Interleukin-10 in vivo neutralization by gene therapy as a new therapeutic approach in B16F10-Nex2 melanoma model

Citocinas do tipo 2 estão presentes em fases mais avançadas do desenvolvimento de diversos tumores humanos, funcionando em alguns casos como fatores prognósticos de neoplasias. O desenvolvimento do melanoma murino B16F10 está relacionado a um aumento na produção de IL-10 por células NK e linfócitos T CD4+ e uma diminuição acentuada na produção de IFN- por essas células, nas fases mais avançadas da progressão tumoral. Embora o modelo singeneico do melanoma murino B16F10-Nex2 apresente baixa imunogenicidade in vivo, uma pequena porcentagem de camundongos C57Bl/6 são naturalmente resistentes ao desenvolvimento subcutâneo desse tumor, mesmo após mais de uma inoculação das células tumorais. Animais naturalmente resistentes produziram maiores concentrações de IFN- e animais susceptíveis ao tumor produziram maiores concentrações de interleucinas anti-inflamatórias, IL-10 e IL-6. Confirmando o papel imunoregulador negativo da IL-10 na resposta imune protetora natural desse modelo, camundongos geneticamente deficientes em IL-10 (IL-10KO) foram mais resistentes à implantação subcutânea de células B16F10-Nex2. Animais que resistiram à progressão tumoral produziram uma resposta protetora com perfil de citocinas do tipo 1 (IFN- e IL-12), e a proteção foi dependente de IFN- . Macrófagos e células dendríticas de animais IL-10KO após estímulo in vitro com antígenos do melanoma B16F10-Nex2 apresentaram maior produção de citocinas pró-inflamatórias (IFN- , TNF- e IL-12) e uma maior expressão de marcadores de ativação celular (MHCII, CD40, CD80 e CD86). Com a transferência adotiva de células dendríticas IL-10KO, mas não IL-10 competentes, associadas a um lisado de células B16F10-Nex2, animais C57Bl/6 foram protegidos contra o desenvolvimento tumoral, sugerindo que células dendríticas que não expressam IL-10 sejam responsáveis pela indução da resposta protetora natural mais eficiente observada em animais IL-10KO. Tendo em vista o papel imunossupressor da IL-10 na resposta protetora induzida pelo melanoma B16F10-Nex2, foi construído um vetor plasmidial eucariótico contendo o mini-gene referente à porção extracelular do receptor da IL-10 murina, a ser utilizado em protocolos de terapia gênica para neutralização da IL-10 in vivo pela expressão de um receptor decoy da interleucina. Animais tratados com o plasmídeo recombinante apresentaram aumento na sobrevida, em um efeito dependente de IFN- e potencializado pela associação de uma terapia gênica adjuvante para produção de IL-12. Células dendríticas de animais C57Bl/6 foram transfectadas com esse plasmídeo recombinante, associadas a antígenos tumorais e transferidas adotivamente à animais C57Bl/6, que foram subsequentemente desafiados com células tumorais subcutaneamente. Essas células, que tiveram o IL-10 neutralizado pelo receptor decoy, induziram resposta protetora significativamente mais eficiente que as células controle transfectadas com o plasmídeo vazio, sugerindo que essas células estejam envolvidas in vivo na indução da resposta protetora observada após a imunização com o plasmídeo recombinante e neutralização da IL-10 sistêmica. Concluímos que a terapia gênica desenvolvida foi eficaz na neutralização da IL-10 sistêmica, podendo ser aplicada como uma nova alternativa imunoterapêutica antitumoral.Type 2 cytokines are increased in late phases of several human tumors, and in some cases are considered prognostic factors for these neoplasias. Late development phases of murine melanoma B16F10 correlate with an increased production of IL-10 by NK cells and CD4+ T lymphocytes, and also with a decreased production of IFN- by these cells. Syngeneic murine melanoma B16F10-Nex2 shows low immunogenicity in vivo, however, a small percentage of C57Bl/6 mice are naturally resistant to subcutaneous tumor development, even after several tumor cell inoculations. Naturally resistant animals produced higher concentrations of IFN- and tumor susceptible animals produced higher concentrations of anti-inflammatory cytokines, IL-10 and IL-6. The immunoregulatory role of IL-10 on the natural protective immune response induced in this model was confirmed by the increased resistance to tumor development observed in IL-10 genetically-deficient mice (IL- 10KO) subcutaneously inoculated with B16F10-Nex2 cells. A type 1 immune reponse (IFN- and IL-12) was induced in resistant IL-10KO animals, and the protection was IFN- -dependent. IL-10KO macrophages and dendritic cells stimulated in vitro with B16F10-Nex2 melanoma antigens secreted higher concentrations of proinflammatory cytokines (IFN- , TNF- e IL-12), and expressed an increased amount of surface activation markers (MHCII, CD40, CD80 e CD86). Adoptive transfer of IL-10KO dendritic cells, but not IL-10-competent cells, in association with tumor antigens, induced a protective response in C57Bl/6 mice, suggesting that IL-10-negative dendritic cells induce the efficient protective response observed in IL-10KO animals. As IL-10 showed a clear immunosuppressive role on the natural protective response induced by B16F10-Nex2 cells, we constructed an eukaryotic plasmidial vector carrying the murine IL-10 receptor extracellular portion gene, to be used in gene therapy protocols for IL-10 neutralization in vivo by the expression of a decoy receptor. Recombinant plasmid-treated animals showed an IFN- -dependent increased survival, and this protective effect was augmented by the association with an adjuvant IL-12 gene therapy Dendritic cells from C57Bl/6 animals were transfected with recombinant plasmid, adoptively transferred to C57Bl/6 mice, and treated animals were challenged subcutaneously with B16F10-Nex2 tumor cells. Interleukin-10-neutralized dendritic cells induced a significantly increased survival, as compared to IL-10-containing dendritic cells, suggesting that dendritic cells induce the protective response observed in vivo after recombinant plasmid immunization and systemic IL-10 neutralization. We concluded that gene therapy using a plasmid expressing the IL-10 receptor extracellular region was effective on systemic IL-10 neutralization, and this tool could be used as a novel antitumor immunotherapeutic alternative.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

La prevalencia y la relación de los factores clínicos y los trastornos emocionales en pacientes con discopatia degenerativa del disco

OBJECTIVES: to describe the psychosocial conditions, at the time of surgical indication, of patients with chronic low back pain caused by degenerative disc disease. METHODS: in a series of 32 cases of degenerative disc disease elective surgery, a psychological evaluation was performed before the surgery. In this evaluation, socio-demographic data were collected: gender; age; present working status; occurrence of withdrawal due to disability; and clinical-psychological data: pain; physical restraint; use of psychiatric medication controlled; degree of anxiety; degree of depression; degree of hopelessness; expectations before the surgical goal. RESULTS: the group was composed of 13 women and 14 men, mean age of 44.3 years old (23 to 65 years). The parameters of pain and physical restraint were compared to cases usually indicative of surgery, indicating no peculiarity in the studied group. We demonstrated a high and correlated prevalence of psychological changes in patients: 50% of depression, 54% of anxiety and 22% of hopelessness. Furthermore, it was possible to show high rates of absence from work due to physical disability and relation to the presence of anxiety and/or depression with cases in which expectations were misleading according to the surgical objective. CONCLUSIONS: chronic low back pain is accompanied by clinical pictures of pain and psychological disorders such as anxiety, depression and hopelessness. These parameters indicate the need for pre-surgical psychological evaluation and posterior follow-up, aiming at the rehabilitation of the patient.OBJETIVOS: describir las condiciones psicosociales, en el momento de la indicación quirúrgica, de pacientes con dolor lumbar crónico causado por discopatia degenerativa del disco. MÉTODOS: en una serie de 32 casos de discopatia degenerativa del disco, se llevó a cabo una evaluación psicológica antes de la cirugía para la cirugía electiva. En esta evaluación, se recogieron datos socio-demográficos: de género; edad; situación laboral actual; la aparición de retiro debido a la discapacidad; y la clínica del dolor psicológico: la restricción física; uso de medicación psiquiátrica controlada; el grado de ansiedad; el grado de depresión; el grado de la desesperanza; expectativas antes de la meta quirúrgica. RESULTADOS: el grupo estaba compuesto por 13 mujeres y 14 hombres, edad media de 44,3 años (23 a 65 años). Los parámetros de dolor y de la restricción física están en la acción suele ser indicativa de la cirugía, lo que indica ninguna peculiaridad en el grupo de estudio. Hemos demostrado una alta prevalencia y las correlaciones de cambios psicológicos en pacientes: el 50% en la depresión, el 54% en el marco de la ansiedad y el 22% en el marco de la desesperanza. Además, era posible mostrar altas tasas de ausencia del trabajo debido a la discapacidad y la correlación de la presencia física de la ansiedad y la depresión de los casos donde las expectativas eran engañosas en cuanto a los resultados. CONCLUSIONES: el dolor lumbar crónico se acompaña de imágenes de dolor y los trastornos psicológicos tales como ansiedad, depresión y la desesperanza. Estos parámetros indican la necesidad de una evaluación psicológica antes de la cirugía y el seguimiento, con miras a la rehabilitación del paciente.OBJETIVOS: descrever as condições psicossociais, no momento da indicação cirúrgica, dos pacientes com dor lombar crônica causada por discopatia degenerativa. MÉTODOS: em uma série de 32 casos de discopatia degenerativa eletivos para cirurgia, foi realizada avaliação psicológica pré-operatória. Nesta avaliação, foram colhidos dados demográficos e sociais: sexo, idade, situação ocupacional atual, ocorrência de afastamento por invalidez; e dados clínico-psicológicos: dor, restrição física, utilização de medicamento psiquiátrico controlado; grau de ansiedade; grau de depressão; grau de desesperança; expectativas frente ao objetivo cirúrgico. RESULTADOS: o grupo foi composto de 13 mulheres e 14 homens, com média de idade de 44,3 anos (23 a 65 anos). Os parâmetros de dor e restrição física estão dentro de valores geralmente indicativos de cirurgia, não indicando nenhuma peculiaridade no grupo estudado. Foi evidenciada uma alta e correlacionada prevalência de alterações psicológicas nos pacientes: 50% em quadro depressivo, 54% em quadro de ansiedade e 22% em quadro de desesperança. Além disso, foi possível evidenciar altos índices de afastamento do trabalho por invalidez física e correlação da presença de ansiedade e/ou depressão com casos em que haviam expectativas deturpadas quanto ao resultado cirúrgico. CONCLUSÕES: dor lombar crônica é acompanhada de quadros de dor e de alterações psicológicas, como ansiedade, depressão e desesperança. Esses parâmetros evidenciam a necessidade de avaliação psicológica pré-cirúrgica e acompanhamento posterior, visando à reabilitação do paciente.Santa Casa de Misericórdia de São Paulo Instituto de Patologia da ColunaInstituto da Patologia de ColunaUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Departamento de DiagnósticoUniversidade de San Diego Instituto de Patologia da ColunaUNIFESP, Depto. de DiagnósticoSciEL

Combined secondary compounds naturally found in nectars enhance honeybee cognition and survival

The alkaloid caffeine and the amino acid arginine are present as secondary compounds in nectars of some flower species visited by pollinators. Each of these compounds affects honeybee appetitive behaviours by improving foraging activity and learning. While caffeine potentiates responses of mushroom body neurons involved in honeybee learning processes, arginine acts as precursor of nitric oxide, enhancing the protein synthesis involved in memory formation. Despite existing evidence on how these compounds affect honeybee cognitive ability individually, their combined effect on this is still unknown. We evaluated acquisition and memory retention in a classical olfactory conditioning procedure, in which the reward (sucrose solution) contained traces of caffeine, arginine or a mixture of the two. The results indicate that the presence of the single compounds and their most concentrated mixture increases bees' learning performance. However, memory retention, measured in the short and long term, increases significantly only in those treatments offering combinations of the two compounds in the reward. Additionally, the most concentrated mixture triggers a significant survival rate in the conditioned bees. Thus, some nectar compounds, when combined, show synergistic effects on cognitive ability and survival in an insect.Fil: Marchi, Ignacio Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Palottini, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Farina, Walter Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentin

Sobre os problemas inerentes aos processos discretos na analise de nucleos estruturais

Orientador: Jose Luiz F. de Arruda SerraDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia CivilResumo: Neste trabalho, utilizando processo discreto para análise de núcleos estruturais de concreto annado, é desenvolvido um modelo para discretização dos elementos de parede que procura resolver dois problemas comuns nos modelos discretos tradicionais: o momento parasita que causa uma flexão artificial na coluna central do modelo, principalmente quando o núcleo está submetido a grandes tensões de cisalhamento, e a incompatibilidade de giro na ligação parede-lintel. A influência do esforço normal nos coeficientes de rigidez das colunas é considerada. Núcleos sobre fundações elásticas também são tratados. Um programa para computadores de pequeno porte é elaborado e vários exemplos são analisados. Resultados experimentais e teóricos obtidos por outros autores são comparados, para comprovar a versatilidade e precisão do processo propostoAbstract: This thesis descrihes a procedure for a wide-column-frame analogy for the analysis of shear/core walls buildings. The model try solve two problems that occur in the classical models: the parasitic moment, which causes artificial flexure when the shear deformation of the wall is significant and the incompatibility of rotation in the beam-wall joint. The influence of the axial force is considered in the stiffness coefficients of the columns. Treatment of core walls on flexible bases is also allowed. A program for microcomputers was developed. Examples of application are presented to evaluate versatility and accuracy of the proposed procedure. Theoretical and experimental results available in the literature are used for the validationMestradoMestre em Engenharia de Estrutura

Análise de riscos na operação de extrusão na Cooperativa de Dois Irmãos e a exclusão de gênero no processo produtivo

A atividade de recicladores e cooperativas envolve riscos em todas as etapas do processo de reciclagem, desde a catação dos resíduos sólidos urbanos, até o processamento e beneficiamento dos plásticos pós-consumo. Apesar da alta composição de mulheres na força de trabalho total na atividade de reciclagem (75%), a composição de mulheres na indústria cai para 25% do total de trabalhadores, setor esse o qual se insere cooperativas que realizam o beneficiamento total do plástico, vendendo-o peletizado, como é o exemplo da Cooperativa de Dois Irmãos (CDI), onde foi desenvolvido este trabalho. Na CDI, dos 36 trabalhadores, apenas 4 são mulheres. Aceitando-se a hipótese que operações com elevados riscos associados contribuem diretamente para a exclusão de gênero em operações industriais, procurou-se avaliar os riscos no processo utilizado na CDI. O estudo aqui descrito primeiramente identifica a operação de extrusão como a que envolve os maiores riscos, e dos materiais processados o polipropileno (PP) como o material que amplifica ainda mais os riscos descritos. A operação de extrusão foi separada em 4 etapas distintas onde havia carregamento de pesos, e a operação de troca de tela da matriz. Aplicou-se então o método NIOSH da equação do Limite de Peso Carregado (LPR) para cada uma das 4 etapas onde havia carregamento de peso, e calculou-se os respectivos valores do índice de levantamento (IL). Para a avaliação de riscos na operação da troca de tela da matriz foi aplicado o método da matriz GUT. Os resultados obtidos nas 4 etapas indicaram que em 2 delas houve índices de levantamento acima do máximo 3, indicando que o operador levanta mais de 3 vezes mais peso do que deveria. Para a troca de tela da matriz os riscos avaliados envolveram o uso de força demasiada no rosqueamento da matriz, e a exposição a altas temperaturas do equipamento e do material. Obteve-se assim, para essa operação, um índice da matriz GUT de 75, considerado elevado. Recomendou-se a adoção de transportadores manuais de pallets de madeira para o melhor carregamento das cargas envolvidas, o uso de correias para a alimentação da extrusora, ou um projeto de transportadores de esteira. Para a diminuição dos riscos na troca da tela da matriz, recomenda-se que na compra de equipamento novo seja dada prioridade àquele que tiver essa troca automática, sem necessidade de intervenção manual. Avaliou-se também a produtividade alcançada no processo de extrusão do PP, chegando-se à conclusão que nas condições atuais de operação ocorre uma perda de 17% com relação à produtividade máxima que poderia ser alcançada. Logo, as mesmas soluções apontadas para a diminuição dos riscos envolvendo a operação da extrusora e que permitam uma maior inclusão da mulher também irão impactar diretamente na produtividade

Stand-Alone Lateral Interbody Fusion for the Treatment of Low-Grade Degenerative Spondylolisthesis

The purpose of this paper was to investigate the stand-alone lateral interbody fusion as a minimally invasive option for the treatment of low-grade degenerative spondylolisthesis with a minimum 24-month followup. Prospective nonrandomized observational single-center study. 52 consecutive patients (67.6 ± 10 y/o; 73.1% female; 27.4 ± 3.4 BMI) with single-level grade I/II single-level degenerative spondylolisthesis without significant spine instability were included. Fusion procedures were performed as retroperitoneal lateral transpsoas interbody fusions without screw supplementation. The procedures were performed in average 73.2 minutes and with less than 50cc blood loss. VAS and Oswestry scores showed lasting improvements in clinical outcomes (60% and 54.5% change, resp.). The vertebral slippage was reduced in 90.4% of cases from mean values of 15.1% preoperatively to 7.4% at 6-week followup (P < 0.001) and was maintained through 24 months (7.1%, P < 0.001). Segmental lordosis (P < 0.001) and disc height (P < 0.001) were improved in postop evaluations. Cage subsidence occurred in 9/52 cases (17%) and 7/52 cases (13%) spine levels needed revision surgery. At the 24-month evaluation, solid fusion was observed in 86.5% of the levels treated. The minimally invasive lateral approach has been shown to be a safe and reproducible technique to treat low-grade degenerative spondylolisthesis

Occlusal Interferences: How Can This Concept Influence The Clinical Practice?

This brief review discusses the role of occlusal interferences on the development and progression of temporomandibular dysfunction (TMD) and postural disorders. The eligible literature is described and critically presented to demonstrate that occlusal interferences are an important factor in the risk of TMD. Several studies have demonstrated through their findings that the use of occlusal adjustments, whether or not associated with restorative procedures, might avoid the development of articular problems in vulnerable patients. The occlusal interferences caused by restorative procedures or orthodontic treatment can cause TMDs in susceptible patients, and occlusal adjustments can be an alternative in the treatment of these TMDs.4487-9

Lateral Interbody Fusion for Treatment of Discogenic Low Back Pain: Minimally Invasive Surgical Techniques

Low back pain is one of the most common ailments in the general population, which tends to increase in severity along with aging. While few patients have severe enough symptoms or underlying pathology to warrant surgical intervention, in those select cases treatment choices remain controversial and reimbursement is a substancial barrier to surgery. The object of this study was to examine outcomes of discogenic back pain without radiculopathy following minimally-invasive lateral interbody fusion. Twenty-two patients were treated at either one or two levels (28 total) between L2 and 5. Discectomy and interbody fusion were performed using a minimallyinvasive retroperitoneal lateral transpsoas approach. Clinical and radiographic parameters were analyzed at standard pre- and postoperative intervals up to 24 months. Mean surgical duration was 72.1 minutes. Three patients underwent supplemental percutaneous pedicle screw instrumentation. Four (14.3%) stand-alone levels experienced cage subsidence. Pain (VAS) and disability (ODI) improved markedly postoperatively and were maintained through 24 months. Segmental lordosis increased significantly and fusion was achieved in 93% of levels. In this series, isolated axial low back pain arising from degenerative disc disease was treated with minimally-invasive lateral interbody fusion in significant radiographic and clinical improvements, which were maintained through 24 months

Netnografia como método de pesquisa em publicações científicas associadas à gestão do conhecimento

Este texto tem como objetivo analisar uso do método da netnografia na área de gestão do conhecimento em estudos nacionais. O método foi a revisão sistemática da literatura  realizada nas bases de dados Scielo e Spell, com artigos publicados no período entre 2010 e 2020. Os resultados evidenciam os principais estudos, com os respectivos autores e journals associados aos temas netnografia e gestão do conhecimento. Além disso, identificou-se um conjunto de oito temas: uso do método, comunidades e marketing, compartilhamento de informações, obtenção de conhecimento, sentimento de pertencimento, redes e ambiente de trabalho, satisfação de usuários, redes e smartphones. Além disso, foram sugeridas perspectivas de pesquisas. Ademais, gestores organizacionais podem compreender como o ambiente on-line é importante fonte de obtenção e compartilhamento de informações. Estudiosos no campo podem se motivar para a utilização de netnografias em pesquisas na área

Netnografia como método de pesquisa em publicações científicas associadas à gestão do conhecimento

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