New molecular and therapeutic insights into canine diffuse large B cell lymphoma elucidates the role of the dog as a model for human disease

open21siopenAresu, Luca; Ferraresso, Serena; Marconato, Laura; Cascione, Luciano; Napoli, Sara; Gaudio, Eugenio; Kwee, Ivo; Tarantelli, Chiara; Testa, Andrea; Maniaci, Chiara; Ciulli, Alessio; Hillmann, Petra; Bohnacker, Thomas; Wymann, Matthias P; Comazzi, Stefano; Milan, Massimo; Riondato, Fulvio; Dalla Rovere, Giulia; Giantin, Mery; Giannuzzi, Diana; Bertoni, FrancescoAresu, Luca; Ferraresso, Serena; Marconato, Laura; Cascione, Luciano; Napoli, Sara; Gaudio, Eugenio; Kwee, Ivo; Tarantelli, Chiara; Testa, Andrea; Maniaci, Chiara; Ciulli, Alessio; Hillmann, Petra; Bohnacker, Thomas; Wymann, Matthias P; Comazzi, Stefano; Milan, Massimo; Riondato, Fulvio; Dalla Rovere, Giulia; Giantin, Mery; Giannuzzi, Diana; Bertoni, Francesc

Molekulare Basis der Aktivierung und Modulation des P2Y₂-Nukleotid-Rezeptors

Der P2Y2-Rezeptor wird durch die physiologischen Nukleotide ATP und UTP aktiviert und löst eine Signalübertragung über die Phospholipase Cß und Inositol-1,4,5-trisphosphat aus, die schließlich zu intrazellulären Calciumanstiegen führt. Er spielt eine wichtige Rolle bei bestimmten pathophysiologischen Prozessen wie der Befeuchtung von Epithelien, Atherosklerose, Zellproliferation und neurodegenerativen Erkrankungen. Daher sind der P2Y2-Rezeptor sowie auch andere Subtypen der P2Y-Rezeptor-Familie viel versprechende Arzneistoff-Targets. Ziel der vorliegenden Arbeit war die Charakterisierung der Bindungstasche des humanen P2Y2-Rezeptors mittels zielgerichteter Mutagenese. Bisher waren lediglich drei Aminosäuren bekannt, die an der Ligandbindung und Rezeptoraktivierung des P2Y2-Rezeptors beteiligt sind: Die positiv geladenen Aminosäuren His262, Arg265 und Arg292. Der humane P2Y2-Rezeptor wurde mittels retroviraler Transfektion funktionell in 1321N1-Astrozytomzellen exprimiert. Die Aktivierbarkeit der Rezeptoren wurde durch intrazelluläre Calciummessungen mit einem fluorimetrischen Assay im 96-Well-Format untersucht. Zur Bestimmung der Expressionsraten der Rezeptoren wurde ein Zelloberflächen-ELISA entwickelt, bei dem monoklonale Antikörper gegen das N-terminale HA-Tag des Rezeptors zur Detektion dienten. Durch die chemische Reduktion mittels Dithiothreitol (DTT) wurde gezeigt, dass die Disulfidbrücken zwischen Cys25 und Cys278 sowie zwischen Cys106 und Cys183 essentiell für die Aktivierbarkeit des P2Y2-Rezeptors sind. Dies konnte durch Mutagenese einzelner Cysteine bestätigt werden. Folgende Mutationen wurden in die transmembranären Helices des P2Y2-Rezeptors eingeführt: Y114A, Y118A (TM3), Y198A (TM5), S296A (TM7). Des Weiteren wurden Mutationen basischer Aminosäuren in den extrazellulären Schleifen des P2Y2-Rezeptors durchgeführt: R177A_R180A, R177A, R180A, R194H (EL2) und R272A (EL3). Die Aminosäuren Tyr118 und Ser296 sind essentiell für die Rezeptoraktivierung. Sie bilden direkte Wechselwirkungen mit den Rezeptor-Liganden aus und sind an der Rezeptorstabilisierung beteiligt. Auch die basischen Aminosäuren im Extrazellulären Loop 2 sind direkt an der Agonistbindung beteiligt. Arg272 ist Teil einer so-genannten Meta-Bindungsstelle. An den P2Y2-Rezeptor-Mutanten wurden des Weiteren Antagonisten mit Anthrachinonstruktur untersucht. Für die Bindung spielen die basischen Aminosäuren im Extrazellulären Loops 2 sowie die Aminosäure Tyr114 eine Rolle. Insgesammt konnte die Bindungstasche des humanen P2Y2-Rezeptors charakterisiert werden, was zur Entwicklung und strukturellen Verbesserung von Rezeptor-Liganden führt und einer Annäherung von computergenerierten Rezeptormodellen an die Realität dient. Hohe Konzentrationen von Ammonium im Blut führen zu neurotoxischen Effekten, wie dies zum Beispiel in der Hepatischen Encephalopathie der Fall ist. Von den toxischen Auswirkungen der Ammonium-Ionen sind hauptsächlich Astrozyten nicht jedoch Neuronen betroffen. Durch hohe Konzentrationen verschiedener Ammoniumsalze wurden in 1321N1-Astrozytomzellen (EC50 = 6,38 mM), nicht jedoch in NG108-15-Zellen, transiente intrazelluläre Calciumanstiege ausgelöst. Die Calcium-Ionen wurden hierbei aus intrazellulären Speichern freigesetzt. Acetat konnte in hohen Konzentrationen die Ammonium-induzierten Ca2+-Anstiege hemmen. Die Expression der Ammoniumtransporter RhBG/Rhbg und RhCG/Rhcg wurde auf mRNA-Ebene mittels RT-PCR untersucht. Beide Transporter werden in NG108-15-Zellen exprimiert. In 1321N1-Astrozytomzellen konnte keine mRNA für die Ammoniumtransporter nachgewiesen werden. 1321N1-Astrozytomzellen wurden als leicht handhabbares, erstes humanes Modellsystem für die Untersuchung der Hepatischen Encephalopathie etabliert

PI3K/mTOR Pathway Inhibition: Opportunities in Oncology and Rare Genetic Diseases

The phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/mammalian target of rapamycin (mTOR) signaling pathway has been implicated as a cancer target. Big pharma players and small companies have been developing small molecule inhibitors of PI3K and/or mTOR since the 1990s. Although four inhibitors have been approved, many open questions regarding tolerability, patient selection, sensitivity markers, development of resistances, and toxicological challenges still need to be addressed. Besides clear oncological indications, PI3K and mTOR inhibitors have been suggested for treating a plethora of different diseases. In particular, genetically induced PI3K/mTOR pathway activation causes rare disorders, known as overgrowth syndromes, like PTEN (phosphatase and tensin homolog) hamartomas, tuberous sclerosis complex (TSC), phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha (PIK3CA)-related overgrowth spectrum (PROS), and activated PI3-Kinase delta syndrome (PI3KCD, APDS). Some of those disorders likeTSC or hemimegalencephaly, which are one of the PROS disorders, also belong to a group of diseases called mTORopathies. This group of syndromes presents with additional neurological manifestations associated with epilepsy and other neuropsychiatric symptoms induced by neuronal mTOR pathway hyperactivation. While PI3K and mTOR inhibitors have been and still are intensively tested in oncology indications, their use in genetically defined syndromes and mTORopathies appear to be promising avenues for a pharmacological intervention

Knock-Knock! Who's There? The Laughter-Enhanced Virtual Real-Estate Agent

Ludusan B, Wagner P. Knock-Knock! Who's There? The Laughter-Enhanced Virtual Real-Estate Agent. In: Hillmann S, Weiss B, Michael T, Möller S, eds. Elektronische Sprachsignalverarbeitung 2021. Tagungsband der 32. Konferenz. Studientexte zur Sprachkommunikation . Vol 99. Dresden: TUDpress, 2021; 2021: 281-288.We present here an investigation into the use of social laughter in human-machine interaction. We employed an overhearer study, in which the interaction between a virtual real-estate agent and a client visiting an apartment was evaluated. Two conditions were considered, without and with laughter, the only difference between the two cases being the inclusion of laughter, at appropriate locations in the agent's speech, in the latter case. A large pool of participants listened to the recording corresponding to one of the two conditions, while watching a slideshow of the visited apartment. They were asked to judge the interaction of the agent, based on the following dimensions: professionalism, communication, pleasantness, formality and spontaneity, as well as expressing the likelihood of recommending the apartment and the agent to acquaintances. The results showed that the scores of the five dimensions decreased while the apartment and the agent ratings increased, in the laughter case, but only the formality difference reached significance. Nevertheless, a linear regression analysis showed that condition had an effect on the ratings, mainly through interactions with other factors. We discuss these findings and propose further directions of research to be followed

A Conformational Restriction Strategy for the Identification of a Highly Selective Pyrimido-pyrrolo-oxazine mTOR Inhibitor

The mechanistic target of rapamycin (mTOR) plays a pivotal role in growth and tumor progression and is an attractive target for cancer treatment. ATP-competitive mTOR kinase inhibitors (TORKi) have the potential to overcome limitations of rapamycin derivatives in a wide range of malignancies. Herein, we exploit a conformational restriction approach to explore a novel chemical space for the generation of TORKi. Structure−activity relationship (SAR) studies led to the identification of compound 12b with a ∼450-fold selectivity for mTOR over class I PI3K isoforms. Pharmacokinetic studies in male Sprague Dawley rats highlighted a good exposure after oral dosing and a minimum brain penetration. CYP450 reactive phenotyping pointed out the high metabolic stability of 12b. These results identify the tricyclic pyrimido-pyrrolo-oxazine moiety as a novel scaffold for the development of highly selective mTOR inhibitors for cancer treatment

Improving the Management of Psoriatic Arthritis and Axial Spondyloarthritis: Roundtable Discussions with Healthcare Professionals and Patients

<p><b>Article full text</b></p> <p><br></p> <p>The full text of this article can be found here<b>. </b><a href="https://link.springer.com/article/10.1007/s40744-017-0066-2">https://link.springer.com/article/10.1007/s40744-017-0066-2</a></p><p></p> <p><br></p> <p><b>Provide enhanced content for this article</b></p> <p><br></p> <p>If you are an author of this publication and would like to provide additional enhanced content for your article then please contact <a href="http://www.medengine.com/Redeem/”mailto:[email protected]”"><b>[email protected]</b></a>.</p> <p><br></p> <p>The journal offers a range of additional features designed to increase visibility and readership. All features will be thoroughly peer reviewed to ensure the content is of the highest scientific standard and all features are marked as ‘peer reviewed’ to ensure readers are aware that the content has been reviewed to the same level as the articles they are being presented alongside. Moreover, all sponsorship and disclosure information is included to provide complete transparency and adherence to good publication practices. This ensures that however the content is reached the reader has a full understanding of its origin. No fees are charged for hosting additional open access content.</p> <p><br></p> <p>Other enhanced features include, but are not limited to:</p> <p><br></p> <p>• Slide decks</p> <p>• Videos and animations</p> <p>• Audio abstracts</p> <p>• Audio slides</p