Trending Fuel Design Parameters for Competitive Advantage

The primary competitive advantage of commercial nuclear power over other baseload generating sources has been and continues to be the stability of fuel expense. Fuel contributes about 30% of total nuclear production costs and we believe this percentage will rise moderately as non-fuel production costs continue their decline. This places some urgency on seeking and implementing improvements in fuel utilisation by both suppliers and consumers to keep nuclear power competitive. The nuclear operating company as a fuel consumer can evaluate trends over the past operating cycles in its search for improvement in fuel utilisation. Some fuel parameters that have received attention recently are contracting strategies, fuel reliability, and higher exposures for discharged fuel

Molecular Mechanism of Action of Antimalarial Benzoisothiazolones: Species-Selective Inhibitors of the Plasmodium spp. MEP Pathway enzyme, IspD

The methylerythritol phosphate (MEP) pathway is an essential metabolic pathway found in malaria parasites, but absent in mammals, making it a highly attractive target for the discovery of novel and selective antimalarial therapies. Using high-throughput screening, we have identified 2-phenyl benzo[d]isothiazol-3(2H)-ones as species-selective inhibitors of Plasmodium spp. 2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate cytidyltransferase (IspD), the third catalytic enzyme of the MEP pathway. 2-Phenyl benzo[d]isothiazol-3(2H)-ones display nanomolar inhibitory activity against P. falciparum and P. vivax IspD and prevent the growth of P. falciparum in culture, with EC50 values below 400 nM. In silico modeling, along with enzymatic, genetic and crystallographic studies, have established a mechanism-of-action involving initial non-covalent recognition of inhibitors at the IspD binding site, followed by disulfide bond formation through attack of an active site cysteine residue on the benzo[d]isothiazol-3(2H)-one core. The species-selective inhibitory activity of these small molecules against Plasmodium spp. IspD and cultured parasites suggests they have potential as lead compounds in the pursuit of novel drugs to treat malaria

Daily Eastern News: September 23, 1993

https://thekeep.eiu.edu/den_1993_sep/1015/thumbnail.jp

Central injection of substance P elicits grooming behavior and motor inhibition in mice

Substance P undecapeptide (SP) was injected into the lateral ventricles of adult male Swiss-Webster mice. Two behaviors were observed after peptide. SP increased grooming in a naloxone non-reversible manner and reduced exploratory motor activity. Both effects were dose dependent. Both effects may point to psychoactive properties for SP.Peer Reviewedhttp://deepblue.lib.umich.edu/bitstream/2027.42/23590/1/0000552.pd

Civilização cristã ou cultura e espírito? Notas para reflexão e debate em torno do tema «fé e cultura»

1. Esclarecendo a noção de Cultura, sua evolução e crise2. A relação desta crise da Cultura (e mutação civilizacional) com a Fé3. Perspectiva s de desafio à linguagem da F

EXPANDING THE POTENTIAL PRENYLOME: PRENYLATION OF SHORTENED TARGET SUBSTRATES BY FTASE AND DEVELOPMENT OF FRET-BASED SYSTEM FOR DETECTING POTENTIALLY “SHUNTED” PROTEINS

Protein prenylation is a posttranslational modification involving the attachment of a C15 or C20 isoprenoid group to a cysteine residue near the C-terminus of the target substrate by protein farnesyltransferase (FTase) or protein geranylgeranyltransferase type I (GGTase-I), respectively. Both of these protein prenyltransferases recognize a C-terminal CaaX sequence in their protein substrates, but recent studies in yeast- and mammalian-based systems have demonstrated FTase can also accept sequences that diverge in length from the canonical four-amino acid motif, such as the recently reported five-amino acid C(x)3X motif. In this work, we further expand the substrate scope of FTase by demonstrating sequence-dependent farnesylation of shorter three-amino acid Cxx C-terminal sequences using both genetic and biochemical assays. Surprisingly, biochemical assays utilizing purified mammalian FTase and Cxx substrates reveal prenyl donor promiscuity leading to both farnesylation and geranylgeranylation of these sequences. The work herein expands the substrate pool of sequences that can be potentially prenylated, further refines our understanding of substrate recognition by FTase and GGTase-I and suggests the possibility of a new class of prenylated proteins within proteomes. To identify potential new Cxx substrates in human proteomes, we explored a FRET-based system using phosphodiesterase delta subunit (PDE) as the acceptor protein for potentially prenylated Cxx sequences. While not conclusive, this work lays the foundation for an assay not dependent on membrane localization as a signal for prenylation inside cells and suggests future studies to improve upon the utility of this assay. Lastly, this work demonstrates FTase’s flexibility in accepting a prenyl donor analogue with an azobenzene moiety that can be modulated with light. This establishes a potential new avenue for mediating membrane localization behavior of prenylated proteins

Biotechnological platforms for aryl-alcohol oxidases by directed evolution

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 03-10-2019Esta tesis tiene embargado el acceso al texto completo hasta el 03-04-2021The aryl-alcohol oxidase (AAO) is a fungal flavoenzyme that supplies H2O2 to the ligninolytic consortium during natural wood decay. Being active on a wide array of aromatic alcohols, this GMC oxidase presents a highly enantioselective mechanism of great interest in organic synthesis processes. The most powerful strategy for the AAO to meet industrial standards is the engineering of its properties by directed evolution. In the present Doctoral Thesis, an evolutionary platform for the AAO from Pleurotus eryngii was developed in order to: (i) obtain functional expression in yeasts, (ii) design a secondary benzyl-alcohol oxidase, and (iii) explore the enzymatic conversion of furfural derivatives. To achieve functional expression in Saccharomyces cerevisiae, the AAO gene was fused to different signal peptides including chimeric versions of the mating-α factor and the killer K1 toxin preprosequences. The platform for in vitro evolution was completed with a dual high-throughput screening assay to detect H2O2 that included a method based on the Fenton reaction. To enhance secretion, several libraries were created combining classical evolution (i.e. mutagenic PCR and DNA shuffling) with structure-guided evolution by MORPHING. The final secretion variant FX9, carried four mutations in the signal peptide and two substitutions in the mature protein including the consensus/ancestral H91N. The FX9 improved secretion up to 4.5 mg/L and presented high stability and kinetic values similar to the native enzyme. FX9 was cloned and expressed in Pichia pastoris maintaining expression levels and main biochemical properties. When the production was scaled-up in 5L fermenter, AAO production was increased to 25.5 mg/L. FX9 was further evolved to selectively oxidize secondary benzyl alcohols. The residual activity on chiral molecules was unlocked with the modulation for the catalytic pocket by combinatorial saturation mutagenesis. After four generations, that included a site-directed recombination step to polish mutations, LanDo variant harbored five new substitutions increasing the catalytic efficiency with 1-(p-methoxyphenyl)-ethanol in 3 orders of magnitude with a 99% ee. Exploring the transformation of 5-hydroxymethylfurfural (HMF) into furan-2,5-dicarboxylic acid (FDCA), FX9 acquired mutation F501W that improved catalytic efficiency on HMF 3-fold and showed for the first time the performance of three consecutive oxidations for the AAOLa aril-alcohol oxidasa (AAO) es una flavoenzima fúngica que suple H2O2 al consorcio ligninolítico durante la degradación natural de la madera. Siendo activa con una amplia variedad de alcoholes aromáticos, esta oxidasa GMC presenta un mecanismo altamente enantioselectivo de gran interés en procesos de síntesis orgánica. La estrategia más potente para adaptar a la AAO a estándares industriales es la ingeniería de sus propiedades mediante técnicas de evolución dirigida. En la presente Tesis Doctoral, una plataforma evolutiva para la AAO de Pleurotus eryngii fue desarrollada con el objetivo de: (i) obtener expresión funcional en levaduras, (ii) diseñar una aril-alcohol oxidasa activa con alcoholes secundarios, y (iii) explorar la conversión enzimática de derivados del furfural. Para obtener expresión funcional en Saccharomyces cerevisiae, el gen de la AAO se fusionó a diferentes péptidos señales incluyendo versiones quiméricas de las secuencias prepro del factor-α y la toxina killer K1. La plataforma para la evolución in vitro se completó con un ensayo dual de screening para la detección de H2O2 incluyendo un método basado en la reacción de Fenton. Para mejorar la secreción, se crearon varias librerías combinando evolución clásica (PCR mutagénica y DNA shuffling) con evolución focalizada con el método MORPHING. La variante final FX9, con alta estabilidad y constantes cinéticas similares a la enzima nativa, presentó cuatro mutaciones en el péptido señal y dos substituciones en la proteína madura incluyendo la consenso/ancestral H91N. FX9 se expresó en S. cerevisiae con valores de 4.5 mg/L y fue posteriormente clonada y expresada en Pichia pastoris a escala de fermentador de 5 L alcanzando niveles de secreción 25.5 mg/L y manteniendo sus propiedades bioquímicas generales. La variante FX9 fue sometida a posteriores ciclos de evolución, incluyendo el remodelado del bolsillo catalítico por mutagénesis saturada combinatorial, para la oxidación de alcoholes bencílicos secundarios. Las cinco mutaciones introducidas en la variante LanDo aumentaron la eficiencia catalítica con 1-(p-methoxyphenyl)-ethanol en 3 órdenes de magnitud con un 99 % ee. Explorando la transformación del 5-hydroxymethylfurfural (HMF) en furan-2,5-dicarboxylic acid (FDCA), FX9 adquirió la mutación F501W que mejoró 3 veces la eficiencia catalítica con HMF y demostró por primera vez la catálisis de 3 oxidaciones consecutivas para la AAOLa financiación que me ha permitido seguir mis estudios doctorales. Los proyectos europeos “Optimized oxidoreductases for medium and large scale industrial biotransformations (INDOX FP7-KBBE-2013-7-613549)” y “New enzymatic oxidation/oxyfunctionalization technologies for added value bio-based products. (ENZOX2 H2020-BBI-PPP-2015-2-720297)”. Los proyectos nacionales “Evolución dirigida de oxidoreductasas ligninolíticas modernas y ancestrales para el diseño de una levadura de podredumbre blanca (DEWRY BIO2013-43407-R)”, “Evolución dirigida y computacional de ligninasas (LIGNOLUTION BIO2016-79106-R)“ y “Química sintética mediante enzimas quiméricas de fusión diseñadas por evolución dirigida y computacional (EVOCHIMERA Y2018/BIO-4738)”

Dimensões essenciais da cultura: um seu estudo diferencial e categorial: elementos para uma filosofia da cultura

1. Semiogonia da noção e seu contexto relacional2. Fenomenologia conceptual da cultura3. Conclusão: o diferente da cultur

Caracterización del sistema de incorporación de hierro Fet3/Ftr1 en el hongo fitopatógeno Botrytis cinerea y evaluación de su participación en el proceso de infección

Tesis (Magíster en Biotecnología)Botrytis cinerea es un hongo fitopatógeno que infecta un número muy significativo de especies vegetales de interés comercial, afectando principalmente el cultivo de frutilla, uva y tomate, entre otros. Este hongo produce necrosis en los tejidos vegetales que infecta, destruyendo la célula hospedera para obtener los nutrientes, generando cuantiosas pérdidas económicas a nivel mundial. Debido a esto, el estudio de las estrategias de infección de B. cinerea tiene una gran relevancia. Los mecanismos de infección son complejos y variados, y están regulados por distintos factores moleculares y ambientales. Entre las variables ambientales, los micronutrientes juegan un papel fundamental, pero pese a ello, en el caso de B. cinerea, no existe mayor información respecto de cómo distintos micronutrientes pueden incidir en el desarrollo e infección causada por el hongo. En particular, se ha descrito que el hierro es un micronutriente esencial para el desarrollo de la mayoría de los organismos, jugando un papel fundamental en las infecciones de muchos patógenos. Además, está involucrado en las respuestas de plantas frente a estos organismos. En B. cinerea, los mecanismos de captación de hierro no están estudiados, pero la presencia en el genoma de secuencias que codifican para proteínas hipotéticas asociadas a captación de hierro hace pensar que este micronutriente, también estaría jugando un rol fundamental en este organismo. Las proteínas de interés corresponden a Fet3 y Ftr1, caracterizadas inicialmente en Saccharomyces cerevisiae como parte del sistema de captación de hierro de alta afinidad, que también ha sido descrito en hongos fitopatógenos. Fet3 es un ferroxidasa de membrana que permite la oxidación del metal, el que ingresa al intracelular por medio de Ftr1, una permeasa de hierro. Mediante recombinación homóloga en el genoma de B. cinerea, se delecionaron los genes ortólogos a fet3 y ftr1, los que fueron denominaods bcfet3 y bcftr1. De esta forma, se estudió cómo una variable ambiental, hierro, afecta el desarrollo de la infección causada por el hongo en Phaseolus vulgaris y Arabidopsis thaliana. Los resultados muestran que la cepa mutante Δbcfet3 posee un fenotipo de crecimiento/desarrollo atípico en condiciones de ciclos de luz/oscuridad. En comparación con la cepa silvestre, la mutante Δbcfet3 presenta un retraso en el desarrollo de conidias y formación de estructuras de sobrevivencia denominadas esclerocios, las que se generan normalmente condiciones desfavorables. La formación de estas estructuras se revierte de manera dependiente de la concentración de hierro. Adicionalmente, ensayos de virulencia indican que la cepa mutante Δbcfet3 genera lesiones significativamente más grandes, en comparación, con la lesión causada por la cepa B05.10 (silvestre). Contrario a lo que ocurre con la cepa Δbcftr1 donde no se observaron diferencias en el área de lesión. Ensayos cualitativos realizados in planta nos permiten sugerir fuertemente, que la lesión causada por la mutante Δbcfet3 provoca un estallido oxidativo más extenso que el causado por la cepa B05.10 o la mutante Δbcftr1