Phosphatidylinositol 4-phosphate 5-kinases 1 and 2 are involved in the regulation of vacuole morphology during Arabidopsis thaliana pollen development

The pollen grains arise after meiosis of pollen mother cells within the anthers. A series of complex structural changes follows, generating mature pollen grains capable of performing the double fertilization of the female megasporophyte. Several signaling molecules, including hormones and lipids, have been involved in the regulation and appropriate control of pollen development. Phosphatidylinositol 4-phophate 5-kinases (PIP5K), which catalyze the biosynthesis of the phosphoinositide PtdIns(4,5)P2, are important for tip polar growth of root hairs and pollen tubes, embryo development, vegetative plant growth, and responses to the environment. Here, we report a role of PIP5Ks during microgametogenesis. PIP5K1 and PIP5K2 are expressed during early stages of pollen development and their transcriptional activity respond to auxin in pollen grains. Early male gametophytic lethality to certain grade was observed in both pip5k1-/- and pip5k2-/- single mutants. The number of pip5k mutant alleles is directly related to the frequency of aborted pollen grains suggesting the two genes are involved in the same function. Indeed PIP5K1 and PIP5K2 are functionally redundant since homozygous double mutants did not render viable pollen grains. The loss of function of PIP5K1 and PIP5K2results in defects in vacuole morphology in pollen at the later stages and epidermal root cells. Our results show that PIP5K1, PIP5K2 and phosphoinositide signaling are important cues for early developmental stages and vacuole formation during microgametogenesis

Desarrollo de muffins libres de gluten y sacarosa : Uso de combinaciones de proteínas, fibras solubles e insolubles como agentes texturizantes

Actualmente existe un creciente interés en el desarrollo de productos libre de gluten debido a un aumento en la población de pacientes celíacos. La diabetes mellitus tipo I y la enfermedad celíaca suelen manifestarse juntas, ya que aproximadamente entre un 5 y 10% de los enfermos celíacos sufren de diabetes mellitus tipo I. Los pacientes celíacos poseen una ingesta de fibra menor a la recomendada por organizaciones internacionales. La inclusión en la dieta de alimentos ricos en fibra puede prevenir o aliviar la diabetes mellitus tipo I. La fibra alimentaria presenta diferentes propiedades tecnológicas: mejora la textura, características sensoriales y tiempo de vida útil del alimento, debido a su capacidad de retención de agua, su habilidad de formar geles, y como reemplazante de grasa, texturizante y producto de relleno. Por ello en este trabajo se estudió el efecto de diferentes tipos de fibras solubles e insolubles (maltodextrina, salvado de maíz, celulosa microcristalina) en combinación con proteínas de suero de leche en muffins libres de gluten y de azúcar, aptos para diabéticos y celíacos. Como agentes edulcorantes se utilizaron combinaciones de Stevia y sucralosa. Para ello se preparó una solución de suero de leche al 5% (p/v) la cual fue liofilizada en combinación de las fibras solubles e insolubles por medio de un liofilizador a 20 µm de Hg. Se realizaron formulaciones de muffins libres de sacarosa y libres de gluten, con y sin agregado de mejoradores entre un 1 a 3%(p/p) de proteínas de suero de leche liofilizadas con la incorporación de maltodextrina (PS+M), salvado de maíz (PS+SM) y celulosa microcristalina (PS+CM). Se realizó un muestra Control sin agregado de mejoradores. Se evaluó la firmeza cada 24 h durante 4 días. Para ello se realizó un test de doble compresión con un texturómetro, a una velocidad de penetración de 100 mm/min con una distancia de compresión de 5 mm, utilizando una probeta cilíndrica de 38 mm. En el parámetro de firmeza de los muffins no se observó diferencia estadísticamente significativa entre las muestras con agregado de los mejoradores al 1%(p/p) (PS+M: 21,09±0,70N; PS+SM: 21,42±0,09N; PS+CM: 25,68±4,19N) y la muestra control (20,59±2,17N), (P>0,05). El incremento de la concentración de los diferentes mejoradores ensayados generó un aumento de la firmeza durante el período estudiado. Las muestras evaluadas presentaron un incremento mayor en el valor de la firmeza que la muestra control durante el periodo de almacenamiento, a excepción de la formulación con agregado de PS+M al 1%(p/p) que no presentó diferencia estadísticamente significativa con la muestra control durante los primeros días del almacenamiento (P>0,05). Además, el agregado de este mejorador (PS+M al 1%,p/p) permitió disminuir la dureza de la muestra en el cuarto día de almacenamiento con respecto al control, desde 56,83±3,25N a 37,69±2,47N. En conclusión el agregado de PS+M al 1% (p/p) permitió una reducción estadísticamente significativa de la firmeza de los muffins libres de gluten y sacarosa ensayados, permitiendo obtener productos con un perfil nutricional y de textura mejorados con mayor tiempo de vida útil.Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimento

Análisis de los mecanismos involucrados en la localización asimétrica de ATPRP1 y ATPRP3 en el pelo radicular de Arabidopsis thaliana

Tesis (Doctor en Biotecnología)Las proteínas ricas en prolinas (PRPs) son proteínas estructurales involucradas en el ensamblaje de la pared celular. En Arabidopsis dos miembros de esta familia de genes, ATPRP1 y ATPRP3, se expresan específicamente en células de pelo radicular. Los pelos radiculares elongan mediante crecimiento por el ápice a partir de células epidermales especializadas denominadas tricoblastos. El crecimiento por el ápice involucra la secreción polarizada de los materiales necesarios para formar la membrana y la pared celular en crecimiento. Ha sido previamente descrito que ATPRP3 se acumula de manera asimétrica en la pared celular en la punta del pelo en crecimiento mientras que, ATPRP1 , presenta una distribución uniforme a lo largo de la pared celular del pelo radicular. Este trabajo de tesis se centra en el estudio de los mecanismos y señales involucrados en la distribución asimétrica de ATPRP1 y ATPRP3 en la pared celular del pelo radicular de Arabidopsis. Se analizó el tráfico subcelular de ATPRP1 y ATPRP3 utilizando fusiones de las secuencias codificantes con el reportero GFP. Asimismo , mediante una combinación de estrategias que incluyen análisis farmacológicos y de imágenes confocales se comprobó que ambas proteínas trafican hacia el ápice del pelo en crecimiento. Sin embargo, podrían utilizar diferentes rutas de secreción. Nuestros resultados también indican que una vez que estas proteínas alcanzan la pared celular solo ATPRP3 es endocitada y destinada a la vacuola. Utilizando estrategias de expresión heteróloga en células epiteliales de mamíferos MDeK se estudiaron las señales involucradas en la distribución polarizada de ATPRP3 y ATPRP1 . En estas células ATPRP3 es reconocida y destinada de manera polariza al medio apical. Mientras que, ATPRP1 es destinada de manera no polarizada tanto al medio apical como al basolateral. Además, se comprobó que el segmento e-terminal de ATPRP3 posee los determinantes para su destinación polarizada. Asimismo, ensayos realizados en células de pelo radicular de Arabidopsis permitieron comprobar que el segmento e-terminal de ATPRP3 también está involucrado en la localización asimétrica de esta proteína en la pared celular y que la deslocalización de esta proteína altera el crecimiento del pelo radicular. En conjunto , los resultados obtenidos en esta tesis permitieron concluir que el mantenimiento de la acumulación de ATPRP3 en la punta del pelo radicular obedece tanto a mecanismos exocíticos como endocíticos. Además, que esta localización asimétrica de ATPRP3 depende de la presencia de señales especificas y está asociada a su función en la pared celular.Proline-rich proteins (PRPs) are structural proteins involved in the assembly of the cell wall. AtPRP1 and AtPRP3 represent two members of this gene family that are specifically expressed in root hair cells . Root hairs elongate by tip growth from specialized epidermal cells (trichoblasts) in arabidopsis. Tip growth involves unidirectional elongation in which secretion of new cell wall material occurs in a small area at the tip of the hair. lt has been reported that ATPRP3 accumulates at the root hair tip and that ATPRP1 presents an even distribution within the growing root hair cell wall. This thesis work addresses the mechanisms and signals involved in the asymmetric distribution of ATPRP1 and ATPRP3 at the root hair cell wall. To examine the subcellular protein traffic we generated GFP-fusions and we perform studies using a combination of pharmacological and confocal cell imaging approaches. Our results reveled that both proteins are secreted to the growing root hair tip . However, they may use different secretory pathways. Furthermore, once they reach the cell wall only ATPRP3 is endocytosed and transported to the vacuole . Using a heterologous expression approach in epithelial MDCK cells we identify signals in the ATPRP3 C-terminal involved in the polarized sorting of this protein. We also confirm that these signals are important for asymmetric accumulation in plant cells and that miss localization of this protein alters normal root hair growth . These results demonstrate that the asymmetric accumulation of ATPRP3 in the root hair cell wall is regulated by exocytic and endocytic mechanisms. In addition this asymmetric localization is associated to the protein function within the cell wall and depends on specific signal

Aplicación móvil para la gestión automática de perfiles, usando tecnologías de posicionamiento global e inteligencia artificial

Desarrollar una herramienta capaz de gestionar los perfiles de un dispositivo móvil automáticamente, haciendo uso de sistemas de posicionamiento global y algoritmos de inteligencia artificial, así diagnosticar de manera correcta una necesidad no suplida por aplicaciones móviles ya existentes

Evaluation of Long-Term Effects of the Gonadotrophin-Releasing-Hormone Antagonist Acyline on Domestic-Cat Growth

Acyline contraception has been described in cats, but few data are available on the drug's long-term effect on growth. The relevant data cover until puberty with no radiographic description. We investigated the radiographic parameters throughout bone growth in order to more completely determine the drug's safety. Thirteen male and 12 female cats were studied, with the kittens being randomly assigned to one of the following groups within the first 24 hours of birth: ACY, subcutaneous acyline, 33 µg/100 g, which injection was repeated weekly until age 3 months; or CO, untreated control. Body measurements were recorded weekly and radiographic parameters obtained from monthly radiographs of the antebrachium. In the ACY and CO male and female kittens, the body weight, withers height, and body length plus the age at the end of body growth and radial growth remained similar throughout the study (P> .05). Both female groups finished radial growth before the males (P< .05). The ACY females evidenced a longer radial length between the eighth and 28th weeks (P< .05). All groups closed their proximal and distal physes within the normal ranges described for the species. The bone-cortex width was lower in the ACY vs. the CO animals at weeks 52 and 60 in the males and at weeks 24, 48, 52, and 56 in the females (P< .05) The transient greater radial length and lower bone-cortex thickness observed in the treated cats were compensated for at the end of growth with no adverse clinical effects being observed. In conclusion, acyline as a contraceptive did not evidence a permanent or severe effect on domestic-cat growth.Fil: Romero, Mariela Grisolia. CONICET; ArgentinaFil: Marchetti, Cynthia. CONICET; ArgentinaFil: Priotto, Marcelo. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Rodríguez, Marcelo. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires; ArgentinaFil: Gobello, Cristina. CONICET; ArgentinaFil: Furlan, Paulina. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Faya, Marcela. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Romero, Mariela Grisolia. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Marchetti, Cynthia. Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Gobello, Cristina. Universidad Nacional de La Plata; Argentin

Arabidopsis thaliana AtUTr7 encodes a golgi-localized UDP-glucose/UDP- galactose transporter that affects lateral root emergence

Nucleotide sugar transporters (NSTs) are antiporters comprising a gene family that plays a fundamental role in the biosynthesis of complex cell wall polysaccharides and glycoproteins in plants. However, due to the limited number of related mutants that have observable phenotypes, the biological function(s) of most NSTs in cell wall biosynthesis and assembly have remained elusive. Here, we report the characterization of AtUTr7 from Arabidopsis (Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.), which is homologous to multi-specific UDP-sugar transporters from Drosophila melanogaster, humans, and Caenorhabditis elegans. We show that AtUTr7 possesses the common structural characteristics conserved among NSTs. Using a green fluorescent protein (GFP) tagged version, we demonstrate that AtUTr7 is localized in the Golgi apparatus. We also show that AtUTr7 is widely expressed, especially in the roots and in specific floral organs. Additionally, the results of an in vitro nucleotide sugar transport assay carr

Unraveling protein stabilization mechanisms:Vitrification and water replacement in a glass transition temperature controlled system

<p>The aim of this study was to elucidate the role of the two main mechanisms used to explain the stabilization of proteins by sugar glasses during drying and subsequent storage: the vitrification and the water replacement theory. Although in literature protein stability is often attributed to either vitrification or water replacement, both mechanisms could play a role and they should be considered simultaneously. A model protein, alkaline phosphatase, was incorporated in either inulin or trehalose by spray drying. To study the storage stability at different glass transition temperatures, a buffer which acts as a plasticizer, ammediol, was incorporated in the sugar glasses. At low glass transition temperatures (</p>