Single Nucleotide Polymorphisms of the IZUMO Gene in Male Infertile Patients

IZUMOは精子頭部の膜表面に局在し、マウスの精子と卵の受精に必須なタンパク質である。日本人におけるIZUMO遺伝子の多型と精子形成の異常の関係を解析するために、我々は妊孕性の確認されたボランティアの男性１７２人と男性不妊症患者８９２人のゲノムDNAを用いてIZUMO遺伝子の多型と変異の検索を行った。ABI‐PRISM 3730xl Genetic Analyzer and SeqScape software （Applied Biosystems社）を用い解析を行った結果、妊孕性の確認されたボランティアの男性では検出されない一塩基置換を男性不妊症患者に見出した。初回の探索において、男性不妊症患者に４つの一塩基多型（４１７T>G（Cys１３９Trp），５８９A>T（Ser１９７Cys），９３９T>A（Phe３１３Leu），９４４G>A（Arg３１５Gln））が有意に検出された。これらの一塩基置換は、別のプライマーセットを用いた塩基配列解析では検出することができなかったが、一塩基多型と男性不妊症の関係の解析において重要な標的候補と考えられる。IZUMO is a surface protein on sperm and essential for egg fusion in mice. To investigate the possible association between variations in the IZUMO gene and impaired spermatogenesis in Japanese males, we screened for mutations in the human IZUMO gene using DNA from 892 sterile male patients and 172 proven-fertile male volunteers. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) were identified in the heterozygous state in the infertile patients, and neither variant was identified in fertile subjects using an ABI-PRISM 3730xl Genetic Analyzer and SeqScape software (Applied Biosystems). Four single nucleotide polymorphisms (SNPs), 417 T>G (Cys 139 Trp), 589 A>T (Ser 197 Cys), 939 T>A (Phe 313 Leu), and 944 G>A (Arg 315 Gln), were found significantly more often in infertile subjects than in fertile controls in the first screening. Otherwise, the four SNPs were not detected by direct sequencing using the other primers. These results show that four SNPs exist as an analytical target of SNPs that associated with the male infertility n the IZUMO gene

公衆衛生看護技術論演習及び実習のカリキュラム改正における保健師学生の実践力向上効果：ミニマム・リクワイアメンツを活用して

報告Reports　本学では、2009 年の保健師助産師看護師法の改正に伴い、2012 年度入学生以降、公衆衛生看護課程の学部選択制を導入し、厚生労働省の示す、保健師学生が保健師活動に求められる一定水準の技術習得を備えることができるよう公衆衛生看護技術論演習（以下、技術論演習）並びに公衆衛生看護学実習（以下、実習）カリキュラムの改正をおこなった。　保健師の援助技術において家庭訪問は、対象である住民の生活実態に迫るという、重要かつ象徴的活動方法である。しかし学生の実習では１例しか同行訪問を経験していないため、深刻な事例を担当することへの不安や戸惑いが大きく、新卒の保健師は訪問が苦手と報告されるように、学部教育の課題といえる。そこで本研究では、個人や家族を対象とした実践能力に焦点を絞り、授業評価の一環として、学生の卒業時の到達度を分析・評価し、学生指導の今後の課題や対策を検討すると共に、今後の学生指導への示唆を得ることを目的とした。　調査内容は、全国保健師教育機関協議会が卒業時までに必ず修得する最低限の技術として作成した、保健師教育におけるミニマム・リクワイアメンツ（以下、MR）の５つの実践能力のうち、「実践能力Ⅰ」個人・家族を対象とした地域の健康課題の明確化と計画・立案する能力に着目した。さらに行動目標を、演習並びに実習で実践可能な「家庭訪問」に焦点化し、自己評価が可能な12 の大項目、38 の行動目標項目を抽出して作成し、到達度を「十分達成できた」「おおよそ達成できた」「なんとか達成できた」「全く達成できなかった」の４件法で回答を求めた。分析対象者は、本学の看護学部公衆衛生看護課程を履修し、技術論演習及び実習修了後に自己評価を提出した学生74 名のうち本研究の参加同意を得た65 名であった。　技術論演習と実習終了後のMR 自己評価の結果を比較・分析したところ、全38 行動目標のうち、12 項目に有意な到達レベルの改善が認められた。　本研究により、本学の公衆衛生看護カリキュラム改正は、卒業時到達目標に到達ができ、学生の実践力向上に繋がることが示唆された

Ａ大学における保健師学生の地域診断能力の評価：ミニマム・リクワイアメンツを活用して

報告Reports　本研究は「保健師教育におけるミニマム・リクワイアメンツ保健師教育機関協議会版（2014）（以下、MR）」を活用し、地域診断から事業化に関する技術の行動目標の達成度を、学生の自己評価を用いて実習後と総合演習後で比較し、実習・演習の教育評価を行うことを目的とする。到達割合の全28 小項目の平均は、84.4％（実習後）から、94.1％（総合演習後）と9.7 ポイント上昇した。28 小項目の到達割合を実習後と総合演習後で比較すると、実習後に９割に達しなかった小項目は22 項目（78.6％）あったが、総合演習後は全項目で上昇がみられ、28 項目すべてが9 割を超える到達割合を示した。実習後と総合演習後で到達割合に有意差があった小項目は、19 小項目（67.9％）であった。　以上の結果より、公衆衛生看護学実習後、学内で公衆衛生看護総合演習として地域診断のプロセスを再考し思考の整理をすることで、目標が達成ができ地域診断能力の向上につながったと思われる。そして実習、演習の連動した授業内容は評価を得たと考える

Intrinsic Promoter Activities of Primary DNA Sequences in the Human Genome

In order to understand an overview of promoter activities intrinsic to primary DNA sequences in the human genome within a particular cell type, we carried out systematic quantitative luciferase assays of DNA fragments corresponding to putative promoters for 472 human genes which are expressed in HEK (human embryonic kidney epithelial) 293 cells. We observed the promoter activities of them were distributed in a bimodal manner; putative promoters belonging to the first group (with strong promoter activities) were designated as P1 and the latter (with weak promoter activities) as P2. The frequencies of the TATA-boxes, the CpG islands, and the overall G + C-contents were significantly different between these two populations, indicating there are two separate groups of promoters. Interestingly, similar analysis using 251 randomly isolated genomic DNA fragments showed that P2-type promoter occasionally occurs within the human genome. Furthermore, 35 DNA fragments corresponding to putative promoters of non-protein-coding transcripts (ncRNAs) shared similar features with the P2 in both promoter activities and sequence compositions. At least, a part of ncRNAs, which have been massively identified by full-length cDNA projects with no functional relevance inferred, may have originated from those sporadic promoter activities of primary DNA sequences inherent to the human genome

Stable and transient transformation, and a promoter assay in the selective lignin-degrading fungus, Ceriporiopsis subvermispora

A genetic transformation system was developed for the selective white rot basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora using a modified protocol with polyethylene glycol and CaCl₂ treatment of the protoplasts and plasmids harboring recombinant hygromycin phosphotransferase (hph) driven by a homologous promoter. During repeated transfer on fresh potato dextrose agar plates containing 100 µg/ml hygromycin B, most transformants lost drug resistance, while the remaining isolates showed stable resistance over five transfers. No drug-resistant colonies appeared in control experiments without DNA or using a promoter-less derivative of the plasmid, indicating that a transient expression of the recombinant hph was driven by the promoter sequence in these unstable drug-resistant transformants. Southern blot analysis of the stable transformants revealed random integration of the plasmid DNA fragment in the chromosome at different copy numbers. This transformation system yielding mostly transient transformants was successfully used for promoter assay experiments, and only a 141-bp fragment was found to be essential for the basic promoter function of glyceraldehyde dehydrogenase gene (gpd) in this fungus. Subsequent mutational analyses suggested that a TATAA sequence is important for the basic promoter function of gpd gene. The promoter assay system will enable the functional analysis of gene expression control sequences quickly and easily, mostly in the absence of undesirable effects from differences in copy number and chromosomal position of an integrated reporter gene among stable transformants