A Key Role for Old Yellow Enzyme in the Metabolism of Drugs by Trypanosoma cruzi

Trypanosoma cruzi is the etiological agent of Chagas' disease. So far, first choice anti-chagasic drugs in use have been shown to have undesirable side effects in addition to the emergence of parasite resistance and the lack of prospect for vaccine against T. cruzi infection. Thus, the isolation and characterization of molecules essential in parasite metabolism of the anti-chagasic drugs are fundamental for the development of new strategies for rational drug design and/or the improvement of the current chemotherapy. While searching for a prostaglandin (PG) F2α synthase homologue, we have identified a novel “old yellow enzyme” from T. cruzi (TcOYE), cloned its cDNA, and overexpressed the recombinant enzyme. Here, we show that TcOYE reduced 9,11-endoperoxide PGH2 to PGF2α as well as a variety of trypanocidal drugs. By electron spin resonance experiments, we found that TcOYE specifically catalyzed one-electron reduction of menadione and β-lapachone to semiquinone-free radicals with concomitant generation of superoxide radical anions, while catalyzing solely the two-electron reduction of nifurtimox and 4-nitroquinoline-N-oxide drugs without free radical production. Interestingly, immunoprecipitation experiments revealed that anti-TcOYE polyclonal antibody abolished major reductase activities of the lysates toward these drugs, identifying TcOYE as a key drug-metabolizing enzyme by which quinone drugs have their mechanism of action

The role of laccase in prostaglandin production by Cryptococcus neoformans

Recently, it has been demonstrated that the opportunistic fungal pathogen Cryptococcus neoformans can synthesize authentic immunomodulatory prostaglandins. The mechanism by which this takes place is unclear as there is no cyclooxygenase homologue in the cryptococcal genome. In this study, we show that cryptococcal production of both PGE 2 and PGF 2α can be chemically inhibited by caffeic acid, resveratrol and nordihydroguaiaretic acid. These polyphenolic molecules are frequently used as inhibitors of lipoxygenase enzymes; however, blast searches of the cryptococcal genome were unable to identify any homologues of mammalian, plant or fungal lipoxygenases. Next we investigated cryptococcal laccase, an enzyme known to bind polyphenols, and found that either antibody depletion or genetic deletion of the primary cryptococcal laccase ( lac1 δ) resulted in a loss of cryptococcal prostaglandin production. To determine how laccase is involved, we tested recombinant laccase activity on the prostaglandin precursors, arachidonic acid (AA), PGG 2 and PGH 2 . Using mass spectroscopy we determined that recombinant Lac1 does not modify AA or PGH 2 , but does have a marked activity toward PGG 2 converting it to PGE 2 and 15-keto-PGE 2 . These data demonstrate a critical role for laccase in cryptococcal prostaglandin production, and provides insight into a new and unique fungal prostaglandin pathway.Peer Reviewedhttp://deepblue.lib.umich.edu/bitstream/2027.42/73041/1/j.1365-2958.2008.06245.x.pd

Late Stage Infection in Sleeping Sickness

At the turn of the 19th century, trypanosomes were identified as the causative agent of sleeping sickness and their presence within the cerebrospinal fluid of late stage sleeping sickness patients was described. However, no definitive proof of how the parasites reach the brain has been presented so far. Analyzing electron micrographs prepared from rodent brains more than 20 days after infection, we present here conclusive evidence that the parasites first enter the brain via the choroid plexus from where they penetrate the epithelial cell layer to reach the ventricular system. Adversely, no trypanosomes were observed within the parenchyma outside blood vessels. We also show that brain infection depends on the formation of long slender trypanosomes and that the cerebrospinal fluid as well as the stroma of the choroid plexus is a hostile environment for the survival of trypanosomes, which enter the pial space including the Virchow-Robin space via the subarachnoid space to escape degradation. Our data suggest that trypanosomes do not intend to colonize the brain but reside near or within the glia limitans, from where they can re-populate blood vessels and disrupt the sleep wake cycles

Prééminence de YHWH ou autonomie du prophète: Etude comparative et critique des confessions de Jérémie dans le texte hébreu massorétique et la "Septante"

A la suite d’importantes découvertes à Qumrân (et dans le désert de Juda) de nombreux manuscrits bibliques et de leur publication progressive, plusieurs chercheurs ont voulu saisir l’occasion qui s’offrait ainsi pour reprendre à nouveaux frais l’étude de la LXX et réaffirmer son importance pour l’exégèse et sa place dans la compréhension de l’histoire la plus ancienne du texte biblique. La présente étude des confessions de Jérémie (on en dénombre habituellement 5 : Jr 11,18-12,6 ; 15,10-21 ; 17,12-18 ; 18,18-23 et 20,7-18) s’inscrit dans le cadre de cet effort scientifique qui tente de déterminer les rapports entre la LXX et le TM du livre de Jérémie. Le regard rétrospectif sur l’histoire de la recherche et la discussion sur la datation de la forme longue du livre de Jérémie qui en découle (chap. 1) vise à éclairer les différentes tendances majeures dans les travaux qui se consacrent à l’étude du livre de Jérémie. La partie centrale du livre (chap. 2) est consacrée à une étude comparative et critique détaillée de la forme textuelle hébraïque en TM et la forme textuelle de la LXX, dans le but de vérifier si le texte des confessions de Jérémie est proche ou éloigné dans les deux formes textuelles (TM et LXX). Nous cherchons ensuite à mettre en lumière (chap. 3), par une analyse approfondie de certains choix textuels opérés par chacune des deux formes textuelles, la manière propre dont chacune présente ou caractérise le personnage de Jérémie. Dans le dernier chapitre (chap. 4), nous nous demandons si l’étude des confessions peut éclairer le rapport chronologique (d’antériorité ou de postériorité) entre les deux formes textuelles et aider à établir un rapport de priorité de l’une par rapport à l’autre de ces deux formes textuelles et, éventuellement, de suggérer leur datation. Il ressort de cette étude synoptique minutieuse et critique faite sur les confessions que, de manière générale, les deux formes textuelles y représentent un texte commun. Le livre de Jérémie semble avoir gardé dans le TM comme dans la LXX des traces, des passages importants d’un livre conçu initialement pour être un seul et même livre. Néanmoins, les quelques différences (de type textuel et rédactionnel ou de type littéraire) relevées entre les deux formes textuelles (TM et LXX) dans les confessions ont permis de mettre en lumière le mouvement qui a surtout vu le texte évoluer du modèle hébreu de la LXX vers le texte hébreu massorétique. Quant à savoir quand et par qui ces retouches rédactionnelles ont été opérées, les indices relevés dans les textes parlent en faveur de la période ayant immédiatement suivi la fin de l’exil babylonien (à savoir la fin du 6e et le début du 5e siècle avant J.-C.) comme étant le moment le plus propice pour une activité littéraire d’une telle envergure