Establishment of a saliva donor selection for in vitro biofilm growth

Resumo Introdução O emprego de biofilmes polimicrobianos, utilizando a saliva como inóculo, é um modelo promissor para o estudo de biofilmes cariogênicos in vitro. Entretanto, ainda não existe uma padronização para seleção de doadores de saliva. Objetivo O objetivo deste estudo foi estabelecer uma metodologia para seleção de doadores de saliva utilizando fatores salivares microbianos e características in vitro do biofilme. Material e método Para doação de saliva foram selecionados vinte voluntários. Os voluntários permaneceram 24 horas sem escovar os dentes e ficaram em jejum por 2 horas antes da coleta da saliva. Foram avaliados os seguintes parâmetros: viabilidade das bactérias anaeróbias totais e mutans streptococci; concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) da clorexidina; capacidade de formação de biofilme por meio da biomassa; e a suscetibilidade dos biofilmes à clorexidina. Resultado A viabilidade bacteriana da saliva, a capacidade de formação de biofilme e a suscetibilidade do biofilme à clorexidina foram apresentadas como média e intervalo de confiança (95%). A diferença entre a viabilidade do biofilme (mutans streptococci e bactérias totais) após tratamento com NaCl 0,9% e diacetato de clorexidina 0,2% foi comparada pelo teste t de Student com nível de significância estabelecido em 5%. A viabilidade total de bactérias anaeróbias (mediana) foi de 7,28 log 1+UFC/mL (unidades formadoras de colônia/mL). A viabilidade dos mutans streptococci na saliva apresentou mediana de 5,47 log 1+UFC/mL. Para capacidade de formação de biofilme a mediana da biomassa foi de 0,1172 A570. Conclusão O tratamento com clorexidina reduziu significativamente os mutans streptococci e a viabilidade total das bactérias. A metodologia para seleção do doador de saliva foi estabelecida com sucesso

Influence of the Vehicle on the Tissue Reaction and Biomineralization of Fast Endodontic Cement

Objective: To investigate the tissue response and the biomineralization ability of CER prepared with epoxy resin or water compared to Mineral Trioxide Aggregate (MTA). Material and Methods: Polyethylene tubes containing materials or empty tubes for control were inserted into the subcutaneous tissues of 30 rats. After 7, 15, 30, 60, and 90 days, the rats were killed and the tubes were removed for analysis using hematoxylin-eosin staining, von Kossa staining, and under polarized light. Inflammation was graded through a score system; the thickness of the fibrous capsule was classified as thin or thick; the biomineralization ability was recorded as present or absent. The results were statistically analyzed using the Kruskal-Wallis test (p<0.05). Results: Histologic analysis performed after 7 and 15 days for CER prepared with epoxy resin or water and for MTA showed moderate inflammation and a thick fibrous capsule (p>0.05). After 30, 60, and 90 days, mild inflammation, and a thin fibrous capsule were observed in all groups (p>0.05). Conclusion: All materials had structures positive for von Kossa and birefringent to polarized light. CER epoxy resin showed biocompatibility and biomineralization similar to CER water and MTA

Effect of hydrogen peroxide associated with methylene blue conjugated to ?-cyclodextrin in photodynamic antimicrobial chemotherapy with laser or Led in "S. mutans" biofilm

Orientador: Carolina Steiner Oliveira AlarconDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Técnicas inovadoras de controle do biofilme de "Streptococcus mutans (S. mutans)" são importantes para a prevenção da doença cárie. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da adição de peróxido de hidrogênio ao azul de metileno conjugado à ß-ciclodextrina na terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDA) em modelo de biofilme de "S. mutans" utilizando diferentes fontes de luz. Os grupos foram divididos em (n = 3, em triplicata): C (Controle negativo), CX ß- clorexidina 0,2% (controle positivo), F (Azul de metileno/ß-ciclodextrina), H (Peróxido de hidrogênio), FH (Azul de metileno/ß-ciclodextrina + Peróxido de hidrogênio), L (LASER), LF (LASER + Azul de metileno/ß-ciclodextrina), LH (LASER + Peróxido de hidrogênio), LFH (LASER + Azul de metileno/ß-ciclodextrina + Peróxido de hidrogênio) , LED, LEDF (LED + Azul de metileno/ß-ciclodextrina), LEDH (LED + Peróxido de hidrogênio) e LEDFH (LED + Azul de metileno/ß-ciclodextrina + Peróxido de hidrogênio). A formação de biofilme de "S. mutans" foi realizada em placa de 96 poços por 24 h com BHI suplementado com 1% (p/v) de sacarose. A solução de azul de metileno conjugado com a nanopartícula (32 uM), o peróxido de hidrogênio (40 uM) e a solução de azul de metileno conjugado com a nanopartícula mais o peróxido de hidrogênio foram deixados nos poços por 5 min. As irradiações da TFDA foram conduzidas com laser ('lambda' = 660 nm), 9 J e 320 J/cm2 e com LED ('lambda' = 660 nm), 8 J e 0,8 J/cm2, ambos por 150 s. A redução microbiana foi avaliada pela contagem de micro-organismos viáveis do biofilme após os respectivos tratamentos, de acordo com os grupos, em meio de cultura seletivo mitis salivarius agar (MSA). A normalidade e homocedasticidade dos dados foram avaliadas pelos testes Shapiro-Wilk e Levene, respectivamente, e os resultados foram submetidos ao teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, seguido do teste post-hoc de Dunn para evidenciar diferenças (a = 5%). Os grupos LF, LH, LFH, LEDF, LEDH, LEDFH reduziram significativamente as contagens de "S. mutans" em comparação com o grupo C e as reduções em log foram de 1,87, 1,94, 2,19, 0,91, 0,92, 1,33, respectivamente. Não houve diferença significativa na redução microbiana entre os grupos com adição de peróxido de hidrogênio (LFH e LEDFH), comparados com os grupos LF e LEDF e, por fim, no grupo controle positivo, não houve crescimento bacteriano, porém, sem diferença significativa em relação aos grupos LF, LH, LFH. Concluiu- se que a adição do peróxido de hidrogêneo ao fotossensibilizador não resultou em efeito sinérgico da TFDA independente da fonte de luz utilizada; e o peróxido de hidrogênio se comportou como um fotossensibilizador, uma vez que reduziu o número de "S. mutans" quando associado a diferentes fontes de luzAbstract: Innovative techniques to control "S. mutans" biofilm are important for the prevention of caries disease. The aim of this study was to evaluate the effect of the addition of hydrogen peroxide to ß-cyclodextrin-conjugated methylene blue in photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT) in "S. mutans" biofilm model using different light sources. The groups were then divided into (n = 3, in triplicate): C (negative control), CX - chlorhexidine 0.2% (positive control), P (methylene blue/ß-cyclodextrin), H (Hydrogen Peroxide), PH (methylene blue/ß-cyclodextrin + Hydrogen Peroxide), L (Laser), LP (Laser + methylene blue/ß-cyclodextrin), LH (Laser + Hydrogen Peroxide), LPH (Laser + methylene blue/ß-cyclodextrin + Hydrogen Peroxide), LED, LEDP (LED + methylene blue/ß-cyclodextrin) , LEDH (LED + Hydrogen Peroxide) and LEDPH (LED + methylene blue/ß-cyclodextrin + Hydrogen Peroxide). The "S. mutans" biofilm formation was performed in a 96-well plate for 24 h with BHI supplemented with 1% (w/v) sucrose. The methylene blue solution conjugated to the nanoparticle (32 uM), hydrogen peroxide (40 uM) and the methylene blue solution conjugated to the nanoparticle plus hydrogen peroxide were left in the wells for 5 min. Irradiations of the PACT were conducted with laser ('lambda' = 660 nm), 9 J and 320 J/cm2 and with LED ('lambda' = 660 nm), 8 J and 0.8 J/cm2, both for 150 s. The microbial reduction was evaluated by the counting of viable microorganisms of the biofilm after the respective treatments, according to the groups, in selective culture medium mitis salivarius agar (MSA). The normality and homoscedasticity of the data were evaluated by the Shapiro-Wilk and Levene tests, respectively, and the results were submitted to the Kruskal-Wallis non-parametric test, followed by Dunn's post-hoc test to show differences (a = 5%). The groups LP, LH, LPH, LEDP, LEDH, LEDPH significantly reduced the counts of "S. mutans" compared to C group and the log reductions were of 1.87, 1.94, 2.19, 0.91, 0.92, 1.33, respectively. No significant difference was found in the microbial reduction between the groups with hydrogen peroxide addition (LPH and LEDPH), compared to the LP and LEDP groups, and, finally, in the positive control group, no bacterial growth was observed, nevertheless, with no significant difference in relation to the LP, LH, LPH groups It was concluded that (1): the addition of hydrogen peroxide to the photosensitizer did not result in a synergistic effect of PACT; (2): hydrogen peroxide behaved as a photosensitizer as it reduced the number of "S. mutans" when associated with different light sourcesMestradoOdontopediatriaMestra em Odontologia132211/2017-32017/03263-3CNPQFAPES

Addition of hydrogen peroxide to methylene blue conjugated to β-cyclodextrin in photodynamic antimicrobial chemotherapy in S. mutans biofilm

This study evaluated the effect of hydrogen peroxide addition on β-cyclodextrin-conjugated methylene blue in antimicrobial photodynamic therapy(a-PDT) in S. mutans biofilm model using laser or light emitting diode (LED) (λ = 660 nm). A preliminary assay was performed to evaluate the cytotoxicity of hydrogen peroxide in oral fibroblasts by the colorimetric method (MTT). Afterwards, groups were divided into (n = 3, in triplicate): C (negative control), CX – chlorhexidine 0.2% (positive control), P (methylene blue/β-cyclodextrin), H (Hydrogen Peroxide at 40 μM), PH, L (Laser), LP, LH (Laser+Hydrogen Peroxide), LPH, LED, LEDP, LEDH, and LEDPH. The biofilm was formed in 24 h with BHI + 1% sucrose (w/v). Light irradiations were conducted with laser, 9 J, 323 J/cm2, 113 s or with LED, 8.1 J, 8.1 J/cm2 for 90 s. Microbial reduction was evaluated by counting the viable microorganisms of the biofilm after the respective treatments, in a selective culture medium, and laser confocal microscopy evaluation. LP, LH, LPH, LEDP, LEDH, and LEDPH groups statistically reduced the counts of S.mutans compared with the C group and the log reductions were of 1.87, 1.94, 2.19, 0.91, 0.92, and 1.33, respectively; the addition of hydrogen peroxide did not potentiate the microbial reductions (LPH and LEDPH) compared with the LP and LEDP groups. The association of hydrogen peroxide with the conjugated β-cyclodextrin nanoparticle as photosensitizer did not result in an enhanced effect of a-PDT; hydrogen peroxide behaved as a photosensitizer, since it reduced the number of S. mutans when associated with laser light28226233CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQCOORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPESFUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP132211/2017-30012017/03263-