Análise da metilação de genes em resposta a Diploidia em Aspergillus (=Emericella) Nidulans (Eidam) Vuill / Analysis of gene methylation in response of Diploidy in Aspergillus (=Emericella) Nidulans (Eidam) Vuill

Epigenética estuda alterações de expressão gênica sem alteração em nucleotídeos da região promotora. A metilação tem sido muito estudada em eucariotos superiores e mais recentemente em fungos. Aspergillus nidulans é um fungo filamentoso, homotálico geralmente haplóide. Por meio de cruzamentos com marcadores nutricionais é possível obter linhagens diplóides estáveis. Colônias diplóides apresentam desenvolvimento vegetativo e conidiogênese normalmente como ocorre com as haplóides. O presente trabalho teve como objetivo estudar a metilação de genes em resposta ao excesso de material genético em linhagens diplóides.  Linhagens com marcadores conhecidos foram utilizadas para a obtenção dos diplóides biA1methG1//MSE, CLB3//MSE, ppy//MSE, 4//8 e 4//14. Colônias destes diplóides foram cultivadas para observação da ocorrência espontânea de setores com diferentes morfologias, coloração de conídios, formato dos conidióforos, presença de cleistotécios, indicativos de metilação em resposta a diploidia. Nenhuma das 100 colônias de cada diplóide produziu setores nem de coloração nem de esporulação nem de cleistotécios. Os diplóides foram cultivados com carência de oxigênio para a produção de cleistotécios. Ascósporos de um cleistotécio de cada linhagem foram inoculados para a obtenção de linhagens metiladas por evento pré-meiótico. Destas colônias foram selecionados setores para coloração. As colônias purificadas destes setores mostraram estabilidade de cor e grande parte delas tinham também uma alta produção de cleistotécios em resposta a metilação. Os resultados mostraram que linhagens diplóides ao serem ativadas sofrem metilação em genes para coloração de esporos e para a produção de ciclo sexual

Effect of nutritional factors on the Aspergillus nidulans germination program / Efeito de fatores nutricionais sobre o programa de germinação de conídios de Aspergillus nidulans

The development of conidia germination of the filamentous fungus Aspergillus nidulans can be used to evaluate the effects of different agents. The objective of the present work was to test eight compositions of the culture medium for the germination of conidia of the bimeth strain. Dormant conidia were inoculated in minimal medium with the following compositions: TN1 (MM + glyc 1% + VIT), TN2 (MM + glyc 0.1% + VIT), TN3 (MM + glyc 1% + VIT + casein), TN4 (MM + 0.1% gli + VIT + casein), TN5 (KH2PO4 + 1% gli + VIT), TN6 (KH2PO4 + 1% gli + casein), TN7 (NaNO3 + KCl, 1% gli + VIT) and TN8 (MC). Five hundred conidia were analyzed in each observation, determining the percentage of conidia in each germination phase, for a period of up to 24 hours. After that time, the percentages of death and malformation of the conidia were determined. The results showed changes in germinative development, in the generation of dead and malformed in all TNs that lacked nutrients, when compared to MM and MC. When testing two glucose concentrations, it can be seen that glucose is not consumed during germination, although it is necessary for breaking dormancy. The absence of casein showed that the bimeth strain, which has a requirement for methionine, germinated in the absence of methionine, therefore, it was able to synthesize at least a small amount of this amino acid, although in casein media the germination was better. The absence of phosphate totally inhibited the germination of the conidia, due to the lack of raw material for DNA duplication. Some media that are poorer in nutrients than MM have shown to allow germination. The analysis of dead and malformed showed that TNs 3, 4 and 6 had a disrupting effect on polarized growth and TNs 1, 2 and 5 had a more drastic inhibitory effect, increasing cell death. The results of this work show that the conidia had changes in the development of germination in response to nutritional conditions, showing that the choice of constituents for the preparation of the medium to be used influences the responses of germination, death and malformations in conidia of A. nidulans

EFEITO MUTAGÊNICO DE BAIXA DOSE DE ULTRAVIOLETA NO SISTEMA methG1 EM Aspergillus nidulans

O cncer atualmente um dos problemas mais comuns e graves. Esse grupo de doenas caracteriza-se pela formao de tumores malignos, em decorrncia de mutaes em genes responsveis pelo controle da proliferao e diferenciao celular. Assim, os agentes mutagnicos so potencialmente carcinognicos. Entre os agentes cancergenos mais conhecidos est a radiao ultravioleta, por ser um conhecido fator de risco para cncer de pele. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi analisar o potencial mutagnico de baixas doses de ultravioleta no sistema methG1. Para isto, foram tratados esporos da linhagem biA1methG1 de Aspergillus nidulans com um segundo de exposio luz ultravioleta. Os resultados mostraram que, mesmo em dose mnima, este agente capaz de causar danos ao genoma, diminuindo a viabilidade e aumentando significativamente a frequncia de mutao, quando comparadas aos valores do controle (esporos no expostos ao tratamento). Estes resultados corroboram com a importncia dos cuidados preventivos e de restrio exposio demasiada a radiao ultravioleta da luz solar

Efeitos do suco comercial de Aloe vera L. na germinação e antimutagênese em Aspergillus nidulans e pelo ensaio cometa em ratos Wistar

Aloe vera L., popularly known in Brazil as “babosa”, has great pharmacognostic value and is widely used in folk medicine. Numerous properties have been identified in extracts of this plant, such asantioxidant, antitumor, antidiabetic, antibiotic, anti-inflammatory, and immunostimulatory activities. We aimed to evaluate the effect of Aloe vera commercial juice on the development of normal and mutant strains of Aspergillus (= Emericella) nidulans and on antimutagenesis in the methG1 system of this fungus; as well as its genotoxicity on Wistar rats, evaluated through the comet assay. In both germination and antimutagenicity assays, two juice concentrations (4% and 8%, v/v) were tested. Animals were treated for 7 days with juice at concentrations 0.1 mL/100 g c.p. and 0.2 mL/100 g c.p., receiving the chemotherapy etoposide as genotoxic agent in the eighth day of treatment. The highest juice concentration (8%) was the most efficient, stimulating germination in all A. nidulans strains. However, regarding the decrease in number of dead and malformed spores, both concentrations were beneficial, but through random effects. Antimutagenicity was observed only in the 8% extract. In the comet assay, on the other hand, both concentrations were antigenotoxic compared to the etoposide. Thus, our results corroborate the literature reportsof beneficial properties in A. vera.Efeitos do suco comercial de Aloe vera L. na germinação e antimutagênese em Aspergillus nidulans e pelo ensaio cometa em ratos Wistar. Aloe vera, popularmente conhecida como babosa, possui grande valor medicinal e éamplamente utilizada pela população em geral. Inúmeras atividades biológicas já foram relacionadas a essa planta, tais como antioxidante, antitumoral, hipoglicemiante, antibiótica, anti-inflamatória e imunomoduladora. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do suco comercial de Aloe vera no desenvolvimento de linhagens normais e mutantes do fungo Aspergillus (=Emericella) nidulans e sobre a antimutagênese no sistema methG1 neste fungo e a antigenotoxicidade em ratos Wistar, no Ensaio Cometa. Tanto nos testes de germinação como nos de antimutagenicidade no fungo, foram testadas duas concentraçõesdo suco, 4% e 8% (v/v). Os animais foram tratados com o suco durante 7 dias com as concentrações 0,1 mL/100g p.c. e 0,2 mL/100g p.c., recebendo o quimioterápico etoposido como agente genotóxico no oitavo dia de tratamento. A maior concentração do suco (8%) mostrou-se mais eficiente, estimulando a germinação em todas as linhagens de A. nidulans. Entretanto, em relação à diminuição de esporos mortos e malformados, ambas as concentrações se mostraram benéficas, porém, de forma aleatória. A antimutagenicidade foi demonstrada somente pelo extrato a 8%. No Ensaio Cometa, ambas as concentrações foram protetoras em relação ao etoposido. Desse modo, os resultados descritos no presente estudo corroboram com os resultados presentes na literatura, associados às propriedades benéficas da A. vera

Cytological, genetical and molecular characterization of a conidiation mutant of Aspergillus nidulans

Com o objetivo de estudar a conidiogênese em Aspergillus nidulans, foram obtidos por tratamento com luz ultravioleta, diversos mutantes com esporulação deficiente. Uma destas linhagens, CLB3, mostrou-se particularmente interessante por apresentar conidióforos aberrantes típicos de mutantes bristle ou medusa. As análises genéticas demonstraram tratar-se de um novo alelo do gene bristle (brlA), o mais importante gene regulador na diferenciação do conidióforo. A expressão de brlA apresenta uma coordenação temporal-espacial bastante complexa. Para isto são transcritos dois diferentes mRNAs que codificam para a mesma proteína. O primeiro, β é responsável pelo desenvolvimento do conidióforo até a fase de métula e é regulado a nível de transcrição, processamento e tradução. O segundo, α, é induzido a nível de transcrição. A morfologia do conidióforo e o mapeamento intragênico indicavam que a mutação está localizada em região anterior à estrutural, comprometendo a quantidade de produto do transcrito β. O sequenciamento mostrou uma transição C → T a -24 da origem de transcrição de β, o que deve acarretar diminuição de transcrição deste mRNA. A análise citológica da conidiogênese de CLB3 em diferentes condições de meio, osmolaridade, luz e temperatura, trouxe duas importantes contribuições para o conhecimento do papel deste gene no estágio inicial do desenvolvimento em Aspergillus nidulans: 1. Demonstrou que a deficiência de brlAβ leva à formação de conidióforos secundários, como previa PRADE & TIMBERLAKE, com deficientes construídos por tecnologia do DNA recombinante. 2. Demonstrou que todos os fatores que induzem esporulação não são capazes de suprimir a deficiência de brlAβ e, por isto, não induzem brlA, como havia sido sugerido.To analyse the conidiogenesis in Aspergillus nidulans, some mutants oligosporous were obtained by treatment with UV. One of them, CLB3, was interesting because its aberrant conidiophores, that resembles bristle and medusa mutants. Genetic approach showed that a new alele of the bristle (brlA) gene was responsable for this phenotype. This gene is the most important regulator of conidiophore differentiation. Its expression presents a complex spacial-temporal coordination. For this purpose, there are the transcription of two differents mRNAs. Both led to the same protein. First, β is responsable by early development and is regulated by transcription, splicing and translation. The second mRNA, α, is induced only at transcription level. The conidiophore's morphology and intragenic mapping demonstrated that the mutation is upstream the structural region. The consequence is a delayed expression of the transcript β product. The sequencing showed a transition C → T at -24 of the β transcription initiation site. This damage may be led to decrease of the βmRNA transcription. Cytological analysis of the CLB3 conidiogenesis at distinct nutrition, osmolarity, light and temperature conditions led two important contributions to the knowledge about brlA at early stages of development of the A. nidulans conidiophores: 1. The demonstration that the deficiency of brlAβ led to secondary conidiophores development. This results are in concordance with PRADE & TIMBERLAKE (1993) had obtained with deficient strains constructed by molecular approach; 2. The indication that all the factors that induce conidiogenesis don't suppress the deficiency of brlAβ. This means that brlA isnt induced by this factors as have been suggested

Plant-microbe interactions between maize (Zea mays L.) and endophytic microrganisms observed by Scanning Electron Microscopy

ABSTRACT. During the last few years endophytes occurrence has been constantly reported in healthy, symptomless leaves, suggesting that this microrganisms can colonize plant organs without causing apparent disease symptoms. The purpose of this study was to observe plant-microbe interactions between maize (Zea mays L.) and endophytic bacteria into the leaf tissue by scanning electron microscopy with application of an osmium fixation technique. It was possible to observe intracellular space of maize leaves infected with endophytic bacteria by this technique. The three-dimensional configuration and arrangement of endophyte colonies inside leaf tissue of host plant were visible. Key words: endophytic, bacteria, maize, scanning electron microscopy. RESUMO. Interações planta-micróbio entre o milho (Zea mays L.) e microrganismos endofíticos observados por microscopia eletrônica de varredura. Durante os últimos anos, a ocorrência de endófitos tem sido constantemente reportada em folhas saudáveis, assintomáticas, sugerindo que esses microrganismos podem colonizar órgãos de plantas sem causarem sintomas aparentes de doenças. O objetivo deste trabalho foi o de observar as interações planta-micróbio entre o milho (Zea mays L.) e bactérias endofíticas no tecido das folhas por microscopia eletrônica de varredura com a aplicação de uma técnica de fixação com ósmio. Com o emprego dessa técnica foi possível observar o espaço intercelular das folhas de milho com bactérias endofíticas. A configuração tridimensional e o arranjo das colônias endofíticas nos tecidos das folhas da planta hospedeira foram visíveis. Palavras-chave: endofíticos, bactérias, milho, microscopia eletrônica de varredura

Efeitos do suco comercial de Aloe vera L. na germinação e antimutagênese em Aspergillus nidulans e pelo ensaio cometa em ratos Wistar

Aloe vera L., popularly known in Brazil as “babosa”, has great pharmacognostic value and is widely used in folk medicine. Numerous properties have been identified in extracts of this plant, such asantioxidant, antitumor, antidiabetic, antibiotic, anti-inflammatory, and immunostimulatory activities. We aimed to evaluate the effect of Aloe vera commercial juice on the development of normal and mutant strains of Aspergillus (= Emericella) nidulans and on antimutagenesis in the methG1 system of this fungus; as well as its genotoxicity on Wistar rats, evaluated through the comet assay. In both germination and antimutagenicity assays, two juice concentrations (4% and 8%, v/v) were tested. Animals were treated for 7 days with juice at concentrations 0.1 mL/100 g c.p. and 0.2 mL/100 g c.p., receiving the chemotherapy etoposide as genotoxic agent in the eighth day of treatment. The highest juice concentration (8%) was the most efficient, stimulating germination in all A. nidulans strains. However, regarding the decrease in number of dead and malformed spores, both concentrations were beneficial, but through random effects. Antimutagenicity was observed only in the 8% extract. In the comet assay, on the other hand, both concentrations were antigenotoxic compared to the etoposide. Thus, our results corroborate the literature reportsof beneficial properties in A. vera.Efeitos do suco comercial de Aloe vera L. na germinação e antimutagênese em Aspergillus nidulans e pelo ensaio cometa em ratos Wistar. Aloe vera, popularmente conhecida como babosa, possui grande valor medicinal e éamplamente utilizada pela população em geral. Inúmeras atividades biológicas já foram relacionadas a essa planta, tais como antioxidante, antitumoral, hipoglicemiante, antibiótica, anti-inflamatória e imunomoduladora. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do suco comercial de Aloe vera no desenvolvimento de linhagens normais e mutantes do fungo Aspergillus (=Emericella) nidulans e sobre a antimutagênese no sistema methG1 neste fungo e a antigenotoxicidade em ratos Wistar, no Ensaio Cometa. Tanto nos testes de germinação como nos de antimutagenicidade no fungo, foram testadas duas concentraçõesdo suco, 4% e 8% (v/v). Os animais foram tratados com o suco durante 7 dias com as concentrações 0,1 mL/100g p.c. e 0,2 mL/100g p.c., recebendo o quimioterápico etoposido como agente genotóxico no oitavo dia de tratamento. A maior concentração do suco (8%) mostrou-se mais eficiente, estimulando a germinação em todas as linhagens de A. nidulans. Entretanto, em relação à diminuição de esporos mortos e malformados, ambas as concentrações se mostraram benéficas, porém, de forma aleatória. A antimutagenicidade foi demonstrada somente pelo extrato a 8%. No Ensaio Cometa, ambas as concentrações foram protetoras em relação ao etoposido. Desse modo, os resultados descritos no presente estudo corroboram com os resultados presentes na literatura, associados às propriedades benéficas da A. vera

Kaurenoic acid from Annona squamosa L. exhibits antiproliferative effect on human tumor cell lines and induces apoptosis in Aspergillus nidulans

Made available in DSpace on 2020-02-17T11:40:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) daniela_granella_gomes_et_all.pdf: 726691 bytes, checksum: e6e3f7c19e3b105914c0d5f2ed57ec31 (MD5) Previous issue date: 2019Universidade Estadual de Maringá. Secretaria de Biologia Comparada. Laboratório de Genética Molecular e do Desenvolvimento. Maringá, PR, Brasil.Universidade Estadual de Maringá. Secretaria de Biologia Comparada. Laboratório de Genética Molecular e do Desenvolvimento. Maringá, PR, Brasil.Universidade Tecnológica Federal do Paraná. Campo Mourão, PR, Brasil.Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Campinas, SP, Brasil.Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Campinas, SP, Brasil.Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Campinas, SP, Brasil.Universidade Estadual de Maringá. Centro de Ciências Biológicas. Departamento de Biologia Celular e Genética. Maringá, PR, Brasil.Annona squamosa is a source of bioactive compounds, with several pharmacological activities. However, tests are needed to confirm the safety of these compounds in terms of cytogenotoxic potential and their possible medicinal activity. Thus, the aims of the present study were to isolate kaurenoic acid from sugar apple peel and determine its antiproliferative activity in nine human tumor cell lines and mutagenic activity in germinating Aspergillus nidulans conidia. Chemical extraction resulted in the isolation of kaurenoic acid, a terpene that demonstrated a cytostatic effect at concentrations of 25 and 250 µg mL-1 and antiproliferative at a concentration 250 µg mL-1. The germination test showed that this compound can activate apoptosis, since there was an increase in dead conidia and a decrease in malformed individuals in all treatments. These results indicate its antiproliferative effect and apoptosis activation, representing a useful tool in the development of new chemotherapy drugs

Fração de sementes de Annona squamosa L. apresenta potente atividade antiproliferativa em linhagens tumorais humanas

Muitas plantas são empregadas pela população como medicinais devido suas propriedades farmacológicas. Annona squamosa L., conhecida popularmente como pinha, possui ampla distribuição em regiões tropicais e subtropicais e é rica em componentes bioativos que incluem diterpenos, flavonoides, alcaloides, taninos, glicosídeos, fitoesterois, acetogeninas, ciclopeptídeos e óleos essenciais. Tais componentes apresentam diversas bioatividades, como antidiabética, hepatoprotetora, antioxidante, antigenotóxica, antitumoral e antiproliferativa. O presente trabalho avaliou a atividade antiproliferativa da fração metanólica de sementes de A. squamosa, semipurificada por cromatografia de coluna, testada nas concentrações de 0,25 µg mL-1, 2,5 µg mL-1, 25 µg mL-1 e 250 µg mL-1, em nove linhagens celulares tumorais humanas U251, UACC-62, MCF-7, NCI-ADR/RES, 786-0, NCI-H40, PC-3, HT-29, K562 e na linhagem celular não tumoral humana HaCat, frente ao controle positivo com doxorrubicina. Os resultados mostraram potente efeito antiproliferativo para todas as linhagens testadas. No entanto, houve seletividade sobre a linhagem NCI-H460 (TGI 0,80 µg mL-1) para atividade citostática e, para linhagem U251 (TGI 4,1 µg mL-1) para atividade citocida, atingindo 100%. Essa atividade pode estar relacionada à presença de componentes pró-apoptóticos, como as acetogeninas e/ou compostos fenólicos, indicando potencial uso da fração para futuros isolamentos de moléculas anticâncer