Estudo das regioes heterocromáticas ricas em GC e aplicaçao da enzima de restriçao AluI em duas espécies de Astyanax(Pisces,Characidae) pertencentes ao primeiro planalto do Rio Iguaçu(PR)

Orientador: Marta Margarete CestariCo-orientador:Alberto Sérgio FenocchioFalta página 46 no originalMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias BiológicasResumo : A família eharacidae representa o maior grupo de peixes de água doce da América do Sul. O gênero Astyanax, pertencente a referida família, representa um táxon bem complexo, com numerosas formas, muitas delas bastante similares. Dados cariotípicos também mostram um alto grau de complexidade em algumas espécies deste gênero. Foram analisados duas populações de Astyanax sp. e provenientes do Alto Rio Iguaçu. Os indivíduos das duas populações são similares com relação ao número cromossômico (2n=50) e à coloração convencional (2 pares de metacêntricos, 13 de submetacêntricos, 4 de subtelocêntricos e 8 de acrocêntricos), entretanto são evidenciadas diferenças entre os padrões de RON, Banda e, eMA3 e de AluI entre as populações. A outra espécie estudada foi Astyanax sp. D, sendo que os indivíduos analisados apresentaram um número diplóide modal de 50 cromossomos. Dentre os animais estudados, um indivíduo apresentou 75 cromossomos (triplóide). O cariótipo destes animais apresentou 2 pares de cromossomos metacêntricos, 12 de submetacêntricos, 3 de subtelocêntricos, 8 de acrocêntricos. Através da técnica de impregnação pelo nitrato de prata foi evidenciada uma variabilidade, tanto inter quanto intraindividual, em relação a quantidade e a localização das RONs ativas. A heterocromatina revelada, através da técnica da banda e, mostrou-se distribuída, principalmente, nas regiões teloméricas de todos os cromossomos subtelocêntricos, e em grande parte dos cromossomos acrocêntricos. Os blocos e positivos encontrados demonstraram uma variação interindividual com relação ao número e localização das marcas, evidenciando ser este um caráter polimórfico. Em alguns pares de cromossomos acrocêntricos foram identificados blocos e+ interstlclals, os quais provavelmente são resultado de inversões paracêntricas. As regiões AgN03 + também se mostraram heterocromáticas. A enzima de restrição AluI e a Cromomicina A3 apresentaram um resultado parecido com o da Banda e. Comparando os dados deste trabalho com Astyanax sp. C, observa-se uma grande diferença na quantidade e localização da heterocromatina. Em vista dos resultados obtidos, pode-se dizer que os dados cariotípicos são uma ferramenta importante na discriminação de espeCles taxonomicamente problemáticas como os Astyanax pertencentes à Bacia do Rio Iguaçu

Estudo citogenético comparativo entre populaçoes de uma espécie de Astyanax (Characidae, Tetragonopterinae) endemica do Rio Iguaçu

O rio Iguaçu, caracterizado pelo alto endemismo relacionado à ictiofauna, possui pelo menos 8 espécies do gênero Astyanax: A. sp.A, A. sp. B, A. sp. C, A. sp. D, A. sp. E, A. sp. F e A. altiparanae. A espécie Astyanax sp. D vive em cabeceiras de pequenos rios. Foram feitas análises cromossômicas em A. sp.D de três populações provenientes de dois riachos da margem direita e um da margem esquerda do alto rio Iguaçu. Nas três localidades, os indivíduos analisados apresentaram um número diplóide modal de 50 cromossomos, distribuídos em 2 pares de cromossomos metacêntricos, 12 de submetacêntricos, 3 de subtelocêntricos e 8 de acrocêntricos (NF=84). Não foi detectado dimorfismo sexual cromossômico. Dentro de todas as populações foi verificada uma variação interindividual com relação ao número e localização de bandas heterocromáticas. Ao comparar os blocos C positivos das três localidades, estes se mostraram semelhantes. Através da mensuração das variações cromossômicas estruturais (inversões paracêntricas) identificadas pelo bandamento C, foi possível obter freqüências “alélicas” e “genotípicas” de dois pares cromossômicos polimórficos (18 e 19), sendo que cada par possui dois morfotipos. As freqüências, em todas as localidades, se mostraram concordantes com as proporções esperadas pelo equilíbrio de Hardy-Weinberg. Quando comparadas, as populações apresentaram freqüências “alélicas” e “genotípicas” estatisticamente similares, evidenciando semelhanças populacionais. A estatística-F foi usada para descrever uma possível estruturação entre as populações. Os valores obtidos através da análise de Fs t referente a dois pares cromossômicos polimórficos indicam que não há estruturação populacional, e que as populações provavelmente se comportam como uma s

Serological and molecular investigation of viral agents in free-living jaguars of the Pantanal wetlands, state of Mato Grosso, Brazil

Este estudo investigou a exposição de onças-pintadas de vida livre a agentes virais selecionados em duas unidades de conservação federais no Pantanal de Mato Grosso, Brasil. Para a análise desses agentes virais, a maioria de caráter zoonótico, foram utilizados métodos sorológicos e moleculares. Nenhuma das onze onças-pintadas examinadas foi positiva na técnica de real-time RT-PCR para a detecção molecular dos agentes da Influenza aviária e Febre do Nilo Ocidental (WNF). Somente um animal foi positivo sorologicamente para a o vírus da Encefalite Equina do Leste (EEE) pela Microtécnica de vírus neutralização em culturas de células VERO, sendo este o primeiro relato da exposição de onças-pintadas. Todos os animais examinados s foram negativos para o vírus da Encefalite Equina do Oeste (WEE) e Venezuelana (VEE). Amostras de soro colhidas de 11 onças-pintadas foram submetidas a adois testes distintos para a detecção de anticorpos contra o vírus da raiva (Teste Rápido de Inibição de Foco de Fluorescência – RFFIT e Microteste Simplificado de Inibição da Fluorescência - SFIMT), resultando em cinco animais positivos, dos quase dois positivos para cada teste e um positivo quando submetido aos dois testes sorológicos. Além disso, três das 14 amostras submetidas a técnica de soroneutralização foram positivas para a pesquisa de anticorpos contra o vírus da cinomose (CDV) e 15 amostras positivas das 17 analisadas para a pesquisa de anticorpos contra o parvovírus canino (CPV) foram identificadas pela técnica de Inibição da Hemaglutinação (HI). De acordo com os resultados deste estudo, é pouco provável que os agentes virais aqui analisados representem ameaça à população de onças-pintadas nesta região.This study investigates the exposure of free-living jaguars from two federal protected areas in the Pantanal of Mato Grosso, Brazil, to a variety viral agents. These viral agents, particularly causing zoonotic diseases, were analyzed using serological and molecular methods. None of the jaguars was positive by RT-PCR for the molecular detection of avian influenza and West Nile Fever (WNF). Only one animal was serologically positive for Eastern Equine Encephalitis (EEE) by virus neutralization test in VERO cell cultures, representing the first reported case of jaguar exposure to EEE virus. However, all the animals were negative for Western Equine Encephalitis (WEE) virus and Venezuelan Equine Encephalitis (VEE) virus. Eleven jaguars were tested by two tests for the detection of antibodies against rabies virus (Simplified Fluorescent Inhibition Microtest – SFIMT and Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test – RFFIT), resulting in five positive animals, two animals in each test and one in both serological tests. Furthermore, three out of 14 samples subjected to the neutralization test were positive for antibodies against canine distemper virus (CDV), and 15 out of 17 samples subjected to the hemagglutination-inhibition test (HI) were positive for antibodies against canine parvovirus (CPV). In view of the findings of this study, it is unlikely that the viruses examined here represent a threat to the jaguar populations in this region

Genome-wide signatures of complex introgression and adaptive evolution in the big cats.

The great cats of the genus Panthera comprise a recent radiation whose evolutionary history is poorly understood. Their rapid diversification poses challenges to resolving their phylogeny while offering opportunities to investigate the historical dynamics of adaptive divergence. We report the sequence, de novo assembly, and annotation of the jaguar (Panthera onca) genome, a novel genome sequence for the leopard (Panthera pardus), and comparative analyses encompassing all living Panthera species. Demographic reconstructions indicated that all of these species have experienced variable episodes of population decline during the Pleistocene, ultimately leading to small effective sizes in present-day genomes. We observed pervasive genealogical discordance across Panthera genomes, caused by both incomplete lineage sorting and complex patterns of historical interspecific hybridization. We identified multiple signatures of species-specific positive selection, affecting genes involved in craniofacial and limb development, protein metabolism, hypoxia, reproduction, pigmentation, and sensory perception. There was remarkable concordance in pathways enriched in genomic segments implicated in interspecies introgression and in positive selection, suggesting that these processes were connected. We tested this hypothesis by developing exome capture probes targeting ~19,000 Panthera genes and applying them to 30 wild-caught jaguars. We found at least two genes (DOCK3 and COL4A5, both related to optic nerve development) bearing significant signatures of interspecies introgression and within-species positive selection. These findings indicate that post-speciation admixture has contributed genetic material that facilitated the adaptive evolution of big cat lineages

Comparative cytogenetics among populations of Astyanax altiparanae (Characiformes, Characidae, Incertae sedis)

Cytogenetic data are presented for Astyanax altiparanae populations from three Brazilian hydrographic systems. The chromosomal data obtained in A. altiparanae support the hypothesis of diploid number conservation. However, small differences in the karyotype formula and number of nucleolar organizer regions were observed in these populations. The apparent karyotypical similarity among the studied populations strongly suggests a close relationship among them with some chromosomal divergences due to gene flow restriction

Citogenética de espécies de siluriformes da região de transposição do Rio Piumhi (MG)

At the beginnig of the 60 was concluded the building of the Furnas dam over the Rio Grande, wich belongs to Parana river watershed. When the gates of the hydroelectric were closed, a dike was built to contain the waters of the dam, in order to prevent the flooding of the city of Capitólio MG. However, this dike has dammed the river Piumhi, which, at that time, was an affluent of the Rio Grande. The Piumhi River was then diverted to São Francisco watershed. The present work aimed to characterizing, based on classic and molecular cytogenetic, some species of Siluriforms, actually found in the region of the transposition channel of the Piumhi River, to verify the occurrence of possible interrelationships between faunas of different watersheds, also realizing cytotaxonomic analysis. Were analysed the following species: Imparfinis schubarti with 18m + 34sm + 6st and RON simple interstitial, Cetopsorhamdia iheringi with 28m + 26sm + 4st and RON simple interstitial, Pimelodella vittata with 16m + 22sm + 8st and RON simple terminal, Rhamdia sp. A aff. R. quelen with 26m + 16sm + 14st + 2a and RON simple terminal, Rhamdia sp. B aff. R. quelen with 28m + 20sm + 10st and RON simple interstitial, Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala 12m + 30sm + 14st and RON simple interstitial, Trichomycterus brasiliensis with 34m + 18sm + 2sm and RON simple interstitial, Pimelodus pohli with 28m + 16sm + 10st +2a with RON simple terminal and Parauchenipterus galeatus with 26m + 16sm + 14st + 8a. Classical and molecular cytogenetic data (rDNA 18S e 5S) obtained to the species Imparfinis schubarti, Cetopsorhamdia iheringi, Pimelodella vittata, Rhamdia sp. A aff. R. quelen, Rhamdia sp. B aff. R. quelen and Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala, in comparative analysis with other results available in literature, corroborates with the traditional taxonomic literature of Heptapteridae family, including the formation of subclade Nemuroglanis. The results led to considerations about aspects of the taxonomic species, as well as possible relations of these with the transposition of the river Piumhi.Universidade Federal de Sao CarlosNo início dos anos 60 foi concluída a construção da represa de Furnas sobre o rio Grande, bacia do rio Paraná. Quando as comportas da usina hidrelétrica foram fechadas, um dique foi construído para conter as águas da represa, a fim de evitar o alagamento da cidade de Capitólio (MG). Entretanto, esse dique represou as águas do rio Piumhi que, naquela época, era um dos afluentes do rio Grande. O rio Piumhi foi então desviado para a bacia do rio São Francisco. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar, com base na citogenética clássica e molecular, algumas espécies de Siluriformes atualmente encontradas na região do canal de transposição do rio Piumhi, com o intuito de verificar a ocorrência de possíveis inter-relações entre faunas de bacias distintas, além de realizar analises citotaxonômicas. Foram analisadas as espécies: Imparfinis schubarti com 18m + 34 sm + 6st e RON simples intersticial, Cetopsorhamdia iheringi com 28m + 26sm + 4st e RON simples intersticial, Pimelodella vittata com 16m + 22sm + 8st e RON simples terminal, Rhamdia sp. A aff. R. quelen com 26m + 16sm + 14st + 2a e RON simples terminal, Rhamdia sp. B aff. R. quelen com 28m + 20sm + 10st e RON simples intersticial, Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala 12m + 30sm + 14st e RON simples instersticial, Trichomycterus brasiliensis com 34m + 18sm + 2sm e RON simples instersticial , Pimelodus pohli com 28m + 16sm + 10st + 2a com RON simples terminal e Parauchenipterus galeatus com 26m + 16sm + 14st + 8a. Os dados citogenéticos clássicos e moleculares (rDNA 18S e 5S) obtidos para as espécies Imparfinis schubarti, Cetopsorhamdia iheringi, Pimelodella vittata, Rhamdia sp. A aff. R. quelen, Rhamdia sp. B aff. R. quelen e Rhamdiopsis sp. cf. R. microcephala, em análise comparativa com outras resultados disponíveis na literatura, corroboram com a literatura taxonômica tradicional da família Heptapteridae, inclusive com a formação do subclado Nemuroglanis. Os resultados obtidos permitiram tecer considerações sobre aspectos taxonômicos das espécies estudadas, bem como as possíveis relações destas com a transposição do rio Piumhi

Cytogenetic study of heptapterids (Teleostei, Siluriformes) with particular respect to the Nemuroglanis subclade

The catfish family Heptapteridae (order Siluriformes) is endemic to the Neotropics and is one of the most common of the fish families in small bodies of water. Although over 200 species have been identified in this family, very few have been characterized cytogenetically. Here, we analyze the chromosome genomes of four species of Heptapteridae: Cetopsorhamdia iheringi (Schubart & Gomes, 1959), 2n = 58, comprising 28 metacentric (m) + 26 submetacentric (sm) + 4 subtelomeric (st) chromosomes; Pimelodella vittata (Lütken, 1874), 2n = 46, comprising 16m + 22sm + 8st; Rhamdia prope quelen (Quoy & Gaimard, 1824), 2n = 58 comprising 26m + 16sm + 14st + 2 acrocentric; and Rhamdiopsis prope microcephala (Lütken, 1874), 2n = 56, comprising 12m + 30sm + 14st. The nucleolus organizer regions (NORs) were located in a single chromosome pair in all species. The two species that belonged to the subclade Nemuroglanis, C. iheringi and R. prope quelen, had a diploid chromosome number of 58 and an interstitial NOR adjacent to a C+ block located on one of the larger chromosome pairs in the complement. Our results from conventional cytogenetic techniques in combination with FISH using 18S and 5S rDNA probes corroborated the taxonomical hypothesis for the formation of the Nemuroglanis subclade