Biochemical and structural features of the catalytic domain of cellulase CelE2 and its relation with the Calx-beta accessory domain

Orientadores: Fabio Marcio Squina, Thabata Maria AlvarezDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: As glicosil hidrolases (GHs) compõem uma classe de enzimas amplamente utilizadas nos processos enzimáticos por atuarem na hidrólise das ligações glicosídicas de polissacarídeos. Além do domínio catalítico, diversas GHs apresentam domínios acessórios que podem influenciar diversos aspectos bioquímicos e estruturais das enzimas. A celulase CelE2 de origem metagenômica, caracterizada recentemente, apresenta em sua estrutura um domínio catalítico N-terminal característico da família GH5 e um domínio C-terminal com identidade para o domínio Calx-beta, previamente identificado em outras GHs mas sem função claramente definida nestes casos. Com o intuito de investigar as características bioquímicas e estruturais dos domínios de CelE2 separadamente, foram construídas derivações truncadas referentes ao domínio catalítico e ao domínio acessório Calx-beta. Como resultados, observou-se que a excisão do domínio acessório Calx-beta (CelE2382-477) não provocou alterações nas características bioquímicas de CelE2, visto que o domínio catalítico (CelE21-381) apresentou valores semelhantes de atividade enzimática em beta-glucano, carboximetilcelulose e liquenana, valores de pH e temperatura ótimos próximos de 5,3 e 45 ºC, respectivamente, estabilidade térmica a 40 ºC e 50 ºC por 360 minutos e aumento de atividade enzimática na presença de CaCl2. O perfil de degradação e as evidências de transglicosilação também foram mantidas após a excisão do domínio acessório Calx-beta. No entanto, o domínio catalítico apresentou um aumento de cerca de 4 vezes da atividade enzimática na hidrólise de Avicel, comparado à CelE2. As análises por dicroísmo circular (CD) de CelE21-381 indicaram um perfil predominante de alfa-hélice, diminuição de 4,6 ºC da temperatura de desnaturação e um aumento destes valores na presença de CaCl2, tanto para a construção completa, quanto para CelE21-381. Assim como para CelE2, as análises por espalhamento de raio-X de baixo ângulo (SAXS) mostraram que a adição de CaCl2 resultou na diminuição da tendência de agregação proteica para CelE21-381. Os ensaios de avaliação da ligação a polissacarídeos solúveis e insolúveis indicaram que CelE2382-477 não apresentou capacidade de ligação para os substratos testados. A estrutura tridimensional do domínio catalítico CelE21-381 foi determinada a uma resolução de 2,1 Å que permitiu a identificar um enovelamento do tipo barril (alfa/beta)8. Os resultados obtidos mostraram que a presença do domínio acessório Calx-beta não é fundamental para atividade enzimática de CelE2, de modo que a alteração mais significativa diz respeito ao aumento da atividade enzimática do domínio catalítico em Avicel em comparação à construção completa. Estes resultados contribuirão para estudos futuros acerca deste domínio pouco estudado entre as celulases e informações para a família 5 das GHsAbstract: Glycoside hydrolases (GHs) comprise a class of enzymes widely used in the enzymatic processes, acting in the hydrolysis of the polysaccharides glycosidic bonds. In addition to the catalytic domain, several GHs present accessory domains, which may influence the biochemical and structural aspects of the enzymes. The CelE2, a metagenomic-derived cellulase, recently characterized, harbors in its structure an N-terminal catalytic domain characteristic of the GH5 family, and a C-terminal domain with identity for the Calx-betadomain, previously identified in other glycoside hydrolases but without clearly defined function in these cases. In order to investigate the biochemical and structural characteristics of the CelE2 domains separately, truncated derivations were constructed regarding the catalytic domain and the accessory domain Calx-beta. The results showed that the deletion of Calx-beta domain (CelE2382-477) did not cause alterations in the biochemical characteristics of CelE2, since the catalytic domain (CelE21-381) presented similar values of enzymatic activity in beta-glucan, carboxymethylcellulose and lichenan, optimal pH and temperature values near 5,3 and 45 ºC, respectively, thermal stability at 40 ºC and 50 ºC up to 360 minutes, and increase of enzymatic activity in the presence of CaCl2. The cleavage pattern and evidence of transglycosylation were also maintained after Calx-beta deletion from CelE2. However, the catalytic domain showed a 4-fold increase in the enzymatic activity of Avicel hydrolysis, compared to CelE2. Circular dichroism (CD) analysis of CelE21-381 indicated a predominant alpha-helix profile, decrease in the denaturation temperature around 4.6 ºC and an increase of these values in the presence of CaCl2, both for the complete construct and for CelE21-381. As well as CelE2, small angle X-ray scattering (SAXS) analyzes showed that the addition of CaCl2 resulted in a decrease in the protein aggregation tendency for CelE21-381. The binding assays for soluble and insoluble polysaccharides indicated that CelE2382-477 did not show the binding ability for the substrates tested. The three-dimensional structure of the catalytic domain CelE21-381 was determined at a resolution of 2.1 Å which allowed to identify an (alpha/beta)8 barrel fold. The results showed that the presence of the accessory domain Calx-beta is not fundamental for the enzymatic activity of CelE2, so that the most significant change concerns the increase of the enzymatic activity of the catalytic domain in Avicel, comparing to the whole construct. These results may contribute to future studies about this understudied domain among cellulases and information for the family 5 of glycoside hydrolasesMestradoBioquimicaMestra em Biologia Funcional e Molecular132372/2016-92016/01926-2FAPESPCNP

Avaliação da relação parental em centros de acolhimento temporário : conceções dos profissionais

Durante o período em que as crianças permanecem acolhidas nos Centros de Acolhimento Temporário é fundamental que a relação criança‐família seja avaliada de modo a ser definido, em tempo útil, o projeto de vida mais adequado a cada uma delas, seja ele a adoção, o retorno à família biológica ou a institucionalização. A partir da análise de 18 entrevistas realizadas a técnicos de Centros de Acolhimento Temporário e especialistas em diferentes áreas dos Estudos da Criança procurámos explorar quais as suas conceções acerca de três conceitos essenciais no processo de avaliação da relação parental: qualidade da relação parental, vínculos próprios da filiação e manifesto desinteresse. Verificámos que, na delimitação dos referidos conceitos, a dimensão afetiva tem um importante papel. As diferenças surgem na importância dada à competência educativa e à atitude dos pais face à mudança

Avaliação da relação parental no acolhimento residencial de crianças: conceções dos intervenientes e especialistas

Este trabalho é o resumo de uma comunicação apresentada no 3º Congresso da Ordem dos Psicólogos Portugueses, realizado na Alfândega do Porto, de 28 de setembro a 1 de outubro de 2016.Durante o período em que as crianças permanecem acolhidas em Casas de Acolhimento Residencial é fundamental que a relação criança‐família seja avaliada de modo a ser definido, em tempo útil, o projeto de vida mais adequado a cada uma delas, seja ele a adoção, o retorno à família biológica ou o acolhimento residencial. A partir da análise de 32 entrevistas realizadas a técnicos de Casas de Acolhimento Residencial, especialistas em diferentes áreas dos Estudos da Criança, progenitores de crianças acolhidas ou com experiência prévia de acolhimento, e crianças acolhidas ou também com experiência prévia de acolhimento, procurámos explorar quais as suas conceções acerca de três conceitos essenciais no processo de avaliação da relação parental: qualidade da relação parental, vínculos próprios da filiação e manifesto desinteresse. Verificámos que, na delimitação dos referidos conceitos, a dimensão afetiva tem um importante papel. As diferenças surgem na importância dada à competência educativa e à atitude dos pais face à mudança.CIEC - Centro de Investigação em Estudos da Criança, IE, UMinho (UI 317 da FCT

Lena y Epícaris, dos ejemplos de valor femenino

Lena y Epícaris, dos ejemplos de valor femenino El punto de partida de nuestra investigación ha sido un texto anónimo publicado en 1790, en una hoja de cordel, titulado Tratado sobre a Igualdade dos Sexos, ou Elogio do Merecimento das Mulheres..., impreso inserto en la denominada Querelle des Femmes. Para probar su punto de vista, el de que no se debe negar la capacidad igual de hombres y mujeres en las diferentes tareas de la vida, el Autor refuta cada pretendido defecto de las mujeres y, siguiendo el consagrado precepto retórico, cita con frecuencia exempla de la Historia Antigua, probatorios de su tesis. En el capítulo sobre el Secreto, que supuestamente las mujeres son incapaces de guardar, el Autor evoca dos heroínas, Lena y Epícaris, la primera, figura legendaria griega, la segunda, con existencia histórica en la Roma del siglo I de nuestra era. En el desarrollo de nuestro trabajo, intenté responder a las siguientes preguntas: ¿Qué circunstancias hicieron de estas mujeres objeto de laudatio? ¿Dónde se inició la asociación entre las dos heroínas? ¿Cuál fue la trayectoria de estos exempla, qué matices y formas diversas asumieron en el curso de la historia literaria? La primera pregunta es fácil de responder: los preceptos retóricos justifican que la utilización de exempla cuyo protagonista es una mujer sean bastante más eficaces en la retórica epideíctica. En el caso de Lena y Epícaris, otra circunstancia acentúa la finalidad retórica del encomio: el hecho de ser ambas de estrato social inferior y, como agravante, el de ser de vida y costumbres moralmente poco dignos. Además, puestas en situación terrible y extrema, la tortura, ante la que no ceden, desafían a la tiranía que las tiene a su merced, y prefieren la muerte o la automutilación a correr el riesgo de flaquear. Para observar el proceso de construcción y posterior cristalización de la imagen de Lena y Epícaris, y el de su asociación en contextos literarios (y artísticos) hasta por lo menos el siglo XX, recordamos los contenidos temáticos de los episodios donde surgen las dos heroínas en las fuentes antiguas, procurando entrever una secuencia cronológica en las referencias. Sobre Lena, hetera ateniense, partícipe de la conspiración de Harmodio e Aristogitón, se observó aquella que parece ser la fuente principal: Plinio el Viejo, al que se siguieron Plutarco, Pausanias, Ateneo, Polieno y los autores cristianos Tertuliano, Lactancio, Eusebio de Cesarea / Jerónimo, Ambrosio. Sobre Epícaris, partícipe de la conjura de Pisón contra Nerón, se analizó la fuente primordial, Tácito, y igualmente Dión Casio y Polieno. Se observó, en seguida, la presencia independiente de ambas heroínas, en la literatura y el arte, a lo largo de los siglos, y la trayectoria de las dos figuras asociadas, desde Polieno, en la Antigüedad, hasta el siglo XX, con Anatole France. En este apartado, remontando hasta donde nos es posible, llegamos a Boccaccio y su De mulieribus claris, seguimos con J. L. Vives, Castiglione, Marie le Jars de Gournay, Daniel Tuvill y afloramos la presencia de las dos heroínas en tratados filosóficos y morales, en obras dedicadas a la formación de las mujeres, en tratados de derecho civil y canónico, en comentarios a los textos clásicos, en colecciones de exempla, en piezas que se pueden integrar en el debate de la Querelle des Femmes y en textos literarios, sobre todo tragedias.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

The influence of the external factors on touristic destinations

O objetivo deste ensaio teórico foi identificar, a partir da estrutura do mercado turístico, as influências causadas por elementos macroambientais na gestão e planejamento de destinos turísticos (DTs). O argumento defendido aqui é o de que o posicionamento do destino turístico no ambiente externo condiciona suas possibilidades de crescimento, organização e desenvolvimento. Por meio de um levantamento teórico, indutivo, identificou-se um conjunto de elementos externos que podem influir sobre as decisões e ações tomadas no âmbito interno de um DT. Como resultado, é apresentado um framework teórico de fatores condicionantes da realização da atividade turística em escala local a partir de estratégias baseadas na análise macroambiental. Tais fatores trazem, por extensão, consequências diretas também para o planejamento de destinos turísticos, condicionando as possibilidades de ação, os recursos passíveis de ser efetivamente utilizados, bem como os mercados a serem atingidos. Conclui-se propedeuticamente com a apresentação de um framework sistêmico e integrado, evidenciando sua necessária consideração como um pré-requisito fundamental do processo de planejamento do destino turístico, pois sua desconsideração pode inviabilizar qualquer plano elaborado.This theoretical essay aims to identify, from the standpoint of touristic market structure, the influence caused by macro-environmental factors in the management and planning of tourist destinations (TDs). The idea defended here is that the position of the tourist destination in the external environment affects its possibilities of growing, organizing and development. Through a theoretical, inductive, survey it was identified an arrangement of external factors that can affect the decisions and actions taken as within a TD. As result, it is presented a theoretical framework of environmental conditioning factors the tourism on local level from strategies based on the macro environmental analysis. These factors also bring, by extension, direct consequences for the planning of tourist destinations, affecting the possibilities of action, the resources that could be effectively used, as well as the markets to be achieved. In conclusion, we present an integrative and systemic framework, demonstrating its necessary consideration as an elementary prerequisite of the tourist destination planning process, because their disregard can do practicable whatever plan elaborated

Per memoriam sui, per laudes ac memoriam uirtutum eius: recordação e louvor de Germânico nos Annales de Tácito

This paper analyzes the narrative structures and the rhetorical processes used in Tacitus’ Annals to develop two aspects of Germanicus’ laudatio: the memory of who he used to be and the praise of what he did. Building on Germanicus’ own words to his wife Agrippina on his deathbed (Ann. 2.72) and on his friends’ wish to revenge his death, Tacitus creates the memory of a unique character and weaves the tragic destiny of the people that had surrounded him. At the same time, the chapters that recall the last moments of Germanicus and his final will entrusted to his wife are a guide to the interpretation of the first six chapters of Book 3, with its discontinuities and progressions, drawing a picture full of pathos and dark tragedy.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

A Roma dos Flávios: gente e sentimentos nos Epigramas de Marcial

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