STABILITY AND DISASSEMBLY OF ALPHA-SYNUCLEIN FIBRILS

International audienceObjectives Several studies have established that alpha-synuclein (aSyn) fibrils made in vitro from recombinant protein can seed the aggregation of soluble aSyn in living organisms (cells, animals). Considering the prion-like properties of these synthetic fibrils, it is necessary to evaluate their stability so as to design efficient removal, disassembly and/or inactivation procedures. The objective of this study was to evaluate the comparative stability of WT and A53T-mutated fibrils and their ability to retain fibrillar structure in different solvents. MethodsHuman recombinant fibrils were prepared from WT and A53T aSyn in PBS. Resistance to proteolysis was evaluated under proteinase K (PK) treatment. Fibrillar conformation was assessed using spectrofluorimetry with Thioflavin T (ThT) and Transmission Electron Microscopy (TEM) after one dilution into various solvents. Results A53T fibrils were insensitive to PK treatment, in contrast to WT fibrils, which showed limited proteolysis (Fig. 1). TEM and ThT spectrofluorimetry gave concordant results, which confirmed the higher resistance of A53T vs WT fibrils to solvent denaturation (summarized in Table 1). Conclusions Among the solvents tested, only formic acid at 50% was able to fully disassemble both WT and A53T aSyn fibrils. Higher concentration SDS requires further testing

Neurovascular multiparametric MRI defines epileptogenic and seizure propagation regions in experimental mesiotemporal lobe epilepsy

International audienceObjective: Improving the identification of the epileptogenic zone and associated seizure-spreading regions represents a significant challenge. Innovative brain-imaging modalities tracking neurovascular dynamics during seizures may provide new disease biomarkers.Methods: With use of a multi-parametric magnetic resonance imaging (MRI) analysis at 9.4 Tesla, we examined, elaborated, and combined multiple cellular and cerebrovascular MRI read-outs as imaging biomarkers of the epileptogenic and seizure-propagating regions. Analyses were performed in an experimental model of mesial temporal lobe epilepsy (MTLE) generated by unilateral intra-hippocampal injection of kainic acid (KA).Results: In the ipsilateral epileptogenic hippocampi, tissue T1 and blood-brain barrier (BBB) permeability to gadolinium were increased 48-72 hours post-KA, as compared to sham and contralateral hippocampi. BBB permeability endured during spontaneous focal seizures (4-6 weeks), along with a significant increase of apparent diffusion coefficient (ADC) and blood volume fraction (BVf). Simultaneously, ADC and BVf were augmented in the contralateral hippocampus, a region characterized by electroencephalographic seizure spreading, discrete histological neurovascular cell modifications, and no tissue sclerosis. We next asked whether combining all the acquired MRI parameters could deliver criteria to classify the epileptogenic from the seizure-spreading and sham hippocampi in these experimental conditions and over time. To differentiate sham from epileptogenic areas, the automatic multi-parametric classification provided a maximum accuracy of 97.5% (32 regions) 48-72 hours post-KA and of 100% (60 regions) at spontaneous seizures stage. To differentiate sham, epileptogenic, and seizure-spreading areas, the accuracies of the automatic classification were 93.1% (42 regions) 48-72 hours post-KA and 95% (80 regions) at spontaneous seizure stage.Significance: Combining multi-parametric MRI acquisition and machine-learning analyses delivers specific imaging identifiers to segregate the epileptogenic from the contralateral seizure-spreading hippocampi in experimental MTLE. The potential clinical value of our findings is critically discussed

Le mausolée de Jaunay-Clan (Vienne) : protocole d’étude de sépultures en milieu clos

International audienceUne fouille préventive réalisée en 2011-2012 à Jaunay-Clan, près de Poitiers, a porté sur un mausolée de la fin de l’Antiquité contenant deux sépultures. Chacune d’entre elles était constituée d’un sarcophage de calcaire renfermant un cercueil de plomb. Le caractère exceptionnel de ce type de découverte et les excellentes conditions de conservation ont conduit à mettre en place un protocole d’étude destiné à préserver et à étudier au mieux les deux sépultures (restes organiques, textiles, pollen, etc.). Ce protocole a compris la présence de plusieurs anthropologues, et surtout l’intervention de spécialistes dès l’ouverture des sarcophages : palynologues, entomologue, paléopathologiste, chimiste, spécialistes de paléoparasitologie, des textiles, de l’ADN, et de la conservation préventive. Leur présence était destinée à observer certains vestiges susceptibles de se dégrader rapidement, à réaliser des prélèvements avant contamination (ADN) et à orienter la stratégie de fouille et de prélèvement. Les habituels protocoles de fouille et de démontage ont ensuite été adoptés, en focalisant l’attention sur la localisation précise des restes organiques (tissus humains et textiles notamment par rapport au squelette dans le cercueil. L’ensemble du contenu des deux sépultures (notamment les résidus de décomposition et les fragments de textiles) recouvrant le fond de chaque cercueil en plomb) a été prélevé et localisé suivant un carroyage fin. Les études réalisées à l’issue de la fouille ont permis de préciser les pratiques funéraires appréhendées par l’étude du squelette. Elles constituent un apport majeur pour lareconstitution précise des pratiques funéraires de l’aristocratie, en identifiant la présence d’offrandes végétales ou en permettant de restituer l’usage de différents textiles dans les sépultures. Cette communication propose de développer les aspects méthodologiques et de détailler les différentes étapes du protocole mis en oeuvre. A travers les résultats de chacune des études et analyses, elle propose en même temps de discuter de leur validité et de leur contribution à la connaissance des pratiques funéraires

Le mausolée de Jaunay-Clan (Vienne) : protocole d’étude de sépultures en milieu clos

Une fouille préventive réalisée en 2011-2012 à Jaunay-Clan, près de Poitiers, a porté sur un mausolée de la fin de l’Antiquité contenant deux sépultures. Chacune d’entre elles était constituée d’un sarcophage de calcaire renfermant un cercueil de plomb. Le caractère exceptionnel de ce type de découverte et les excellentes conditions de conservation ont conduit à mettre en place un protocole d’étude destiné à préserver et à étudier au mieux les deux sépultures (restes organiques, textiles, pollen, etc.). Ce protocole a compris la présence de plusieurs anthropologues, et surtout l’intervention de spécialistes dès l’ouverture des sarcophages : palynologues, entomologue, paléopathologiste, chimiste, spécialistes de paléoparasitologie, des textiles, de l’ADN, et de la conservation préventive. Leur présence était destinée à observer certains vestiges susceptibles de se dégrader rapidement, à réaliser des prélèvements avant contamination (ADN) et à orienter la stratégie de fouille et de prélèvement. Les habituels protocoles de fouille et de démontage ont ensuite été adoptés, en focalisant l’attention sur la localisation précise des restes organiques (tissus humains et textiles notamment par rapport au squelette dans le cercueil. L’ensemble du contenu des deux sépultures (notamment les résidus de décomposition et les fragments de textiles) recouvrant le fond de chaque cercueil en plomb) a été prélevé et localisé suivant un carroyage fin. Les études réalisées à l’issue de la fouille ont permis de préciser les pratiques funéraires appréhendées par l’étude du squelette. Elles constituent un apport majeur pour lareconstitution précise des pratiques funéraires de l’aristocratie, en identifiant la présence d’offrandes végétales ou en permettant de restituer l’usage de différents textiles dans les sépultures. Cette communication propose de développer les aspects méthodologiques et de détailler les différentes étapes du protocole mis en oeuvre. A travers les résultats de chacune des études et analyses, elle propose en même temps de discuter de leur validité et de leur contribution à la connaissance des pratiques funéraires