Caracterização da composição do lisado plaquetário

A cultura de células in vitro utiliza diversas formulações de meios de cultura, os quais contém uma fonte de fatores de crescimento; o padrão ouro atualmente utilizado para essa finalidade é o soro fetal bovino (SFB). Entretanto, existem alternativas melhores que superam sua eficácia e limitações. O uso do suplemento lisado plaquetário (LP) humano como substituto do SFB na cultura de células-tronco mesenquimais (CTM) humanas, por exemplo, é particularmente importante pois elimina o risco de xenorreação em pacientes tratados com essas células, além de evitar a transmissão de zoonoses, como a encefalopatia espongiforme bovina. Diversas agências regulatórias como a Organização Mundial da Saúde solicitaram a não utilização de suplementos de origem animal na manipulação de produtos biológicos que têm como finalidade a terapia em humanos. Produzido a partir de bolsas de plaquetas humanas descartadas pelo banco de sangue devido ao prazo de validade, o lisado plaquetário é uma fonte alternativa de fatores de crescimento atualmente viável, sustentável e segura para cultivo celular. Ele promove crescimento acelerado de CTMs em especial, permitindo a obtenção de uma dose terapêutica em menos tempo, mantendo características celulares imunofenotípicas e diferenciativas. A análise do conteúdo desse suplemento, porém, carece de dados, já que ele é preparado in-house, com variações dependendo do protocolo utilizado, sendo muitos protegidos por patente. Sabe-se que a ativação e rompimento das plaquetas no processo de coagulação sanguínea promove a liberação de mais de trezentas moléculas intracelulares em grânulos heterogêneos para o sangue, orquestrando diversas funções fisiológicas, como regeneração tecidual e angiogênese. No Centro de Processamento Celular Avançado (CPCA) do Hospital de Clínicas de Porto Alegre é utilizada grande quantidade de LP para diversos ensaios clínicos. Este trabalho busca, portanto, caracterizar a composição desse produto por metodologias não convencionalmente descritas na literatura, ao passo em que permite futuras investigações sobre seu modo de ação. Através da dosagem de proteínas totais foi observado que o LP possui 49,57 ± 3,65 mg/mL, concentração significativamente maior que o SFB (30,54 ± 1,76 mg/mL); além disso, a análise proteômica por ontologia gênica e função proteica identificou proteínas relacionadas a proliferação, morfogênese, diferenciação, biossíntese, adesão e metabolismo celular, que estão sendo possivelmente metabolizadas ou recicladas pelas células. Ainda, foram detectadas proteínas responsáveis pela ligação e ativação dos fatores de crescimento TGF-β, HGF e IGF. Na análise de partículas por espalhamento dinâmico de luz observou-se a presença de um perfil heterogêneo e polidisperso de partículas, com dois padrões populacionais em 231 ± 96 d.nm com 61% de intensidade e em 30 ± 8 d.nm com 26% de intensidade; sendo possivelmente agregados proteicos ou distintas populações de vesículas, um importante meio de transporte de proteínas no microambiente celular. A realização de estudos como esse contribui essencialmente para a indústria biomédica, fornecendo dados para a melhor compreensão de diversos mecanismos moleculares envolvidos em terapia celular, impulsionando tecnologias na área da saúde e oferecendo alternativas melhores de tratamento para diversas patologias.In vitro cell culture make use of several culture media formulations, that contain a source of growth factors; the gold standard currently used to this aim is fetal bovine serum (FBS). However, there are better alternatives that outweigh its effectiveness and limitations. The use of human platelet lysate (PL) as a substitute for FBS in human mesenchymal stem cell (MSC) culture is particularly important because it eliminates the xenoreaction risk in patients treated with these cells, as well as avoiding the zoonosis transmission, like bovine spongiform encephalopathy. Several health regulatory agencies such as the World Health Organization requested that animal origin supplements are not to be utilized in the manipulation of biological products purposed as therapy in humans. Made from expired human platelet bags discarded by the blood bank, the platelet lysate is an alternative source of growth factors actually viable, sustainable and safe to cell culture. It promotes MSCs faster growth in particular, allowing to achieve the required therapeutic dose in a shorter period of time, maintaining the immunophenotypic and differential cellular characteristics. The analysis of this supplement content, besides, lack data, since it is prepared in-house, with variations according to the utilized protocol, many being patent protected. It is known that the platelet activation and lysis in the blood coagulation process promote the release of more than three hundred intracellular molecules contained in heterogeneous granules to the bloodstream, which coordinate many physiological functions like tissue regeneration and angiogenesis. At the Advanced Cellular Processing Center (CPCA) from the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a large amount of PL is utilized in several clinical trials. This work aim, therefore, to characterize this product composition by unconventional literature-described methodologies, while allowing further investigations about its mechanism of action. Through total protein quantification, it was observed that PL has 49,57 ± 3,65 mg/mL, a significant higher amount than FBS (30,54 ± 1,76 mg/mL); besides, the proteomics analysis by gene ontology and protein function identified proteins related to cellular proliferation, morphogenesis, differentiation, biosynthesis, adhesion and metabolism, which are possibly being metabolized or having its structure recycled by cells. Also, several proteins responsible for activating and binding of the growth factors TGF-β, HGF and IGF were detected. Particle analysis through dynamic light scattering showed a heterogeneous and polydisperse profile of particles, with two population patterns at 231 ± 96 d.nm with 61% of intensity and at 30 ± 8 d.nm with 26% intensity; possibly being protein aggregates or distinct vesicle populations, an important way of protein transportation through the cellular microenvironment. Making studies like this one contribute essentially to the biomedical industry, with data to better comprehend several molecular mechanisms involved in cellular therapy, pushing healthcare technologies forward and offering patients better treatment options for several pathologies

Organ-Preserving Surgery for Penile Carcinoma

Introduction. Penile carcinoma has traditionally been treated by either surgical amputation or radical radiotherapy, both associated with devastating anatomical, functional, and psychological impact on the patient's life. Innovative surgical techniques have focused on penile preservation in well-selected patients to minimize physical disfigurement and consequently maximize quality of life. The objective of this article is to define the current status of these organ-preserving surgical options for penile carcinoma. Materials and Methods. An extensive review of the Pubmed literature was performed to find articles discussing only reconstructive surgery which have contributed significantly to change traditional, frequently mutilating treatments, to develop less disfiguring surgery, and to improve patients' quality of life over the last two decades. Results. Several articles were included in this analysis in which a major contribution to the change in therapy was thought to have occurred and was documented as beneficial. Some articles reported novel techniques of less-mutilating surgery involving different forms of glans reconstruction with the use of flaps or grafts. The issue of safe surgical margins was also addressed. Conclusion. The development of less-disfiguring techniques allowing phallus preservation has reduced the negative impact on functional and cosmetic outcomes of amputation without sacrificing oncological objectives in appropriately selected patients based on stage, grade, and location of the tumour. Until more prospective studies are available and solid evidence is documented, organ preservation should be offered with caution

Knowledge extraction from medium voltage load diagrams to support the definition of electrical tariffs

With the electricity market liberalization, distribution and retail companies are looking for better market strategies based on adequate information upon the consumption patterns of its electricity customers. In this environment all consumers are free to choose their electricity supplier. A fair insight on the customer´s behaviour will permit the definition of specific contract aspects based on the different consumption patterns. In this paper Data Mining (DM) techniques are applied to electricity consumption data from a utility client’s database. To form the different customer´s classes, and find a set of representative consumption patterns, we have used the Two-Step algorithm which is a hierarchical clustering algorithm. Each consumer class will be represented by its load profile resulting from the clustering operation. Next, to characterize each consumer class a classification model will be constructed with the C5.0 classification algorithm

Fatores psicológicos associados à qualidade de vida em pacientes com VIH/SIDA

Esta investigação tem como principal objetivo estudar a associação de diversas variáveis sociodemográficas, clínicas e psicológicas - apreciação corporal, responsividade corporal, afetos positivos, afetos negativos, ansiedade e depressão - com a qualidade de vida em pacientes com VIH. O estudo foi realizado no Serviço de Doenças Infecciosas do Centro Hospitalar Universitário de São João, no Porto, a partir de uma amostra de 60 adultos seropositivos com idades compreendidas entre os 18 e os 67 anos e com diagnóstico de VIH há pelo menos 6 meses. Os dados foram recolhidos com recurso aos seguintes instrumentos: Questionário Sociodemográfico e Clínico, Escala de Apreciação Corporal 2 (BAS-2), Escala de Responsividade Corporal (BRS), Escala dos Afetos Positivos e Negativos (PANAS), Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (HADS) e Instrumento de Avaliação da Qualidade de Vida da Organização Mundial de Saúde (WHOQOL-BREF). De um modo geral, conclui-se que não existem diferenças estatisticamente significativas atribuíveis à idade, escolaridade, estado civil, tempo de diagnóstico, tempo de tratamento, efeitos secundários do tratamento e a presença de outras doenças crónicas. Ainda assim, existem diferenças significativas em função do sexo dos participantes relativamente aos domínios físico e ambiental da qualidade de vida (em ambos os casos, as médias masculinas são superiores). Para além disso, a apreciação corporal e os afetos positivos estão positivamente associados com a qualidade de vida, enquanto que os afetos negativos, ansiedade e depressão estão negativamente associados com a variável em questão. Não foram encontradas correlações significativas entre a responsividade corporal e a qualidade de vida. Os modelos preditores dos vários domínios da qualidade de vida revelam-se significativos, explicando 32% da variância para o domínio geral, 38% para o domínio físico, 71% para o domínio psicológico, 25% para o domínio das relações sociais e 18% para o domínio ambiental. Embora a ansiedade tenha um contributo menor e a responsividade corporal não contribua de todo para os resultados, estes são particularmente influenciados pela apreciação corporal, afetos positivos, afetos negativos e depressão, sobretudo na dimensão psicológica da qualidade de vida. A depressão foi o indicador com contributo único em todos os modelos com exceção da qualidade de vida geral. Assim, futuras intervenções deverão prestar especial atenção às variáveis com impacto comprovado na qualidade de vida desta população clínica

a microanalytical case study

UIDB/00693/2020 UIDP/00693/2020The literature reports the benefits of multimodal interaction with the maternal voice for preterm dyads in kangaroo care. Little is known about multimodal interaction and vocal modulation between preterm mother–twin dyads. This study aims to deepen the knowledge about multimodal interaction (maternal touch, mother’s and infants’ vocalizations and infants’ gaze) between a mother and her twin preterm infants (twin 1 [female] and twin 2 [male]) during speech and humming in kangaroo care. A microanalytical case study was carried out using ELAN, PRAAT, and MAXQDA software. Descriptive and comparative analysis was performed using SPSS software. We observed: (1) significantly longer humming phrases to twin 2 than to twin 1 (p = 0.002), (2) significantly longer instances of maternal touch in humming than in speech to twin 1 (p = 0.000), (3) a significant increase in the pitch of maternal speech after twin 2 gazed (p = 0.002), and (4) a significant increase of pitch in humming after twin 1 vocalized (p = 0.026). This exploratory study contributes to questioning the role of maternal touch during humming in kangaroo care, as well as the mediating role of the infant’s gender and visual and vocal behavior in the tonal change of humming or speech.publishersversionpublishe

Effects of diets with increasing corn levels on the ruminal energy and protein metabolism in buffalo

Avaliaram-se os efeitos de dietas com níveis crescentes de milho em grão moído (0, 22, 37 e 49% na MS) em substituição ao feno de coast-cross mantendo-se diferentes relações proteína:carboidratos não-fibrosos (PB:CNF = 1,01; 0,39; 0,33 e 0,27) sobre o metabolismo ruminal de búfalos. Utilizaram-se quatro búfalos fistulados no rúmen, mantidos em delineamento quadrado latino 4 × 4, para a coleta de amostras do líquido ruminal, colhidas em cada período experimental (de 28 dias) nos tempos 0, 2, 4 e 8 horas após a alimentação. Em geral, os bubalinos apresentaram boa capacidade tamponante no rúmen, com pH médio alto (6,70) e aumento da ingestão de milho em grão moído. O acréscimo nos níveis de milho na dieta promoveu aumento da produção de ácido butírico. Somente a dieta com 49% de milho promoveu melhor fermentação ruminal, com menor propoção de ácidos acético:propiônico. A relação PB:CNF de 1,01 indica deficiência de energia da dieta disponível para microrganismos no rúmen ao longo do dia, enquanto dietas com PB:CNF entre 0,39 e 0,27 promovem fermentações ruminais semelhantes, o que indica sincronismo na utilização de nitrogênio e energia pelos microrganismos no rúmen nessas condições.The effects of diets with increasing ground corn grain levels (0, 22, 37 and 49% in the dry matter) substituting coast-cross hay, with different protein:non-fibrous carbohydrate ratios (CP:NFC = 1.01; 0.39; 0.33 and 0.27) were assessed on buffalo ruminal metabolism. Four rumen fistulated buffaloes were used kept in a 4 × 4 latin square design, to collect liquid ruminal samples, collected in each experimental period (28 days) at 0, 2, 4 and 8 hours after feeding. In general, the buffalo presented good buffering capacity in the rumen, with high mean pH (6.70) and increase in ground corn intake. The increase in the corn levels in the diet resulted in increased butyric acid production. Only the diet with 49% corn showed better ruminal fermentation, with a small proportion of acetic:propionic acids. The CP:NFC ratio of 1.01 indicated energy deficiency in the diet available for microorganisms in the rumen throughout the day, although the diets with CP:NFC between 0.39 and 0.27 resulted in similar ruminal fermentations, that indicated synchronization in nitrogen and energy use by the rumen microorganisms under these conditions.Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior (CAPES

O poder de Portugal nas relações internacionais : a dimensão militar

Numa altura em que a conjuntura internacional sofre um significativo sobressalto e na lógica justificativa de uma possível revisão do edifício concetual da Defesa Nacional, iniciada pelo Conceito Estratégico de Defesa Nacional, é pertinente estudar o contributo das Forças Armadas para a prossecução dos interesses nacionais na “arena” internacional. Esta investigação tem por objetivo especificar contributos para o emprego da dimensão militar na promoção do poder de Portugal, no quadro das relações internacionais que se avizinham, a médio e longo prazo. Para o efeito utilizou-se uma metodologia de raciocínio indutivo, assente numa estratégia qualitativa e num desenho de pesquisa de estudo de caso, recorrendo-se à análise documental e a entrevistas a entidades relevantes no domínio do estudo. Os resultados obtidos confirmaram a importância das Forças Armadas na afirmação e credibilidade externa de Portugal, assim como o estatuto de Estado coprodutor de segurança internacional, que granjeia. A análise prospetiva do ambiente estratégico e operacional, permitiu concluir pela necessidade de manter e desenvolver forças de natureza ágil, com capacidades técnicas e equipamentos adequados, que permitam ao país continuar a desempenhar um papel ativo, não só em operações militares correntes, como também em operações de apoio humanitário e em desastres naturais.These are critical times, with significant upheaval in the international arena, surging under a prevailing rationale of a possible revision of the National Defence´s conceptual building, initiated by the Strategic Concept of National Defence. It is therefore adequate to analyse the contribution of the Armed Forces to the pursuit of our national interests in the international arena. This paper's main objective is to clarify in which ways the military dimension contributes to the promotion of Portugal's strength in the upcoming international relationship framework, in the medium and long term. An inductive reasoning methodology was used, based on a qualitative strategy and a case study design, using documentary analysis and conducting interviews with relevant entities to this study´s scope. The results validated the Armed Forces' relevance for Portugal's external affirmation and credibility, as well as for its already achieved status of international security coproducing state. The foresight analysis of the strategic and operational environments to come, reinforces the need to maintain and develop forces of an agile nature, with technical capabilities and appropriate equipment, that enable the country to further play an active role not only in current military operations but also in humanitarian support and natural disasters operations.N/