Quantification of basal digital blood flow and after cold stimulus by laser doppler imaging in patients with systemic sclerosis

OBJECTIVES: The objective of this study was to investigate the dynamic behavior of the blood flow of the microvascular circulation of the fingertips before and after two cold stimuli (CS), using Laser Doppler Imaging with different intensities in patients with systemic sclerosis (SSc) and in healthy individuals. PATIENTS AND METHODS: Fourteen SSc patients (51.2 ± 5.5 years) with Raynaud's phenomenon and 12 healthy controls (44.8 ± 9.0 years) were included in this study. Two CS protocols (submersion of the hands in water at 10 ºC or 15 ºC for 1 minute) were performed on the same day. Mean fingertip blood flow (FBF) of four digits of the left hand was measured using LDI (Moor LDI-VR, Moor Instruments) at baseline and at 1, 4, 10, 25, and 40 minutes after CS. RESULTS: Baseline blood flow was significantly lower in both CS protocols in SSc patients when compared to controls (312.9 ± 102.7 vs 465.4 ± 135.4 PU, P = 0.006 at 15 ºC; 305.2 ± 121.0 vs 437.9 ± 119.8 PU; P = 0.01 at 10 ºC). In the control group, a significant decrease in FBF after CS, when compared to baseline, was observed 1 minute (P = 0.001) after CS at 15 ºC and at 1 (P = 0.005) and 25 minutes (P = 0.001) after CS at 10 ºC. In SSc patients, a significant decrease in FBF was observed in both CS protocols at 1, 4, and 10 minutes (P < 0.000; P = 0.002; P = 0.014, after CS at 15 ºC; P < 0.000; P = 0.004; P = 0.001, after CS at 10 ºC). CONCLUSIONS: Laser Doppler Imaging showed lower baseline fingertip perfusion and further reduction after CS in SSc patients compared to controls. Quantification of fingertip blood flow by LDI may be useful in the longitudinal monitoring of the disease status and therapeutic interventions in SSc.OBJETIVO: Determinar o comportamento dinâmico do fluxo sanguíneo da microcirculação digital, antes e após dois estímulos frios (EF) de diferentes intensidades, utilizando o método do Laser Doppler Imaging (LDI) em pacientes com esclerose sistêmica (ES) e controles saudáveis. MÉTODOS: Foram incluídos 14 pacientes com ES (51,2 ± 5,5 anos de idade) e 12 controles saudáveis (44,8 ± 9,9 anos). Foram realizados dois protocolos alternativos de EF (submersão das mãos em água a 10 ºC ou 15 ºC, durante 1 minuto). O fluxo médio das quatro polpas digitais da mão esquerda (FPD) foi mensurado com a utilização do LDI (Moor LDI-VR), em condições basais, nos períodos de 1, 4, 10, 25 e 40 minutos após EF. RESULTADOS: O fluxo basal foi significativamente menor em ambos os protocolos em pacientes com ES comparados a controles (312,9 ± 102,7 versus 465,4 ± 135,4 PU, P = 0,006, no protocolo a 15 ºC; 305,2 ± 121,0 versus 437,9 ± 119,8 PU, P = 0,01, no protocolo a 10 ºC). Nos controles houve declínio significativo do FPD após EF, em comparação aos valores basais apenas no tempo de um minuto após EF a 15 ºC (P = 0,001) e nos tempos de 1 e 25 minutos após EF a 10 ºC (P = 0,005; P = 0,001, respectivamente). Nos pacientes com ES, houve declínio significativo do FPD nos tempos de 1, 4 e 10 minutos após ambos EFs (P < 0,000; P = 0,002; P = 0,014, EF a 15 ºC; P < 0,000; P = 0,004; P = 0,001, EF a 10 ºC, respectivamente). CONCLUSÃO: LDI demonstrou baixa perfusão em polpa digital em condições basais e elevado declínio de perfusão com retardo na recuperação após EF na ES. A quantificação do fluxo sanguíneo pelo LDI pode ser útil para o seguimento longitudinal da doença e para a monitoração de intervenções terapêuticas na ES.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)UNIFESP disciplina de reumatologiaUNIFESP disciplina de reumatologia ambulatório de Esclerose SistêmicaUNIFESP, disciplina de reumatologiaUNIFESP, disciplina de reumatologia ambulatório de Esclerose SistêmicaSciEL

Werner's syndrome associated with scleroderma-like syndrome: case report and literature revision

Werner's syndrome is a rare autosomal recessive disease associated with premature ageing. Skin alteration must be distinguished from cutaneous manifestation of systemic sclerosis (SSc). We describe a case of a 39 years old patient with Werner's syndrome admitted with an initial diagnostic hypothesis of SSc. The patient had many characteristic features associated with Werner's syndrome including gray hair, hoarseness, short stature, scleroderma-like skin changes, diabetes mellitus, cataracts, hypogonadism, hypothyroidism, and hyperlipidemia. There was no Raynaud's phenomenon, other typical visceral manifestation of SSc, nailfold capillary alterations or autoantibodies. Werner's syndrome diagnosis notwithstanding rare, should be remember in the differential diagnosis of SSc, mainly in the presence of atypical manifestations and in the absence of typical features of SSc.A síndrome de Werner é uma doença autossômica recessiva rara associada a envelhecimento precoce, cujo quadro cutâneo deve ser distinguido daquele encontrado na esclerose sistêmica (ES). Descrevemos aqui o caso de uma paciente de 39 anos de idade, portadora de síndrome de Werner, encaminhada ao nosso serviço com hipótese diagnóstica inicial de ES. A paciente apresentava várias manifestações associadas à síndrome de Werner, incluindo cabelos precocemente grisalhos, voz estridente, baixa estatura, alterações cutâneas esclerodermiformes, diabetes melito, catarata, hipogonadismo, hipotireoidismo e hiperlipidemia. Não apresentava fenômeno de Raynaud, manifestações viscerais típicas da ES, alterações capilaroscópicas periungueais ou auto-anticorpos. O diagnóstico de síndrome de Werner, apesar de raro, deve ser lembrado no diagnóstico diferencial de ES, principalmente na presença de manifestações atípicas e na ausência de alterações típicas da ES.UNIFESP-EPMAmbulatório de Doenças do Espectro da Esclerose SistêmicaUNIFESP, EPMSciEL

Behcet disease (BD) and BD-like clinical phenotypes : NF-kappa B pathway in mucosal ulcerating diseases

Behcet's disease (BD) is a heterogeneous multi-organ disorder in search of a unified pathophysiological theory and classification. The disease frequently has overlapping features resembling other disease clusters, such as vasculitides, spondyloarthritides and thrombophilias with similar genetic risk variants, namelyHLA-B*51,ERAP1,IL-10,IL-23R. Many of the BD manifestations, such as unprovoked recurrent episodes of inflammation and increased expression of IL-1, IL-6 and TNF alpha, overlap with those of the hereditary monogenic autoinflammatory syndromes, positioning BD at the crossroads between autoimmune and autoinflammatory syndromes. BD-like disease associates with various inborn errors of immunity, including familial Mediterranean fever, conditions related to dysregulated NF-kappa B activation (egTNFAIP3,NFKB1,OTULIN,RELA,IKBKG) and either constitutional trisomy 8 or acquired trisomy 8 in myelodysplastic syndromes. We review here the recent advances in the immunopathology of BD, BD-like diseases and the NF-kappa B pathway suggesting new elements in the elusive BD etiopathogenesis.Peer reviewe

Immunothrombosis and COVID-19 ‒ a nested post-hoc analysis from a 3186 patient cohort in a Latin American public reference hospital

Objective: COVID-19 is associated with an elevated risk of thromboembolism and excess mortality. Difficulties with best anticoagulation practices and their implementation motivated the current analysis of COVID-19 patients who developed Venous Thromboembolism (VTE). Method: This is a post-hoc analysis of a COVID-19 cohort, described in an economic study already published. The authors analyzed a subset of patients with confirmed VTE. We described the characteristics of the cohort, such as demographics, clinical status, and laboratory results. We tested differences amid two subgroups of patients, those with VTE or not, with the competitive risk Fine and Gray model. Results: Out of&nbsp;3186&nbsp;adult patients with COVID-19, 245&nbsp;(7.7%) were diagnosed with VTE, 174&nbsp;(5.4%) of them during admission to the hospital. Four (2.3% of these&nbsp;174) did not receive prophylactic anticoagulation and 19&nbsp;(11%) discontinued anticoagulation for at least&nbsp;3&nbsp;days, resulting in&nbsp;170&nbsp;analyzed. During the first week of hospitalization, the laboratory most altered results were C-reactive protein and D-dimer. Patients with VTE were more critical, had a higher mortality rate, worse SOFA score, and, on average, 50% longer hospital stay. Conclusion: Proven VTE incidence in this severe COVID-19 cohort was&nbsp;7.7%, despite&nbsp;87% of them complying completely with VTE prophylaxis. The clinician must be aware of the diagnosis of VTE in COVID-19, even in patients receiving proper prophylaxis

Use and misuse of biomarkers and the role of D-dimer and C-reactive protein in the management of COVID-19: A post-hoc analysis of a prospective cohort study

OBJECTIVE: Coronavirus disease 2019 (COVID-19) is associated with high mortality among hospitalized patients and incurs high costs. Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 infection can trigger both inflammatory and thrombotic processes, and these complications can lead to a poorer prognosis. This study aimed to evaluate the association and temporal trends of D-dimer and C-reactive protein (CRP) levels with the incidence of venous thromboembolism (VTE), hospital mortality, and costs among inpatients with COVID-19. METHODS: Data were extracted from electronic patient records and laboratory databases. Crude and adjusted associations for age, sex, number of comorbidities, Sequential Organ Failure Assessment score at admission, and D-dimer or CRP logistic regression models were used to evaluate associations. RESULTS: Between March and June 2020, COVID-19 was documented in 3,254 inpatients. The D-dimer level ≥4,000 ng/mL fibrinogen equivalent unit (FEU) mortality odds ratio (OR) was 4.48 (adjusted OR: 1.97). The CRP level ≥220 mg/dL OR for death was 7.73 (adjusted OR: 3.93). The D-dimer level ≥4,000 ng/mL FEU VTE OR was 3.96 (adjusted OR: 3.26). The CRP level ≥220 mg/dL OR for VTE was 2.71 (adjusted OR: 1.92). All these analyses were statistically significant (p&lt;0.001). Stratified hospital costs demonstrated a dose-response pattern. Adjusted D-dimer and CRP levels were associated with higher mortality and doubled hospital costs. In the first week, elevated D-dimer levels predicted VTE occurrence and systemic inflammatory harm, while CRP was a hospital mortality predictor. CONCLUSION: D-dimer and CRP levels were associated with higher hospital mortality and a higher incidence of VTE. D-dimer was more strongly associated with VTE, although its discriminative ability was poor, while CRP was a stronger predictor of hospital mortality. Their use outside the usual indications should not be modified and should be discouraged

Identification of eight novel proteasome variants in five unrelated cases of proteasome-associated autoinflammatory syndromes (PRAAS)

Mutations in genes coding for proteasome subunits and/or proteasome assembly helpers typically cause recurring autoinflammation referred to as chronic atypical neutrophilic dermatosis with lipodystrophy and elevated temperatures (CANDLE) or proteasome-associated autoinflammatory syndrome (PRAAS). Patients with CANDLE/PRAAS present with mostly chronically elevated type I interferon scores that emerge as a consequence of increased proteotoxic stress by mechanisms that are not fully understood. Here, we report on five unrelated patients with CANDLE/PRAAS carrying novel inherited proteasome missense and/or nonsense variants. Four patients were compound heterozygous for novel pathogenic variants in the known CANDLE/PRAAS associated genes, PSMB8 and PSMB10, whereas one patient showed additive loss-of-function mutations in PSMB8. Variants in two previously not associated proteasome genes, PSMA5 and PSMC5, were found in a patient who also carried the PSMB8 founder mutation, p.T75M. All newly identified mutations substantially impact the steady-state expression of the affected proteasome subunits and/or their incorporation into mature 26S proteasomes. Our observations expand the spectrum of PRAAS-associated genetic variants and improve a molecular diagnosis and genetic counseling of patients with sterile autoinflammation

Aspectos da função fagocitária e da imunidade inata em pacientes com doença de behçet

Introdução: Não está claro se a hiper-reatividade neutrofílica na doença de Behçet (DB) é constitutiva. Tampouco foi determinado se é induzida por algum fator solúvel sérico ou tecidual. A hipersensibilidade ao Streptococcus sanguinis sugere que infecções devam desempenhar um papel na patogênese. Devido a semelhanças clínicas e fisiopatológicas, postula-se que a DB também seja uma doença autoinflamatória. Estudos prévios sugerem o papel de fatores plasmáticos na hiperatividade neutrofílica da DB. A via do NF-&#61547;B modula várias das funções dos fagócitos, porém não há descrições do seu estado de ativação na DB. Objetivos: avaliar aspectos de ativação celular em neutrófilos e células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de pacientes com DB ativa (DBa) e inativa (DBi). Materiais e métodos: quatro grupos: DBa (n=53); DBi (n=49); sepse (n=25); controles saudáveis (CS; n=50). A atividade da DB foi estabelecida com a pontuação igual ou superior a 2 no “simplified Behçet’s Disease Current Activity Form” validado para o português. Análise por citometria de fluxo avaliou: 1) a fagocitose de zimosan, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sanguinis e Candida albicans; 2) o metabolismo oxidativo por diidrorrodamina (DHR) antes e após estímulo com forbol miristato acetato (PMA); 3) a ativação de fagócitos mediante liberação de CD62L (shedding) após estímulos de ligantes de “toll-like receptors” (TLR)-2, -3, -4, -5, -7; 4) expressão de NF-&#61547;B-p65 fosforilado pós-estímulo com PMA, TLR-3/7, plasma de CS, DBa ou DBi; 5) expressão proteica das subunidades GP-91, p22, p40, p47 e p67 da NADPH-oxidase antes e após estímulo com PMA, plasma de CS, DBa ou DBi. Foi avaliada a atividade microbicida contra S. pneumoniae, S. sanguinis, C. albicans, por meio da técnica de redução do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-thiazolil)-2,5-diphenil-2H-tetrazolio (MTT) e leitura por ELISA. O sobrenadante de culturas de CMSP com estímulo por TLR ou patógenos foi usado para determinação por ELISA de TNF&#61537;, IFN&#61543;, IL12p70, IL23, IL6 e IL10. O sobrenadante de culturas de neutrófilos com estímulo por PMA, lipopolissacarídeo (LPS) ou patógenos foi usado para determinação por ELISA de IL1&#946; e IL8. A produção de H2O2- e O2&#42777; foi determinada pela intensidade de luminescência de luminol/lucigenina pós-estímulo com PMA, S. pneumoniae, S. sanguinis, C. albicans ou plasma CS, DBa ou DBi. Foi avaliada a expressão gênica das cinco subunidades da NADPH-oxidase de neutrófilos e CMSP por qRT-PCR. A produção das armadilhas extracelulares neutrofílicas (NETs) foi quantificada após sedimentação das células em lamínulas e tratamento com PMA ou plasma humano (CS, DBa e DBi), seguida da marcação com anticorpos anti-histonas e anti-elastase e DNA (Hoechst). As concentrações plasmáticas da alarmina “high mobility group box 1” (HMGB1) foram determinadas por ELISA e as de 64 citocinas e 13 receptores solúveis por Luminex. Resultados: A função fagocítica, a atividade microbicida e o metabolismo oxidativo por DHR em PMN e monócitos não mostraram diferenças entre os quatro grupos. Os neutrófilos e os monócitos ativados no ensaio de shedding mostraram maior ativação por TLR-3 em DBi e DBa do que nos controles e nos sépticos. Houve tendência estatística para menor ativação por TLR-7 em monócitos de DBi e DBa do que nos sépticos. Monócitos e neutrófilos de DBa e DBi apresentaram expressão aumentada de NF-&#61547;B-p65 no estado basal e após estímulo com PMA, TLR-3 e -7. CMSP de pacientes sépticos produziram menos IL10, IL23, TNF&#945; e IFN&#61543; do que CS, DBa e DBi, sob estímulo com os ligantes de TLR e patógenos. Neutrófilos e CMSP de DBa, DBi e CS produziram mais O2&#42777; e H2O2- quando expostos aos plasmas de DBa e DBi, comparados à exposição ao plasma de CS. Neutrófilos e CMSP de sépticos apresentaram expressão gênica aumentada de GP-91, p40 e p67 no estado basal comparados aos outros três grupos, sendo o mesmo verdadeiro para p22 em neutrófilos. A expressão proteica das cinco subunidades da NADPH-oxidase encontrou-se aumentada em neutrófilos e monócitos de CS, DBi e DBa após estímulo com plasma de DBi ou DBa comparado ao estímulo com plasma de CS. Houve maior produção de NETs em condições basais nos grupos de pacientes com DBa e DBi, comparados aos CS. Da mesma forma, os neutrófilos de DBa e DBi produziram mais NETs do que CS quando submetidos ao estímulo com plasma humano de controles, de DBi e de DBa, porém esse fenômeno foi mais evidente sob estímulo com plasma DBa. Os pacientes com DB apresentaram níveis plasmáticos aumentados de HMGB1 comparados aos CS, independentemente do grau de atividade da doença. Das 35 citocinas cujas concentrações plasmáticas se mostraram elevadas em algum dos grupos de pacientes com DB, destacou-se o CD40 ligante solúvel (sCD40L), com aumento marcante e uniforme em ambos os grupos de pacientes com DB comparados aos CS. Conclusões: Os fagócitos na DB não se mostraram ativados na maior parte de suas funções imunitárias em condições basais, apesar de a formação de NETs e a via do NF-&#61547;B estarem constitutivamente estimuladas na DB, com aumento adicional após estímulos. A baixa variação na ativação de fagócitos mediante liberação de CD62L pode ser secundária à exaustão da via do NF-&#61547;B. Como esta é uma condição marcada por manifestações mucocutâneas, células epiteliais podem ser o foco do estímulo inflamatório da doença, liberando fatores solúveis possivelmente carreados pelo plasma, os quais estimulam os fagócitos a distância. Plasma de pacientes com DB foi capaz de estimular a produção de derivados reativos do oxigênio e de NETs, independentemente do estado de atividade da doença, porém de forma mais marcante nos pacientes ativos, o que sugere a presença de algum fator ainda indefinido carreado pelo soro. Similarmente aos nossos resultados acerca do metabolismo oxidativo de fagócitos, estudos demonstraram alterações funcionais em neutrófilos normais induzidas pela exposição ao soro de pacientes com DB. O sCD40L, o qual se mostrou marcantemente aumentado no plasma de pacientes com DBi e DBa na nossa casuística, já foi associado por estudos prévios ao estímulo do metabolismo oxidativo de neutrófilos via NF-&#61547;B e, portanto, pode estar associado a essas alterações fagocitárias na DB. Estudos adicionais para a identificação de vias metabólicas e fatores solúveis associados à ativação fagocitária são necessários na DB.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016

Investigação da relação entre as células tregulatórias e expressão do gene irf-1 com a patogênese e fenômenos autoimunes nas sindromes mielodisplásicas: avaliação prospectiva e sequencial

BACKGROUND: The myelodysplastic syndromes (MDS) are characterized by clonal proliferation of bone marrow cells with inefficient production of one or more cell lines and consequent peripheral cytopenia and hematopoietic dysplasia. The precise pathogenesis of MDS is still unknown. The good response to antithymocyte globulin therapy corroborates with the hypothesis that MDS might be immunomediated. Autoimmune phenomena have been reported in about 10% of patients with MDS. Although the pathological basis for the occurrence of autoimmune diseases in patients with MDS is not completely understood, several studies have shown abnormal immune function in MDS. Thus, there is current interest in evaluations of aspects related to the immune system that may be related to the pathogenesis of MDS, especially regulatory T cells and a gene Factor Interferon Regulatory (IRF-1).OBJECTIVES: To evaluate the expression of parameters that may be involved in changing the environment in Myelodysplastic bone marrow, such as IRF-1 expression and its relationship with autoimmune changes chronologically (time zero and 1 year) in a prospective study of patients diagnosed with Myelodysplastic Syndrome and correlate these parameters with clinical features and prognosis.MATERIALS AND METHODS: Samples will be collected from peripheral blood of 38 MDS patients, controls and AID to be evaluated on the number and function of regulatory T cells by flow cytometry, cellular culture and the quantification of cytokines related to regulatory T cell function. Expression of IRF-1 gene (INF regulatory factor) and Foxp3 will be performed by RT-PCR in peripheral blood and by immunohistochemistry on bone marrow biopsy. RESULTS: MDS patients showed no difference regarding the Treg number in subgroups determined according to prognosis score: WPSS (p=0,29), IPSS (p=0,5) and IPSS-R (p=0,6). Hemoglobin serum levels was lower in high risk compared to low risk patients (p=0.025), according to IPSS score. There was no difference in Treg number according to the presence of altered karyotype (p=0.12). However, the presence of altered karyotype was more frequent in high risk compared to low risk patients (p=0.017).Treg peripheral number was significantly higher in MDS than in HC (p=0.007) and AID (p=0.008). Peripheral Teff percentage was similar in HC, MDS (p=0,27) and AID (p=0,98). Suppression of proliferation Teff cell mediated by Treg cell was increase in HC group (p=0,003) compared to the AID and SMD group (p=0,434) and MDS (p=0368). Cytokine production of IL10, TNF? and INF? in culture supernatant was decreased in MDS compared to HC and AID. The gene expression of IRF-1 exon 2 (p<0.02) and 4/5 (p<0.01) in total peripheral blood were lower in MDS patients compared to IAD. Additionally, gene expression of IRF-1 exon 4/5 in Treg cell was increased in AID (p=0,005) compared to MDS and HC (p=0,003). Gene expression of Foxp3 in Treg cell was similar in the three groups (p=0,96). MDS patients presented lower CH100 than IAD (p=0,014). The frequency of ANA-positive individuals was higher in MDS than in HC (p=0.029). In the progression of disease the Treg number (p=0.3) and Teff percentage (p=0.06) did not differ after 12 months, albeit there was a trend toward a decrease of Teff. Cultures of Treg:Teff 1:1 showed an increased Teff proliferation in T12 compared to T0 (p=0.02). The cytokine production was significantly increased in culture supernatant (pg/mL) after 12 months. Relative genetic expression of IRF-1 exon 4/5 was increased in whole blood (p=0,001) and Treg (p<0.001) after 12 months. However, genetic expression of exon 2 was only increased in whole blood (p<0.001), while the genetic expression of Foxp3 in Treg did not present statistical differences (p=0.57). Interestingly, a moderate positive correlation between the genetic expression of Foxp3 and IRF-1 exon 4/5 (R=0,659; p=0.002). DISCUSSION: Our results showed that suppression of Teff cell by Treg cell is decrease in MDS, however the peripheral number of Treg cell is higher than in HC and AID, suggesting that the overall regulatory function might be increased in MDS patients. One can hypothesize that it occurs secondarily, in an attempt of controlling the disease immune hyper activation. Interestingly, cytokine production was globally impaired in MDS, revealing a possible exhaustion of immune system, emphasized by complement consumption. In the progression of MDS the increase of Teff proliferation and cytokine production suggests an impairment of Treg suppression ability and might be related to dysfunctions in inhibition by contact and inhibitory cytokine production. The initial reduced expression of IRF-1 in MDS patients evolved with an important increase during the disease progression. The IRF-1 is a powerful tumor gene suppressor and its low expression may be associated to disease progression. Moreover, IRF-1 is involved in several immune functions and high expression was described in MDS patients with autoimmune manifestations, thus the observed higher expression of IRF-1 might be associated to immune alterations, such as the increased cytokine production, like IFN. In mice, IRF-1 inhibits Foxp3 expression in Treg cells. However, our results showed a positive correlation of IRF-1 exon 4/5 and Foxp3. Thus it is possible that the high IRF-1 expression was disproportionally induced by Foxp3 in MDS patients along disease progression.Introdução: As síndromes mielodisplásicas (SMD) são caracterizadas pela proliferação clonal das células da medula óssea (MO), com produção ineficaz de linhagens celulares e conseqüente citopenia periférica. A patogênese precisa das SMD é ainda desconhecida. A boa resposta a terapia com globulina antitimocítica corrobora a hipótese de que sejam doenças imunomediadas e têm sido relatados que cerca de 10% desses pacientes apresentam fenômenos autoimunes. Estudos têm mostrado presença de funções imunológicas anormais e inibidores mediados por células T na hematopoese. Diante disso, há interesse em avaliar parâmetros imunes que possam relacionar-se à SMD como as células Tregulatórias e o gene Fator Regulador de Interferon (IRF-1). Objetivos: Avaliar parâmetros que possam estar implicados no funcionamento do sistema imunitário em pacientes com SMD, tais como, células Tregulatórias (Treg) e expressão do IRF-1 e FoxP3, e sua relação com caraterísticas autoimunes, de forma sequencial (tempo zero e 12 meses), em um estudo prospectivo em pacientes SMD comparados com controles negativos e controles positivos (com doenças autoimunes). MATERIAIS E Métodos: foram coletadas amostras de sangue periférico (SP) e de MO de 38 pacientes com SMD. Como controles negativos, forma colhidos SP de 28 indivíduos saudáveis e como controles positivos, 17 pacientes com doenças autoimunes (DAI=Lupus e Artrite Reumatóide). Nessas amostras foram analisados: o número das células Treg identificados por citometria de fluxo, a função de supressão que as células Treg exercem na proliferação das células Tefetoras (Tefet) em cultura celular em diferentes proporções (Tefet isolada, Teft:Treg:1:1 e Tefet:Treg:8:1). Além disso, no sobrenadante dessas culturas, foi realizada a dosagem de citocinas (IL2, IL4, IL6, IL10, TNF?, INF-?, IL17) por método de CBA. A expressão do gene IRF-1(éxon 2 e 4/5) e FOXP3 por RT-PCR foi identificada em SP e células Treg. No soro dessas amostras, dosou-se, adicionalmente, os autoanticorpos e complemento total. Resultados: Os pacientes com SMD apresentaram a média de idade de 71,7anos (23?93a) e de hemoglobina de 9,6g/dL (5,3-14,9g/dL). Desses 39.5% apresentaram cariótipo alterado e pela a classificação da OMS (2008), 17 pacientes eram CRDM, 3 AR, 10 ARSA, 3 AREB-I, 4 AREB-II e 1 paciente, sindrome 5q-. Classificando os pacientes pelo escore prognóstico IPSS, WPSS e IPSS-R e comparando com o nível de hemoglobina sérica, esta foi menor no grupo de alto risco comparado ao de baixo risco (p=0,025) e quanto ao número de células Treg, não houve diferença: WPSS (p=0,29), IPSS (p=0,5) e IPSS-R (p=0,6), assim como, na presença de cariótipo alterado (p=0,12), também não houve diferença. 27 Comparando os grupos de estudo, o número de Treg (x105cells) foi maior nos pacientes com SMD do que nos controles negativos (p=0,007) ou com DAI (p=0,008). A porcentagem de célula Tefet foi similar nos grupos. A supressão de proliferação da célula Tefet pelas células Treg, medido por citometria de fluxo, após 7 dias de cultura celular, foi maior no grupo controle (p=0,003) comparado a SMD e DAI. A produção de IL10, TNF? e INF-? foi menor na SMD na cultura de Tefet isolada. A expressão gênica do éxon 2 do IRF-1 (p<0.02) e 4/5 (p<0.01) no sangue total foi menor nos pacientes com SMD comparado ao grupo de DAI. A expressão do FoxP3 na célula Treg foi similar entre os grupos (p=0,96). A concentração de CH100 foi menor na SMD que DAI (p=0,014). Quando avaliamos o estudo de forma prospectiva, o número de Treg (T0=5,6x105±2,8 vs T12=4,8x105±2,60; p=0.3) e porcentagem de Tefet (T0=16,8%±9,5 vs T12=13,1%±6,3; p=0.06) não alterou após 12 meses. A produção de todas as citocinas (IL2, IL4, IL6, IL10, TNF?, INF-?, IL17) foi significantemente maior no sobrenadante de cultura celular após 12 meses. A expressão relativa do exon 4/5 do IRF-1 aumentou no sangue total (p=0,001) e nas Treg (p<0.001) após 12 meses. Entretanto, a expressão do éxon 2 aumentou somente no sangue total (p<0.001), enquanto que a expressão do FoxP3 nas Treg não apresentou diferença estatística (p=0.57). Interessantemente, houve uma correlação positiva moderada entre Foxp3 e exon 4/5 do IRF-1 (R=0,659; p=0.002). Conclusão/DISCUSSÃO: Nossos resultados mostram uma diminuição de supressão da Tefet pela Treg em pacientes com SMD, apesar de apresentar maior número de célula Treg, sugerindo que a função regulatória pode estar alterada na SMD. Uma das explicações seria uma hiperativação do sistema imunitário, onde há necessidade de aumento de células Treg para controle imunológico. A produção de citocinas globalmente diminuída nos pacientes com SMD revela uma exaustão do sistema imunitário, posteriormente confirmada pelo consumo do complemento. Já na progressão da doença, a proliferação da Tefet e produção de citocina sugere uma piora da supressão pelas Treg e pode estar relacionada a disfunção de inibição por contato ou produção de citocina inibitória. A redução da expressão do IRF-1 nos pacientes com SMD apresentou um aumento importante durante a progressão. A baixa expressão do IRF-1 pode estar associada a progressão da doença. Entretanto, o IRF-1 está envolvido em várias funções do sistema immune e a alta expressão foi descrita nos pacientes com SMD com manifestações autoimunes. Em camundongos, o IRF-1 inibe a expressão do FoxP3 nas células Tregulatórias. Entretanto, nossos resultados mostram uma correlação positiva entre eles. Isso pode decorrer de uma indução de Foxp3 de forma desproporcional ao longo da evolução da doença.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016