisar o impacto que essa lei teve sobre o endividamento dos estados brasileiros, visto que estes eram os entes mais socorridos pela União naquele momento. Para tanto, foi desenvolvido um modelo econométrico, utilizando dados em painéis, para analisar se a LRF impactou negativamente e de maneira significante o grau de endividamento no período de 2000 a 2010. As conclusões apontaram a LRF como um instrumento eficaz na contenção da dívida pública, o que sugere que a má administração dos recursos por parte dos estados era proveniente de uma cultura flexível com relação ao endividamento. ________________________________________________________________________________ ABSTRACTMany countries in the 1990s have reformed their budget institutions with the purpose of containing fiscal imbalances from excessive deficits and public debt. In the case of Brazil, the Fiscal Responsibility Law, LRF, created in 2000, was the main tool adopted to contain the fiscal crisis that began in this period. In this sense, the aim of this paper is to analyze the impact this law has had on the indebtedness of Brazilian states, as these were the most loved rescued by the Union at that time. For this purpose, an econometric model was developed using panel data to analyze whether the LRF negatively impacted and the degree of indebtedness significantly on the period 2000-2010. Findings indicated the LRF as an effective tool in curbing public debt, suggesting that mismanagement of resources by states came from a flexible culture with respect to indebtedness

A mediação sociofamiliar no âmbito do acolhimento residencial

A intervenção junto das famílias de crianças e jovens em contexto de acolhimento residencial visa o reforço das suas competências pessoais, familiares e sociais através de intervenções focalizadas e orientadas para a reunificação familiar. Tendo em consideração a complexidade do trabalho que deve ser desenvolvido junto destas famílias, na articulação dos seus sistemas envolventes (familiar, institucional e social), urge a necessidade de se criar condições que agilizem este processo de comunicação e interação. A mediação assume um papel importante neste processo, nomeadamente junto das famílias vulneráveis e socialmente em risco e/ou perigo e das diversas instituições intervenientes na institucionalização de crianças e jovens. Apresenta-se uma proposta de mediação sociofamiliar que visa o empoderamento das famílias, o fortalecimento dos laços familiares e a sua participação na construção de alternativas viáveis, responsáveis e duradouras, com vista à reunificação familiar das crianças e jovens em acolhimento residencial. A mediação sociofamiliar consiste num trabalho de facilitação da comunicação entre indivíduos da mesma família e os seus sistemas sociais e de proteção como forma de tornar mais próximas as suas relações e interações, essenciais ao equilibrado desenvolvimento das crianças e jovens e ao (re)estabelecimento dos laços afetivos no interior do sistema familiar

Agir e Educar em face ao diabetes mellitus

Anais do 35º Seminário de Extensão Universitária da Região Sul - Área temática: SaúdeO Diabetes mellitus é uma doença crônica não transmissível de grande relevância para a saúde pública mundial. O tratamento é diário e contínuo, associa medicamentos, alimentação e prática de atividade física. Para o controle de níveis glicêmicos dentro dos parâmetros desejáveis a pessoa com DM enfrenta inúmeros desafios no seu cotidiano. Trata-se de um projeto de Extensão Universitária cujo objetivo é desenvolver atividades de atenção à pessoa com Diabetes mellitus no Ambulatório do Hospital Universitário Polydoro Ernani de São Thiago, da Universidade Federal de Santa Catarina, Área B. O projeto iniciou em março de 2016 e tem desenvolvido as seguintes atividades periodicamente: Grupo de Educação em Saúde, o grupo iniciou em abril/2016 e mantém regularidade mensal com abordagens sobre temas de interesse; Elaboração do Manual de Orientações e Cuidados com Diabetes mellitus; Atendimento individual interdisciplinar – Estudo de caso, atividade iniciada em abril/2017 para desenvolver planos de cuidados de acordo com as necessidades individuais das pessoas com Diabetes. Acredita-se que as ações coletivas contribuem para o compartilhamento de informações e motivação para o autocuidado. Bem como, a criação de espaços de discussão multiprofissional mobiliza ações capazes de repercutir na saúde considerando-a de forma abrangente e nos âmbitos da promoção e proteção e recuperação da saúd

Two cases of late-onset Argininosuccinic aciduria with normal results at newborn screening

Argininosuccinic aciduria (ASA) is an autosomal recessive metabolic disorder caused by Argininosuccinate Lyase (ASL) deficiency, and it is the second most frequent urea cycle disorder, with an estimated frequency of 1:70 000. The human ASL gene is located on chromosome 7q11.21 and comprises 16 exons encoding a 464 amino acids long monomer. The enzyme is functional in a homotetrameric structure and is mainly expressed in the liver, although it can be found in several other tissues. The clinical presentation of ASA is very heterogeneous, ranging from asymptomatic to severe hyperammonemic neonatal-onset cases. Complex clinical phenotypes, with neurological deficits and hepatic complications adding to hyperammonemic episodes, are often observed. Biochemically, ASA is usually characterized by elevation of both citrulline and argininosuccinic acid in plasma and urine, but also at this level heterogeneity is observed, adding to a poor correlation found between residual enzymatic activity and the severity of the clinical phenotype. Newborn Screening (NBS) for ASA is widely established although some paradoxal results can be obtained due to the clinical and biochemical ASA heterogeneity: asymptomatic cases can be detected and, on the contrary, late-onset forms with important clinical manifestations observed since the first months of live can be missed due to normal biochemical results. ASA was included in the Portuguese NBS Program in 2005, based on elevated argininosuccinic acid blood levels. During these ten years of NBS two cases were identified and two other were missed. The missed cases were two brothers with a late-onset clinical form, which presented completely normal results at NBS. They are homozygous for R12Q mutation, which is a mutation reported to be associated with a mild clinical form of the disease and frequently found in late-onset ASA cases. Based on this finding it is important to keep in mind that a late-onset form of ASA should be considered for a child with clinical signs fitting this disease, even if NBS had a normal result

A violência obstétrica sob a perspectiva da mulher negra

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Jurídicas. Direito.A violência obstétrica tem se tornado um tema popular devido a sua forte e reiterada ocorrência, no entanto tem havido controvérsias sobre o uso do seu termo por alguns considerarem uma ofensa aos profissionais da saúde, especialmente obstetras e até mesmo um termo ideológico. Observa-se que as práticas consideradas como violência obstétrica, principalmente as mais dolorosas, são mais constantes em mulheres negras, devido a certas crenças, e, ao racismo institucionalizado que derivam da colonialidade e está enraizada até hoje. Diante deste cenário, e interesse pessoal da autora ao ouvir o relato de parto de mulheres de seu convívio social, o intuito da presente pesquisa busca contextualizar inicialmente o direito das mulheres negras e nuances sobre seus movimentos sociais de forma a compreender introdutoriamente a ligação entre raça e gênero, ou seja, as possíveis causas que levam mulheres negras a sofrer mais violência obstétrica que mulheres brancas. Além disso analisar a incidência da violência obstétrica e sua caracterização, verificar os impactos das leis existentes para resguardar as gestantes e o enfrentamento da violência no Brasil através da análise jurisprudencial sobre a reparação de danos nos casos cabíveis, em sequência a existência de políticas públicas do governo.Obstetric violence has become a popular topic due to its strong and repeated occurrence, however there has been controversy over the use of its term because some consider it an offense to health professionals, especially obstetricians and even an ideological term. It is observed that the practices considered as obstetric violence, especially the most painful ones, are more constant in black women, due to certain beliefs, and, the institutionalized racism that derives from coloniality and is rooted until today. Given this scenario, and the author's personal interest in hearing the birth reports of women in her social environment, the purpose of this research seeks to contextualize initially the rights of black women and nuances about their social movements in order to understand the connection between race and gender, i.e., the possible causes that lead black women to suffer more obstetric violence than white women. In addition, analyze the incidence of obstetric violence and its characterization, verify the impacts of existing laws to protect pregnant women and the confrontation of violence in Brazil through jurisprudential analysis on the repair of damage in appropriate cases, following the existence of public policies of the government

Parenting during the COVID-19 lockdown in Portugal: changes in daily routines, co-parenting relationships, emotional experiences, and support networks

The COVID-19 pandemic challenged parental resources pertinent to coping with lockdowns. The main objective of this work was to study parenting during the COVID-19 lockdown. Specifically at focus were parental behaviors concerning key domains for the family (daily routine, co-parenting, emotional experience, and support network) and changes related to the pandemic and associated with the parents’ employment statuses. An online survey was carried out through an ad hoc questionnaire where participants completed questions about their sociodemographic data and rated how much their family routines, their co-parenting relationship, their emotional experiences, and the support available in the family network varied on a 5-point scale. The participants included 1384 parents, of which 286 responded to open questions regarding impactful experiences during the lockdown. The results showed differences in daily routine, co-parenting, emotional experience, and support network according to the parents’ employment statuses. Between-group comparisons showed that at-home parents caring for children with governmental aids generally revealed more positive parenting behavior changes, while at-home parents who were teleworking reported more difficulties in parent-child activities and co-parenting. Furthermore, the content analysis of the data confirmed how important themes such as family dynamics, professional activities, and the relationship with the school community were throughout the participants’ accounts of gains and losses. Overall, parents’ employment statuses are associated with diverse experiences during lockdown. The COVID-19 pandemic highlighted the importance of family resources and parental resilience, particularly during circumstances jeopardizing the ever-sensitive work-family balance.This research was financially supported by Portuguese national funds through the FCT (Foundation for Science and Technology) within the framework of the CIEC (Research Center for Child Studies of the University of Minho) projects under the references UIDB/00317/2020 and UIDP/00317/2020