Cytokine gene expression and cellular immune response in dogs with leishmaniosis before and under the two first-line treatment protocols : new insights into the animal disease

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias, especialidade de Ciências Biológicas e Biomédicas. Universidade de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária 2020Canine leishmaniosis (CanL) caused by Leishmania infantum is a zoonotic visceral disease of worldwide concern. The drugs used for its treatment improve the animal’s clinical condition, although, in most cases, the parasites are not completely destroyed. The current study aimed to evaluate the immune response of the dog with leishmaniosis before and during treatment with first-line drugs, by analyzing the profile of cytokines and subsets of CD4+ and CD8+ T-cells in peripheral blood, lymph node and bone marrow. Two groups of six dogs diagnosed with CanL were treated with either miltefosine or meglumine antimoniate in combination with allopurinol. Simultaneously, another group of ten clinically healthy dogs was used as a control group. Upon diagnosis and during the following three months of treatment, clinical signs, hematological and biochemical parameters, urinalysis results and anti-Leishmania antibody titers using IFAT were recorded. Furthermore, peripheral blood, popliteal lymph node and bone marrow mononuclear cells were collected to evaluate the gene expression of IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, TNF-α, TGF-β and IFN-γ by qPCR. In parallel, these cells were also immunophenotypically analyzed be flow cytometry, using surface monoclonal antibodies anti-CD45, CD3, CD4, CD8, CD25 and intracellular monoclonal antibody anti-nuclear factor FoxP3. Both treatment protocols promoted the remission of clinical signs, normalization of hematological and biochemical parameters and urinalysis values. Sick dogs showed a generalized increase in IFN-γ gene expression and a decrease of IL-2, IL-4, and TGF-β. The expression of IL-12, TNF-α, IL-5, and IL-10 showed variations between groups of dogs and the tissue analyzed. CanL also resulted in an overall increase in the percentage of CD8+ T-cells in all tissues. In the peripheral blood there was also a decrease in CD4+ T-cells and an increase of CD4+CD25+FoxP3+ and CD8+CD25+FoxP3+ T-cells, with the latter also increasing on the bone marrow. CD4+CD25-FoxP3- T-cells showed a marked decrease in blood and bone marrow. During treatment, a trend towards normalization of cytokine gene expression and T-cell subsets was observed. However, high levels of IFN-γ gene expression were still observed in all tissues. In turn, the treatments caused an increase in the percentage of CD4+CD25+FoxP3+ and a decrease in CD8+CD25-FoxP3- T-cells, leading to normalization of CD4+ and CD8+ T cells in all tissues. Furthermore, the effect of treatment on gene expression of cytokines that were not significantly altered by infection indicates that these combined treatment protocols directly affect cytokine production. Both combined treatments are effective in remitting clinical sings and appear to influence the dog’s immune response, sustaining a pro-inflammatory immune environment while promoting the normalization of T-cell subsets. These findings indicate that L. infantum may be able to manipulate elements of the dog's immune system to avoid differentiating an efficient protective response, preventing the rapid development of severe pathology while ensuring the parasite’s survival and securing the possibility of several transmission cycles. Allied to these results, other studies carried out in collaboration with the working group on the role of neutrophils, hepatocytes and Kupffer cells in CanL, as well as the evaluation of treatment in feline leishmaniosis, have allowed to enhance the knowledge in the area of animal leishmaniosis.RESUMO - Expressão génica de citocinas e resposta imune celular em cães com leishmaniose antes e sob os dois protocolos de tratamento de primeira linha: novas informações sobre a doença animal - A leishmaniose canina (LCan) causada por Leishmania infantum é uma doença visceral zoonótica de interesse mundial. Os fármacos utilizados para o tratamento melhoram o estado clínico do animal, embora, muitas das vezes, os parasitas não sejam totalmente eliminados. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a resposta imunitária do cão com leishmaniose antes e durante o tratamento com fármacos de primeira linha, através da análise do perfil de citocinas e subconjuntos de células T CD4+ e CD8+ no sangue periférico, linfonodo e medula óssea. Dois grupos de seis cães diagnosticados com LCan foram tratados com antimoniato de meglumina ou miltefosina em associação com alopurinol. Em simultâneo, outro grupo de dez cães clinicamente saudáveis foi usado como grupo controlo. Aquando do diagnóstico e durante os três meses consecutivos de tratamento, foram registados os sinais clínicos, parâmetros hematológicos e bioquímicos, resultados de urianálise e títulos de anticorpos anti-Leishmania obtidos por IFAT. Células mononucleares do sangue periférico, linfonodo e medula óssea foram recolhidas para avaliação da expressão génica de IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, TNF-α, TGF-β e IFN-γ por qPCR. Em paralelo, estas células foram também analisadas imunofenotipicamente por citometria de fluxo, com anticorpos monoclonais de superfície anti-CD45, CD3, CD4, CD8, CD25 e anticorpo mononuclear intracelular anti-factor nuclear FoxP3. Ambos os protocolos de tratamento promoveram a remissão dos sinais clínicos, a normalização dos parâmetros hematológicos, bioquímicos e dos valores de urianálise. Cães doentes mostraram um aumento generalizado da expressão génica de IFN-γ e diminuição de IL-2, IL-4 e TGF-β. A expressão de IL-12, TNF-α, IL-5 e IL-10 apresentou variações entre os grupos de cães e o tecido analisado. A LCan levou também a um aumento generalizado da percentagem de células T CD8+ em todos os tecidos. No sangue verificou-se ainda diminuição de células T CD4+ e aumento de células T CD4+CD25+FoxP3+ e CD8+CD25+FoxP3+, com estas últimas aumentando também na medula. As células CD4+CD25-FoxP3- mostraram diminuição acentuada no sangue e medula óssea. Durante o tratamento, foi observada uma tendência para a normalização da expressão génica de citocinas e subconjuntos celulares. No entanto, níveis elevados da expressão génica de IFN-γ foram observados em todos os tecidos. Por sua vez, os tratamentos causaram um aumento da percentagem de células T CD4+CD25+FoxP3+ e diminuição de células T CD8+CD25-FoxP3-, levando à normalização os valores de células T CD4+ e CD8+ em todos os tecidos. Adicionalmente, o efeito do tratamento na expressão génica de citocinas, que não se encontravam alteradas aquando da infeção, é indicador de que estas terapêuticas combinadas afetam diretamente a produção de citocinas. Ambas as terapêuticas combinadas são eficazes na remissão dos sinais clínicos e parecem influenciar a resposta imunitária do cão, sustentando um ambiente imunológico pró-inflamatório e promovendo a normalização de subconjuntos de linfócitos T. Estes resultados indicam que L. infantum poderá ser capaz de manipular elementos do sistema imunológico do cão para impedir a diferenciação de uma resposta protetora eficaz, evitando o rápido desenvolvimento de patologia grave, enquanto assegura a sobrevivência do parasita, garantindo a possibilidade de vários ciclos de transmissão. Aliado a estes resultados, estudos realizados em colaboração pelo grupo de trabalho sobre o papel dos neutrófilos, hepatócitos e células de Kupffer na LCan, assim como a avaliação do tratamento na leishmaniose felina, permitiram agregar mais conhecimentos na área da leishmaniose animal.N/

Discurso das pessoas internadas por crise psiquiátrica sobre credibilidade e autonomia no tratamento

Objective: to describe people in psychiatric crisis’ perception of their credibility of speech and its relationship with treatment autonomy promotion. Method: qualitative, descriptive-exploratory approach, based on semi-structured interviews, carried out in October and November 2019, with 12 men admitted to a public psychiatric institute in Minas Gerais, Brazil, selected for convenience. The research complied with ethical principles and was approved in September 2019, by number 3.566.943. Thematic content analysis technique was used to treat the data. Results: the participants reported punitive perception in relation to hospitalization and treatment, devaluation of their statements in the construction of the Singular Therapeutic Project and ignorance about the implications of these perceptions for the work of the team that accompanied them and for the institution. Conclusion: despite the reconfigurations of the mental health care model, users’ speech is still marked by low credibility and low level of autonomy on the therapeutic process. Furthermore, in the hospital environment, the challenges for the consolidation of multidisciplinary care and for the participation of the user in its treatment have been maintained.Objetivo: describir la percepción de las personas en crisis psiquiátrica sobre la credibilidad del discurso que emiten y su relación con la promoción de la autonomía de tratamiento. Método: enfoque cualitativo, descriptivo-exploratorio, basado en entrevistas semiestructuradas, realizados en octubre y noviembre de 2019, con 12 hombres ingresados en un instituto psiquiátrico público en Minas Gerais, Brasil, seleccionados por conveniencia. La investigación cumplió con principios éticos y fue aprobada en septiembre de 2019, mediante dictamen 3.566.943. Para el tratamiento de los datos se utilizó la técnica de análisis de contenido temático. Resultados: los participantes refirieron percepción punitiva con relación a la hospitalización y tratamiento, desvalorización de sus discursos en la construcción del Proyecto Terapéutico Singular y desconocimiento de las implicaciones de estas percepciones para el trabajo del equipo que los acompañaba y para la institución. Conclusión: no obstante, la reconfiguración del modelo de asistencia en salud mental, el discurso de los usuarios todavía está marcado por escasa credibilidad y falta de autonomía en el proceso terapéutico. Además, en el ámbito hospitalario, se han mantenido los retos para la consolidación de la atención multidisciplinaria y para la participación del usuario en su tratamiento.Objetivo: descrever a percepção das pessoas em crise psiquiátrica sobre a credibilidade do discurso que emitem e sua relação com a promoção da autonomia no tratamento. Método: abordagem qualitativa, descritivo-exploratória, a partir de entrevistas semiestruturadas, realizadas em outubro e novembro de 2019, com 12 homens internados em um instituto psiquiátrico público em Minas Gerais, Brasil, selecionados por conveniência. A pesquisa cumpriu os princípios éticos e foi aprovada em setembro de 2019, pelo parecer 3.566.943. Utilizou-se a técnica de análise de conteúdo temática, para tratar os dados. Resultados: os participantes referiram percepção punitiva em relação à internação e tratamento, desvalorização de suas falas na construção do Projeto Terapêutico Singular e desconhecimento sobre as implicações dessas percepções para o trabalho da equipe que os acompanhava e para a instituição. Conclusão: apesar da reconfiguração do modelo de assistência em saúde mental, o discurso dos usuários ainda está marcado por pouca credibilidade e baixa autonomia no processo terapêutico. Ademais, no âmbito hospitalar, têm-se mantido os desafios para a consolidação do cuidado multidisciplinar e para a participação do usuário em seu tratamento

Espaços crepusculares: poesia, mitohermenêutica e educação de sensibilidade

Resumo Este artigo trata de aspectos relativos a uma determinada educação de sensibilidade com base na mito-hermenêutica, aprofundada pelo autor em conferências proferidas na Universidad de Deusto (Bilbao), que resultaram na publicação: Crepusculário: conferências sobre mitohermenêutica e educação. O plano de Crepusculário discorre sobre três momentos que se configuram importantes para uma discussão mais ampla de educação: o entardecer pedagógico, o amanhecer mítico e a crespularidade ancestral. A mitohermenêutica apresenta-se como estilo filosófico - no sentido de manter uma atitude de inquietação e questionamento e, também, como método de investigação - no sentido de estabelecer procedimentos sistemáticos de pesquisa acadêmica. O título Crepusculário homenageia Pablo Neruda, um outro Crepusculário antecessor, publicado em 1923, o primeiro livro de poesias do poeta chileno. Palavras-chave: Crepusculário; Razão sensível; Mitohermenêutica; Educação de sensibilidade. Abstract This This article deals with aspects related to the education of sensibility with basis on the myth-hermeneutics, which has been deeply analyzed by the author in conferences that have taken place at the Universidad de Deusto (Bilbao) and that resulted in the publication: Crepuscule: Conferences on myt-hermeneutics and education. The plan of Crepuscule discourses on three important configurations for a broader discussion of the education: the twilight pedagogical, the mythical dawn and the crepuscule ancestral. The title honors the poet Pablo Neruda, the original Crepuscule was the first book written by the chilian author Pablo Neruda, published in 1923. Keywords: Crepuscule; Sensitive reason; Myth-hermeneutics; Education of sensibility

“Navegar é preciso, viver não é preciso”: risco no discurso da vida ativa

In this paper, I discuss the emergence of the current notion of risk, the different epistemological approaches to it and how they appear in the active life discourse. With this aim, I take as a reference the Agita Sao Paulo Program, which is mentioned by WHO as an exemplary physical activity promotion initiative. This program, though, is founded on a realistic perspective of risk, disregarding sociocultural determinants of physical activity, which is taken as the solution for complex public health problems. Aiming at promoting active lifestyles, the program follows a rationale that is built up towards consensus regardless of socioeconomic differences, demonizing sedentariness and blame sedentary people; moreover, it takes rationality as the inspiring muse of human behaviors.En este ensayo discuto como surge la moderna noción de riesgo, sus diferentes abordajes epistemológicos y su manifestación en el discurso de la vida activa. Tomo como referencia el programa Agita São Paulo, señalado por la OMS como ejemplo en el campo de la promoción de la actividad física. El programa, sin embargo, funda su estrategia en la perspectiva realista de riesgo, sin considerar los condicionantes socioculturales de la actividad física y tomándola como la solución para los complejos problemas de salud pública. Para promover la vida activa, el programa se basa en un discurso que busca el consenso, a despecho de las diferencias socieconomicas, demoniza el sedentarismo y culpa a sus adeptos. Asimismo toma la racionalidad humana como musa inspiradora de comportamiento humano.Neste ensaio, discuto a emergência da moderna noção de risco, suas diferentes abordagens epistemológicas e como elas se manifestam no discurso da vida ativa. Para isso, tomo como referência o programa Agita São Paulo, apontado pela OMS como exemplar no campo da promoção da atividade física. O programa, porém, funda suas estratégias na perspectiva realista de risco, desconsiderando os condicionantes socioculturais da atividade física e tomando-a como a solução para os complexos problemas de saúde pública. Para promover a vida ativa, o programa se baseia em um discurso que busca o consenso, a despeito das diferenças socioeconômicas, demonizando o sedentarismo e culpabilizando seus adeptos; além disso, toma a racionalidade como musa inspiradora do comportamento humano

A JUSTEZA E A BONITEZA: A ESTÉTICA-ÉTICA DAS SERTANÍAS EM PAULO FREIRE

Este artigo apresenta a abordagem mitohermenêutica (Círculo de Eranos, Andrés Ortiz-Osés, Ferreira-Santos) sobre a obra e trajetória de Paulo Freire revelando as pertinências e ressonâncias simbólicas de sua práxis com um imaginário (em seu sentido técnico a partir de Gilbert Durand): crepuscular (Ferreira-Santos). Nesse sentido, a partir de seu poema "canção óbvia" (1971), a constituição mítica e “práxica” do jardim, da rosa e da árvore (axis mundi), suas íntimas ligações com o tópos libertário desde a Comuna de Paris (1871), passando pela resistência francesa e independências africanas, além da resistência aos golpes militares na América Latina, a partir da utopia e da ucronia, numa conciliação constante (coincidenta oppositorum) entre ética (justeza) e estética (boniteza). Modulado por testemunhos memorialísticos, a investigação também alerta para as recentes recepções “endemonizadas” ou ainda “descafeínadas” das contribuições de Paulo Freire, “pósmodernamente” descontextualizado de seu compromisso histórico e seu engajamento político-social

Desenvolvimento de métodos moleculares para detecção de Theileria annulata

Dissertação para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e BiomedicinaA theileriose tropical (ou mediterrânica) é uma doença transmitida por carraças e que afecta bovinos, resultando em elevadas perdas económicas na produção e comércio internacional destes animais. O agente da doença é o hemoparasita Theileria annulata e a sua detecção em animais infectados é habitualmente realizada através de exame microscópico de esfregaços de sangue, que apresenta baixa sensibilidade na identificação de animais portadores, onde apenas um número diminuto de eritrócitos se mantém infectado. O objectivo deste estudo foi desenvolver métodos melhorados de detecção de T. annulata em amostras de sangue de bovino, baseados nas tecnologias de PCR em tempo real e de amplificação isotérmica de ácidos nucleicos (LAMP). Foram desenhados oligonucleótidos iniciadores com alvos complementares no gene Tams1, específico de T. annulata,para o método de LAMP. O DNA foi extraído a partir de amostras de sangue de bovino, usando métodos comerciais robotizados e kits de extracção, e foi usado como molde nas reacções de PCR em tempo real (com o corante intercalante EvaGreen®) e LAMP. Estas amostras de DNA encontravam-se testadas para a presença de parasitas dos géneros Theileria e Babesia, usando um método de hibridação reversa em membrana (Reverse Line Blotting – RLB). A detecção de T. annulata por PCR em tempo real nestas amostras revelou uma especificidade e sensibilidade de 100% e 80%,respectivamente, usando o teste de RLB como referência. A técnica de LAMP, por sua vez, conseguiu detectar uma amostra com baixa parasitémia correspondente a 0,03%. Ambas as técnicas usadas neste trabalho demonstraram ser eficientes na detecção de T. annulata, constituindo a técnica de PCR em tempo real um bom método de detecção em laboratórios bem equipados e a técnica de LAMP uma promissora ferramenta em laboratórios de diagnóstico com menores recursos.Apoiado pelo Deputado Europeu Rui Tavares através do financiamento de uma bolsa de estud

Soluções analíticas de equações integrais de Cauchy e de Hadamard em dois intervalos disjuntos

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Avaliação da (in) satisfação com um serviço de dependência química na perspectiva dos familiares

Objetivou-se neste estudo, avaliar a satisfação dos familiares de usuários com um serviço de dependência química. Trata-se de um estudo descritivo, de corte transversal, com abordagem quantitativa e qualitativa, realizado com familiares que acompanhavam usuários internados em tratamento. Este estudo integrou a pesquisa intitulada Avaliação de Serviços de Saúde Mental: O caso PRESTA-ES que foi aprovada pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal do Espírito Santo, sob o No. 242.842. Na análise quantitativa, a amostra foi composta por 23 indivíduos que tiveram dados coletados através de um questionário que dentre outras variáveis, mensura a satisfação por meio da Escala de Avaliação da Satisfação em Serviços de Saúde Mental (SATIS-BR). A estatística descritiva e a correlação de Pearson foram empregados para analisar os resultados. Predominou o sexo feminino entre os participantes (91,3%). Quanto ao grau de parentesco, houve maior prevalência dos genitores (39,2%), seguido pelos cônjuges (30,43%). A droga mais se constituiu como motivo de procura pela internação no serviço foi a cocaína/crack (69,6%) seguida pelo álcool (26,1%). Detectou-se alto grau de satisfação dos familiares com o serviço (4,65), como também com os subitens: resultados do tratamento (4,61); acolhida e competência da equipe (4,83); privacidade e confidencialidade (4,43). As correlações das três subescalas SATIS-BR com a escala global foram positivas, fortes e significativas (r > 0,7 e p < 0,01).Para análise qualitativa empregou-se a técnica do grupo focal de seis indivíduos que tinham participado da etapa quantitativa. As falas foram gravadas, transcritas integralmente e analisadas a luz da análise de conteúdo conforme Bardin (2011). Emergiram a posteriori seis categorias : 1) Satisfação com os profissionais do serviço; 2) Acessibilidade; 3) Aspectos Estruturais; 4) Resultados do tratamento; 5) Continuidade do tratamento; 6) Atenção oferecida à família. Notou-se que os familiares estiveram satisfeitos com o serviço e que as mudanças apresentadas pelos usuários decorrentes do tratamento, a competência e a postura acolhedora da equipe foram questões relacionadas à satisfação destes. Os sujeitos demonstram-se insatisfeitos com as condições físicas do local, com a quantidade de dias fixados para visita aos usuários e com grupo de atenção à família. A satisfação dos familiares foi observada tanto no componente quantitativo quanto no componente qualitativo, contudo na análise qualitativa a insatisfação foi mais evidenciada.The objective of this study was to evaluate the satisfaction of the families of users with a service of chemical dependency . This is a descriptive, cross- sectional, quantitative and qualitative approach, performed with relatives who accompanied users admitted to treatment. This study was part of a study entitled "Evaluation of Mental Health Services : The PRESTA - ES case" that was approved by the Ethics Committee in Research of the Science Center , Federal University of Espírito Santo Saúde , under number. 242 842 . In quantitative analysis , the sample consisted of 23 individuals who had data collected through a questionnaire that, among other variables , measures satisfaction through " Satisfaction Rating Scale for Mental Health Services " (SATIS - BR) . Descriptive statistics and Pearson correlation were used to analyze the results . Females predominated among the participants (91.3 %) . The degree of kinship, was more prevalent among parents ( 39.2 %) , followed by spouses (30.43 %) . More The drug was constituted as the reason for seeking admission to the service was cocaine / crack ( 69.6 % ) followed by alcohol (26.1 %) . Detected a high degree of satisfaction with the service of the family (4.65) , but also with sub-items : treatment results (4.61), acceptance and competence of staff ( 4.83), privacy and confidentiality (4 ,43) . The correlations of the three subscales SATIS - BR with the global scale were positive , strong and significant ( r> 0.7 and p < 0.01 ) . Qualitative analysis employed the technique of focus group of six individuals who had participated step quantitative . The discussions were recorded , transcribed and analyzed the light content analysis according to Bardin (2011) . Emerged subsequent six categories : 1) satisfaction with service professionals , 2) accessibility , 3) Structural Aspects ; 4) Results of treatment ; 5 ) Continuity of treatment ; 6 ) Attention offered to the family . It was noted that relatives were satisfied with the service and that the changes made by users from the treatment , competence and welcoming attitude of the staff were issues related to the satisfaction thereof. The subjects show themselves dissatisfied with the physical conditions of the site , with the number of days set for business users and group of family care . The satisfaction of family members was observed in both the quantitative component as the qualitative component , yet the dissatisfaction was more evident qualitative analysisFAPE