The Geomagnetic Field (GMF) Is Required for Lima Bean Photosynthesis and Reactive Oxygen Species Production

: Plants evolved in the presence of the Earth's magnetic field (or geomagnetic field, GMF). Variations in MF intensity and inclination are perceived by plants as an abiotic stress condition with responses at the genomic and metabolic level, with changes in growth and developmental processes. The reduction of GMF to near null magnetic field (NNMF) values by the use of a triaxial Helmholtz coils system was used to evaluate the requirement of the GMF for Lima bean (Phaseolus lunatus L.) photosynthesis and reactive oxygen species (ROS) production. The leaf area, stomatal density, chloroplast ultrastructure and some biochemical parameters including leaf carbohydrate, total carbon, protein content and δ13C were affected by NNMF conditions, as were the chlorophyll and carotenoid levels. RubisCO activity and content were also reduced in NNMF. The GMF was required for the reaction center's efficiency and for the reduction of quinones. NNMF conditions downregulated the expression of the MagR homologs PlIScA2 and PlcpIScA, implying a connection between magnetoreception and photosynthetic efficiency. Finally, we showed that the GMF induced a higher expression of genes involved in ROS production, with increased contents of both H2O2 and other peroxides. Our results show that, in Lima bean, the GMF is required for photosynthesis and that PlIScA2 and PlcpIScA may play a role in the modulation of MF-dependent responses of photosynthesis and plant oxidative stress

Expression of matrix metalloproteinases in chronic liver diseases

Chronic liver injury occurs in response to a variety of causes, including viral hepatitis B and C. During liver fibrosis the pathological accumulation of extracellular matrix occurs as a consequence of the modifications that follow the synthesis and degradation of matrix proteins. The exact mechanism, by which specific matrix-degrading enzymes act during ECM remodelling, is not clear. Evidence of the involvement of MMPs, the most important family of ECM-degradative enzymes, in various liver diseases exists in a number of studies. The majority of the findings regarding matrix metalloproteinase (MMP) expression in hepatitis B and C infected patients indicate the fluctuations of MMP's RNA, DNA or active enzyme levels in relation to the viral presence and chronic infections. However, better understanding is crucial for the management of these diseases since there are still many points to be answered. No study has attempted to study matrix metalloproteinase expression in non-alcoholic steatohepatitis (NASH). To achieve more information about fibroproliferation in hepatitis B, C and NASH patients, the expression of MMPs in these diseases was studied checking the hypothesis that different MMPs might be involved in different liver diseases during the process of fibrogenesis. For that purpose, we assessed the expression levels of MMPs by reverse transcription polymerase chain (RT-PCR) reaction and examined the presence of MMP-2, -9, -10, -11 total RNAs in the tissues from patients with viral and non viral hepatitis.73 patients were examined in this study: non-diseased controls (10), patients with chronic hepatitis B (14), chronic hepatitis C (33) and non-alcoholic steatohepatitis (16). All patients studied consumed no alcohol. Ten liver samples were taken at operation for cholecystectomy and used as healthy controls. Total RNA was isolated after immersion of the liver biopsies in liquid nitrogen and it was reversely transcribed by cDNA synthesis. Consecutive amplification of cDNA was performed by PCR and products were electrophorised through an 8% polyacrylamide gel and silver stained. PCR products were semi-quantitatively analyzed by densitometric analysis using b-actin or b2-microglobulin as the house keeping gene. The RNA levels of each gene were expressed as a ratio of the intensity of the bands in diseased tissues versus the corresponding levels of the internal control. Non-parametric tests (Kruskal-Wallis and Mann-Whitney) were performed to examine differences on metalloproteinase expression amongst diseases and controls. When we grouped together the expression values for metalloproteinases from HCV and HBV viral hepatitis patients and compared it with non-viral patients a statistically significant increase in levels of MMP-9 and MMP-10 in NASH (P<0.05) was obtained. In our studies in viral diseases a statistically significant increase in MMP-2 expression (P<0.05) was observed when compared to control values. We observed statistically significant increases in MMP-9 expression values in NASH when compared to controls (P<0.05). We examined expression patterns of metalloproteinases in different histological stages of chronic hepatitis due to HBV or HCV viruses. In HBV cases, MMP-9 expression showed a statistically significant decrease (P<0.05) in the final stages of the viral infection. When we investigated HCV related liver disease, a stronger presence of MMP-2 and MMP-9 in final disease stages was detected. MMP-10 and MMP-11 followed a decreasing pattern during disease development. Statistical significance was obtained only for the MMP-2 expression (P<0.05) at the final stages of HCV. Few studies have assessed the expression of metalloproteinase network in chronic hepatitis. No study has attempted to study in detail their expression in non-alcoholic steatohepatitis. In the present results in non-alcoholic steatohepatitis we showed a significant increase in the expression of MMP-9 and MMP-10, when compared to viral hepatitis B and C. Previous reports on MMP-9 expression in the human liver have demonstrated an increase of MMP-9 gelatinolytic activity in hepatic tissues from patients with viral and alcoholic cirrhosis and an early increase in chronic viral hepatitis C during all fibrotic stages including cirrhosis. We identified similar increase in the expression of MMP-9 when comparisons were made with normal livers. In our viral hepatitis patients we identified MMP-10 expression with an increasing pattern in advanced fibrosis of HBV cases and a decreasing pattern in advanced HCV fibrosis when compared to the early fibrosis. The reason for this discrepancy is not clear. When HCV and HBV related chronic hepatitis were grouped together and compared to the controls, a significant increase in the MMP-2 expression was observed. Results from experimental animal and human studies agree with our findings. In the present study, when the patients were analysed according to the viral aetiology and disease staging using the Ishaks system in the study of late stage HCV we obtained results which showed a different profile, with values of MMP-9 relatively increased. This increase did not reach statistical significance. Our findings in HCV agree with the findings of Lichtinghagen et al. [2003] who also observed an increase in MMP-9 mRNA expression in patients with advanced HCV fibrotic stages. Gelatinases are the enzymes mostly responsible for collagen type IV degradation. We suggest that their increase might be a compensatory mechanism occurring as a result of the over accumulation of type IV collagen previously reported in fibrotic livers. Our results indicate that apart from fibrotic stages, the viral aetiology should also be taken into account when MMP expression is examined. In addition to these findings our results on MMPs expression in NASH indicate that a different pattern emerges in this non-viral potentially fibrotic liver disease. This may be of importance when looking for diagnostic targets and therapy in the case of hepatic fibrosis. Further studies are warranted in order to elucidate the expression of the other MMPs and their role in hepatic diseases.Η χρόνια ηπατοπάθεια μπορεί να έχει πολλές αιτίες και κάποιες από αυτές είναι η ηπατίτιδα Β ή C. Στην ηπατική ίνωση η παθολογική αύξηση του εξωκυττάριου υποστρώματος οφείλεται στις αλλαγές που συμβαίνουν κατά την διάρκεια της σύνθεσης και αποικοδόμησης των πρωτεϊνών του υποστρώματος. Ο ακριβής μηχανισμός σύμφωνα με τον οποίο δρουν τα συγκεκριμένα αποικοδομητικά ένζυμα κατά την διάρκεια της ανάπλασης του εξωκυττάριου υποστρώματος δεν είναι γνωστός. Μελέτες που έχουν γίνει σε διάφορες ασθένειες του ήπατος επιβεβαιώνουν την εμπλοκή των ΜΜΡs, της πιο σημαντικής οικογένειας των αποικοδομητικών ενζύμων του εξωκυττάριου υποστρώματος. Η πλειονότητα των ευρημάτων που αφορούν την έκφραση των ΜΜPs σε ασθενείς με ηπατίτιδα Β και C δείχνει διακυμάνσεις στα επίπεδα DNA, RNA και ενεργού ενζύμου σε σχέση με την παρουσία ιού και χρόνιας λοίμωξης. Αυτό βοηθά στην καλύτερη κατανόηση και διαχείριση των ασθενειών αυτών. Δεν υπάρχει μελέτη που να εξετάζει την έκφραση των μεταλλοπρωτεασών στην στεατοηπατίτιδα μη αλκοολικής αιτιολογίας. Για να πάρουμε περισσότερες πληροφορίες για την παθολογία της ηπατικής ίνωσης στις ηπατίτιδες B, C και NASH μελετήσαμε την έκφραση των ΜΜΡ στα νοσήματα αυτά. Εξετάσαμε τα επίπεδα έκφρασης των ΜΜP με RT-PCR σε επίπεδο RNAσε ιστούς ασθενών με ιογενή και μη ιογενή ηπατίτιδα. Οι περιπτώσεις 73 ασθενών ερευνήθηκαν στην παρούσα μελέτη. 10 από αυτούς ήταν οι υγιείς μάρτυρες, 10 ήταν ασθενείς με χρόνια ηπατίτιδα Β 33 έπασχαν από χρόνια ηπατίτιδα C και 16 υπέφεραν από μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα. Κανένας από τους ασθενείς της μελέτης δεν κατανάλωνε αλκοόλ. Τα δέκα φυσιολογικά δείγματα ήπατος πάρθηκαν κατά τη διάρκεια αφαίρεσης χολής και χρησιμοποιήθηκαν σαν μάρτυρες. Το ολικό RNA απομονώθηκε μετά από εμβάπτιση των βιοψιών ήπατος σε υγρό άζωτο και χρησιμοποιήηκε ως μήτρα σε αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής για την παρασκευή cDNA. Εν συνεχεία το cDNA υπέστη αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και τα προϊόντα ηλεκροφορήθηκαν σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 8%.Μετά από χρώση νιτρικού αργύρου οι λαμβανόμενες ζώνες ημιποσοτικά με ψηφιακή απεικόνιση σε σχέση με τη β-ακτίνη/β-μικροσφαιρίνη. Τα επίπεδα RNA του κάθε γονιδίου εκφράστηκαν ως ο λόγος της έντασης των ζωνών από τους ασθενείς ιστούς προς την ένταση των ζωνών των μαρτύρων. Μη παραμετρικές στατιστικές δοκιμασίες (Kruskal-Wallis, Mann-Whitney) χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστούν οι διαφορές στην έκφραση των ΜΜPs ανάμεσα στις διάφορες ασθένειες και τους μάρτυρες. Όταν ομαδοποιήθηκαν τα αποτελέσματα για τους ασθενείς με HCV HBV και συγκρίθηκαν με αυτά από ασθενείς με μη ιογενείς ηπατίτιδες, παρατηρήθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση στην έκφραση των ΜΜΡ-9, ΜΜΡ-10 (P<0.05) σε περιπτώσεις ΝΑSH. Επίσης παρατηρήθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση της ΜΜΡ-2 (P<0.05) στις περιπτώσεις ιογενών ηπατιτίδων συγκρινόμενες με τους μάρτυρες (P<0.05). Εξετάσαμε τα μοτίβα έκφρασης των ΜΜΡ σε διάφορα ιστολογικά στάδια χρόνιας ιογενούς Β και C ηπατίτιδας. Στις Β περιπτώσεις παρατηρήθηκε μια σημαντική μείωση (P<0.05) στην έκφραση της ΜΜΡ-9 στα τελικά στάδια της ιογενούς λοίμωξης. Σε περιπτώσεις ιογενούς ηπατίτιδας C παρατηρήθηκε μια αύξηση των ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 στα τελικά στάδια της ασθένειας. Αντίθετα η έκφραση των ΜΜΡ-10 και ΜΜΡ-11 μειωνόταν κατά την ανάπτυξη της ασθένειας. Στατιστικά σημαντικά αποτελέσματα (P<0.05) πήραμε μόνο για την έκφραση της ΜΜΡ-2 στα τελικά στάδια της ιογενούς ηπατίτιδας C. Μόνο λίγες μελέτες έχουν αξιολογήσει την έκφραση του δικτύου των ΜΜΡ σε περιπτώσεις χρόνιας ηπατίτιδας. Καμία μελέτη δεν έχει ασχοληθεί με την έκφραση τους σε περιπτώσεις με μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα. Στην παρούσα μελέτη ανακαλύφθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση στην έκφραση των ΜΜΡ-9 και ΜΜΡ-10 συγκρινόμενη με περιπτώσεις ιογενούς ηπατίτιδας Β και C. Παλιότερες μελέτες που αφορούν την έκφραση της ΜΜΡ-9 στο ανθρώπινο ήπαρ, δείχνουν μια αύξηση στην λυτική δραστηριότητα σε ηπατικούς ιστούς ασθενών με ιογενή και αλκοολική κίρρωση. Επίσης μια αρχική αύξηση σε περιπτώσεις χρόνιας ιογενούς ηπατίτιδας C, κατά τη διάρκεια όλων των ινωτικών σταδίων συμπεριλαμβανομένης και της κίρρωσης. Παρόμοια αύξηση στην έκφραση της ΜΜΡ-9 εντοπίστηκε σε συγκρίσεις με φυσιολογικούς ιστούς και στην παρούσα μελέτη. Επίσης, μελετώντας την έκφραση της ΜΜΡ-10 σε ασθενείς με ιογενείς ηπατίτιδες, εντοπίσαμε μια αυξητική τάση σε προχωρημένα στάδια ίνωσης εξαιτίας της ΗΒV και μια τάση μείωσης σε προχωρημένα στάδια ΗCV ίνωσης συγκρινόμενα με τα αρχικά στάδια ίνωσης. Ο λόγος για αυτήν την παρατήρηση δεν είναι γνωστός. Όταν και οι δυο ομάδες των B και C ομαδοποιήθηκαν και συγκρίθηκαν με τους μάρτυρες, παρατηρήθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση στην έκφραση της ΜΜΡ-2. Τα αποτελέσματα προηγούμενων μελετών με πειραματόζωα και ασθενείς συμφωνούν με τα δικά μας ευρήματα. Στην παρούσα μελέτη όταν οι ασθενείς αναλύθηκαν σύμφωνα με το σύστημα του Ishak, σε περιπτώσεις προχωρημένης HCV πήραμε αποτελέσματα με διαφορετικές τάσεις. Συγκεκριμένα οι τιμές της ΜΜΡ-9 έδειξαν αυξητικές τάσεις. Αυτές οι τάσεις δεν ήταν στατιστικά σημαντικές σε ασθενείς με χρόνια ιογενή ηπατίτιδα. Τα αποτελέσματα μας συμφωνούν με αυτά της ομάδας του Lichtinghagen [Clin Sci 2003]. Οι γελατινάσες είναι ένζυμα υπεύθυνα για την αποικοδόμηση του κολλαγόνου τύπου IV. Φαίνεται ότι η αύξηση τους συμβαίνει στα πλαίσια ενός αντισταθμιστικού μηχανισμού της υπερσυγκέντρωσης κολλαγόνου τύπου IV σε ηπατικούς ιστούς με ίνωση. Τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι εκτός του σταδίου της ίνωσης του ήπατος, εκείνο που πρέπει να λαμβάνεται οπωσδήποτε υπ όψιν κατά τη μελέτη των ΜΜΡs στο ήπαρ, είναι η αιτιολογία της νόσου και μάλιστα η συγκεκριμένη ιογενής αιτιολογία. Τα ευρήματα μας στη NASH δείχνουν ότι στις μη ιογενείς, ενέχονται πιθανόν διαφορετικές μεταλλοπρωτεϊνάσες στην διαδικασία της ίνωσης. Αυτό μπορεί να αποδειχτεί σημαντικό κατά την ανίχνευση διαγνωστικών και θεραπευτικών στόχων. Είναι προφανές ότι απαιτούνται εκτενέστερες μελέτες για την έκφραση και άλλων μεταλλοπρωτεϊνασών και το ρόλο τους στις ηπατοπάθειες

Έκφραση των μεταλλοπρωτεασσών στις χρόνιες ηπατοπάθειες

Chronic liver injury occurs in response to a variety of causes, including viral hepatitis B and C. During liver fibrosis the pathological accumulation of extracellular matrix occurs as a consequence of the modifications that follow the synthesis and degradation of matrix proteins. The exact mechanism, by which specific matrix-degrading enzymes act during ECM remodelling, is not clear. Evidence of the involvement of MMPs, the most important family of ECM-degradative enzymes, in various liver diseases exists in a number of studies. The majority of the findings regarding matrix metalloproteinase (MMP) expression in hepatitis B and C infected patients indicate the fluctuations of MMP's RNA, DNA or active enzyme levels in relation to the viral presence and chronic infections. However, better understanding is crucial for the management of these diseases since there are still many points to be answered. No study has attempted to study matrix metalloproteinase expression in non-alcoholic steatohepatitis (NASH). To achieve more information about fibroproliferation in hepatitis B, C and NASH patients, the expression of MMPs in these diseases was studied checking the hypothesis that different MMPs might be involved in different liver diseases during the process of fibrogenesis. For that purpose, we assessed the expression levels of MMPs by reverse transcription polymerase chain (RT-PCR) reaction and examined the presence of MMP-2, -9, -10, -11 total RNAs in the tissues from patients with viral and non viral hepatitis.73 patients were examined in this study: non-diseased controls (10), patients with chronic hepatitis B (14), chronic hepatitis C (33) and non-alcoholic steatohepatitis (16). All patients studied consumed no alcohol. Ten liver samples were taken at operation for cholecystectomy and used as healthy controls. Total RNA was isolated after immersion of the liver biopsies in liquid nitrogen and it was reversely transcribed by cDNA synthesis. Consecutive amplification of cDNA was performed by PCR and products were electrophorised through an 8% polyacrylamide gel and silver stained. PCR products were semi-quantitatively analyzed by densitometric analysis using b-actin or b2-microglobulin as the house keeping gene. The RNA levels of each gene were expressed as a ratio of the intensity of the bands in diseased tissues versus the corresponding levels of the internal control. Non-parametric tests (Kruskal-Wallis and Mann-Whitney) were performed to examine differences on metalloproteinase expression amongst diseases and controls. When we grouped together the expression values for metalloproteinases from HCV and HBV viral hepatitis patients and compared it with non-viral patients a statistically significant increase in levels of MMP-9 and MMP-10 in NASH (P<0.05) was obtained. In our studies in viral diseases a statistically significant increase in MMP-2 expression (P<0.05) was observed when compared to control values. We observed statistically significant increases in MMP-9 expression values in NASH when compared to controls (P<0.05). We examined expression patterns of metalloproteinases in different histological stages of chronic hepatitis due to HBV or HCV viruses. In HBV cases, MMP-9 expression showed a statistically significant decrease (P<0.05) in the final stages of the viral infection. When we investigated HCV related liver disease, a stronger presence of MMP-2 and MMP-9 in final disease stages was detected. MMP-10 and MMP-11 followed a decreasing pattern during disease development. Statistical significance was obtained only for the MMP-2 expression (P<0.05) at the final stages of HCV. Few studies have assessed the expression of metalloproteinase network in chronic hepatitis. No study has attempted to study in detail their expression in non-alcoholic steatohepatitis. In the present results in non-alcoholic steatohepatitis we showed a significant increase in the expression of MMP-9 and MMP-10, when compared to viral hepatitis B and C. Previous reports on MMP-9 expression in the human liver have demonstrated an increase of MMP-9 gelatinolytic activity in hepatic tissues from patients with viral and alcoholic cirrhosis and an early increase in chronic viral hepatitis C during all fibrotic stages including cirrhosis. We identified similar increase in the expression of MMP-9 when comparisons were made with normal livers. In our viral hepatitis patients we identified MMP-10 expression with an increasing pattern in advanced fibrosis of HBV cases and a decreasing pattern in advanced HCV fibrosis when compared to the early fibrosis. The reason for this discrepancy is not clear. When HCV and HBV related chronic hepatitis were grouped together and compared to the controls, a significant increase in the MMP-2 expression was observed. Results from experimental animal and human studies agree with our findings. In the present study, when the patients were analysed according to the viral aetiology and disease staging using the Ishaks system in the study of late stage HCV we obtained results which showed a different profile, with values of MMP-9 relatively increased. This increase did not reach statistical significance. Our findings in HCV agree with the findings of Lichtinghagen et al. [2003] who also observed an increase in MMP-9 mRNA expression in patients with advanced HCV fibrotic stages. Gelatinases are the enzymes mostly responsible for collagen type IV degradation. We suggest that their increase might be a compensatory mechanism occurring as a result of the over accumulation of type IV collagen previously reported in fibrotic livers. Our results indicate that apart from fibrotic stages, the viral aetiology should also be taken into account when MMP expression is examined. In addition to these findings our results on MMPs expression in NASH indicate that a different pattern emerges in this non-viral potentially fibrotic liver disease. This may be of importance when looking for diagnostic targets and therapy in the case of hepatic fibrosis. Further studies are warranted in order to elucidate the expression of the other MMPs and their role in hepatic diseases.Η χρόνια ηπατοπάθεια μπορεί να έχει πολλές αιτίες και κάποιες από αυτές είναι η ηπατίτιδα Β ή C. Στην ηπατική ίνωση η παθολογική αύξηση του εξωκυττάριου υποστρώματος οφείλεται στις αλλαγές που συμβαίνουν κατά την διάρκεια της σύνθεσης και αποικοδόμησης των πρωτεϊνών του υποστρώματος. Ο ακριβής μηχανισμός σύμφωνα με τον οποίο δρουν τα συγκεκριμένα αποικοδομητικά ένζυμα κατά την διάρκεια της ανάπλασης του εξωκυττάριου υποστρώματος δεν είναι γνωστός. Μελέτες που έχουν γίνει σε διάφορες ασθένειες του ήπατος επιβεβαιώνουν την εμπλοκή των ΜΜΡs, της πιο σημαντικής οικογένειας των αποικοδομητικών ενζύμων του εξωκυττάριου υποστρώματος. Η πλειονότητα των ευρημάτων που αφορούν την έκφραση των ΜΜPs σε ασθενείς με ηπατίτιδα Β και C δείχνει διακυμάνσεις στα επίπεδα DNA, RNA και ενεργού ενζύμου σε σχέση με την παρουσία ιού και χρόνιας λοίμωξης. Αυτό βοηθά στην καλύτερη κατανόηση και διαχείριση των ασθενειών αυτών. Δεν υπάρχει μελέτη που να εξετάζει την έκφραση των μεταλλοπρωτεασών στην στεατοηπατίτιδα μη αλκοολικής αιτιολογίας. Για να πάρουμε περισσότερες πληροφορίες για την παθολογία της ηπατικής ίνωσης στις ηπατίτιδες B, C και NASH μελετήσαμε την έκφραση των ΜΜΡ στα νοσήματα αυτά. Εξετάσαμε τα επίπεδα έκφρασης των ΜΜP με RT-PCR σε επίπεδο RNAσε ιστούς ασθενών με ιογενή και μη ιογενή ηπατίτιδα. Οι περιπτώσεις 73 ασθενών ερευνήθηκαν στην παρούσα μελέτη. 10 από αυτούς ήταν οι υγιείς μάρτυρες, 10 ήταν ασθενείς με χρόνια ηπατίτιδα Β 33 έπασχαν από χρόνια ηπατίτιδα C και 16 υπέφεραν από μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα. Κανένας από τους ασθενείς της μελέτης δεν κατανάλωνε αλκοόλ. Τα δέκα φυσιολογικά δείγματα ήπατος πάρθηκαν κατά τη διάρκεια αφαίρεσης χολής και χρησιμοποιήθηκαν σαν μάρτυρες. Το ολικό RNA απομονώθηκε μετά από εμβάπτιση των βιοψιών ήπατος σε υγρό άζωτο και χρησιμοποιήηκε ως μήτρα σε αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής για την παρασκευή cDNA. Εν συνεχεία το cDNA υπέστη αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και τα προϊόντα ηλεκροφορήθηκαν σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 8%.Μετά από χρώση νιτρικού αργύρου οι λαμβανόμενες ζώνες ημιποσοτικά με ψηφιακή απεικόνιση σε σχέση με τη β-ακτίνη/β-μικροσφαιρίνη. Τα επίπεδα RNA του κάθε γονιδίου εκφράστηκαν ως ο λόγος της έντασης των ζωνών από τους ασθενείς ιστούς προς την ένταση των ζωνών των μαρτύρων. Μη παραμετρικές στατιστικές δοκιμασίες (Kruskal-Wallis, Mann-Whitney) χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστούν οι διαφορές στην έκφραση των ΜΜPs ανάμεσα στις διάφορες ασθένειες και τους μάρτυρες. Όταν ομαδοποιήθηκαν τα αποτελέσματα για τους ασθενείς με HCV HBV και συγκρίθηκαν με αυτά από ασθενείς με μη ιογενείς ηπατίτιδες, παρατηρήθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση στην έκφραση των ΜΜΡ-9, ΜΜΡ-10 (P<0.05) σε περιπτώσεις ΝΑSH. Επίσης παρατηρήθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση της ΜΜΡ-2 (P<0.05) στις περιπτώσεις ιογενών ηπατιτίδων συγκρινόμενες με τους μάρτυρες (P<0.05). Εξετάσαμε τα μοτίβα έκφρασης των ΜΜΡ σε διάφορα ιστολογικά στάδια χρόνιας ιογενούς Β και C ηπατίτιδας. Στις Β περιπτώσεις παρατηρήθηκε μια σημαντική μείωση (P<0.05) στην έκφραση της ΜΜΡ-9 στα τελικά στάδια της ιογενούς λοίμωξης. Σε περιπτώσεις ιογενούς ηπατίτιδας C παρατηρήθηκε μια αύξηση των ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 στα τελικά στάδια της ασθένειας. Αντίθετα η έκφραση των ΜΜΡ-10 και ΜΜΡ-11 μειωνόταν κατά την ανάπτυξη της ασθένειας. Στατιστικά σημαντικά αποτελέσματα (P<0.05) πήραμε μόνο για την έκφραση της ΜΜΡ-2 στα τελικά στάδια της ιογενούς ηπατίτιδας C. Μόνο λίγες μελέτες έχουν αξιολογήσει την έκφραση του δικτύου των ΜΜΡ σε περιπτώσεις χρόνιας ηπατίτιδας. Καμία μελέτη δεν έχει ασχοληθεί με την έκφραση τους σε περιπτώσεις με μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα. Στην παρούσα μελέτη ανακαλύφθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση στην έκφραση των ΜΜΡ-9 και ΜΜΡ-10 συγκρινόμενη με περιπτώσεις ιογενούς ηπατίτιδας Β και C. Παλιότερες μελέτες που αφορούν την έκφραση της ΜΜΡ-9 στο ανθρώπινο ήπαρ, δείχνουν μια αύξηση στην λυτική δραστηριότητα σε ηπατικούς ιστούς ασθενών με ιογενή και αλκοολική κίρρωση. Επίσης μια αρχική αύξηση σε περιπτώσεις χρόνιας ιογενούς ηπατίτιδας C, κατά τη διάρκεια όλων των ινωτικών σταδίων συμπεριλαμβανομένης και της κίρρωσης. Παρόμοια αύξηση στην έκφραση της ΜΜΡ-9 εντοπίστηκε σε συγκρίσεις με φυσιολογικούς ιστούς και στην παρούσα μελέτη. Επίσης, μελετώντας την έκφραση της ΜΜΡ-10 σε ασθενείς με ιογενείς ηπατίτιδες, εντοπίσαμε μια αυξητική τάση σε προχωρημένα στάδια ίνωσης εξαιτίας της ΗΒV και μια τάση μείωσης σε προχωρημένα στάδια ΗCV ίνωσης συγκρινόμενα με τα αρχικά στάδια ίνωσης. Ο λόγος για αυτήν την παρατήρηση δεν είναι γνωστός. Όταν και οι δυο ομάδες των B και C ομαδοποιήθηκαν και συγκρίθηκαν με τους μάρτυρες, παρατηρήθηκε μια στατιστικά σημαντική αύξηση στην έκφραση της ΜΜΡ-2. Τα αποτελέσματα προηγούμενων μελετών με πειραματόζωα και ασθενείς συμφωνούν με τα δικά μας ευρήματα. Στην παρούσα μελέτη όταν οι ασθενείς αναλύθηκαν σύμφωνα με το σύστημα του Ishak, σε περιπτώσεις προχωρημένης HCV πήραμε αποτελέσματα με διαφορετικές τάσεις. Συγκεκριμένα οι τιμές της ΜΜΡ-9 έδειξαν αυξητικές τάσεις. Αυτές οι τάσεις δεν ήταν στατιστικά σημαντικές σε ασθενείς με χρόνια ιογενή ηπατίτιδα. Τα αποτελέσματα μας συμφωνούν με αυτά της ομάδας του Lichtinghagen [Clin Sci 2003]. Οι γελατινάσες είναι ένζυμα υπεύθυνα για την αποικοδόμηση του κολλαγόνου τύπου IV. Φαίνεται ότι η αύξηση τους συμβαίνει στα πλαίσια ενός αντισταθμιστικού μηχανισμού της υπερσυγκέντρωσης κολλαγόνου τύπου IV σε ηπατικούς ιστούς με ίνωση. Τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι εκτός του σταδίου της ίνωσης του ήπατος, εκείνο που πρέπει να λαμβάνεται οπωσδήποτε υπ όψιν κατά τη μελέτη των ΜΜΡs στο ήπαρ, είναι η αιτιολογία της νόσου και μάλιστα η συγκεκριμένη ιογενής αιτιολογία. Τα ευρήματα μας στη NASH δείχνουν ότι στις μη ιογενείς, ενέχονται πιθανόν διαφορετικές μεταλλοπρωτεϊνάσες στην διαδικασία της ίνωσης. Αυτό μπορεί να αποδειχτεί σημαντικό κατά την ανίχνευση διαγνωστικών και θεραπευτικών στόχων. Είναι προφανές ότι απαιτούνται εκτενέστερες μελέτες για την έκφραση και άλλων μεταλλοπρωτεϊνασών και το ρόλο τους στις ηπατοπάθειες

C++ multithreading cookbook

The book is an easy-to-follow guide for creating multi-threaded applications using C++. Each topic is thoroughly explained with multiple illustrations. Many algorithms, such as Dinning Philosophers Problem give you thorough explanations that will help you to understand and solve concurrent tasks. The book is intended for enterprise developers and programmers who wish to make use of C++ capabilities to learn the multithreaded approach. Knowledge of multithreading along with experience in C++ is an added advantage. However it is not a prerequisite

VALUATION OF BIOTECHNOLOGY COMPANIES: REAL OPTIONS APPROACH UNDER UNCERTAINTY

Biotechnology is one of the most intensive industries in the past few decades. Essence of their operations leads to problem of determining the value of biotechnology companies, because in addition to their existing value, future product, market opportunities and intangible assets are difficult to value. Biotech companies don’t have a standard format, and simple techniques, such as financial statements analysis or discounted cash flows cannot be applied. Due to the complexity of their work and high levels of risk, alternative method such as real options is applied. The concept of financial options can be extended to the valuation of investment opportunities in commercial companies, especially in biotech. This paper explains how real options provide various perspectives on the project (investment) value in relation to situations in which the project is: delayed, expanded, abandoned, business is contracted, operations are switched, products with multiple applications are grown, and optimal date for the product launch is determined

The Geomagnetic Field (GMF) Is Required for Lima Bean Photosynthesis and Reactive Oxygen Species Production

Plants evolved in the presence of the Earth&rsquo;s magnetic field (or geomagnetic field, GMF). Variations in MF intensity and inclination are perceived by plants as an abiotic stress condition with responses at the genomic and metabolic level, with changes in growth and developmental processes. The reduction of GMF to near null magnetic field (NNMF) values by the use of a triaxial Helmholtz coils system was used to evaluate the requirement of the GMF for Lima bean (Phaseolus lunatus L.) photosynthesis and reactive oxygen species (ROS) production. The leaf area, stomatal density, chloroplast ultrastructure and some biochemical parameters including leaf carbohydrate, total carbon, protein content and &delta;13C were affected by NNMF conditions, as were the chlorophyll and carotenoid levels. RubisCO activity and content were also reduced in NNMF. The GMF was required for the reaction center&rsquo;s efficiency and for the reduction of quinones. NNMF conditions downregulated the expression of the MagR homologs PlIScA2 and PlcpIScA, implying a connection between magnetoreception and photosynthetic efficiency. Finally, we showed that the GMF induced a higher expression of genes involved in ROS production, with increased contents of both H2O2 and other peroxides. Our results show that, in Lima bean, the GMF is required for photosynthesis and that PlIScA2 and PlcpIScA may play a role in the modulation of MF-dependent responses of photosynthesis and plant oxidative stress

Cysteine-Specific Labeling of Proteins with a Nitroxide Biradical for Dynamic Nuclear Polarization NMR

Dynamic nuclear polarization (DNP) enhances the signal in solid-state NMR of proteins by transferring polarization from electronic spins to the nuclear spins of interest. Typically, both the protein and an exogenous source of electronic spins, such as a biradical, are either codissolved or suspended and then frozen in a glycerol/water glassy matrix to achieve a homogeneous distribution. While the use of such a matrix protects the protein upon freezing, it also reduces the available sample volume (by ca. a factor of 4 in our experiments) and causes proportional NMR signal loss. Here we demonstrate an alternative approach that does not rely on dispersing the DNP agent in a glassy matrix. We synthesize a new biradical, ToSMTSL, which is based on the known DNP agent TOTAPOL, but also contains a thiol-specific methanethiosulfonate group to allow for incorporating this biradical into a protein in a site-directed manner. ToSMTSL was characterized by EPR and tested for DNP of a heptahelical transmembrane protein, <i>Anabaena</i> sensory rhodopsin (ASR), by covalent modification of solvent-exposed cysteine residues in two ¹⁵N-labeled ASR mutants. DNP enhancements were measured at 400 MHz/263 GHz NMR/EPR frequencies for a series of samples prepared in deuterated and protonated buffers and with varied biradical/protein ratios. While the maximum DNP enhancement of 15 obtained in these samples is comparable to that observed for an ASR sample cosuspended with ∼17 mM TOTAPOL in a glycerol-<i>d</i>₈/D₂O/H₂O matrix, the achievable sensitivity would be 4-fold greater due to the gain in the filling factor. We anticipate that the DNP enhancements could be further improved by optimizing the biradical structure. The use of covalently attached biradicals would broaden the applicability of DNP NMR to structural studies of proteins