Estudo do efeito anti-inflamatório da Esenbeckia leiocarpa Engl. no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2012Introdução: O gênero Esenbeckia (Rutaceae) compreende aproximadamente 30 espécies identificadas, nativas de regiões tropicais, tais como México e Brasil, incluindo principalmente os Estados brasileiros de São Paulo, Bahia, Minas Gerias, Goiás e Mato Grosso do Sul. Estudos in vivo e in vitro demonstraram que plantas deste gênero apresentam propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto hidroalcoólico (EBH), frações e compostos isolados da Esenbeckia leiocarpa Engl., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As cascas secas da E. leiocarpa Engl. foram maceradas e extraídas com etanol para obter o EBH. A partir deste extrato, foram obtidas as frações n-hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt), aquosa (Aq) e alcaloídica (Alc), sendo que esta última fração foi extraída com éter etílico originando duas subfrações: uma alcaloídica polar (AlcP) e outra apolar (AlcAp). O composto majoritário, o alcaloide indólico dihidrocorinanteol (DHC), foi isolado da subfração AlcAp. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura do composto majoritário presente na E. leiocarpa Engl., foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C) e espectrometria de massas. Em outro protocolo, o composto isolado identificado foi modificado por reações de substituição nucleofílica, originando os análogos acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, que foram utilizados em um estudo de relação estrutura-atividade, avaliando-se o efeito destes compostos sobre leucócitos, exsudação e atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). No modelo da pleurisia induzida pela carragenina, foram utilizados camundongos albinos Swiss e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas MPO e adenosina-deaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina 1-beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBH (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alc (1 - 10 mg/kg), AlcP (0,5 - 5 mg/kg), AclAp (0,1 - 2 mg/kg) ou DHC (0,1 - 0,5 mg/kg), administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), Newman-Keuls e/ou t de Student. Valores de P Abstract : Introduction: Esenbeckia genus (Rutaceae) includes approximately 30 species native from tropical regions such as Mexico and Brazil, mainly in the Brazilian states of Sao Paulo, Bahia, Minas Gerais, Goias and Mato Grosso do Sul. Studies using in vivo and in vitro models have demonstrated that plants of this genus have anti-inflammatory properties. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude hydroalcoholic extract (CHE), fractions and compounds isolated from Esenbeckia leiocarpa Engl., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The dried E. leiocarpa Engl. bark was macerated and extracted with ethanol to obtain the CHE. The n-hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), aqueous (Aq) and alkaloids (Alk) fractions were obtained from CHE, and two alkaloid subfractions, polar (polar Alk) and nonpolar (nonpolar Alk) were obtained from the Alk fraction using an ethyl ether extraction. The major compound, the indole alkaloid dihydrocorinantheol (DHC) was isolated from nonpolar Alk subfraction. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and mass spectrometry were used to identify and elucidate the structure of the major compound present in the E. leiocarpa Engl. In another protocol, the isolated compound was subjected to chemical structural modifications by nucleophilic substitution reactions to develop the acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro analogs, which were used in a study of structure-activity relationships to evaluate the effect of these compounds upon leucocytes and exudation concentrations and myeloperoxidase (MPO) activity. Swiss mice were used in the carrageenan-induced murine model of pleurisy and the following inflammatory parameters were evaluated the fluid of the pleural cavity: leukocytes, exudation, MPO and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-1 beta (IL-1â) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-á). In this study, different groups of animals were pretreated with CHE (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alk (1 - 10 mg/kg), polar Alk (0.5 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.1 - 2 mg/kg) or DHC (0.1 - 0.5 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), Newman-Keuls and/or Student#s t test. P < 0.05 was considered significant. Further, the toxicity study of CHE we performed by analyzing the survival curve. In this study, different groups of animals received different doses of EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg and 1000 mg/kg, i.p.) and the number of deaths was observed daily for 10 days. Results: CHE (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alk (5 - 10 mg/kg), polar Alk (1 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 - 2 mg/kg) and DHC (0.25 - 0.5 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (P < 0.05). Also, CHE (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 or 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), polar Alk (1 or 2 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 mg/kg) and DHC (0.25 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, and the concentrations of NOx, IL-1â and TNF-á (P < 0.05). In relation to toxicity, it was observed that the dose of 250 mg/kg of CHE was safe because its administration resulted in 100% survival of the animals after 10 days, whereas at the doses of 500 mg/kg and 1000 mg/kg all animals died in the first day of observation. Furthermore, the DHC alkaloid showed better anti-inflammatory effect than its analogs: acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro, because only the DHC inhibits both studied inflammatory parameters: leukocytes and exudation concentrations (P < 0.01). Further, the DHC analogs inhibited MPO activity (P < 0.01). Conclusions: The results showed that: 1) E. leiocarpa Engl. has important anti-inflammatory activity; 2) this effect occurs mainly in relation to inhibition of leukocyte migration and exudation concentrations; 3) the Inhibition of these inflammatory parameters is also related to NOx, IL-1â and TNF-á inhibition; 4) the inhibition of MPO and ADA activities are associated with decrease of activated leukocytes; 5) the doses used in the experiments of this study appear to be safe; 6) DHC was more effective than its analogs in this model of inflammation, and the physicochemical modifications in the DHC after insertion of the acetyl, p-methylbenzoyl, benzoyl, p-methoxybenzoyl and p-chlorobenzoyl substituents radicals on the hydroxyl group at carbon 17 determine the effectiveness of the anti-inflammatory action

Atividade enzimática e hemolítica de Candida dubliniensis

Candida dubliniensis is an opportunistic yeast that has been recovered from several body sites in many populations; it is most often recovered from the oral cavities of human immunodeficiency virus-infected patients. Although extensive studies on epidemiology and phylogeny of C. dubliniensis have been performed, little is known about virulence factors such as exoenzymatic and hemolytic activities. In this study we compared proteinase, hyaluronidase, chondroitin sulphatase and hemolytic activities in 18 C. dubliniensis and 30 C. albicans strains isolated from AIDS patients. C. albicans isolates produced higher amounts of proteinase than C. dubliniensis (p ; 0.05). Hemolytic activity was affected by CaCl2; when this component was absent, we did not notice any significant difference between C. albicans and C. dubliniensis hemolytic activities. On the contrary, when we added 2.5 g% CaCl2, the hemolytic activity was reduced on C. dubliniensis and stimulated on C. albicans tested strains (p ; 0,05). Constatou-se que a atividade hemolítica foi influenciada pelo CaCl2; em sua ausência não foram observadas diferenças na atividade hemolítica das duas espécies; todavia, ao se agregar 2,5% de CaCl2, a atividade hemolítica de C. dubliniensis foi reduzida enquanto a de C. albicans, estimulada (p < 0,05)

Antimicrobial Activity of a Crude Extract and Fractions from Alternanthera brasiliana (L.) O. Kuntze Leaves

SUMMARY. Aqueous EtOH (70%) crude extract of Alternanthera brasiliana leaves and dichloromethane, ethyl acetate and butanolic fractions of the crude extract were tested against a panel of microrganisms by the broth microdilution method to determine the Minimal Inhibitory Concentration (MIC). The results demonstrate that the crude extract and some fractions showed moderate activities against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisae and Prototheca zopffi. All samples did not present activity against the bacteria Escherichia coli, Candida albicans and Candida glabrata. The strongest effect occurred with dichloromethane fraction against the algae P. zopfii, (MIC= 312.5 μg.mL -1 ). These results demonstrate that A. brasiliana have a weak antimicrobial activity that not support the ethno-pharmacological indication of the plant for the treatment of infection diseases nor it&apos;s popular names such as &quot;penicillin&quot; and &quot;terramycin&quot; in Brazil . RESUMEN. &quot;Actividad Antimicrobiana del Extracto Bruto y Fracciones de las Hojas de Alternanthera brasiliana (L.) O. Kuntze&quot;. El extracto etanólico crudo (70%) y las fracciones diclorometánica, de acetato de etilo y butanólica de las hojas de A. brasiliana fueron analizados en relación a su actividad antimicrobiana. Las concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) fueron determinadas usando el método de microdilución en caldo. Los experimentos demostraron que el extracto y algunas fracciones exhibieron moderada acción antimicrobiana, particularmente contra Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisae y Prototheca zopffi. El efecto más fuerte ocurrió con la fracción diclorometánica frente a P. zopfii (MIC 312,5 μg.mL -1 ). La bacteria Escherichia coli y las leveduras Candida albicans y C. glabrata no fueron inhibidas por ninguno de los extractos probados. La baja actividad antimicrobiana de la planta no respalda las indicaciones planteadas por la comunidad para su uso en el tratamiento de procesos infecciosos, ni tampoco sus nombres populares en Brasil, tales como &quot;penicilina&quot; y &quot;terramicina&quot;

Atividade antimicrobiana de óleos essenciais extraícos de condimentos

Atualmente, grande número de microorganismos patogênicos ao homem e animais evidencia preocupante perfil de suscetabilidade aos antimicrobianos disponíveis no mercado, demonstrando alarmantes percentuais de resistência, principalmente no ambiente hospitalar. O impacto da resistência é crítico quando as opções terapêuticas restringem-se a poucas drogas ou as opções são nulas. A indústria químico-farmacêutica busca soluções inovadoras e, neste contexto, metabólitos vegetais, tradicionalmente utilizados na alimentação humana ou na medicina popular, revestem-se de importância, cujos potenciais antimicrobianos requerem avaliações. Desta forma, a presente revisão objetivou ressaltar as atividades antimicrobianas de alguns óleos essenciais extraídos de condimentos popularmente utilizados

Comunidades virtuais : um novo espaço de aprendizagem

Este artigo busca fazer uma reconstrução teórica do conceito de comunidade virtual(CV) e de comunidade virtual de aprendizagem (CVA). As comunidades virtuais sãodefinidas como redes virtuais de comunicação interativa, organizadas em torno deinteresses compartilhados. Já as comunidades virtuais de aprendizagem são constituídasa partir de interesses comuns de conhecimento estabelecidos em um processocooperativo. A interação entre os participantes de uma comunidade virtual deaprendizagem cria espaços que privilegiem a co-construção do conhecimento criando,assim, uma nova concepção de aprendizagem

Atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano, tomilho e canela frente a sorovares de Salmonella enterica de origem avícola Antimicrobial activity of essential oils from oregano, thyme and cinnamon against Salmonella enterica sorovars from avian source

Avaliou-se a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de orégano (Origanum vulgare), tomilho (Thymus vulgaris) e canela (Cinnamomum zeylanicum) frente a 60 amostras de Salmonella enterica distribuídas entre 20 sorovares, todos isolados de carcaças de aves. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para cada isolado, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo. O óleo essencial de orégano evidenciou forte atividade antibacteriana (CIM média = 529mig ml-1 e CBM média= 661mig ml-1), seguido do tomilho (CIM média=961mig ml-1 e CBM média= 1074mig ml-1), com atividade moderada, enquanto que a menor atividade foi observada com o óleo essencial de canela (CIM média= 1335mig ml-1 e CBM média = 1979mig ml-1). Apesar deste claro padrão de atividade, os sorovares de Salmonella enterica evidenciaram significativas variações de suscetibilidade, embora nenhuma, em particular, pudesse ser classificada como totalmente sensível ou resistente aos três óleos essenciais avaliados. Assim, no momento em que os antibacterianos utilizados como promotores de crescimento estão sendo substituídos. E os óleos essenciais de temperos e condimentos se constituem numa alternativa importante, os resultados aqui apresentados sinalizam dois pontos: os óleos essenciais de orégano e tomilho são efetivos contra Salmonella, mas as variações de suscetibilidade entre os sorovares deverão também ser consideradas.Essential oils from oregano (Origanum vulgare), thyme (Thymus vulgaris) and cinnamom (Cinnamomum zeylanicum) were tested for their inhibitory activity against sixty Salmonella sp. isolates. These microorganisms were distributed in 20 serovars, all of them isolated from broiler chickens. Based on microdilution technique, the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were determined. The strongest antibacterial activity was obtained for oregano (MIC mean = 529mug ml-1 and MBCmean = 661mug ml-1), followed by a moderate activity for thyme (MICmean=961mug ml-1 and MBCmean=1074mug ml-1) and the lowest obtained activity observed for cinnamon (MICmean= 1335mug ml-1 and MBCmean= 1979mug ml-1). Despite of this activity pattern, the serovars of Salmonella enterica showed significant susceptibility variations. However none of them could be classified as sensitive or resistant to the three essential oils tested. At the moment, when the antibiotics, as growth promoters, are being replaced, the essential oils from spices could be a very reasonable choice and the present results show us two points: the essential oils from oregano and thyme are effective against Salmonella isolates but the variations among the serovars must be considered