Intervenção psicomotora e perturbações do espetro do autismo, Centro de Apoio ao Desenvolvimento Infantil (CADIn)

Mestrado em Reabilitação PsicomotoraO presente relatório descreve a prática profissional desenvolvida no Centro de Apoio ao Desenvolvimento Infantil (CADIn), no âmbito do Ramo de Aprofundamento de Competências Profissionais do mestrado em Reabilitação Psicomotora, durante o ano letivo 2013/2014. Reflete o trabalho desenvolvido principalmente junto de crianças e jovens com Perturbações do Espetro do Autismo (PEA), centrando-se na Intervenção Psicomotora quer individual, quer em grupo. As PEA caracterizam-se por défices em vários domínios, principalmente ao nível da interação social e comunicação e comportamentos repetitivos e estereotipados, variando segundo o nível de gravidade e consequente acompanhamento. A Intervenção Psicomotora é uma abordagem que, através de atividades específicas, estruturadas e lúdicas, permite ao indivíduo o seu desenvolvimento holístico, desenvolvendo a cognição, a motricidade, a comunicação, o comportamento, bem como o estabelecimento de uma relação mais adequada com os outros e com o meio envolvente. O relatório é dividido em Enquadramento Institucional, Enquadramento da Prática Profissional e Realização da Prática Profissional abordando-se, de uma forma mais detalhada, três estudos de caso (dois individuais e um de grupo)

Variabilidade interobservador da classificação de Waldenström na doença de Perthes: estudo retrospetivo

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina (Ortopedia), apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra.Introdução: A doença de Perthes é uma patologia da anca que ocorre em crianças. Apresenta uma incidência anual que varia de 2 a 294 por 1.000.000 de crianças, com maior prevalência entre os 4 e os 12 anos de idade, sendo mais comum no sexo masculino. Consiste num evento isquémico transitório, total ou parcial, do núcleo de ossificação da epífise superior do fémur, numa anca em crescimento. Além da fase aguda de lesão óssea, a doença carateriza-se por todo o processo subsequente de reparação e remodelação. Uma das principais dificuldades na orientação de crianças com doença de Perthes decorre do caráter evolutivo da patologia. Os poucos consensos internacionais existentes na abordagem terapêutica da doença dependem da nossa capacidade em enquadrar os doentes em grupos homogéneos, de forma a uniformizar a comunicação médica bem como a tomada de decisão clínica e melhorar a qualidade da informação dada às famílias. O estadiamento obtido pela classificação de Waldenström, ao enquadrar a doença em quatro grupos correspondentes à respetiva fase de evolução, torna-se um instrumento particularmente útil na abordagem desta doença. Materiais e métodos: Estudo de coorte retrospetivo. Seleção dos doentes a partir da base de dados do CHUC, EPE- Hospital Pediátrico, com o código ICD-9 7321. Incluídos doentes a partir do ano 2007, tendo sido excluídos doentes com outras patologias inicialmente classificadas como Perthes. Revisão dos processos clínicos dos doentes com recolha dos dados demográficos e informação relativa ao exame radiográfico das ancas. Compilação e organização das imagens da bacia (face e incidência de Löwenstein) de forma aleatória, intercalada e anónima num ficheiro PDF. Classificação das mesmas por um painel de três ortopedistas e três internos de ortopedia. Considerada como classificação de Waldenström padronizada a modificação publicada no livro de texto Tachdjian (4ª edição) da classificação original de H. Waldenström publicada no artigo de 1922. Análise estatística dos dados de forma a estabelecer a variabilidade interobservador desta classificação. A revisão da literatura foi feita utilizando o pubmed. Resultados: As classificações apresentaram um kappa global médio de 0,392, considerado de grau razoável. Apesar de existirem diferenças entre internos e especialistas em ortopedia (0,330 vs 0,548), estas diferenças não foram consideradas estatisticamente significativas. Mesmo assim, os especialistas apresentaram resultados mais concordantes e fiáveis. Para os internos, o estadio de reossificação foi o que apresentou maior discordância; no caso dos especialistas, houve maior discordância no estadio de fragmentação, tendo-se obtido concordância total no estadio de remodelação. Conclusões: Os resultados do presente estudo sugerem que a classificação de Waldenström, baseada isoladamente em critérios radiográficos, não é uma ferramenta de elevada fiabilidade nem reprodutibilidade para a avaliação dos doentes com Perthes. Assim sendo, admite-se a possibilidade combinar dados do exame físico e da evolução radiográfica a este sistema de classificação, no sentido de melhorar estes parâmetros e tornar mais fiável a decisão clínica nesta patologia.INTRODUCTION: Perthes’ disease is a disorder of the hip in young children. The annual incidence of this disorder ranges from 2 to 294 per 1.000.000 children, with higher prevalence between 4-12 years, being more common in males. The disease consists in a total or partial, transient ischemic event of the ossific nucleus of the superior epiphysis of the femur, in a growing hip. Besides the acute phase of the bone lesion, the disease is characterized by all the subsequent process of repair and remodelling. One of the main difficulties treating children with Perthes’ disease lies on the evolving character of the pathology. The few existing international consensus about the therapeutic approach rely on our ability to divide the children into homogeneous groups, to uniformize the medical communication as well as the clinical decision and improve the quality of the information given to the families. The staging method obtained by the Waldenström criteria, dividing the disease into four different stages corresponding on their evolution phase, becomes a useful tool to approach this disease. MATERIALS AND METHODS: Retrospective cohort study. Selection of the patients according to the database from CHUC, EPE-Hospital Pediátrico (code: ICD-97321). Included patients from 2006. Excluded patients with other diseases that were initially diagnosed with Perthes’ disease. Revision of the radiological data of the children’s hips. Collection and ordering of the radiographs (anteroposterior and Löwenstein incidence), randomly and anonymously in a PDF file. Staging of the radiographs by a panel of 3 orthopaedic residents and 3 orthopaedic surgeons. Considered the Waldenström classification published in the Tachdjian (4th edition) modified from the original published in the 1922’s article. Statistical analysis of the data to establish inter-rater reliability of this staging system. The literature review was based on Pubmed. RESULTS: The mean kappa value was 0,392 (reasonable). Even though there was discrepancy among the classification of interns and specialists (k=0,330 vs k=0,548), the differences were not considered statistically relevant. Nevertheless, the specialists were more consistent and reliable. The reossification stage presented the most disagreement amid interns. Among specialists, the fragmentation stage was the most discordant and the residual stage presented total agreement. CONCLUSIONS: The results of the present study suggest that the Waldenström Classification, if considering radiographs alone, is not a reliable tool to evaluate patients with Perthes’ disease. Therefore, we consider the possibility of combining data from physical examination and x-ray sequences to improve the reliability of this classification system and the clinical decision of this disease in the future

Structural investigation of the Bacillus subtilis morphogenic factor RodZ

A thesis to obtain a Master degree in Structural and Functional BiochemistryRodZ is a protein widely conserved in bacteria and a core component of the morphogenic apparatus of the cell. It is known to be required for assembly of the bacterial actin homologue, MreB, that controls cell wall synthesis and cell shape. The domain organization of RodZ consists of a well-conserved N-terminal (RodZn) with helix-turn-helix motif (HTH), a conserved transmembrane domain, and a conserved C-terminal domain (RodZc). RodZn, located in the cytoplasm, has been shown to interact with MreB actin-homologue by x-ray studies in T. maritima. However, the structure of RodZn from gram-positive B. subtilis showed low homology with the published one from gram-negative T. maritima. Here we present the solution structure of RodZn from B. subtilis determined for the first time, by NMR spectroscopy. Compared to previous structural data obtained from the crystallized RodZn from T. maritima and more recently from S. aureus, several differences could be observed, namely the length of the alpha-helices and the presence of an extended coil. Interaction studies were preformed between RodZn domain and MreB from which no significant results could be extrapolated. Since HTH motif is frequently associated with DNA interaction, the involvement of RodZn in DNA organization is being investigated. At the same time, RodZc domain, which structure has never been reported, was subject of study. Bioinformatic, biophysical and biochemical methodologies were employed to study this domain. A model based in a pseudo-ab initio methodology was built, revealing an Ig-like fold. The Ig superfamily is a large group of cell surface and soluble proteins that are involved in the recognition, binding, or adhesion processes of cells. Therefore, RodZ is thought to be a protein that establishes a link between the inner side of the cell membrane and the outer side, promoting spatiotemporal coordination between peptidoglycan synthesis and cell division

On-line monitoring of deposits formation and removal on solid surfaces using vibration techniques

Tese de doutoramento. Engenharia Química e Biológica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 200

Topology optimization considering geometrical nonlinear behavior

Foi realizada a validação de um programa de análise de elementos finitos não lineares já desenvolvido, PROAES_NL. Para tal, quatro exemplos encontrados na literatura foram resolvidos utilizando o programa e os resultados foram comparados com os valores apresentados em artigos publicados e também com os resultados obtidos com o software de elementos finitos ANSYS. O erro relativo entre os resultados obtidos utilizando o PROAES_NL e as duas outras fontes mencionadas anteriormente foi relativamente pequeno e o programa foi considerado validado. A teoria de cálculo de sensibilidades em estruturas com comportamento não linear desenvolvida por Santos [1] foi estudada, interpretada e traduzida para o domínio físico. As equações resultantes foram implementadas numericamente em linguagem Octave completando o código PROAES_NL usando apenas dados de pós-processamento de elementos finitos. Para validar as expressões de análise de sensibilidade utilizadas foram resolvidos cinco exemplos. Os resultados obtidos foram comparados com os valores obtidos pelo método das diferenças finitas e com os resultados apresentados por Santos [1]. O erro relativo entre o programa PROAES_NL e as fontes mencionadas anteriormente foi pequeno e as expressões de sensibilidade foram consideradas validadas. Além disso, é demonstrado que existe uma diferença entre o cálculo da análise de sensibilidades numa análise linear e numa análise não linear. As expressões de sensibilidades implementadas foram depois usadas para executar otimizações de topologia. O objetivo era verificar se haveria alguma diferença entre executar uma otimização de topologia utilizando análises lineares e não lineares. Embora alguns dos artigos estudados mostrem diferenças entre a configuração ótima obtida com análise linear e análise não linear, usando o programa PROAES_NL, a diferença foi visível em apenas um dos dois exemplos estudados. Durante a fase final deste trabalho, limitações na convergência da análise não linear resultaram em restrições na seleção dos parâmetros de otimização

Intervenção precoce em Portugal : evidências e consequências

Neste artigo, enquadraremos um Estudo de Investigação Nacional sobre a Avaliação das Práticas Centradas na Família nos Projectos de Intervenção Precoce em Portugal (continente e ilhas), bem como os seus principais resultados e respectivas recomendações

Analysis of signalling pathways required for hemocyte navigation in Drosphila

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011A migração celular é um fenómeno fundamental e altamente regulado, que desempenha um papel activo numa grande variedade de processos biológicos. Por exemplo, é essencial para os processos de gastrulação e organogénese durante o desenvolvimento embrionário e, também, para o estabelecimento e manutenção da homeostasia do organismo durante a vida adulta, onde participa na reparação de feridas e na migração de células imunitárias para locais de inflamação. Falhas nos mecanismos de migração celular podem originar diversas patologias, tais como inflamações crónicas, defeitos congénitos e metastização de tumores. Os processos que permitem a migração celular despertam, por isso, grande interesse do ponto de vista terapêutico. O mecanismo de migração celular direccionada, também designado por quimiotaxia, tem sido principalmente analisado através de estudos em cultura de células imunitárias de mamífero. Estes estudos identificaram vários estímulos quimiotácticos, receptores celulares e vias de sinalização essenciais para a migração celular. Alguns destes estímulos quimiotácticos são compostos por moléculas difusíveis designadas por quimiocinas. Estas moléculas são reconhecidas por receptores que se encontram à superfície dos leucócitos, e que fazem parte de uma vasta família de receptores celulares, os receptores associados a proteínas G ou “G-protein coupled receptors” (GPCRs). Estes promovem respostas por parte da célula através de proteínas a eles associadas, as proteínas G ou “G-proteins”. Outros tipos de estímulos quimiotácticos, tais como factores de crescimento, tem a capacidade de activar outra classe de receptores, os receptores tirosina-cinase ou “receptor tyrosine kinases” (RTKs), que são também importantes na promoção de migração celular. A activação destes receptores leva ao recrutamento de moléculas sinalizadoras, nomeadamente a cinase de fosfatidilinositol (PI3K), importante para o estabelecimento da polaridade celular necessária para a migração celular. Embora estes estudos em culturas celulares tenham contribuído bastante para o nosso conhecimento sobre os mecanismos moleculares da migração celular, pouco se sabe acerca da regulação destes mecanismos no contexto de um organismo. É, portanto, fundamental o recurso a um modelo animal simples, e ao mesmo tempo relevante, para analisar estes processos. As células imunitárias ou hemócitos de Drosophila melanogaster (mosca-da-fruta) partilham muitas características com os seus equivalentes nos mamíferos, tanto em termos de função (fagocitose de microrganismos invasores e de corpos apoptóticos, por exemplo), como no seu desenvolvimento hematopoiético (regulado por factores de transcrição das famílias GATA, RUNX, e friend-of-GATA). Em semelhança aos leucócitos, os hemócitos são expostos a uma elevada variedade de estímulos quimiotácticos que têm de ser integrados para definir a sua direcção de migração. Recentemente, os hemócitos embrionários têm sido utilizados como um excelente sistema para o estudo da migração celular e da inflamação in vivo. Estes estudos revelaram que os componentes moleculares que regulam a migração celular são muito semelhantes aos dos leucócitos. Em D. melanogaster existem receptores da familia dos GPCRs e RTKs que desempenham um papel na migração determinados tipos celulares. Um exemplo importante, é o receptor Pvr, um RTK, que é necessário à migração de hemócitos durante o desenvolvimento embrionário. Além disso, a utilização de D. melanogaster como modelo de estudo permite tirar partido de tecnologias bastante avançadas e úteis como a microscopia confocal, e de vastas bibliotecas de mutantes e transgénicos. Outra vantagem é a utilização do sistema GAL4/UAS, que permite determinar a função e localização de diferentes moléculas especificamente nos tecidos e células em estudo e no estádio de desenvolvimento relevante. Assim, o objectivo deste projecto foi analisar o papel da cinase PI3K, dos GPCRs e dos RTKs no recrutamento de hemócitos para localizações específicas, durante a terceira fase larvar de D. melanogaster. Neste estádio do desenvolvimento, uma parte dos hemócitos encontra-se associada a vários tecidos, nomeadamente, à região anterior do intestino designada “proventriculus” (PV) e ao epitélio dorsal, onde estas células se distribuem por grupos sésseis ao longo do eixo antero-posterior da larva, os “sessile patches” (SP). Em primeiro lugar, estudou-se a função da cinase PI3K através da expressão nos hemócitos de uma forma Dominante Negativa (DN) e de uma forma Constitutivamente Activa (CA) desta proteína. Enquanto a primeira bloqueia a acção de PI3K, a segunda mantém-la constantemente activada. Quando se expressou a forma DN de PI3K especificamente nos hemócitos, observou-se um aumento na população de hemócitos no PV, ao passo que nos SP foi observada uma diminuição no número destas células. O efeito da forma DN de PI3K na população de hemócitos do PV é semelhante aos resultados recentemente obtidos em modelos de ratinho para colite, o que demonstra alguma semelhança entre estes dois modelos. Por outro lado, o fenómeno oposto foi detectado após a expressão da forma CA de PI3K. Isto é, quando constitutivamente activa, a cinase PI3K leva à diminuição do número de hemócitos no PV e ao seu aumento nos SP. Verificou-se ainda que as alterações no número de hemócitos são independentes de um potencial efeito da cinase PI3K na proliferação e apoptose destas células, confirmado através da utilização de imunomarcação com o anticorpo anti-fosfo histona H3 e da técnica de TUNEL. Estes resultados revelam que a cinase PI3K poderá ter um papel na regulação da migração de hemócitos em ambas regiões da larva mas a diferentes níveis. Para além disso, verificou-se que a modulação dos níveis de activação de PI3K leva a alterações na morfologia e propriedades adesivas dos hemócitos, o que indica que PI3K também pode ter um papel na regulação das propriedades adesivas destas células. Resumindo, a cinase PI3K parece ser necessária para o controlo e manutenção do tamanho destas populações de hemócitos possivelmente através da regulação da sua migração e/ou adesão aos tecidos adjacentes. Para analisar o papel de receptores envolvidos no recrutamento e na manutenção destas populações de hemócitos, preferencialmente a montante da cinase PI3K, efectuou-se um rastreio genético baseado na utilização de RNAi para silenciar a expressão de potenciais candidatos. Uma vez que existem cerca de 270 GPCRs e 21 RTKs em D. melanogaster, optou-se por se estudar apenas RTKs e GPCRs (e suas proteínas G associadas) que se sabe serem expressos nos hemócitos. Através deste rastreio genético foi possível identificar vários genes com diferentes funções na migração e/ou manutenção das populações de hemócitos: GRHR, btl, Pvr, e GRHRII. GRHR é um GPCR que parece ser importante para a homeostasia dos hemócitos. Blt é um RTK que poderá ser necessário para a regulação negativa do número de hemócitos nos SP. Pvr é também um RTK que poderá desempenhar uma função homeostática, mas ao mesmo tempo ser necessário para a migração dos hemócitos para o PV e SP, uma vez que se observou uma diminuição no número de hemócitos em ambas as localizações quando silenciada a sua expressão. Finalmente, identificou-se o gene GRHRII, que poderá funcionar a montante da cinase PI3K, uma vez que a expressão de RNAi contra este receptor provocou um efeito semelhante ao observado através da expressão da forma DN de PI3K. Dos quatro candidatos identificados, Pvr e GHRHII parecem ser os receptores mais relevantes. Sendo estes resultados preliminares, a próxima etapa deste projecto será validar os fenótipos observados através de outros métodos de análise. Por exemplo, para confirmar a função destes genes pode recorrer-se à utilização de mutantes e a análises epistáticas para determinar se o gene GRHRII actua a montante da cinase PI3K. Em conclusão, estes resultados revelam o papel crucial de diferentes proteínas na regulação das populações de hemócitos durante a terceira fase larvar de D. melanogaster. Em particular a cinase PI3K, que poderá controlar o número de hemócitos através dois processos distintos: i) através da regulação da sua migração, e/ou ii) através da regulação das propriedades adesivas da célula. O rastreio genético realizado permitiu ainda identificar receptores que poderão estar envolvidos na regulação da migração dos hemócitos destas duas regiões, nomeadamente GRHRII e Pvr. De facto, GRHRII poderá funcionar a montante da cinase PI3K e ter um papel na regulação dos números de hemócitos do PV e dos SP. Estes resultados são especialmente interessantes. Se se confirmar o papel deste GPCR no recrutamento de hemócitos, esta será uma descoberta relevante em termos evolutivos, uma vez que demonstra, pela primeira vez, que, à semelhança do que ocorre em mamíferos, os GPCRs desempenham uma função na migração das células imunitárias em D. melanogaster. Estes resultados também apoiam a ideia de que estas células necessitam de integrar diferentes informações provenientes de regiões diferentes para definirem a sua direcção de migração. Desta forma, este estudo fornece novos conhecimentos acerca das vias de sinalização necessárias durante o recrutamento de hemócitos para regiões específicas durante a terceira fase larvar em D. melanogaster e de como estas populações são mantidas. Estes conhecimentos poderão representar um importante contributo para o estabelecimento dos hemócitos como modelos para o estudo de migração celular.Cell migration is an essential and highly regulated mechanism that plays a role in a wide variety of biological processes throughout an organism‟s life. The dysregulation of cell migration can lead to several pathologies such as chronic inflammatory diseases, congenital defects and tumour cell metastasis. Directed cell migration or chemotaxis has been intensively analyzed through cell culture studies, mainly utilizing mammalian immune cells. These models identified several guidance cues, receptors and signalling pathways important for migration of leukocytes to target tissues and to sites of inflammation and damaged epithelia. However, a simple but reliable in vivo system is needed to uncover the mechanisms underlying immune cell migration within the organism. Drosophila melanogaster hemocytes share many important similarities with their mammalian counterparts in terms of function and haematopoiesis. Embryonic hemocytes are an established model to study cell migration in vivo, due to their amenability to live imaging and the array of genetic techniques that allow for functional analysis of molecular processes in specific cell types. The aim of this project was to analyze the role of Phosphoinositide 3-kinase (PI3K), G Protein Coupled Receptors (GPCRs) and Receptor Tyrosine Kinases (RTKs) in hemocyte recruitment to specific tissue targets in Drosophila third instar larvae, namely the intestine and dorsal epithelium. Here we show that PI3K is important for regulating the size and maintenance of these tissue-associated hemocyte populations, possibly by regulating hemocyte response to external signals and/or by modifying their adhesive properties possibly through Cadherin regulation. In addition, in a candidate screen we identified two receptors, a GPCR and an RTK, potentially required for the recruitment and/or maintenance of hemocytes at these locations. In the future, these results could help to better understand innate immune cell migration and to further establish hemocytes as models for in vivo cell migration

As alterações histológicas no fígado da Tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) alimentadas com distintas fontes de ácidos graxos em temperatura sub-ótima

TCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Agrárias. Curso de Engenharia de Aquicultura.Este trabalho foi realizado a partir de uma tese de mestrado onde analisamos a histologia do fígado de tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) alimentadas com distintas fontes de ácidos graxos mantidas em temperatura sub-ótima. As principais exigências nutricionais da tilápia-do-Nilo estão definidas, mas em relação à exigência em ácidos graxos essenciais em temperaturas frias, ainda existem lacunas a serem preenchidas. Espera-se que as tilápias-do-Nilo criadas em temperatura baixa e alimentadas com as fontes diferentes de ácidos graxos não apresentem diferença histológica entre os fígados. Foram formuladas duas dietas com mistura de óleos vegetais, uma com inclusão de óleo de linhaça e outra não, gerando os seguintes níveis dietéticos de α-LNA: 0,03% e 0,71% do peso seco da dieta. Na dieta controle foi adicionado óleo de fígado de bacalhau. O delineamento dos estudos foi feito ao acaso com três tratamentos e três repetições, totalizando nove unidades experimentais. Ao final do experimento, os seguintes índices foram calculados: ganho de peso, ganho de peso diário, índices viscerosomático, hepatossomático e o fígado conservado para histologia. O crescimento e os índices dos peixes foram afetados significativamente pelas diferentes fontes de ácidos graxos. Os peixes alimentados com a dieta com 0,71% de α-LNA tiveram maior crescimento e maiores índices somáticos. Entretanto, de acordo com as análises histológicas, nota-se que os fígados de peixes alimentados com a dieta controle e a dieta α-LNA 0,71%, possuem citoplasma claramente rico em lipídios, por outro lado, os fígados dos peixes tratados com a dieta α-LNA 0,03% possuem hepatócitos com citoplasma menos lipídico e mais proteico