Understanding how capping protein cooperates with aPKC to maintain epithelial integrity in Drosophila imaginal disc

Tese de mestrado, Biologia (Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010Epithelial integrity generally depends on the balance between the stability and remodelling of adherens junctions (AJs). Growing evidence indicates that endocytosis has a central role in maintaining AJs in a state of dynamic equilibrium. However, it is not currently understood how AJs remodelling is achieved without losing epithelial integrity. In this work, I found that Capping Protein (CP), which prevents extension of the barbed ends of actin filaments, interacts genetically with atypical protein kinase C (aPKC), a major effector of the Par-aPKC complex, to maintain epithelial integrity in Drosophila wing imaginal disc. This genetic interaction appears to have differential requirements along the wing disc, since decreasing CP and aPKC levels induce extrusion and death of wing blade cells, whereas cells in the distal hinge region seem to overproliferate. Interestingly, loss of CP results in a significant reduction of aPKC from the apical membrane, suggesting that CP may restrict apical localization of aPKC, which in turn, is required to control AJs dynamics. In addition, similar to apkc mutant tissues, loss of CP leads to decreased apical levels of the AJs components, E-Cadherin (E-Cad) and Armadillo (Arm), suggesting that both CP and aPKC promote AJs stability by regulating early endocytic events. Therefore, by promoting the formation of a highly branched actin network, CP could have a putative role in AJs stability and remodelling by restricting aPKC to the apical membrane and by promoting early endocytic events. Taken together, the presented data highlight the crucial synergy between polarity complexes and actin cytoskeleton in regulating AJs dynamics, which is intimately linked to the maintenance of epithelial integrity.Os tecidos epiteliais possuem duas propriedades contraditórias: têm uma arquitectura robusta, necessária para a sua estabilidade, porém exibem uma extensa plasticidade de modo a permitir eventos celulares tais como divisão e morte celular [1, 2]. Quando ocorre uma perda na regulação deste balanço entre estabilidade e plasticidade, as células epiteliais perdem a adesão entre elas e adquirem a capacidade de sobreproliferar. De facto, a maioria dos tumores malignos surge apartir de epitélios com defeitos no controlo da adesão e proliferação [3, 4]. A adesão entre células epiteliais é em parte devida à acção coesiva das junções aderentes (AJs), cuja principal função é ligar o citoesqueleto de actina entre células vizinhas. As AJs circundam a região apical das células e são principalmente compostas pela proteína transmembranar E-Caderina (E-Cad). Através do seu domínio citoplasmático, E-Cad associa-se a β-catenina (em Drosophila codificada por armadillo, arm) e α-catenina, que por sua vez, promove a ligação ao citoesqueleto de actina [5]. Apesar de terem um papel crucial na manutenção da integridade epitelial, recentes estudos têm revelado que as AJs são constantemente remodeladas através de endocitose [6-8], processo celular pelo qual moléculas extracelulares ou associadas à membrana são internalizadas para o interior das células [9, 10]. No entanto, ainda não é compreendido como é que a remodelação das AJs é estabelecida sem que a integridade do epitélio seja perdida. Na região apical às AJs existem dois complexos proteicos que interactuam entre si de modo a promover a polaridade dos tecidos epiteliais: o complexo composto por Crumbs (Crb), Stardust and Discs lost, denominado por complexo Crb, e o complexo constituído por Bazooka/Par3, proteína cinase C atípica (aPKC) e Par6, designado por complexo Par-aPKC [11]. O complexo Par-aPKC é activado através da associação entre Par6 e a Rho-like GTPase Cdc42. Após esta activação, aPKC fosforila Crb, que por sua vez, promove a estabilização das Ajs [12, 13]. Curiosamente, foi demonstrado que a remoção de cdc42 ou apkc em tecidos epiteliais de Drosophila, resulta na acumulação de proteínas apicais associadas à membrana, tais como Crb, em vesículas endocíticas e à redução dos níveis apicais de E-Cad e Arm. Análises genéticas adicionais sugerem que aPKC actua como efector de Cdc42, regulando a endocitose de proteínas apicais, que por sua vez, tem um efeito estabilizador nas AJs durante processos dinâmicos de reorganização celular [14, 15]. Nos tecidos epiteliais, a região apical das células contém uma banda de filamentos de actina, essencial para o suporte das Ajs [2]. O citoesqueleto de actina desempenha um papel fundamental em numerosos processos celulares, tais como regulação da morfologia celular e manutenção da polaridade celular [16]. Dada a sua dinâmica, é necessária uma regulação eficaz, que é desempenhada por proteínas que se ligam à actina (ABPs) [17, 18]. Uma dessas proteínas é o heterodímero Capping Protein (CP), composto pelas subunidades α (Cpa) e β (Cpb), que se ligam à região terminal dos filamentos de actina, prevenindo a perda ou adição de monómeros de actina e, desta forma, a sua polimerização excessiva [19]. A remoção de CP no disco imaginal da asa de Drosophila leva a diferentes fenótipos celulares que são dependentes da região do disco. Enquanto clones de células mutantes para CP mantêm a polaridade e sobrevivem nas regiões do hinge e notum, células mutantes na wing blade sofrem extrusão basal e morrem por apoptose [20]. Semelhante ao fenótipo observado em epitélios mutantes para apkc, diminuição dos níveis proteicos de CP usando a técnica ARN de interferência (RNAi), resulta na acumulação de Crb em estruturas vesiculares [21]. Isto sugere que, tal como aPKC, CP parece regular a endocitose de proteínas apicais. Curiosamente, foi postulado que CP interactua geneticamente com aPKC no disco imaginal da asa [21]. No entado, a ferramenta genética usada para diminuir a activade de aPKC pode ter efeitos inespecíficos [22] e portanto, a possível interacção genética entre CP e aPKC foi novamente analisada. Desta forma, o presente trabalho tinha como objectivo compreender o mecanismo pelo qual CP pode cooperar com aPKC na manutenção da integridade epitelial do disco imaginal da asa de Drosophila. De modo atingir este objectivo, a técnica RNAi sob o controlo do sistema UAS-Gal4, foi usada para diminuir os níveis proteicos de CP em regiões específicas do tecido (García Fernández, B. and Janody, F. et al., unpublished data), e um alelo mutante termosensível para aPKC (apkcts) foi usado para modular a actividade cinásica de aPKC consoante a temperatura (Martinho, R. et al., unpublished data). Quando comparado com o fenótipo anteriormente descrito para células com níveis reduzidos de CP, ao diminuir ambos os níveis de CP e aPKC no disco de asa, uma maior quantidade de células sofreram extrusão basal e morreram por apoptose. Pelo contrário, células mutantes para apkcts encontraram-se mantidas no epitélio, sem nenhum indício de morte celular. Estes resultados confirmam que CP interactua geneticamente com aPKC na manutenção da integridade epitelial do disco da asa. Esta interacção genética parece ter diferentes requerimentos ao longo do disco da asa. Enquanto que a diminuição dos níveis de CP e aPKC levou à morte das células da wing blade, as células na região distal do hinge pareceram proliferar. Isto sugere que CP e aPKC mantêm a integridade epitelial e previnem a morte celular na wing blade, ao passo que na região do hinge, CP e aPKC parecem restringir o crescimento, possivelmente através da regulação da sinalização Hippo [23]. Curiosamente, a diminuição dos níveis de CP resultou numa redução significativa dos níveis apicais de aPKC, sugerindo que, através da sua função como regulador da dinâmica do citoesqueleto de actina, CP restringe a localização de aPKC na membrana apical das células epiteliais. Além disso, semelhante ao fenótipo observado em epitélios mutantes para apkc, diminuição dos níveis de CP levou a um decréscimo acentuado dos níveis apicais de E-Cad e Arm. Isto sugere que CP tem um papel putativo na dinâmica das AJs. Por último, o efeito nos níveis apicais de E-Cad após diminuição dos níveis de CP foi semelhante ao observado após sobreexpressão de Src64B, um importante regulador da estabilidade das AJs. Uma vez que a actividade de Src parece ser regulada por CP (García Fernández, B. and Janody, F. et al., unpublished data), este resultado sugere que o efeito de CP nas AJs pode ser dependente da actividade de Src. Baseando nestas observações, são apresentadas no presente trabalho diferentes hipóteses que pretendem explicar o papel de CP na manutenção da estabilidade das AJs, e de como esta função putativa de CP pode estar interligada com a função conhecida de aPKC na regulação da dinâmica das AJs. VII É importante referir que as diferentes hipóteses não são mutuamente exclusivas e por isso, de um modo geral, através da sua principal função, prevenir a polimerização dos filamentos de actina, CP parece ter um papel putativo na manutenção da estabilidade das AJs por: (a) restringir a localização de aPKC na membrana apical; (b) regular eventos iniciais de endocitose; e (c) regular a actividade de Src. No conjunto, os dados apresentados neste trabalho apontam para uma crucial sinergia entre complexos de polaridade e o citoesqueleto de actina na regulação da dinâmica das AJs, o qual está intimamente ligado à manutenção da integridade dos tecidos epiteliais

Efeitos do treino dos músculos respiratórios com ortóteses em pacientes com DPOC: uma revisão sistemática

Projeto de Graduação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Licenciada em FisioterapiaResumo Objectivo: Determinar a efectividade do treino muscular respiratório com ortóteses na função respiratória de pacientes com Doença Pulmonar Obstrutiva Crónica (DPOC). Metodologia: Pesquisa computadorizada nas bases de dados Pubmed e PEDro para identificar estudos randomizados controlados que avaliem os efeitos do treino muscular respiratório com ortóteses em pacientes com DPOC. Resultados: Nesta revisão foram incluídos 10 estudos envolvendo 302 indivíduos, com classificação média de 6,0 na escala de PEDro. Dos 10 artigos encontrados, 7 avaliaram o treino muscular inspiratório, 2 avaliaram o treino muscular expiratório e 1 avaliou o treino muscular inspiratório e expiratório e a combinação de ambos. Conclusão: O treino muscular respiratório é um componente indispensável na reabilitação pulmonar. O treino muscular inspiratório é mais eficaz que o expiratório e que a conjugação de ambos têm a mesma eficácia que apenas o treino inspiratório.Objective: To determine the effectiveness of the respiratory muscle training with orthothesis in the respiratory function in patients with chronic obstructive pulmonary disease. Methodology: Research on computerized databases on Pubmed and PEDro to identify randomized controlled trials that evaluated the effectiveness of respiratory muscle training with orthothesis in patients with COPD Results: This review included 10 articles including 302 individuals, with mean methodology classification of 6,0 on the PEDro scale. Of the 10 articles included 7 evaluated the inspiratory muscle training, 2 evaluated the expiratory muscle training and 1 evaluated the combination of both. Conclusions: The respiratory muscle training it’s an essential component of the pulmonary rehabilitation program. The inspiratory muscle training its more effective than the expiratory muscle training and the combination of both has the same effects as the inspiratory muscle training alone

The experience of mental distress and recovery among people involved with the service user/survivor movement

This article examines how the personal experiences of mental distress of people involved in the British service user/survivor movement were shaped or transformed by this involvement, and the impact of involvement on their recovery journeys. The analysis was based on 12 in-depth interviews with service users/survivors who are, or were once, involved with the service user/survivor movement. Three large themes were identified regarding the ways in which social movement involvement affected the personal experience of mental distress: (a) making sense and reframing mental distress, (b) the social experience of involvement and (c) identity and identity reconstruction. We discuss how some features of the service user/survivor movement, such as self- help, user involvement, the centrality of experience to collective action, and the range of political positions adopted by activists can affect experience and recovery in different forms. As an exploratory study that looks into a complex topic, our findings illuminate the ways of surviving, recovering and experiencing mental distress in the context of a significant social movement

Private equity challenge - acquiring Vetropack

This Work Project, in the form of an Investment Committee Paper was prepared by 4 students and consists of a proposal for a leveraged buy out of Vetropack Holding AG, a food and beverage glass pack aging manufacturer based in Switzerland with top european performance in particular in Central Europe. Following a deep analysis of the market and the company it was possible to identify growth opportunities vertical and horizontally to develop a strong value creation strategy backed by an optimal capital structure to realize an IRR of 25.9% and a Money Multiple of 4.9 x over the 7- year holding period

Symphony. Alleviating depression symptoms through science based video gaming

A depressão representa um grande encargo econômico na Europa e em todo o mundo, é esperado que se torne a segunda doença mental mais comum em todo o mundo até 2020. Os tratamentos de primeira linha incluem medicação e psicoterapia, os quais podem produzir efeitos colaterais indesejáveis, ou serem ineficazes por várias razões que vão da escassez de profissionais treinados, até ao desconforto dos pacientes com os resultados. Terapias alternativas, como a música e terapias baseadas em tecnologia, têm sido propostas como tratamentos alternativos. Esta tese propõe o uso de um jogo casual afim de ajudar pessoas com sintomatologia depressiva. Foi realizado um estudo inicial com uma amostra de indivíduos com sintomas de depressão, leve a moderada, para entender a sua relação com videojogos, tendências de jogos e qual o tipo preferido de jogos. Concluímos que jogando no seu tempo livre, sozinhos e num computador ou dispositivo móvel tiveram maior preferência. Com base na informação coletada, criamos um jogo para dispositivos móveis chamado Symphony, baseado em resolver puzzles e audição musical, como meio de fornecer dicas para o bem-estar mental. Tentamos também promover a estimulação cognitiva, a melhoria de humor, e estratégias de regulação de emoções. Um teste de usabilidade foi realizado com 5 indivíduos da população geral para testar sua jogabilidade, onde eles preencheram questionários pré e pós-intervenção para avaliar seu humor e perceção do jogo. Uma experiência final foi realizada com uma amostra da população-alvo de 8 voluntários, que também completaram questionários pré e pós-intervenção para avaliar o impacto de jogar Symphony em seus níveis de depressão, humor e também para conhecer sua perceção do jogo. Os dados dos questionários e os comentários e observações informais dos terapeutas, revelaram respostas emocionais positivas e mudanças de humor resultantes de jogar Symphony. As quais, sugerem melhorias para tornar Symphony mais eficaz e adaptável a cada indivíduo.Depression is a heavy economic burden in Europe and worldwide, and it is expected to reach second place as the most common mental illness worldwide by 2020. First-line treatments include medication and psychotherapy, but they may either bring undesirable side-effects or be ineffective for several reasons that go from the shortage of trained practitioners to lack of compliance. Alternative therapies, such as music and technology based therapies, have been proposed as adjunctive treatments. This thesis proposes using a casual-game to aid people with depressive symptomatology. We conducted an initial study with a sample of individuals with mild to moderate depression symptoms to understand their regards to video-games, gaming tendencies, and preferred type of games. Playing in their free time, alone and on a computer or mobile device were mostly preferred, so we created a mobile casual game called Symphony based on puzzle-playing and music-listening to give tips for their mental well-being, promote cognitive stimulation, mood improvement, and emotion regulation strategies. A usability test conducted with 5 individuals from the general population was conducted to test its playability, where they completed pre- and post-intervention questionnaires to assess their mood and perception of the game. A final experiment was conducted with a sample of the target population of 8 volunteers, who also completed pre- and post-intervention questionnaires to assess the impact of playing Symphony on their depression levels, mood, and also to gather their perception of the game. Questionnaire data and therapists’ informal comments and observations reveal overall positive emotional responses and mood changes resulting from playing Symphony, and suggest improvements to make Symphony more effective and adaptable to each individual

Nutritional plasticity and evolutionary divergence in the Drosophila ovary

The environment can modify developmental trajectories and generate a range of distinct phenotypes without altering an organism’s genome, a widespread phenomenon called developmental plasticity. The past decades have seen a resurgent interest in understanding how developmental plasticity contributes to evolutionary processes, as it can produce phenotypic variation among individuals and facilitate diversification among populations that inhabit distinct ecological niches. To better understand the importance of plastic responses for evolutionary change, we need to explore how the environment alters development to produce phenotypic variation and then compare this to how genetic variation influences these same developmental processes.(...

Incorporating ESG criteria in human rights risk management in the finance sector: the case of Banco Montepio (Montepio Bank)

Over the last 15 years, the finance sector witnessed an exponential emergence and adoption of ESG criteria - a proxy term for considering sustainability-related factors - under the remit of sustainable finance and fuelled by initiates such as the UN Global Compact (UNGC) and the UN-backed Principles for Responsible Investment (PRI), which led to a spill over effect to other sectors and industries. Not only large corporations and investors have widely adopted corporate reporting on ESG factors and issues under frameworks such as the Global Reporting Initiative (GRI), the International Integrated Reporting Initiative (IIRC) and the Sustainability Accounting Standard Board (SASB), but ESG criteria have been associated with enhanced market performance in addressing corporate risks and strategies in investment decisions and it is estimated to be worth approximately US$D 20 trillion in assets. Yet, while ESG criteria are relevant for US and UK-based financial companies, it is not clear how in other countries, including European countries, such criteria are taken into consideration by banks, particularly in human rights risk management practices. Through a real case study, this research aims to understand how a Portuguese bank, Montepio, currently incorporates ESG criteria in human rights risk management practices when compared to some of the largest financial institutions in the world. Findings will shed light on some of the key gaps in the adoption of ESG criteria and assessment of human rights issues and modern slavery for managing risk in investment decisions, with practical policy recommendations.No decorrer dos últimos 15 anos, o sector financeiro testemunhou uma emergência e adoção exponencial dos critérios ESG - um termo representativo da consideração dos fatores de sustentabilidade - sob a alçada do financiamento sustentável e estimulado por iniciativas tais como o Pacto Global das Nações Unidas (UNGC) e os Princípios para o Investimento Responsável (PRI), apoiados pelas Nações Unidas, o que conduziu a um efeito de alargamento a outros sectores e indústrias. Não só os relatórios corporativos sobre fatores e questões de ESG foram amplamente adotados por grandes empresas e investidores em quadros como a Global Reporting Initiative (GRI), a "International Integrated Reporting Initiative" (IIRC) e o "Sustainability Accounting Standard Board" (SASB), como também os critérios de ESG foram associados a um melhor desempenho do mercado na abordagem dos riscos corporativos e estratégias nas decisões de investimento e, estima-se que ascenda a cerca de 20 triliões de dólares em ativos. Contudo, embora os critérios ESG sejam relevantes para as empresas financeiras sediadas nos EUA e no Reino Unido, não está claro de que forma noutros países, incluindo países europeus, tais critérios são tidos em consideração pelos bancos, particularmente nas práticas de gestão de risco dos direitos humanos. Através de um estudo de caso real, esta pesquisa pretende compreender como um banco português, o Banco Montepio, incorpora atualmente critérios de ESG nas práticas de gestão de risco de direitos humanos quando comparado com algumas das maiores instituições financeiras do mundo. As conclusões irão esclarecer algumas das principais lacunas na adoção dos critérios de ESG e na avaliação das questões de direitos humanos e da escravatura moderna, para a gestão do risco nas decisões de investimento, com recomendações políticas práticas

Health Needs and Nursing Care Practices for High-Risk Pregnant Women

Goal: Our general objective was to understand the meaning given by women with high-risk pregnancies to their health needs and the nursing team’s care practices received during the pre-natal period. Method: Qualitative study of 10 high-risk pregnant women who attended the prenatal service at a Health Center in ``Cabo Verde``. To analyze the data, we used Laurence Bardin’s conceptual assumptions. Results: The main findings reveal that high-risk pregnancy causes women a set of physical, psychological, social and emotional changes that often cause ambivalence of feelings, uncertainty in the future and specific needs in terms of child care. nursing. Conclusion: This study allows nurses to have knowledge about the experiences lived by these women and thus improve their care practice since each woman is unique and positions herself differently in the face of the risk situation depending on the factors/vulnerabilities that the involves. Implications for practice: It will be possible to list foci of attention for nursing practice with a view to developing nursing diagnoses and nursing interventions that target the person being cared for.info:eu-repo/semantics/publishedVersio