Avaliação de um teste de avidez imunoenzimático para o citomegalovírus humano (ELISA-HCMV) para distinguir a infecção primária recente da infecção de longa duração

This article describes the standardization and evaluation of an in-house specific IgG avidity ELISA for distinguishing recent primary from long-term human cytomegalovirus (HCMV) infection. The test was standardized with the commercial kit ETI-CYTOK G Plus (Sorin Biomedica, Italy) using 8 M urea in phosphate-buffered saline to dissociate low-avidity antibodies after the antigen-antibody interaction. The performance of the in-house assay was compared to that of the commercial automated VIDAS CMV IgG avidity test (bioMérieux, France). Forty-nine sera, 24 from patients with a recent primary HCMV infection and 25 from patients with a long-term HCMV infection and a sustained persistence of specific IgM antibodies, were tested. Similar results were obtained with the two avidity methods. All 24 sera from patients with recently acquired infection had avidity indices compatible with acute HCMV infection by the VIDAS method, whereas with the in-house method, one serum sample had an equivocal result. In the 25 sera from patients with long-term infection, identical results were obtained with the two methods, with only one serum sample having an incompatible value. These findings suggest that our in-house avidity test could be a potentially useful tool for the immunodiagnosis of HCMV infection.Este artigo descreve a padronização e avaliação de um teste de avidez imunoenzimático para o citomegalovírus humano (ELISA-HCMV) para distinguir a infecção primária recente da infecção de longa duração. O teste foi padronizado com o kit comercial ETI-CYTOK G Plus (Sorin Biomedica, Itália), utilizando uréia 8 M para a dissociação dos anticorpos de baixa avidez. A performance do teste ELISA-HCMV foi comparada com a do teste de avidez comercial automatizado VIDAS CMV IgG (bioMérieux, França), utilizando 24 soros de pacientes com infecção primária recente e 25 soros de pacientes com infecção de longa duração apresentando persistência de anticorpos específicos IgM. Resultados similares foram obtidos com os dois métodos de avidez. Todos os 24 soros de pacientes com infecção recentemente adquirida apresentaram índices de avidez compatíveis com infecção aguda pelo HCMV utilizando o teste VIDAS CMV IgG, enquanto que um dos soros apresentou resultado duvidoso no teste ELISA-HCMV. Os 25 soros de pacientes com infecção de longa duração apresentaram resultados idênticos com os dois métodos, com apenas um dos soros apresentando um valor não compatível. Estes resultados sugerem que o teste de avidez descrito pode ser potencialmente útil para o imunodiagnóstico da infecção pelo HCMV

Evaluation Of An In-house Specific Immunoglobulin G (igg) Avidity Elisa For Distinguishing Recent Primary From Long-term Human Cytomegalovirus (hcmv) Infection.

This article describes the standardization and evaluation of an in-house specific IgG avidity ELISA for distinguishing recent primary from long-term human cytomegalovirus (HCMV) infection. The test was standardized with the commercial kit ETI-CYTOK G Plus (Sorin Biomedica, Italy) using 8 M urea in phosphate-buffered saline to dissociate low-avidity antibodies after the antigen-antibody interaction. The performance of the in-house assay was compared to that of the commercial automated VIDAS CMV IgG avidity test (bioM rieux, France). Forty-nine sera, 24 from patients with a recent primary HCMV infection and 25 from patients with a long-term HCMV infection and a sustained persistence of specific IgM antibodies, were tested. Similar results were obtained with the two avidity methods. All 24 sera from patients with recently acquired infection had avidity indices compatible with acute HCMV infection by the VIDAS method, whereas with the in-house method, one serum sample had an equivocal result. In the 25 sera from patients with long-term infection, identical results were obtained with the two methods, with only one serum sample having an incompatible value. These findings suggest that our in-house avidity test could be a potentially useful tool for the immunodiagnosis of HCMV infection.45323-

Perfil hematológico de Chelonia mydas (Testudines, Cheloniidae) de acordo com o grau de acometimento pela fibropapilomatose e sua ausência

The green turtle Chelonia mydas feeds and nests in the Brazilian coastal area and is considered an endangered species by the World Conservation Union (IUCN 2009) and threatened by the Red List of Brazilian Fauna (Ministério do Meio Ambiente 2009). Fibropapillomatosis is a disease characterized by benign skin tumors (fibropapillomas), and it is one of the main threats to the survival of this species. Studies suggest the involvement of viruses as infectious agents associated with environmental and genetic factors. Blood samples were collected from 45 turtles captured in the coastal area of the state of Sao Paulo, Brazil. From these, 27 were affected by fibropapillomas and 18 were tumor free. Biometrical data on the turtles, size, location and quantity of tumors were recorded. The area occupied by fibropapillomas per animal was calculated and four groups were determined according to severity of the disease or its absence. The objective of the study was to compare hemogram results of the sea turtles classified in these four groups. The lowest hematocrit value was observed in severely affected animals. In the hemoglobin assay, the highest value was observed in the group of tumor free turtles and the lowest, in animals severely affected. Lymphocyte counts and curved carapace length were on the verge of statistical significance.Chelonia mydas, denominada tartaruga verde, é uma tartaruga marinha que frequenta o litoral brasileiro para alimentação e nidificação e é considerada em perigo de extinção pela IUCN (World Conservation Union, 2009) e ameaçada pela Lista Vermelha da Fauna Brasileira (Ministério do Meio Ambiente, 2009). A fibropapilomatose, doença caracterizada por tumores cutâneos benignos (fibropapilomas), é uma das mais importantes ameaças à sobrevivência dessa espécie. Pesquisas sugerem o envolvimento de agentes infecciosos virais em associação com fatores ambientais e genéticos. Foram colhidas amostras sanguíneas de 45 tartarugas provenientes do litoral do estado de São Paulo, Brasil, sendo 18 sem fibropapilomas e 27 acometidas. Dados de biometria das tartarugas, quantidade, localização e tamanho dos tumores foram anotados. Foi realizado o cálculo da área de fibropapilomas por animal e foram estipulados 4 grupos de acordo com o grau de acometimento e sua ausência. O objetivo foi realizar uma comparação entre os hemogramas das tartarugas marinhas classificadas nos 4 grupos. Animais de grau grave apresentaram o menor valor para hematócrito. Para dosagem de hemoglobina, observou-se que o maior valor foi para o grupo de tartarugas sem fibropapilomas e o menor para o de grau grave. Os valores de linfócitos e comprimento curvilíneo da carapaça beiraram a significância estatística

Análise do consumo alimentar de desportistas em academia

As academias foram criadas com a finalidade básica de melhorar a qualidade de vida oferecendo opções de atividade física e o seu número vem crescendo no mundo e particularmente no Brasil. O presente estudo objetiva verificar o consumo qualitativo e quantitativo, segundo a Pirâmide Alimentar Brasileira, e comparar com o gasto energético total de praticantes de atividade física de uma academia de São Paulo. Trata-se de um estudo retrospectivo com indivíduos maiores de 18 anos, com aplicação de anamnese e antropometria. A avaliação do estado nutricional dos desportistas através do IMC mostrou que 41,7% eram pré-obesos ou com obesidade grau I. Foi constatado que na média o consumo calórico dos desportistas não atingiu as recomendações energéticas necessárias em ambos os sexos. Quanto à análise do consumo dos grupos alimentares por gênero observou-se que não há consumo adequado da maioria dos grupos para adequado estado nutricional. Diante dos dados apresentados faz-se importante a presença de um educador físico e de um nutricionista nas academias para que as necessidades individuais dos desportistas sejam atendidas por completo

O IMPACTO DA PESCA ACESSÓRIA DO ARRASTO CAMAROEIRO NA REPRODUÇÃO DE PEIXES NO NORDESTE DO BRASIL

In the west coast of Rio Grande do Norte many small-scale fisheries targeting mostly shrimp but accidentally catch a large number of fish. Our aim was to evaluate the Ichthyofauna composition and distribution in Potiguar Basin, northeastern Brazil, in order to elucidate the impact of bycatch on fish reproduction. The study area was divided into four stretches (A, B, C and D), and we sampled 1,426 specimens classified into 10 orders, 23 families and 49 species. We obtained biometric data and gonadal tissue in order to determine the reproductive aspects of the studied fish. Stretch A had the highest values of evenness and dominance; the highest values of abundance, biomass, richness and diversity were found in stretches B, C and D. Analysis based on faunal similarity revealed three groups: I (found in stretches B and D), II (C), and III (A). In regards to reproductive phase, 76.3% of the specimens were classified as 'immature’, 16.7% as ‘maturing’ and 7% as ‘mature’. Through the anatomical and histological analyzes of the gonads and the size of first maturation, we verified that the species Pomadasys corvinaeformes, Menticirrhus littoralis and Larimus breviceps were negatively related to fishing activity; on the other hand, Pellona harroweri was positively related. Our findings indicate that the incidental capture of some non-target species can affects predominantly individuals considered immature, i.e. without reproductive potencial, an indicative of non-sustainable fishing in region.Keywords: coastal zone; diversity; ichthyofauna; reproductive stages; sexual maturity.Na costa oeste do Rio Grande do Norte, muitas pescarias de pequena escala têm como alvo principal camarões, mas acidentalmente capturam um grande número de peixes. Nosso objetivo foi avaliar a composição e distribuição da ictiofauna na Bacia Potiguar, Nordeste do Brasil, a fim de elucidar o impacto das capturas acessórias na reprodução dos peixes. A área de estudo foi dividida em quatro trechos (A, B, C e D), e foram amostrados 1.426 espécimes classificados em 10 ordens, 23 famílias e 49 espécies. Obtivemos dados biométricos e tecido gonadal para determinar os aspectos reprodutivos dos peixes estudados. O Trecho A apresentou os maiores valores de equitabilidade e dominância; os maiores valores de abundância, biomassa, riqueza e diversidade foram encontrados nos trechos B, C e D. A análise baseada na similaridade faunística revelou três grupos: I (trechos B e D), II (C) e III (A). Em relação à fase reprodutiva, 76,3% dos espécimes foram classificados como “imaturos”, 16,7% como “em maturação” e 7% como “maduros”. Através das análises anatômicas e histológicas das gônadas e do tamanho da primeira maturação, verificamos que as espécies Pomadasys corvinaeformes, Menticirrhus littoralis e Larimus breviceps foram negativamente relacionadas à atividade pesqueira; Por outro lado, Pellona harroweri estava positivamente relacionada. Nossos achados indicam que a captura incidental de algumas espécies não-alvo pode afetar predominantemente indivíduos considerados imaturos, ou seja, sem potencial reprodutivo, um indicativo de pesca não sustentável na região.Palavras-chave: diversidade, estágios reprodutivos, ictiofauna, maturidade sexual, zona costeira

Determining organochlorine pesticides in samples of green sea turtles by QuEChERS approach

Some Organochlorine Pesticides (OCPs) can pose numerous adverse effects on biota. Marine turtles face numerous threats, in particular those related to anthropogenic activities. Therefore, development and improvement methodologies for monitoring chemical compounds are a relevant task. In this work, we developed a methodology based on the QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) extraction for detection of twelve OCPs, by gas chromatography with electron capture detector, in fat and liver samples of green sea turtles. Quantification limits were lower than 5.3 ng g-1; acceptable recovery rates for most compounds; medium matrix effect; matrix-calibration with linearity at the range from 1.0 to 200 ng g-1. This methodology provides contributions for the study of pesticide residues with adverse effects on sea turtle health, important skills for new directions in conservation issues. Alguns Pesticidas organoclorados (OCPs) podem causar numerosos efeitos adversos na biota. As tartarugas marinhas enfrentam diversas ameaças, em especial aquelas relacionadas às atividades antropogênicas, por isso o desenvolvimento de melhorias nos métodos para monitorar compostos químicos são tarefas importantes. Neste trabalho foi desenvolvida uma metodologia baseada na extração QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) para a detecção de doze OCPs, por cromatografia gasosa com captura de elétrons, em amostras de gordura e fígado de tartarugas verdes. Os limites de quantificação ficaram abaixo de 5.3 ng g-1; com taxas de recuperação aceitáveis para a maioria de compostos; efeito matriz médio; calibração da matriz com linearidade variando de 1.0 a 200 ng g-1. Esta metodologia traz contribuições ao estudo de resíduos com efeito adverso na saúde das tartarugas marinhas, sendo importante instrumento para novas direções em temas de conservação.

CHELONID ALPHAHERPESVIRUS 5 EM TUMORES CUTÂNEOS DE TARTARUGAS VERDES (CHELONIA MYDAS) ENCALHADAS NO NORDESTE DO BRASIL

As tartarugas-verdes (Chelonia mydas) são afetadas pela fibropapilomatose (FP), doença que pode ser uma ameaça para elas. O trabalho teve como objetivo descrever as características histopatológicas dos tumores sugestivos de FP e pesquisar a presença de DNA de Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) em lesões cutâneas  de 26 tartarugas verdes encalhadas na Bacia Potiguar (nordeste do Brasil). As tartarugas verdes foram encontradas durante o monitoramento diário, e os tumores de FP foram coletados por biópsia ou durante necropsia, quantificados e analisados de acordo com distribuição anatômica, tamanho e Escore de Fibropapilomatose do Atlântico Sudoeste (FPSSWA). Vinte e seis cortes histológicos foram examinados, e 26 amostras fixadas em formalina e embebidas em parafina foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar o DNA do ChHV5. Um total de 292 tumores foi analisado (1-42 por indivíduo), sendo a maioria com tamanho de 1-4 cm (74%; 218/292 tumores) e presentes nos membros anteriores (48,6%; 142/292 tumores). De acordo com o FPSSWA, a maioria das tartarugas verdes estava afetada de forma leve (53,8%; 14/26). O exame histopatológico revelou características previamente descritas na literatura (projeções papilares da camada epitelial, hiperceratose, hiperplasia da camada basal, fibroblastos em proliferação bem diferenciados) classificando os tumores como papilomas ou fibropapilomas. Com relação aos resultados de PCR, 79,9% das amostras de tumor testadas foram positivas para ChHV5 e as sequências foram obtidas em todas as amostras amplificadas. Nossas sequências UL30 são idênticas a várias sequências descritas em tartarugas marinhas do Brasil, enquanto as sequências UL18 e UL27 são mais semelhantes as de tartarugas verdes na Flórida. Nosso estudo relata detecção e caracterização molecular do ChHV5 em tartarugas verdes encalhadas na Bacia Potiguar, importante área de alimentação com alta frequência de ocorrência de FP.As tartarugas-verdes (Chelonia mydas) são afetadas pela fibropapilomatose (FP), doença que pode ser uma ameaça para elas. O trabalho teve como objetivo descrever as características histopatológicas dos tumores sugestivos de FP e pesquisar a presença de DNA de Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) em lesões cutâneas  de 26 tartarugas verdes encalhadas na Bacia Potiguar (nordeste do Brasil). As tartarugas verdes foram encontradas durante o monitoramento diário, e os tumores de FP foram coletados por biópsia ou durante necropsia, quantificados e analisados de acordo com distribuição anatômica, tamanho e Escore de Fibropapilomatose do Atlântico Sudoeste (FPSSWA). Vinte e seis cortes histológicos foram examinados, e 26 amostras fixadas em formalina e embebidas em parafina foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar o DNA do ChHV5. Um total de 292 tumores foi analisado (1-42 por indivíduo), sendo a maioria com tamanho de 1-4 cm (74%; 218/292 tumores) e presentes nos membros anteriores (48,6%; 142/292 tumores). De acordo com o FPSSWA, a maioria das tartarugas verdes estava afetada de forma leve (53,8%; 14/26). O exame histopatológico revelou características previamente descritas na literatura (projeções papilares da camada epitelial, hiperceratose, hiperplasia da camada basal, fibroblastos em proliferação bem diferenciados) classificando os tumores como papilomas ou fibropapilomas. Com relação aos resultados de PCR, 79,9% das amostras de tumor testadas foram positivas para ChHV5 e as sequências foram obtidas em todas as amostras amplificadas. Nossas sequências UL30 são idênticas a várias sequências descritas em tartarugas marinhas do Brasil, enquanto as sequências UL18 e UL27 são mais semelhantes as de tartarugas verdes na Flórida. Nosso estudo relata detecção e caracterização molecular do ChHV5 em tartarugas verdes encalhadas na Bacia Potiguar, importante área de alimentação com alta frequência de ocorrência de FP

First report of fibropapillomatosis (FP) and Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) in a green sea turtle (Chelonia mydas) from the historically fibropapillomatosis-free Fernando de Noronha Archipelago, Northeastern Brazil

A fibropapilomatose (FP) é uma doença infecciosa causada pelo Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5). No entanto, as manifestações clínicas da doença são consideradas multifatoriais. Esta doença é monitorada atualmente em populações de tartarugas marinhas nos EUA, Austrália, Caribe e Brasil. Desde 2000, o Projeto TAMAR/Fundação Projeto TAMAR analisa a presença de FP em nove estados da costa brasileira e ilhas oceânicas, incluindo o arquipélago de Fernando de Noronha, uma área historicamente livre de FP. Um total de 4.435 indivíduos de Chelonia mydas foram monitorados de 2010 a 2016 e 43 amostras de pele foram analisadas para detectar ChHV5 em 2012 e 2014 com o objetivo de avaliar a presença do vírus em tecidos sem FP, usando uma PCR qualitativa para detecção de sequências do gene da UL30 polimerase. Em 2015, uma tartaruga verde (C. mydas) foi relatada com um nódulo ocular bilateral caracterizado como FP. Amostras de tecido foram coletadas durante sua reabilitação e procedimento cirúrgico para remover o tumor. A caracterização parcial de uma sequência de 454 bp do gene UL30 polimerase detectou ChHV5 anteriormente relatado em outras áreas da costa atlântica brasileira. Após estes achados, de janeiro de 2017 a março de 2020, um total de 360 indivíduos de C. mydas foram monitorados e nenhum caso de FP foi registrado. Este é o primeiro relato de FP e a primeira caracterização de ChHV5 no arquipélago de Fernando de Noronha, uma questão preocupante e que ressalta a importância do monitoramento desta doença em áreas historicamente livres de FP na costa atlântica brasileira. Fibropapillomatosis (FP) is an infectious disease caused by Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5). Nevertheless, its clinical manifestations are considered multifactorial. Due to its relevance, FP is currently monitored in sea turtle populations in the United States, Australia, Caribbean, and Brazil. Between 2000 and 2020, the TAMAR Project/ TAMAR Project Foundation analyzed the prevalence of FP in nine states and oceanic islands along the Brazilian coast, including Fernando de Noronha Archipelago (FNA), a historically FP-free area. A total of 4,435 green sea turtles (Chelonia mydas) were monitored from 2010 to 2016. Additionally, in 2012 and 2014, 43 FP-free skin samples were analyzed for ChHV5 using a qualitative PCR for the UL30 polymerase (pol) sequence. In 2015, a bilateral ocular nodule characterized as an FP tumor was reported in one of the monitored individuals undergoing rehabilitation. Tissue samples were collected following surgical removal of the tumor. Characterization of a 454 bp UL30 polymerase gene revealed a ChHV5 sequence previously reported in other areas of the Atlantic Brazilian coast. In the years following this finding from January 2017 to March 2020, a total of 360 C. mydas were monitored in the same area and no FP tumors were detected. This is the first report of FP and the first detection of ChHV5 in FNA, a finding of great concern considering this site’s historical absence of FP occurrence. This study highlights the importance of monitoring this disease in historically FP-free areas of the Brazilian Atlantic coast

NEOPLASIAS VISCERAIS E Chelonid alphaherpesvirus 5 EM TARTARUGAS VERDES COM FIBROPAPILOMATOSE

Fibropapillomatosis (FP) is a multifactorial, neoplastic and infectious disease that affects all sea turtle species, and Chelonid alphaherpesvirus 5 (ChHV5) has been singled out as the primary etiological agent. This disease is mainly characterized by cutaneous tumors, but visceral fibromas, myxofibromas and fibrosarcomas have been also reported and can interfere with systemic functions. In spite of previous descriptions of visceral neoplasms in sea turtles from Hawaii and Florida, some of them infected by ChHV5, there are few reports of non-cutaneous tumors in Brazilian sea turtles. In order to fill this gap, we analyzed samples of internal neoplasms from four green turtles (Chelonia mydas) by histopathological and molecular techniques. Cutaneous neoplasms were quantified and classified according to their size and tumor score to determine the FP severity, and the presence of internal tumors was confirmed post-mortem via necropsy. Forty-eight cutaneous tumors (7-23 per individual) were found on sampled green turtles, and the FP severity was mild (2 individuals) and moderate (2 individuals). Visceral neoplasms were found in lung (n=4), heart (n=1), intestine (n=2), esophagus (n=1), stomach (n=1), liver (n=1), spleen (n=1), skeletal muscle (n=1) and kidney (n=2) and were classified as fibromas (n=47) and one as renal myxofibroma. We did not detect ChHV5 DNA in the esophageal, skeletal muscle, or hepatic fibromas. Our research brings a novel description of renal myxofibroma and ChHV5 infection in visceral neoplasms from green turtles in Brazil, improving our knowledge about the prevalence, anatomic localization, and severity of internal neoplasms associated with FP.A fibropapilomatose (FP) é uma doença multifatorial, neoplásica e infecciosa que afeta todas as espécies de tartarugas marinhas, e o Chelonid alphaherpesvirus 5(ChHV5) tem sido apontado como o agente etiológico primário. Essa doença é caracterizada por tumores cutâneos, mas fibromas viscerais, mixofibromas e fibrossarcomas também têm sido relatados e podem interferir nas funções sistêmicas. Apesar de descrições anteriores de neoplasias viscerais em tartarugas marinhas do Havaí e Flórida, algumas infectadas pelo ChHV5, há poucos relatos de tumores não cutâneos em tartarugas marinhas no Brasil. Para preencher essa lacuna, analisamos amostras de neoplasias internas de quatro tartarugas verdes (Chelonia mydas) através de técnicas histopatológicas e moleculares. Neoplasias cutâneas foram quantificadas e classificadas de acordo com seus tamanhos e escores para determinar a severidade da FP, e a presença de tumores internos foi confirmada postmortem durante necropsia. Quarenta e oito tumores cutâneos (7-23 por indivíduo) foram encontrados nas tartarugas verdes amostradas, e a severidade da FP foi classificada como leve (2 indivíduos) e moderada (2 indivíduos). Neoplasias viscerais foram encontradas em pulmão (n=4), coração (n=1), intestino (n=2), esôfago (n=1), estômago (n=1), fígado (n=1), baço (n=1), músculo esquelético (n=1) e rim (n=2), sendo classificadas como fibromas e uma como mixofibroma renal. Não detectamos DNA do ChHV5 nos fibromas esofágico, muscular esquelético e hepático. Nossa pesquisa relata nova descrição de mixofibroma renal e detecção do ChHV5 em neoplasias viscerais de tartarugas verdes no Brasil, melhorando o conhecimento sobre prevalência, localização anatômica e severidade dos tumores internos associados à FP