Terminale und Telomer-assoziierte Proteine von pAL1, einem linearen Plasmid von Arthrobacter nitroguajacolicus Rü61a

Das lineare Plasmid pAL1 von Arthrobacter nitroguajacolicus Rü61a besitzt kovalent gebundene, terminale Proteine (TPs) an den 5’-Enden. In dieser Arbeit sollten die am pAL1-Replikationsmechanismus beteiligten Proteine identifiziert und charakterisiert werden. Es konnte gezeigt werden, dass das auf pAL1 lokalisierte Gen 102 für das an den 5’-Enden von pAL1 kovalent gebundene TP codiert. Das Gen 101 codiert für ein Protein, welches durch in vivo Quervernetzungsversuche als Interaktionspartner von TP identifiziert wurde. Dieses als Telomer-assoziiertes Protein (TAP) bezeichnete Protein ist ein bisher einzigartiges Multidomänenprotein und zeigte in biochemischen Versuchen Topoisomerase-, DNA-Helikase- und DNA-Polymerase-Aktivitäten. Realtime-PCR-Versuche zeigten eine gleichzeitig ausgeprägte DNA-Helikasefunktion während der DNA-Polymerisationsfunktion von TAP sowohl mit DNA-primern als auch mit TP als Protein-primer. Somit konnte TAP DNA exponentiell bei 30°C amplifizieren

Enzymatic production of defined chitosan oligomers with a specific pattern of acetylation using a combination of chitin oligosaccharide deacetylases

Chitin and chitosan oligomers have diverse biological activities with potentially valuable applications in fields like medicine, cosmetics, or agriculture. These properties may depend not only on the degrees of polymerization and acetylation, but also on a specific pattern of acetylation (PA) that cannot be controlled when the oligomers are produced by chemical hydrolysis. To determine the influence of the PA on the biological activities, defined chitosan oligomers in sufficient amounts are needed. Chitosan oligomers with specific PA can be produced by enzymatic deacetylation of chitin oligomers, but the diversity is limited by the low number of chitin deacetylases available. We have produced specific chitosan oligomers which are deacetylated at the first two units starting from the non-reducing end by the combined use of two different chitin deacetylases, namely NodB from Rhizobium sp. GRH2 that deacetylates the first unit and COD from Vibrio cholerae that deacetylates the second unit starting from the non-reducing end. Both chitin deacetylases accept the product of each other resulting in production of chitosan oligomers with a novel and defined PA. When extended to further chitin deacetylases, this approach has the potential to yield a large range of novel chitosan oligomers with a fully defined architecture