RT-PCR for detection of bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3)

The RT-PCR technique has been frequentely used for detection of the human parainfluenza virus type 3 (hPIV-3) but the literature is scarce in relation to the bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3). The aim of this study was to describe a reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for detection of bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3) using degenerate oligonucleotides targeting a conserved region of hemagglutinin-neuraminidase (HN) gene. Reference strain SF-4 and three different brazilian bPIV-3 isolates, besides five viral strains from different sources, were included in this study. Viruses were cultured in MDBK cells under standard conditions. Hemagglutination (HA) test was used for viral titration and a direct immunofluorescence test (DFAT) for isolate screening. In RT-PCR all bPIV-3 isolates showed amplification of an expected 1009 bp fragment of HN gene, as oposed to non PIV-3 viral samples where no amplification was detected. Using SF-4 as positive control, sensitivity of 95 pg cDNA wasachieved. In spite of the low number of bPIV-3 isolates tested, the results obtained in this study point out the potential use of this technique for detection of bPIV-3 in bovine clinical specimens

Transfecção de DNA de BoHV-5 com fosfato de cálcio em diferentes tipos de cultivos celulares

As condições para uma transfecção eficaz pelo método de fosfato de cálcio podem variar substancialmente. Neste estudo foi testado o tipo de cultivo celular mais apropriado para transfecção de DNA de herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) por esta técnica. Primeiramente foi avaliada a capacidade de multiplicação do BoHV-5 em três diferentes tipos de células. Para isto, a concentração viral foi calculada pelo método de dose infectante para cultivo celular / 50% (TCID  50/mL). O BoHV-5 foi titulado em células de linhagem de rim de macaco verde Africano (VERO), células de linhagem de rim de suíno (PKsC3), células primárias de testículos de terneiro (TT) e células de linhagem de rim de bovino (MDBK). Em células VERO e PKsC3 a concentração viral máxima obtida foi 103,3 TCID50/mL, enquanto que em células MDBK o título foi de 106,8 TCID50/mL, similar ao encontrado para as células TT. Para avaliar a eficácia da transfecção nessas células, foi utilizado DNA plasmideal expressando um gene repórter (EGFP). Os resultados mostraram um valor de 4,5% de células fluorescentes para células TT, de 2,9% para PKsC3, de 0,5% para VERO e de 0,05% para MDBK. Quando células PKsC3 e TT foram transfectadas com 0,5 ?g de DNA purificado de BoHV-5, somente as células TT apresentaram resultado positivo, com duas placas virais por poço. Para investigar a influência da concentração de DNA viral, células TT foram transfectadas com 0,5 ?g e 1 ?g de DNA purificado de BoHV-5, produzindo duas e quatro placas, respectivamente. Nas condições experimentais testadas neste estudo os resultados indicam que as células TT poderiam ser boas candidatas para serem utilizadas para a transfecção de DNA de BoHV-5

Prevalência de diabetes mellitus tipo 2 em usuários da Atenção Primária à Saúde e fatores associados

Abstract  To estimate the prevalence and factors associated with type 2 Diabetes mellitus (DM2) in users of Primary Health Care (PHC). Cross-sectional study carried out from May to August 2019. The statistics comprised the calculation of the prevalence of DM2, and its 95% confidence interval (95% CI). To check the adjusted factors, gross and adjusted Prevalence Ratios (PR) were calculated. The sample consisted of 1,365 users, with a 9% prevalence of the outcome (CI95 8-11), which was higher among the elderly (PR = 2.21; CI95 1.50-3.26), hypertensive patients (PR = 3.02 ; CI95 1.90-4.81), with hypertriglyceridemia (PR = 2.38; CI95 1.67-3.38), polymedicates (PR = 2.91; CI95 1.82-4.67) and that did not practiced physical activity (PR = 1.71; CI95 1.04-2.79) and lower, among those who did not engage in paid activity (PR = 0.39; CI95 0.22-0.70) and with the habit of researching on health on the internet (PR = 0.51; 95% CI 0.30-0.88). Thus, the need to promote innovative actions with new forms of primary care is highlighted.  Keywords: Type 2 diabetes mellitus. Primary health care. Prevalence.  O diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é uma patologia crônica que cresceu mundialmente. Quando mal controlado, pode acarretar ao seu portador diversas complicações, comprometendo, assim, a sua qualidade de vida. O presente trabalho teve como objetivo estimar a prevalência e os fatores associados à diabetes mellitus tipo 2 (DM2) em usuários da Atenção Primária à Saúde (APS). Trata-se de um estudo transversal realizado de maio a agosto de 2019. A estatística compreendeu o cálculo da prevalência de DM2, e seu intervalo de confiança foi de 95% (IC95). Para verificação dos fatores ajustados, foram calculadas as Razões de Prevalência (RP), brutas e ajustadas. A amostra foi de 1.365 usuários, com prevalência do desfecho de 9% (IC95 8-11), sendo esta maior entre idosos (RP=2,21; IC95 1,50-3,26), hipertensos (RP= 3,02; IC95 1,90-4,81), pessoas com hipertrigliceridemia (RP=2,38; IC95 1,67-3,38), polimedicados (RP=2,91; IC95 1,82-4,67) e que não praticavam atividade física (RP=1,71; IC95 1,04-2,79) e menor entre aqueles que não exerciam atividade remunerada (RP=0,39; IC95 0,22-0,70) e com costume de pesquisar sobre saúde na internet (RP=0,51; IC95 0,30-0,88). Os achados obtidos nesse estudo destacam a imprescindibilidade à promoção de ações inovadoras com novas formas de atenção primária.                        

Blood or serum collected on filter paper for detection of antibodies to bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1)

Background: The method of collection as well as the packaging conditions in which samples are submitted to laboratories play a critical role on the acquisition of reliable results on diagnostic tests. Alternative methods however have been proposed, as the adsorption of blood or serum in filter paper. In this work, it was evaluated the viability of using serum or whole blood samples from bovines collected in filter paper for serological testing against bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1). Materials, Methods & Results: One hundred and seven whole blood and serum samples were collected by standard methods. Serum neutralization test was used as a golden standard method for evaluation of the serum samples. The same samples of both whole blood and sera were also adsorbed on filter paper strips for further comparisons. Optimal conditions for serum and blood elution from filter paper were determined. Adsorbed samples on filter paper disks were eluted in PBS and subsequently diluted further with PBS 5% skimmed milk. The eluates were tested for antibodies to BoHV-1 in an indirect ELISA (iELISA) and matched with the results obtained by serum neutralization of standard serum samples. Comparison between results obtained by serum neutralization of standard serum samples and the ones from the iELISA of serum eluted from paper disks resulted in sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of 95, 94, 80, 99%, respectively, and a correlation coefficient (κ) of 0.83. Comparison between the results of serum neutralization of standard serum samples and the ones from the iELISA of blood eluted from paper disks resulted in sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of 91, 97, 87, 98% , respectively, and a correlation coefficient (κ) of 0.86. Standard serum samples were also tested in the iELISA and the results compared with those of iELISA from samples eluted from filter paper. Comparison of the results from iELISA between serum samples and serum eluted from filter paper resulted in sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of 91, 81, 69, 95%, respectively, and a correlation coefficient (κ) of 0.66. The comparison of iELISA results between standard serum and blood samples eluted from filter paper resulted, in sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of 78, 92, 82, 89%, respectively, and a correlation coefficient (κ) of 0.70. Fifty samples collected on filter paper were retested eight months later in order to determine whether those would retain its viability; both sensitivity and specificity remained unaltered. Discussion: Sampling on filter paper has been successfully described for antibody detection in a number of diseases such as Aujeszky’s disease virus and Newcastle disease virus. In this work, it has been demonstrated that both blood and sera collected in filter paper can be used for submission of samples aiming detection of antibodies to BoHV-1 in an iELISA, without significant loss of sensitivity and specificity. Submission of samples on filter paper is a practical and economical alternative as no special conditions are required for storaging and transporting. This method also enables the collection of samples from distant places assuring its quality for serological test

O que a população sabe sobre SARS-CoV-2/COVID-19: prevalência e fatores associados / What the population knows about SARS-CoV-2/COVID-19: prevalence and associated factors

Introdução: desde o início da pandemia de COVID-19 a população tem sido alertada por instituições públicas e privadas a respeito das medidas de proteção individual e coletiva. Objetivo: verificar a prevalência e os fatores associados a diferentes aspectos do conhecimento da população sobre SARS-CoV-2/COVID-19. Métodos: inquérito transversal com coleta online de dados sociodemográficos, de saúde, comportamento e conhecimento. Amostrados 920 participantes, sendo prevalências de conhecimento e variáveis associadas a) sinais/sintomas 56%, cor, ocupação, profissional/ estudante da saúde, idosos no domicílio, prevenção, vacinação contra gripe e conhecimento sobre quem faz parte do grupo de risco, quando procurar atendimento e transmissão; b) quando procurar o serviço de saúde 34%, ocupação, idosos no domicílio, autopercepção negativa da saúde, grupo de risco, sinais/sintomas, prevenção, vacinação contra gripe e conhecimento sobre quem faz parte do grupo de risco; c) transmissão 70%, escolaridade, ocupação, profissional/estudante da saúde, grupo de risco, prevenção, vacinação contra gripe, conhecimento sobre quem faz parte do grupo de risco e sobre sinais/sintomas; d) quem faz parte do grupo de risco 80%, sexo feminino, escolaridade, profissional/estudante da saúde, do grupo de risco, prevenção, vacinados contra gripe e que sabem que fazem parte do grupo de risco, sobre sinais/sintomas, quando procurar atendimento e transmissão. Resultados: houve boa compreensão dos participantes sobre as medidas preventivas e aspectos relacionados ao agente etiológico e à doença, como conhecimento sobre sintomatologia, formas de transmissão e quem faz parte do grupo de risco, com provável influência pela alta escolaridade da amostra e da ampla exposição às informações divulgadas por instituições públicas e meios de comunicação. Conclusão: há necessidade de serem intensificadas as informações por órgãos oficiais para melhor esclarecimento da população a fim de reduzir o impacto da pandemia

RT-PCR para detecção do vírus parainfluenza bovino tipo 3 (bPIV-3)

A técnica de RT-PCR tem sido freqüentemente utilizada para a detecção do vírus parainfluenza humano tipo 3 (hPIV- 3), mas a literatura é escassa em relação ao vírus parainfluenza bovino tipo 3 (bPIV-3) .O objetivo deste trabalho foi descrever uma técnica de reação em cadeia pela polimerase, precedida de transcrição reversa (RT-PCR), para a detecção do vírus parainfluenza bovino tipo 3 (bPIV-3), usando oligonucleotídeos degenerados para uma região conservada do gene da hemaglutininaneuraminidase (HN). A amostra-referência SF-4 e três diferentes isolados brasileiros de bPIV-3, além de cinco amostras virais de diferentes origens, foram incluídos neste estudo. Os vírus foram cultivados em células MDBK sob condições padronizadas. O teste de hemaglutinação (HA) foi utilizado para a titulação viral, e o teste de imunofluorescência direta (DFTA) para a triagem dos isolados. Na RT-PCR, todos os isolados de bPIV-3 mostraram amplificação de um fragmento esperado de 1009 pb do gene HN, ao contrário do que aconteceu com as amostras virais não bPIV-3, onde não foi detectada amplificação. Empregando a amostra SF-4 como controle positivo, foi obtida uma sensibilidade de 95 pg de cDNA. Apesar do pequeno número de amostras de bPIV- 3 testadas, os resultados obtidos neste estudo apontam para o uso potencial desta técnica na detecção de bPIV-3 em amostras clínicas bovinas.The RT-PCR technique has been frequentely used for detection of the human parainfluenza virus type 3 (hPIV-3) but the literature is scarce in relation to the bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3). The aim of this study was to describe a reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for detection of bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3) using degenerate oligonucleotides targeting a conserved region of hemagglutinin-neuraminidase (HN) gene. Reference strain SF-4 and three different brazilian bPIV-3 isolates, besides five viral strains from different sources, were included in this study. Viruses were cultured in MDBK cells under standard conditions. Hemagglutination (HA) test was used for viral titration and a direct immunofluorescence test (DFAT) for isolate screening. In RT-PCR all bPIV-3 isolates showed amplification of an expected 1009 bp fragment of HN gene, as oposed to non PIV-3 viral samples where no amplification was detected. Using SF-4 as positive control, sensitivity of 95 pg cDNA wasachieved. In spite of the low number of bPIV-3 isolates tested, the results obtained in this study point out the potential use of this technique for detection of bPIV-3 in bovine clinical specimens

Conjunctival endogenous microbiota in patients submitted to cataract surgery Microbiota endógena conjuntival em pacientes submetidos à cirurgia de catarata

Bacterial isolation, identification and antimicrobial susceptibility tests were carried out in ocular material collected with swab and polimethylmethacrylate (PMMA) or silicone intraocular lenses (IOL) from forty six patients submitted to cataract surgery. Seventy six isolates and seven different microorganisms were identified. Coagulase-negative staphylococci (CNS) were the predominant microorganisms isolated from swabs (71.4% of cases), PMMA lenses (81.3%) and silicon lenses (77.8%). Coagulase-negative staphylococci isolates revealed high resistance to penicillin G followed by tetracycline, chloramphenicol and aminoglicosides. However, these isolates displayed great susceptibility to vancomycin, cephalothin and ofloxacin. Except for penicillin G, Staphylococcus aureus was very sensitive to the antimicrobial agents including oxacillin. Among Gram-negatives, Proteus mirabilis was prevalent and presented high resistance to tetracycline and chloramphenicol. Enterococcus isolates were vancomycin sensitive.<br>A partir de material ocular coletado de 46 pacientes submetidos à cirurgia de catarata foram realizados isolamento, identificação e teste de susceptibilidade de microrganismos frente a antimicrobianos, utilizando-se suabes e lentes intraoculares (LIO). Foram obtidos 76 isolados e identificados 7 tipos de microrganismos. Estafilococos coagulase-negativos (CNS) foram os microrganismos mais freqüentemente detectados de suabes (71,4% dos casos), lentes de PMMA (81,3%) e lentes de silicone (77,8%). Isolados de CNS apresentaram elevada resistência à penicilina G, seguida por tetraciclina, cloranfenicol e aminoglicosídeos. No entanto, estes isolados mostraram grande sensibilidade à vancomicina, cefalotina e ofloxacina. Com exceção da penicilina G, os isolados de Staphylococcus aureus foram bastante sensíveis aos agentes antimicrobianos, incluindo a oxacilina. Entre as gram-negativas, Proteus mirabilis foi a bactéria mais freqüente e também se mostrou bastante resistente à tetraciclina e ao cloranfenicol. Os isolados de Enterococcus se mostraram sensíveis à vancomicina

Microbiota endógena conjuntival em pacientes submetidos à cirurgia de catarata

A partir de material ocular coletado de 46 pacientes submetidos à cirurgia de catarata foram realizados isolamento, identificação e teste de susceptibilidade de microrganismos frente a antimicrobianos, utilizando-se suabes e lentes intraoculares (LIO). Foram obtidos 76 isolados e identificados 7 tipos de microrganismos. Estafilococos coagulase-negativos (CNS) foram os microrganismos mais freqüentemente detectados de suabes (71,4% dos casos), lentes de PMMA (81,3%) e lentes de silicone (77,8%). Isolados de CNS apresentaram elevada resistência à penicilina G, seguida por tetraciclina, cloranfenicol e aminoglicosídeos. No entanto, estes isolados mostraram grande sensibilidade à vancomicina, cefalotina e ofloxacina. Com exceção da penicilina G, os isolados de Staphylococcus aureus foram bastante sensíveis aos agentes antimicrobianos, incluindo a oxacilina. Entre as gramnegativas, Proteus mirabilis foi a bactéria mais freqüente e também se mostrou bastante resistente à tetraciclina e ao cloranfenicol. Os isolados de Enterococcus se mostraram sensíveis à vancomicina.Bacterial isolation, identification and antimicrobial susceptibility tests were carried out in ocular material collected with swab and polimethylmethacrylate (PMMA) or silicone intraocular lenses (IOL) from forty six patients submitted to cataract surgery. Seventy six isolates and seven different microorganisms were identified. Coagulase-negative staphylococci (CNS) were the predominant microorganisms isolated from swabs (71.4% of cases), PMMA lenses (81.3%) and silicon lenses (77.8%). Coagulase-negative staphylococci isolates revealed high resistance to penicillin G followed by tetracycline, chloramphenicol and aminoglicosides. However, these isolates displayed great susceptibility to vancomycin, cephalothin and ofloxacin. Except for penicillin G, Staphylococcus aureus was very sensitive to the antimicrobial agents including oxacillin. Among Gram-negatives, Proteus mirabilis was prevalent and presented high resistance to tetracycline and chloramphenicol. Enterococcus isolates were vancomycin sensitive

Frequência de amebas de vida livre em ambientes hospitalares

32