Draft genome sequences of Escherichia coli O157: H7 strains Rafaela_II (clade 8) and 7.1_Anguil (clade 6) from cattle in Argentina

Escherichia coli O157:H7 is a major etiologic agent of diseases in humans that cause diarrhea, hemorrhagic colitis, and hemolytic-uremic syndrome. Here, we report the draft genome sequences of two strains isolated from cattle that had high levels of Shiga toxin 2 and high lethality in mice.Fil: Amadio, Ariel Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Amigo, Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; ArgentinaFil: Puebla, Andrea Fabiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Farber, Marisa Diana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentin

Identification and characterization of differentially expressed proteins by Escherichia coli O157:H7 strains with hypervirulence phenotype from Argentine cattle

Escherichia coli O157:H7 es un patógeno zoonótico de importancia mundial, capaz de causar diarrea severa y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. El SUH es una enfermedad epidémica de baja tasa de incidencia en países industrializados. Sin embargo, Argentina es el país de mayor incidencia mundial, con 12-14 casos cada 100.000 en menores de 5 años y con 400 nuevos casos por año en la última década. El ganado bovino es su principal reservorio y fuente de infección. E. coli O157:H7 se caracteriza por poseer varios factores de virulencia, entre ellos, el más importante es la toxina Shiga (Stx), necesaria para el desarrollo del SUH, que puede ser de tipo 1 y/o de tipo 2, y esta última a su vez de varios subtipos. Otro de sus factores de virulencia, es el Sistema de Secreción de Tipo Tres (SSTT), codificado en la isla de patogenicidad LEE. El SSTT trasloca factores de virulencia en las células epiteliales; llamados efectores, produciendo una lesión histopatológica conocida como attaching and effacing, caracterizada por la íntima adherencia al enterocito y la eliminación de las microvellosidades intestinales. Otros factores de virulencia se encuentran en el plásmido pO157; pero de sus 100 genes putativos, solo 19 han sido caracterizados. Diversos estudios epidemiológicos sugieren una correlación entre el pO157 y la progresión de la diarrea al SUH. Por SNPs typing se han definido nueve clados de E. coli O157:H7, siendo las cepas de clados 6 y 8 las más frecuentemente asociadas a diarrea severa y SUH. La mayoría de las cepas de clado 8 poseen dos subtipos de Stx2; Stx2a y Stx2c, con una mayor expresión de Stx2 que otros clados, lo que contribuye a la hipervirulencia del clado 8. Se ha observado que las cepas de clado 8 son altamente predominantes, en el ganado y en los casos de SUH en Argentina. En este trabajo, se estudiaron ocho aislamientos seleccionados al azar de E. coli O157:H7 procedentes del ganado de Argentina, así como dos cepas de casos clínicos humanos. Fue posible demostrar, por el análisis de 23 de SNPs que 4 cepas aisladas de bovinos fueron clasificadas como clado 8 así como también 2 cepas aisladas de humanos, mientras que otras dos cepas bovinas fueron clasificadas como clado 6, también descripto como hipervirulento. Luego de clasificarlas se procedió a evaluar la patogenicidad en relación a la producción de toxina Shiga, lisis de glóbulos rojos in vitro dependiente del SSTT, ensayos de adherencia en cultivos celulares, inhibición de la absorción normal de agua en explantos de colon humano y análisis de morbilidad y letalidad en ratones BALB/c. Cuatro de las cepas bovinas mostraron una alta producción de Stx y una de ellas, la cepa 7.1 Anguil, mostro alta actividad Verocitotóxica en cultivos celulares y una fuerte inhibición de la normal absorción de agua en explantos de colon humano, en relación a la cepa E. coli O157:H7 EDL933. Dos cepas, Rafaela II y 7.1 Anguil, presentaron altos niveles de lisis en eritrocitos, altos niveles de producción de Stx2 y fueron asociadas con una alta letalidad y morbilidad en el modelo murino ensayado. Por los resultados obtenidos en los ensayos de virulencia realizados tanto in vitro, ex vivo como in vivo, fueron seleccionadas la cepa Rafaela II (clado 8, bovina) y la cepa 7.1 Anguil (clado 6, bovina), como candidatas para el posterior análisis genómico y proteómico comparativo, con la cepa EDL933 (cepa de referencia, clado 3). Fue realizada la secuenciación de los genomas de estas cepas. En ambas se detectó el plásmido pO157, y en la cepa 7.1 Anguil se detectó un plásmido adicional con alta homología con el plásmido pChi7122-3 de la cepa aviar APEC E. coli 7122 (O78:K80:H9). Fueron predichos los genes de cada cepa, obteniéndose 5,643 para 7.1 Anguil y 5,439 para la cepa Rafaela II, respectivamente. Esta información fue utilizada para comparar los contenidos de los genes, y para la obtención de genes compartidos y únicos, utilizando las cepas TW14359 y EDL933 como referencias. La comparación de los genes compartidos mostró una relación filogenética de la cepa Rafaela II, estrechamente relacionada a la cepa de referencia TW14359, ambas clado 8. Estos resultados son consistentes con el análisis de SNPs previamente realizado. El análisis proteómico cuantitativo, fue centrado en las proteínas sobreexpresadas que podrían estar relacionadas con la virulencia. Las proteínas que se sobreexpresaron en E. coli O157:H7 Rafaela II fueron, la proteína del curli CsgC, un activador transcripcional (PchE), las proteínas de fagos, Stx2, FlgM y FlgD, CheY, CheW, una dienelactona hidrolasa y la proteasa EspP, estas últimas dos codificadas en el plásmido pO157, entre otras. Para la cepa 7.1 Anguil, se detectó una alta sobreexpresión de las proteínas de fagos, sobre todo las codificadas en el fago Stx2a, incluyendo Stx2; también una flagelina y la proteasa TagA, EDL933_p0016, dienelactona hidrolasa, y hemolisina HlyA, cuyas últimas cuatro están codificadas en el pO157. Estas proteínas fueron detectadas como sobreexpresadas entre 4 y 16 veces más en las cepas Rafaela II y 7.1 Anguil comparadas con EDL933. Luego se seleccionaron 12 proteínas, por los mismos criterios de búsqueda y selección, para su validación por RTq-PCR. Se demostró un aumento en la transcripción en 10 de los 12 genes analizados. De este modo, la concordancia entre los resultados de la proteómica y los resultados de RTq-PCR fue aceptable. De esas 10 proteínas, se eligieron seis como candidatas a la obtención de mutantes, poniendo especial énfasis en aquellas proteínas poco estudiadas, posibles factores de virulencia y sobreexpresadas en ambas cepas y/o ambas fracciones. Así fueron seleccionados el activador transcripcional PchE presente en clado 8; la hemolisina HlyA; la proteasa TagA, la proteína de fago EDL1403, con el mayor fold change (16,45) detectado en este trabajo y con un dominio de adaptación de respuesta sensorial quinasa; la proteasa EspP, sobreexpresada en ambas cepas; y Stx2a, uno de los principales factores de virulencia de E. coli O157:H7, sobreexpresada en ambas cepas. Se incluyó a la cepa 125/99 para la mutación de Stx2, por ser clado 8, por poseer una sola copia del gen stx2, no poseer stx1 y por estar incluida entre las cepas más virulentas en los ensayos realizados. Se obtuvieron mutantes para el gen stx2 en la cepa 125/99 y se analizó su rol tanto en el ensayo de citotoxicidad como en el de patogenicidad en el modelo murino. Los resultados obtenidos demuestran que la mutación de stx2 elimina la expresión de Stx2, provocando la anulación del fenotipo asociado, la muerte celular por apoptosis observada en células Vero. En ratones BALB/c se observó que la mutación de stx2 elimina la expresión de Stx2, provocando la disminución de la patogenicidad observada en ratones, sin registrarse letalidad en los animales inoculados con la cepa 125/99Δstx2, Debido a la dificultad en la obtención de mutantes en los otros genes para las cepas bovinas, se implementó la eliminación del plásmido pO157, ya que codifica para tres de los genes candidatos, hlyA, espP y tagA. Se obtuvieron mutantes para las cepas Rafaela II y 7.1 Anguil, para la eliminación del pO157 y se analizó su rol en la virulencia en el modelo murino de infección. Los resultados obtenidos muestran que la eliminación del plásmido pO157 disminuye la virulencia en la cepa 7.1 Anguil provocando la anulación del fenotipo observado de morbilidad y letalidad en BALB/c, ya que no se registró letalidad en el modelo murino con la cepa 7.1 Anguil ΔpO157. Sin embargo, en la cepa Rafaela II, la eliminación de pO157 no disminuyó su virulencia, ya que los valores de patogenicidad y letalidad observados en BALB/c fueron los mismos tanto para la cepa Rafaela II como para la cepa Rafaela IIΔpO157. Estos resultados nos permitieron demostrar una alta virulencia en las cepas de clado 8 y clado 6 aisladas de bovinos argentinos y concluir en consecuencia que la circulación de tales cepas en el ganado puede contribuir en parte a la alta incidencia de SUH en Argentina. Este trabajo nos permite asociar los resultados de la proteómica cuantitativa con los hallazgos previos de virulencia y patogenicidad en modelos in vitro, ex vivo y en el modelo in vivo, en el ratón. Comprender y analizar la medida en que estos y otros factores contribuyen a la virulencia completa de E. coli O157:H7 clado 8 y clado 6 requerirá de mayores y futuras investigaciones. Estos avances, apoyados en estudios bioinfomáticos, nos han permitido identificar nuevos y potenciales factores de virulencia que permitirán comprender características de la virulencia de E. coli O157:H7 en general y de los clados hipervirulentos 6 y 8 en particular. Estos resultados pueden proporcionar nuevas perspectivas en los mecanismos de patogénesis de E. coli O157:H7.Escherichia coli O157: H7 is a zoonotic pathogen of global importance, capable of causing severe diarrhea and hemolytic uremic syndrome (HUS) in humans. HUS is an epidemic disease of low incidence rate in industrialized countries. However, in Argentina, the country with the highest incidence in the world, with 12-14 cases per 100,000 children less than 5 years with about 400 cases reported each year in the last decade. Cattle are the main reservoir and source of infection. E. coli O157:H7 is characterized by the presence of several virulence factors, including Shiga toxin (Stx) necessary for the development of HUS, its most important virulence attribute, which may be type 1 and/or type 2, and the latter has several subtypes. Another virulence factors is the System Type Three Secretion (TTSS), encoded in the pathogenicity island LEE. The TTSS translocate virulence factors called effectors in epithelial cells; producing a histopathological lesion known as attaching and effacing, characterized by the close adherence to enterocytes and removal of intestinal microvilli. Other virulence factors are in the plasmid pO157; but its 100 putative genes, only 19 have been characterized. Epidemiological studies suggest a correlation between pO157 and progression of diarrhea to HUS. Nine clades were defined in E. coli O157:H7 strains by SNP typing, being clades 6 and 8 most frequently associated with severe diarrhea and HUS. Most strains of clade 8 have two subtypes Stx2; Stx2a and Stx2c, with increased expression of Stx2 compared to other clades, contributing to hypervirulence of clade 8. It was observed that the clade 8 strains are highly prevalent in cattle and HUS cases in Argentina. In this work, eight randomly selected isolates of E. coli O157:H7 from cattle in Argentina, as well as two strains of human clinical cases were studied. It could be demonstrated by 23 SNP analyses that 4 strains isolated from cattle were classified as clade 8 as well as two human strains, while two other bovine isolates were closely related to the clade 6, also described as hypervirulent. The pathogenicity was evaluated by Shiga toxin production, in vitro red blood cell lysis dependent of TTSS, adhesion assays in cell lines, inhibition of normal water absorption in explants of human colon and morbidity and mortality analysis in BALB/c mice. Four bovine strains showed high production of Stx and one of them, the strain 7.1 Anguil, showed high verocytotoxic activity in cell cultures. Two strains, 7.1 Anguil and Rafaela II, showed high levels of lysis of erythrocytes. 7.1 Anguil strain also showed a strong inhibition of normal water absorption explants in human colon, respect to the E. coli strain O157:H7 EDL933. The two strains, Rafaela II and 7.1 Anguil, which showed high levels of production of red blood cell lysis and Stx2, were associated with high mortality and morbility in the murine model tested. From these results, both Rafaela II strain (clade 8 bovine) and 7.1 Anguil strain (clade 6 bovine) were selected, as candidates for the post-genomic analysis and quantitative comparative proteomics, with the strain EDL933 (standard strain, clade 3). The genomes of these isolates were sequenced. In both the plasmid pO157 was detected, and in the strain 7.1 Anguil an additional plasmid was detected with high homology with the pChi7122-3 plasmid of the avian E. coli strain APEC 7122 (O78:K80:H9). Genes were predicted in both strains, yielding 5,643 for 7.1 Anguil and 5,439 for Rafaela II strain, respectively. This information was used to compare the contents of the genes, and to obtain shared and unique genes, using TW14359 and EDL933 strains as references. Comparing shared genes showed a closely related phylogenetic relationship of Rafaela II strain to the reference strain TW14359, both clade 8. These results are consistent with the analysis of SNPs previously made. The quantitative proteomic analysis was focused on the overexpressed proteins that could be related to virulence. Proteins were overexpressed in E. coli O157:H7 Rafaela II were, curli CsgC protein, the transcriptional activator PchE, phage proteins, Stx2, FlgM and FlgD, CheY, CheW, a dienelactone hydrolase and protease EspP, these last two encoded in plasmid pO157, among others. For strain 7.1 Anguil, a high overexpression of the phage proteins, particularly those encoded in the phage stx2a including Stx2a, flagellin and TagA protease, EDL933_p0016, dienelactone hydrolase and hemolysin HlyA were detected, these last four are located in the pO157. These proteins were detected between 4 and 16 times more expressed in Rafaela II and 7.1 Anguil compared EDL933. Twelve proteins were then selected, based on the same criteria and selection for validation by RT-qPCR. An increase in transcription was demonstrated in 10 of the 12 genes analyzed. Thus, the agreement between the results of proteomics and the results of RT-qPCR was acceptable. Of those 10 proteins, six were selected as candidates for obtaining mutants under the aforementioned criteria, and with particular emphasis on those proteins little studied to as being potential virulence factors and overexpressed in both strains and/or both fractions. Thus, the selection consisted on: the transcriptional activator PchE, present in clade 8; the hemolysin HlyA; the TagA protease, the EDL1403 phage protein, with the largest fold change (16,45) detected in this work and with a domain adaptive sensory response kinase; the EspP protease overexpressed in both strains; and Stx2, one of the major virulence factors of E. coli O157:H7, overexpressed in both strains. The 125/99 strain was included for mutation of Stx2, for being clade 8, and possessing a single copy of the gene stx2, not have stx1 and being included among the most virulent strains in assays. Gene mutants for stx2 were obtained in strain 125/99 and its role tested in the cytotoxicity assay. The results show that the stx2 mutation eliminated the Stx2 expression, causing the annulment of the associated phenotype, cell death by apoptosis. Due to the difficulty in obtaining mutants in the other genes for the bovine strains, the elimination of plasmid pO157 was implemented as it encodes three of the candidate genes, hlyA, espP and tagA. Mutants for Rafaela II strains and 7.1 Anguil were obtained for eliminating pO157 and their role in virulence was tested in the murine model of infection, along with strain 125/99Δstx2. The results obtained show that the elimination of the pO157 plasmid decreases the virulence in the 7.1 Anguil strain, causing the annulment of the associated phenotype of morbidity and lethality in BALB/c, as well as in the strain 125/99Δstx2, with which no lethality was also recorded in the murine model assayed. However, in the Rafaela II strain, removal of pO157 did not decrease its virulence, as the pathogenicity and lethality values observed in BALB/c were the same for the Rafaela II strain as for Rafaela IIΔpO157 strain. These results allowed us to demonstrate high virulence strains of clade 8 and clades 6 isolated and therefore conclude that the circulation of such strains in cattle can contribute in part to the high incidence of HUS in Argentina. This work allows us to associate the results of quantitative proteomics with previous findings of virulence and pathogenicity in in vitro assays, ex vivo models and in vivo model in mice. To understand and analyze the extent to which these and other factors contribute to full virulence in clade 8 and clade 6 E. coli O157:H7 require further research. These studies supported by bioinformatics advances have allowed us to identify new and potential virulence factors that allow us to understand some characteristics of the virulence of E. coli O157:H7 in general and hypervirulent clades 6 and 8 in particular. These results may provide new insights into the mechanisms of pathogenesis of E. coli O157:H7.Fil: Amigo, Natalia Loreley. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Reconstrucción ideal de un artesonado de la iglesia de Sta. Mª de la Cuesta de Durón a partir de los elementos encontrados durante su restauración

El lamentable estado del templo hizo que Luis de Villanueva y Susana Mora redactaran un Proyecto de Restauración, cuya primera fase era la Restauración de cubiertas. Éstas se desmontaron cuidadosamente, apareciendo en la nave sur una viga cambiada de posición de labra supuestamente mudéjar, lo que hizo exagerar las precauciones. Pudimos así observar otra ménsula de madera labrada que servía de apoyo a elementos pétreos de la cabecera. En la nave lateral norte se encontraron durmientes, varios tirantes, y rebajes equidistantes, que podrían corresponder a estribos. En la nave central, formando parte de las quijeras, estaban integrados elementos con sencillas decoraciones azuladas, que podrían corresponder a restos de los citados estribos de la nave lateral. Las hipótesis se comprobaron, y con el apoyo de textos especializados, se formuló una propuesta de techumbre que podría acercarnos a las construcciones de esta zona del Señorío de Mendoza entre los siglos XV y XVI

Where I am from matters: factors influencing behavioral and emotional changes in autistic individuals during COVID-19 in Latin America

Background: The COVID-19 pandemic brought an increased incidence of disease and mortality in the world at large, making it a particularly salient and stressful life event. For those individuals residing in Latin America, the pandemic was met with fragmented healthcare systems, economic downturn, and sociopolitical crisis which puts autistic individuals at risk for more detrimental outcomes. Behavioral and emotional challenges experienced by autistic individuals at the beginning of the pandemic could later develop into more severe symptomatology as the pandemic progresses. The present study aimed to explore changes in dysregulated (overt and internalizing) behaviors and preoccupation with getting sick during the COVID-19 pandemic among autistic children in 7 Latin American countries. Method: Sample consisted of 1,743 caregivers, residing in: Argentina (n = 677, 38.8%) Brazil (n = 156, 9%), Chile (n = 251, 14.4%), Dominican Republic (n = 171, 9.8%), Mexico (n = 126, 7.2%), Uruguay (n = 259, 14.9%) and Venezuela (n = 103, 5.9%). The majority of caregivers who completed the questionnaire were mothers (85.1%), and most had a male autistic child (81.6%). A series of independent sample t-tests were conducted to assess country differences in dysregulated behaviors and preoccupation with getting sick. Linear regressions were conducted to identify which demographic characteristics and micro-level contextual factors predicted dysregulated overt behaviors and psychological changes. Results: Contextual factors, such as country of residence, were related to preoccupation with getting sick and dysregulated behavior. Particularly, residing in Mexico and Brazil were related to changes in preoccupation with getting sick and mental health concerns. Coexistence predicted dysregulated internalizing behaviors, while being older significantly predicted preoccupation with getting sick. Increased screen time only predicted anxiety. Conclusion: Our findings highlight differences and predictions of behavioral challenges and psychological changes based on certain contextual factors and individual characteristics while experiencing severe life stressors such as a worldwide pandemic. This knowledge could help inform policies and decrees aimed at protecting those most vulnerable due to their increased difficulty adapting to change

Quantification of Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 proteome using TMT-Based Analysis

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is a human pathogen responsible for diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). EHEC infection is distributed worldwide and numerous outbreaks of diseases caused by enterohemorrhagic have been reported. To promote a comprehensive insight into the molecular basis of EHEC O157:H7 physiology and pathogenesis, the combined proteome of EHEC O157:H7 strains, Clade 8 and Clade 6 isolated from cattle in Argentina, and the standard EDL933 (clade 3) strain has been analyzed. TMT (Tandem Mass Tags)-based quantitative proteomic and emPAI analyses were performed to estimate the protein abundance in EHEC proteome. 2,234 non-redundant proteins of EHEC O157:H7 were identified. A comparison of this result with in silico data of EHEC O157:H7 genome showed that approximately 40% of the predicted proteome of this pathogen were covered. According to the emPAI analysis, 85 proteins were among the most abundant (e.g. GAPDH, FliC H-antigen, Enolase, and GroEL). Tellurite resistance proteins were also highly abundant. COG analysis showed that although most of the identified proteins are related to cellular metabolism, the majority of the most abundant proteins are associated with translation processes. A KEGG enrichment analysis revealed that Glycolysis / Gluconeogenesis was the most significant pathway. On the other hand, the less abundant detected proteins are those related to DNA processes, cell respiration and prophage. Among the proteins that composed the Type III Secretion System, the most abundant protein was EspA. Altogether, the results show a subset of important proteins that contribute to physiology and pathogenicity of EHEC O157:H7.IMPORTANCE The study of the abundance of proteins present within a complex mixture of proteins in a cell, under different conditions, can provide important information about the activities of individual protein components and protein networks that are cornerstones for the comprehension of physiological adaptations in response to biological demands promoted by environmental changes. We generated a comprehensive and accurate quantitative list of EHEC O157:H7 proteome, which provides a description of the most abundant proteins produced by this pathogen that were related to physiology and pathogenesis of EHEC. This study provides information and extends the understanding on functional genomics and the biology of this pathogen.Fil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bei, Jinlong. No especifíca;Fil: Amigo, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Valacco, Maria Pia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Amadio, Ariel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Zhang, Qi. No especifíca;Fil: Wu, Xiuju. No especifíca;Fil: Yu, Ting. No especifíca;Fil: Larzabal, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chen, Zhuang. No especifíca;Fil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Quantification of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 protein abundance by high-throughput proteome

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is a human pathogen responsible fordiarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). To promote a comprehensiveinsight into the molecular basis of EHEC O157:H7 physiology and pathogenesis,the combined proteome of EHEC O157:H7 strains, Clade 8 and Clade 6 isolated from cattlein Argentina, and the standard EDL933 (clade 3) strain has been analyzed. From shotgunproteomic analysis a total of 2,644 non-redundant proteins of EHEC O157:H7 were identified,which correspond approximately 47% of the predicted proteome of this pathogen. Normalizedspectrum abundance factor analysis was performed to estimate the proteinabundance. According this analysis, 50 proteins were detected as the most abundant ofEHEC O157:H7 proteome. COG analysis showed that the majority of the most abundantproteins are associated with translation processes. A KEGG enrichment analysis revealedthat Glycolysis / Gluconeogenesis was the most significant pathway. On the other hand, theless abundant detected proteins are those related to DNA processes, cell respiration andprophage. Among the proteins that composed the Type III Secretion System, the mostabundant protein was EspA. Altogether, the results show a subset of important proteins thatcontribute to physiology and pathogenicity of EHEC O157:H7.Fil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Bei, Jinlong. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Amigo, Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Valacco, Maria Pia. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Amadio, Ariel Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Zhang, Qi. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Wu, Xiuju. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Yu, Ting. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Chen, Zhuang. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; Argentin

Complexity Analysis of Spontaneous Brain Activity in Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder: Diagnostic Implications

Background: Attention-deficit/hyperactivity disorder (ADHD) is defined as the most common neurobehavioral disorder of childhood, but an objective diagnostic test is not available yet to date. Neurophychological, neuroimaging, and neurophysiological research offer ample evidence of brain and behavioral dysfunctions in ADHD, but these findings have not been useful as a diagnostic test. Methods: Whole-head magnetoencephalographic recordings were obtained from 14 diagnosed ADHD patients and 14 healthy children during resting conditions. Lempel-Ziv complexity (LZC) values were obtained for each channel and child and averaged in five sensor groups: anterior, central, left lateral, right lateral, and posterior. Results: Lempel-Ziv complexity scores were significantly higher in control subjects, with the maximum value in anterior region. Combining age and anterior complexity values allowed the correct classification of ADHD patients and control subjects with a 93% sensitivity and 79% specificity. Control subjects showed an age-related monotonic increase of LZC scores in all sensor groups, while children with ADHD exhibited a nonsignificant tendency toward decreased LZC scores. The age-related divergence resulted in a 100% specificity in children older than 9 years. Conclusions: Results support the role of a frontal hypoactivity in the diagnosis of ADHD. Moreover, the age-related divergence of complexity scores between ADHD patients and control subjects might reflect distinctive developmental trajectories. This interpretation of our results is in agreement with recent investigations reporting a delay of cortical maturation in the prefrontal corte

Relative and Absolute Reliability of 3 tests to assess the functional capacity in institucionalizated elderly women with fear of falling: a 12

La capacidad funcional es muy importante en las personas mayores institucionalizadas ya que un alto porcentaje de las caídas que se producen en estas personas es por causa de un bajo nivel de capacidad funcional. Un total de 14 mujeres mayores institucionalizadas completaron 2 sesiones de evaluación de la capacidad funcional empleando las pruebas de andar 10 metros, test de levantarse de una silla y andar 3 metros, y el test de sentarse y levantarse, con un intervalo de 12 semanas. El análisis de los datos consistió en el cálculo de los índices de fiabilidad relativos (coeficiente de correlación intraclase) y absolutos (error estándar de medida y mínima diferencia real), así como la representación de los datos mediante los correspondientes gráficos de Bland-Altman. Los resultados obtenidos muestran coeficientes de correlación intraclase altos (CCI> 0,80), así como índices de error absolutos elevados para los test evaluados. Como conclusión, los test empleados para la determinación de la capacidad de capacidad funcional muestran una consistencia temporal alta por lo que pueden ser utilizados como medio para evaluar dicha capacidad en mujeres mayores institucionalizadas en intervenciones inferiores a 12 semanas.Functional capacity is a very important issue because it implication in falls in institucionalizated elderly people when mobility is low. Ten meters walking test, timed up and go test and 30-s sit to stand test were assessed in 14 institucionalizated elderly women in two occasions 12 weeks apart. The data analysis consisted of calculating the relative reliability indices (intraclass correlation coefficients) and absolute (standard error of measurement and smallest real difference) and the representation of the data using the corresponding Bland-Altman plots. Results show high intraclass correlation coefficients (ICC>0.80) and large absolute error rates for all test performed. As a conclusion, the procedure used for determining the temporal consistency of the test assessed in this study shown values high enough to consider it use as a method to assess changes in mobility in institucionalizated elderly women enrolled in interventions not longer than 12 weeks.peerReviewe

Estudio de los factores de riesgo asociados a la excreción de escherichia coli o157:H7 en bovinos

Los bovinos son reservorios primarios de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) O157: H7, bacteria responsable del síndrome urémico hemolítico (SUH) que afecta a niños menores de 6 años en forma endémica en la Argentina, debido a la producción de las toxinas Shiga (stx), la stx1 y la stx2. Estas toxinas producidas en el intestino actúan sobre este órgano, y sistémicamente sobre riñones, cerebro y otros órganos. En este estudio se siguieron 118 terneros de 36 corrales (tres a cuatro animales por corral), que fueron distribuidos en 18 corrales de animales livianos (promedio: 128 kg) y 18 de pesados (promedio: 197 kg), de un establecimiento ganadero de la provincia de La Pampa, Argentina. Los animales se sometieron a tres fases de engorde (recría: marzo - junio de 2014, pastoreo: julio – noviembre, terminación: diciembre 2014 – abril 2015), con una dieta energética con distintos niveles de proteína bruta (PB); recría 9 – 13 – 18% PB, pastoreo 9% PB y terminación 9,5 – 13% PB. Durante un año se hicieron hisopados mensuales de la mucosa recto anal (HMRA), para identificar a los excretores de EHEC O157:H7 y los genes de virulencia de esta bacteria. Las bacterias se caracterizaron por PCR Multiplex. La prevalencia varió de 0.84% en julio hasta 15.25% en noviembre de 2014. Todas las cepas de E. coli O157: H7 aisladas portaban eae, mientras que 11%, 33% y 56% contenían stx1, stx2 y stx1 / stx2 respectivamente. El gen stx1 se encontró solo durante la recría, mientras que stx2 se mantuvo constante a lo largo del ensayo. Durante el pastoreo, se encontró una presencia significativa de stx1 / stx2. Se estudió la influencia de posibles factores predisponentes para la excreción de E. coli O157:H7 y la presencia de los genes de virulencia de esta bacteria. Los factores evaluados fueron el peso, la dieta, la época del año, el efecto de las precipitaciones y las temperaturas. Durante la terminación, los animales livianos excretaron significativamente mayor cantidad de E. coli O157:H7 que los pesados, mientras que no se hallaron diferencias entre el nivel de PB de la dieta y la excreción de E. coli O157:H7 entre las 3 fases del engorde. Por otro lado, la excreción de E. coli O157:H7 y la presencia de los genes que expresan stx1 stx2 se encontraban aumentadas con el incremento de las lluvias y la temperatura en primavera.EEA AnguilFil: Rhades, Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto De Investigación Biotecnología; ArgentinaFil: Bentancor, Adriana. Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Sabio Y Garcia, Julia Veronica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Centro de Investigaciones en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Babinec, Francisco. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Faculta de Agronomía; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto De Investigación Biotecnología; ArgentinaFil: Amigo, Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto De Investigación Biotecnología; ArgentinaFil: Baldone, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; ArgentinaFil: Urquiza, Lucas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; ArgentinaFil: Delicia, Pablo Javier. Universidad Tecnológica Nacional. Facultad Regional Rosario; ArgentinaFil: Fort, Marcelo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; Argentin

All-trans retinoic acid and protein kinase C α/β1 inhibitor combined treatment targets cancer stem cells and impairs breast tumor progression

Breast cancer is the leading cause of cancer death among women worldwide. Blocking a single signaling pathway is often an ineffective therapy, especially in the case of aggressive or drug-resistant tumors. Since we have previously described the mechanism involved in the crosstalk between Retinoic Acid system and protein kinase C (PKC) pathway, the rationale of our study was to evaluate the effect of combining all-trans-retinoic acid (ATRA) with a classical PCK inhibitor (Gö6976) in preclinical settings. Employing hormone-independent mammary cancer models, Gö6976 and ATRA combined treatment induced a synergistic reduction in proliferative potential that correlated with an increased apoptosis and RARs modulation towards an anti-oncogenic profile. Combined treatment also impairs growth, self-renewal and clonogenicity potential of cancer stem cells and reduced tumor growth, metastatic spread and cancer stem cells frequency in vivo. An in-silico analysis of “Kaplan–Meier plotter” database indicated that low PKCα together with high RARα mRNA expression is a favorable prognosis factor for hormone-independent breast cancer patients. Here we demonstrate that a classical PKC inhibitor potentiates ATRA antitumor effects also targeting cancer stem cells growth, self-renewal and frequency.Fil: Berardi, Damian Emilio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentina. University of Chicago; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ariza Bareño, Lizeth Aixa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Amigo, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional, Trasplante y Bioingeniería. Fundación Favaloro. Instituto de Medicina Traslacional, Trasplante y Bioingeniería; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Cañonero, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Pelagatti, Maria de las Nieves. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Motter, Andrea Nora. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Taruselli, María Agustina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Díaz Bessone, María Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentina. Universidad Nacional de San Martín; ArgentinaFil: Cirigliano, Stéfano Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Edelstein, Alexis. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Peters, María Giselle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Diament, Miriam. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Urtreger, Alejandro Jorge. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Todaro, Laura Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentin