Characterization of immune-modulatory MIRNAS and their role in inflammatory skin disease

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011A psoríase vulgares é uma doença cutânea que ocorre aproximadamente em 3% da popula-ção mundial adulta, afectando negativamente a qualidade de vida dos doentes. É uma doença crónica, resultante da activação do sistema imunitário e semelhante a outras doenças auto-imunes como a artrite reumatóide ou a esclerose múltipla. Histologicamente, a psoríase é caracterizada por um aumento da espessura da epiderme devido à hiperproliferação de queratinócitos, resultando no aparecimento de escamas e placas com diferentes tamanhos. Outra particularidade desta doença é o aumento da vascularização da derme, assim como a presença de um elevado número de células imunitárias, tais como linfócitos T e células dendríticas. Ao nível molecular, pensa-se que as manifestações clínicas e laboratoriais descritas são resultantes da desregulação da complexa rede de citocinas devido à acção combinada das células imunitárias que infiltraram a derme e dos queratinócitos presentes na epiderme. Durante a última década foram identificadas inúmeras espécies de pequenos RNA denominados small non-coding RNAs, que contribuem para a intrincada rede de vias que regulam os genes humanos. Entre estes, os microRNA (miRNA) emergiram como reguladores relevantes da tradução proteica, e actualmente acredita-se que os miRNA participam na regula-ção da maioria dos processos celulares e tecidulares. A pele não é excepção, e de momento os miRNA são intensamente estudados para determinar a sua relevância na regulação da homeostase da pele e no aparecimento de doenças cutâneas. O possível envolvimento de miRNA na patologia da psoríase foi identificado pela primeira vez em 2007, quando a equipa liderada por Sonkoly comparou os perfis de expressão de miRNA em pele psoriática e em pele normal. Entre os miRNA identificados, potencialmente associados à psoríase, o miRNA-203 foi identificado predominantemente em queratinócitos e sobre-expressado em psoríase, quando comparado com a pele normal. Recentemente, a mesma equipa científica demonstrou também que o miRNA-203 e o transcrito de um componente regulador da sinalização da resposta imunitária, o SOCS3 (supressor of cytokine signalling 3), apresentam níveis de expressão inversamente relacionados. Sabe-se ainda que a proteína SOCS3 regula negativamente a activação de um factor de transcrição – STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) – que está sobre-expressado em psoríase e implicado na rede de citocinas. Assim, a sobre-expressão do miRNA-203 em psoríase pode ter importantes implicações na patologia da doença uma vez que impossibilita a expressão de SOCS3, proteína que regula negativamente a rede de citocinas. O objectivo principal deste projecto foi descrever a interacção entre miRNA e a expressão de citocinas em pele humana. Com especial interesse no miRNA-203, o projecto procurou elucidar a função específica dos miRNA moduladores da resposta imunitária na complexa rede de interacções moleculares, levando ao desenvolvimento da doença inflamatória na pele. No começo deste projecto, procurou-se estabelecer um sistema in vitro que permitisse a identificação e análise de potenciais genes-alvo de miRNA associados à psoríase. Assim, através da utilização da proteína Renilla luciferase (R-luc), foi desenvolvido um ensaio repór-ter para a detecção de interacções directas entre o miRNA-203 e diversos elementos da resposta imunitária, através da medição de bioluminescência. Os DNA complementares (cDNA) de seis diferentes citocinas (IL12B, IL15, IL17, IL20, IL24 e TNFα) assim como os cDNA de proteínas supressoras da sinalização das citocinas (SOCS3 e SOCS6) foram fundidos ao gene codificante da R-luc, e as medidas de bioluminescência foram avaliadas quando os vectores codificantes da R-luc foram co-transfectados com um vector expressan-do o miRNA-203 em células HEK293 (Human kidney embryo cells). Dos ensaios desenvol-vidos, identificaram-se três potenciais genes-alvo do miRNA-203: IL24, SOCS6 e TNFα. Para a confirmação da interacção directa entre o miRNA-203 e os genes-alvo mencionados foi desenvolvido um estudo bioinformático para a identificação de sequências nucleotídicas na região 3‟UTR dos genes-alvo complementares à sequência nucleotídica do miRNA-203. Uma vez identificadas as possíveis sequências nucleotídicas que permitem o estabelecimento de interacções entre o miRNA-203 e os RNA mensageiro (mRNA) dos genes-alvo, as sequências identificadas nas regiões 3‟UTR foram mutadas de forma a inibir as interacções miRNA-mRNA. Os transcritos 3‟UTR mutantes dos genes IL24, SOCS6 e TNFα foram fundidos ao gene codificante da R-luc e novos ensaios repórteres foram elaborados. Em paralelo, procedeu-se também ao desenvolvimento de uma linha celular de queratinócitos (denominada HaCaT-203), através da utilização do sistema transposão de DNA “sleeping beauty”, para expressar constitutivamente o miRNA-203. Esta nova linha celular de queratinócitos foi especialmente desenvolvida para a confirmação de potenciais genes-alvo do miRNA-203, através da quantificação dos níveis de expressão dos genes-alvo por qRT-PCR. A quantifi-cação e a análise dos valores de bioluminiscência obtidos a partir da expressão do gene da R-luc fundido aos transcritos dos três 3‟UTR mutantes de IL24, SOCS6 e TNFα identificaram a interacção directa entre os três mRNA e o miRNA-203. Resultados semelhantes foram obtidos através da quantificação dos níveis endógenos dos mRNA de IL24, SOCS6 e TNFα em queratinócitos, confirmando a especificidade da interacção entre o miRNA-203 e os genes-alvo mencionados. A identificação destes novos genes-alvo veio contribuir para a compreensão e caracterização das implicações do miRNA-203 na expressão de citocinas em pele humana. Não menos importante, também foi o facto de que os resultados obtidos vieram consolidar a hipótese de que o miRNA-203 poderá ter implicações na patologia da psoríase uma vez que o miRNA-203 foi identificado como um modulador activo na complexa regulação da rede de citocinas em queratinócitos. A equipa com a qual foi desenvolvido este projecto documentou anteriormente a aplicabilidade terapêutica da utilização de lentivirus para a inibição dos mRNA de TNFα e IL12B através da “entrega” (delivery) de RNA efectores anti-TNFα e anti-IL12B, respectivamente, em pele psoriática humana xenotransplantada em ratos imunodeficientes (xenografted psoriatic skin). No projecto actual, foi desenvolvido um novo vector lentiviral codificando um inibidor de miRNA específico para o miRNA-203 (denominado antagomiR-203). Os RNA efectores anti-miRNA (antagomirs) são caracterizados por sequências oligonucleotídicas complementares aos miRNA de interesse. Assim, os antagomir estabelecem interacções específicas com o miRNA-alvo, conduzindo à inibição funcional dos mesmos. Através da utilização do vector lentiviral codificando o antagomiR-203, vários ensaios in vitro foram desenvolvidos para testar a funcionalidade e a potência do antagomiR-203. Com base nas avaliações funcionais, identificou-se uma nítida sobre-expressão do gene da R-luc quando fundido com uma sequência oligonucleotídica complementar ao miRNA-203, quando co-expresso com o vector lentiviral codificando o antagomiR-203. Foi também identificada uma redução dos níveis de expressão do miRNA-203, quando as linhas celulares de queratinócitos foram infectadas com partículas lentivirais expressando o antagomiR-203. Os resultados obtidos confirmaram assim a funcionalidade e especificidade do antagomiR-203 relativamente ao miRNA-203, permitindo o estabelecimento de uma nova plataforma para a regulação de miRNA através da utilização de lentivirus como veículo de transporte de anti-miRNA. Com base na tecnologia de expressão de antagomir, este projecto procurou ainda abrir caminho para os estudos de gene-alvos endógenos, permitindo experimentalmente estudar a função de miRNA em queratinócitos em pele normal e pele psoriática. Como objectivo final deste projecto, testou-se a aplicabilidade terapêutica da utilização de lentivirus para a “entrega” de RNA efectores anti-miRNA-203 em pele psoriática humana xenotransplantada em ratos imunodeficientes. A administração intradérmica de uma única dose de partículas lentivirais em pele psoriática humana resultou num aumento dos níveis de expressão do miRNA-203 e na não alteração da espessura da epiderme em enxertos de pele tratados com o antagomiR-203. Em conformidade com os resultados obtidos, a avaliação clínica do fenótipo psoriático dos enxertos de pele não identificou nenhuma melhoria clínica e histológica do fenótipo psoriático no ensaio desenvolvido. O potencial para a concepção de medicamentos moleculares baseados na modulação de miRNA endógenos é muito ambicionado, mas actualmente está ainda muito inexplorado. Os estudos desenvolvidos ao longo deste projecto demonstraram que o aumento da expressão do miRNA-203 na patologia da psoríase é complexo, claramente evidenciando a necessidade de estudos futuros para uma melhor compreensão das funções desempenhadas pelos miRNA na regulação da resposta imunitária. O projecto realizado procurou também explorar a aplicabilidade terapêutica de fármacos dirigidos aos miRNA, tendo-se identificado algumas dificuldades relacionadas com a funcionalidade dos antagomirs in vivo. No entanto, é de salientar que a abordagem utilizada neste estudo foi única, na medida em que se procurou explorar uma nova metodologia de administração de antagomirs, permitindo a entrega de material genético em tecidos específicos, de modo a aumentar a segurança na utilização de terapia genética em humanos.Psoriasis vulgaris is a chronic inflammatory skin disease which is characterized by an excessive growth of skin epithelial cells, increased dermal angiogenesis and infiltration of immune cells into the skin. The past decade has unveiled a plethora of small RNA species that con-tribute to the intricate network of pathways regulating our genes. Among these, microRNAs have emerged as key regulators of translation and are believed to play a role in almost any cellular process and tissue. One of the most upregulated microRNAs in psoriasis skin is miRNA-203. The aim of this study was to describe the interplay between microRNAs, with focus on miRNA-203, and cytokine-encoding mRNAs in human skin. Based on the v-antagomir expression technology, the project may pave the way for studies of endogenous targets, allowing us to experimentally address microRNA function in keratinocytes and skin inflammation. Three components of the cytokine circuit, interleukin-24, suppressor of cytokine signaling-6 and tumor necrosis factor-α, were identified as direct targets for suppression by miRNA-203 by luciferase reporter assay. In the present study, we also used lentiviral vectors as potent carriers of antagomir-encoding gene cassettes. Lentiviral vectors are attractive gene vehicles primarily due to their ability to establish persistent expression owning to genomic integration of the vector DNA reverse-transcribed from virally delivered single-stranded RNA. Potent and persistent knockdown of miRNA-203 expression following transduction of lentiviral vectors encoding antagomiR-203 in keratinocytes was reported. In contrast to the data collected in vitro, miRNA-203 knockdown was not identified in vivo after a three week treatment of xeno-grafted psoriatic skin with lentivirus-encoded antagomiR-203. Our studies consolidate the properties of lentiviral vectors as a tool in experimental dermatology with particular significance for cutaneous RNA managing and in vivo genetic intervention. However, the therapeutic potential of targeting miRNA-203 in psoriasis is here questioned

SOCIO-ECONOMIC AND OBSTETRIC PROFILE OF PUERPERAE ASSISTED IN A PHILANTHROPIC MATERNITY UNIT

Estudo descritivo, transversal, com abordagem quantitativa, cujo objetivo foi conhecer o perfil socioeconômico e obstétrico de puérperas assistidas em uma maternidade ao norte do Espírito Santo. Cerca de 54% das mulheres estavam na faixa etária de 20 a 29 anos, 83,6% eram casadas ou viviam com parceiro, 49,5% declararam-se pardas, 32,8% possuíam ensino médio completo, 49,8% tinham renda de até um salário mínimo, 61,6% pertenciam à classe C e 89,2% foram atendidas pelo Sistema Único de Saúde. Verificou-se que 72,4% tiveram de uma a duas gestações, 53,9% com intervalo interpartal de 2 a 5 anos, 62,2% com parto cesárea, cerca de 60% realizaram sete consultas ou mais de pré-natal e 87% negaram histórico de abortamento. Conclui-se que o perfil de puérperas é semelhante ao encontrado em outros estudos e evidencia-se a necessidade do serviço estar atento à não realização do pré-natal entre puérperas jovens e alta prevalência de parto cesárea. The aim of this descriptive, cross-sectional and qualitative study was to investigate the socio-economic and obstetric profile of puerperae assisted in a maternity unit in the North of Espírito Santo. Approximately 54% of the women were in the age range 20 to 29 years old, 83.6% were married or lived with a partner, 49.5% stated that they were of mixed race, 32.8% had finished junior high school, 49.8% had an income of not more than one minimum salary, 61.6% belong to social class C and 89.2% were attended by the Unified Health System (SUS). It was ascertained that 72.4% had had one to two pregnancies, 53.9% with an interpartal interval of 2 to 5 years, 62.2% with Caesarean section, approximately 60% had had seven or more pre-natal consultations and 87% denied having a history of miscarriage. It is concluded that the profile of puerperae is similar to that found in other studies and the need is evidenced for the service to be attent to the non-undertaking of pre-natal consultations among young puerperae and the high prevalence of Caesarean births.Estudio descriptivo, transversal, con abordaje cuantitativo, cuyo objetivo fue conocer el perfil socioeconómico y obstétrico de puérperas de una maternidad al norte de Espírito Santo. Aproximadamente 54% de las mujeres estaban en la franja etaria entre 20 y 29 años, 83,6% estaban casadas o vivían con pareja, 49,5% se declararon pardas, 32,8% completaron enseñanza media, 49,8% tenían renta de hasta un sueldo mínimo, 61,6% pertenecían a la clase C y 89,2% fueron atendidas por el Sistema Único de Salud. Se ha verificado que 72,4% tuvieron de una a dos gestaciones, 53,9% con intervalo interpartal de 2 a 5 años, 62,2% con parto cesárea, aproximadamente 60% realizaron siete consultas o más de prenatal y 87% negaron histórico de aborto. Se concluye que el perfil de puérperas es semejante a lo encontrado en otros estudios, evidenciándose la necesidad del servicio poner atención a la no realización del prenatal entre puérperas jóvenes y alta prevalencia de parto cesáreo

Psoriasiform skin disease in transgenic pigs with high-copy ectopic expression of human integrins α2 and β1

Psoriasis is a complex human-specific disease characterized by perturbed keratinocyte proliferation and a pro-inflammatory environment in the skin. Porcine skin architecture and immunity are very similar to that in humans, rendering the pig a suitable animal model for studying the biology and treatment of psoriasis. Expression of integrins, which is normally confined to the basal layer of the epidermis, is maintained in suprabasal keratinocytes in psoriatic skin, modulating proliferation and differentiation as well as leukocyte infiltration. Here, we generated minipigs co-expressing integrins α2 and β1 in suprabasal epidermal layers. Integrin-transgenic minipigs born into the project displayed skin phenotypes that correlated with the number of inserted transgenes. Molecular analyses were in good concordance with histological observations of psoriatic hallmarks, including hypogranulosis and T-lymphocyte infiltration. These findings mark the first creation of minipigs with a psoriasiform phenotype resembling human psoriasis and demonstrate that integrin signaling plays a key role in psoriasis pathology

Efeito do grau de bipartição escrotal sobre a vascularização arterial do escroto de caprinos nativos do Estado do Piauí

Avaliou-se a vascularização arterial do escroto em caprinos com vários graus de divisão escrotal. Foram utilizados 30 animais, distribuídos em três grupos: I - animais que apresentavam escroto único e aqueles com divisão até extremidade caudada dos testículos; II - animais com divisão escrotal até 50% do comprimento dos testículos; III - caprinos com divisão escrotal acima de 50% do comprimento testicular. Os caprinos foram sacrificados e, no Laboratório de Anatomia Animal da Universidade Federal do Piauí, realizadas as técnicas de repleção, corrosão ou dissecação, para estudo das artérias escrotais. A artéria escrotal origina-se freqüentemente (95%) da artéria pudenda externa, eventualmente (3,3%) da epigástrica caudal superficial, ou ainda origina-se como um ramo cranial da artéria epigástrica caudal superficial e um ramo caudal da artéria pudenda externa (1,7%). Na região dorsal do septo do escroto emite dois a três ramos primários, que fornecem os ramos secundários e terminais, os quais distribuem-se, indistintamente, nas faces cranial e caudal do escroto e, ocasionalmente, no septo do órgão. O número de ramos terminais não apresenta diferença em relação à configuração escrotal, porém a região correspondente à divisão escroto, conta com maior quantidade desses ramos nos animais que apresentam essa característica mais acentuada.The present study was design to investigate the arterial distribution of goat's scrotum with several degrees of scrotum division. We used 30 animals divided in 3 groups of 10 animals each as follow: group I: animals with simple scrotum; II animals with 50% of scrotum division; III animals with more than 50% of scrotum division. The goats were sacrificed under deep anaesthesia and the techniques for evaluate the arterial distribution were performed at the Laboratory of animal anatomy of the Federal University of Piaui. The origin of the scrotum artery was mainly from the pudenda artery (95%), follows by the superficial caudal ephigastric artery (3,3%), or had your origin as one cranial branch of the superficial caudal ephigastric artery and one caudal branches of the extern pudenda artery (1,7%). The dorsal region of scrotal septum seed two or three primary branches that provide the secondary and terminals branches, which had indiscriminate distribution into the cranial and caudal faces of the scrotum, and occasionally at the septum. The number of the terminal branches doesn't have show any difference with the scrotum configuration, however the region that corresponds to the scrotum division had more number of these branches at the animals with the greatest scrotal division

Desafios enfrentados por enfermeiros na aplicabilidade da fitoterapia na atenção primária: uma revisão integrativa / Challenges faced by nurses in the applicability of phytotherapy in primary care: an integrative review

Objetivo: Analisar os desafios encontrados por enfermeiros na aplicabilidade da fitoterapia na Atenção Primária, a fim de destacar os pontos positivos e negativos na realidade desses profissionais. Metodologia: Revisão integrativa da literatura com o intuito de compilar os dados obtidos através do Banco Virtual em Saúde (BVS) nas bases de dados BDENF, LILACS e SCIELO no período de dez anos. Foram incluídos 20 artigos. Resultados: Os artigos apontaram a falta de preparo no período acadêmico e profissional, o embate da crença popular e do saber científico, o enfoque no modelo biomédico, o desconhecimento da Fitoterapia e das políticas relacionadas e falta de incentivo governamental como desafios enfrentados pelo enfermeiro na Atenção Primária. Considerações finais: Fazem-se necessários investimentos por parte dos gestores na consolidação das terapias integrativas e complementares, e em especial, da fitoterapia, além da formação e capacitação de recursos humanos na área, bem como a disseminação de informações para os indivíduos sobre o tema

Main Electroclinic Syndromes of The Infant: A Literature Review

An electroclinic syndrome (also known as epileptic syndrome) consists of a set of characteristics that associate with seizures, characteristics of electroencephalography and imaging that tend to occur together. Among them is a group that affects infants, usually having a genetic etiology. Objective: to carry out a literature review on the most common types of infant electroclinical syndromes, describing their main characteristics. Methodology: This is a narrative review of the literature of articles published between 2005 and 2020, in Portuguese and English. The research was carried out in December 2020. The following descriptors were used to search for the articles: Electroclinical syndromes. Epilepsy. Infant. Results: Through the research carried out, 12 scientific articles were selected, nine of them in English and three in Portuguese. Conclusion: The study identified 7 common electroclinical syndromes in infants and made it possible to conclude that knowledge of the clinical profile, types of crises and characteristics of the electroencephalography of the disease phenotype associated with the specific mutation can help improve the accuracy and management of the diagnosis of electroclinical syndromes

MULTILINGUISMO DO ESTADO DO MARANHÃO: A DINÂMICA DA LIBRAS, LÍNGUA DE SINAIS KAAPOR E LÍNGUA PORTUGUESA NO DIALETO MARANHENSE

Santos et al. (2020) in their study observe that the Maranhense dialect is unique throughout the national territory, it has its linguistic vices, but it is still possible to flex verbs and use the pronouns in their correct form. With regard to Libras (Brazilian Sign Language), they describe that there is a diversification of signs in their own elaboration and transfer of emotions in all aspects, this is a characteristic of this State. About the Ka'apor tribe, what is known is that they appeared in the region bathed by the Xingu and Tocantins rivers, 300 years ago. The main objective of this work is to present the multilingualism present in the state of Maranhão, addressing dialects, accents, emergence, variations, among other aspects, and to materialize the linguistics of Maranhão and its importance in enhancing bilingualism and indigenous sign languages ​​within classrooms. class based on public policies for inclusive education, cultural and educational diversity. This work consists of a narrative and descriptive bibliographic investigation, which is carried out by consulting research databases such as the Scientific Electronic Library Online (SCIELO), the Education Resources Information Center (ERIC) and the academic Google. The study brought important reflections on the relevance of the languages ​​present in the state of Maranhão, such as the oral Portuguese language and the signed languages ​​of Libras and the Brazilian Kaapor Sign Language (LSKB), as well as characterizing the multifaceted linguistics present in the state and their relevance in valuing bilingualism and indigenous sign language.Santos et al. (2020) en su estudio señalan que el dialecto Maranhão es único en todo el país, tiene sus vicios lingüísticos, pero los verbos aún pueden ser flexionados y los pronombres en su forma correcta. Con respecto a libras (lengua de señas brasileña), describen que hay una diversificación de signos en su propia elaboración y transferencia de emociones en todos los aspectos, esto es característico de este Estado. Sobre la tribu Kaapor, lo que sí se sabe es que tuvieron su surgimiento en la región bañada por los ríos Xingu y Tocantins, hace 300 años. El objetivo principal de este trabajo es presentar el multilingüismo presente en el estado de Maranhão, abordando dialectos, acentos, emergencias, variaciones, entre otros aspectos y realizando la lingüística de Maranhão y su importancia en la valoración del bilingüismo y las lenguas de signos indígenas dentro de las aulas basadas en las políticas públicas de educación inclusiva, diversidad cultural y educativa. Este trabajo consiste en una investigación bibliográfica narrativa y descriptiva, que se realiza a través de la consulta en bases de datos de investigación como la Biblioteca Científica Electrónica en Línea (SCIELO), el Centro de Información de Recursos Educativos (ERIC) y el académico Google. El estudio trajo importantes reflexiones sobre la relevancia de las lenguas presentes en el estado de Maranhão, como la lengua oral portuguesa y las lenguas de señas de Libras y la Lengua de Señas Ka'apor Brasileira (LSKB), así como caracterizó los multifacéticos lingüísticos presentes.Santos e colaboradores (2020) em seu estudo observam que o dialeto maranhense é único em todo território nacional, possui seus vícios linguísticos, porém ainda se consegue flexionar verbos e empregar os pronomes em sua forma correta. No que se refere a Libras (Língua Brasileira de Sinais), descrevem que acontece uma diversificação de sinais na sua elaboração própria e repasse de emoções em todos os aspectos, isso é característica própria deste Estado. Acerca da tribo Kaapor, o que se sabe é que tiveram seu surgimento na região banhada pelos rios Xingu e Tocantins, há 300 anos. O objetivo principal deste trabalho é apresentar o multilinguismo presente no estado do Maranhão, abordando dialetos, sotaques, surgimento, variações, entre outros aspectos e concretizar a linguística do Maranhão e sua importância em valorizar o bilinguismo e as línguas de sinais indígenas dentro de salas de aula tendo como base as políticas públicas da educação inclusiva, diversidade cultural e educacional. Este trabalho consiste em uma investigação bibliográfica narrativa e descritiva, sendo esta realizada através de consulta em bases de dados de pesquisa como a Scientific Electronic Library Online (SCIELO), o Education Resources Information Center (ERIC) e o Google acadêmico. O estudo trouxe reflexões importantes sobre a relevância das línguas presentes no estado do Maranhão como a Língua Portuguesa oral e as línguas sinalizadas de Libras e a Língua de Sinais Ka’apor Brasileira (LSKB), bem como também caracterizou as multifacetas linguísticas presentes no Estado e sua relevância em valorizar o bilinguismo e a língua de sinais indígena.Santos e colaboradores (2020) em seu estudo observam que o dialeto maranhense é único em todo território nacional, possui seus vícios linguísticos, porém ainda se consegue flexionar verbos e empregar os pronomes em sua forma correta. No que se refere a Libras (Língua Brasileira de Sinais), descrevem que acontece uma diversificação de sinais na sua elaboração própria e repasse de emoções em todos os aspectos, isso é característica própria deste Estado. Acerca da tribo Kaapor, o que se sabe é que tiveram seu surgimento na região banhada pelos rios Xingu e Tocantins, há 300 anos. O objetivo principal deste trabalho é apresentar o multilinguismo presente no estado do Maranhão, abordando dialetos, sotaques, surgimento, variações, entre outros aspectos e concretizar a linguística do Maranhão e sua importância em valorizar o bilinguismo e as línguas de sinais indígenas dentro de salas de aula tendo como base as políticas públicas da educação inclusiva, diversidade cultural e educacional. Este trabalho consiste em uma investigação bibliográfica narrativa e descritiva, sendo esta realizada através de consulta em bases de dados de pesquisa como a Scientific Electronic Library Online (SCIELO), o Education Resources Information Center (ERIC) e o Google acadêmico. O estudo trouxe reflexões importantes sobre a relevância das línguas presentes no estado do Maranhão como a Língua Portuguesa oral e as línguas sinalizadas de Libras e a Língua de Sinais Ka’apor Brasileira (LSKB), bem como também caracterizou as multifacetas linguísticas presentes no Estado e sua relevância em valorizar o bilinguismo e a língua de sinais indígena

Development of Transgenic Cloned Pig Models of Skin Inflammation by DNA Transposon-Directed Ectopic Expression of Human β1 and α2 Integrin

Integrins constitute a superfamily of transmembrane signaling receptors that play pivotal roles in cutaneous homeostasis by modulating cell growth and differentiation as well as inflammatory responses in the skin. Subrabasal expression of integrins α2 and/or β1 entails hyperproliferation and aberrant differentiation of keratinocytes and leads to dermal and epidermal influx of activated T-cells. The anatomical and physiological similarities between porcine and human skin make the pig a suitable model for human skin diseases. In efforts to generate a porcine model of cutaneous inflammation, we employed the Sleeping Beauty DNA transposon system for production of transgenic cloned Göttingen minipigs expressing human β1 or α2 integrin under the control of a promoter specific for subrabasal keratinocytes. Using pools of transgenic donor fibroblasts, cloning by somatic cell nuclear transfer was utilized to produce reconstructed embryos that were subsequently transferred to surrogate sows. The resulting pigs were all transgenic and harbored from one to six transgene integrants. Molecular analyses on skin biopsies and cultured keratinocytes showed ectopic expression of the human integrins and localization within the keratinocyte plasma membrane. Markers of perturbed skin homeostasis, including activation of the MAPK pathway, increased expression of the pro-inflammatory cytokine IL-1α, and enhanced expression of the transcription factor c-Fos, were identified in keratinocytes from β1 and α2 integrin-transgenic minipigs, suggesting the induction of a chronic inflammatory phenotype in the skin. Notably, cellular dysregulation obtained by overexpression of either β1 or α2 integrin occurred through different cellular signaling pathways. Our findings mark the creation of the first cloned pig models with molecular markers of skin inflammation. Despite the absence of an overt psoriatic phenotype, these animals may possess increased susceptibility to severe skin damage-induced inflammation and should be of great potential in studies aiming at the development and refinement of topical therapies for cutaneous inflammation including psoriasis