Use of flow cytometry for the adhesion analysis of Streptococcus pyogenes mutant strains to epithelial cells: investigation of the possible role of surface pullulanase and cysteine protease, and the transcriptional regulator Rgg

BACKGROUND: Flow cytometry based adherence assay is a potentially powerful but little used method in the study of bacterial binding to host structures. We have previously characterized a glycoprotein-binding activity in Streptococcus pyogenes called 'strepadhesin' binding to thyroglobulin, submaxillar mucin, fetuin and asialofetuin. We have identified surface-associated pullulanase (PulA) and cysteine protease (SpeB) as carriers of strepadhesin activity. In the present paper, we investigated the use of flow cytometry as a method to study the binding of Rgg, SpeB and PulA knock-out strains to cultured human epithelial cells. RESULTS: Streptococcal mutants were readily labelled with CFDA-SE and their binding to epithelial cells could be effectively studied by flow cytometry. A strain deficient in Rgg expression showed increased binding to the analyzed epithelial cell lines of various origin. Inactivation of SpeB had no effect on the adhesion, while PulA knock-out strains displayed decreased binding to the cell lines. CONCLUSION: These results suggest that the flow cytometric assay is a valuable tool in the analysis of S. pyogenes adherence to host cells. It appears to be an efficient and sensitive tool for the characterization of interactions between the bacteria and the host at the molecular level. The results also suggest a role for Rgg regulated surface molecules, like PulA, in the adhesion of S. pyogenes to host cells

Julkisen velan kehitys Suomessa ja siihen vaikuttavat tekijät

Keskustelu julkisen talouden velkaantumisesta on lisääntynyt koronapandemian myötä. Julkinen velka on noussut kaikkialla talouden taantuman ja mittavien koronaepidemian vuoksi toteutettujen tukitoimien myötä. Raportissa kuvataan julkiseen velkasuhteeseen vaikuttavia tekijöitä ja niiden vaikutusta velkasuhteen kehitykseen Suomessa menneinä vuosikymmeninä. Velkasuhteen kehitykseen vaikuttavat erityisesti julkisen talouden perusjäämä, korkomenot sekä talouskasvu. Suomen velkasuhteen supistumista auttoi 1990-luvun laman jälkeen nopea talouskasvu sekä ylijäämäinen julkinen talous, vaikka korot olivat korkealla. Finanssikriisin jälkeen julkinen talous on muuttunut kroonisesti alijäämäiseksi ja talouskasvu finanssikriisiä edeltänyttä aikaa hitaammaksi. Velkaantumista on hillinnyt madaltuneet korot. Julkisen talouden tila 2020-luvulla vaikuttaa heikommalta toisinnolta 2010-luvusta, vaikka kehitystä lievittää suotuisa korkotilanne. Velkaantuminen uhkaa jatkua Suomessa myös tulevaisuudessa, sillä väestö ikääntyy, mikä kasvattaa automaattisesti julkisia menoja. Raportissa tarkastellaan velkasuhteen pidemmän aikavälin kehitystä muuttamalla oletuksia talouskasvusta, koroista ja julkisen talouden tasapainosta. Velkasuhteen kasvupainetta pidemmällä aikavälillä voidaan tehokkaasti pienentää BKT:ta pysyvästi kasvattavilla rakenteellisilla uudistuksilla tai perusjäämää suoraan vahvistavilla toimilla. Koron ja talouskasvun erotus on vaihdellut Suomessa viime vuosina ja vaihtelu tulee jatkumaan myös jatkossa. Korkeampi velkasuhde altistaa Suomen tämän vaihtelun haitallisille vaikutuksille aiempaa enemmän. Julkaisun sisällöstä vastaavat tiedon tuottajat, eikä tekstisisältö välttämättä edusta valtiovarainministeriön näkemystä

Use of CFSE staining of borreliae in studies on the interaction between borreliae and human neutrophils

BACKGROUND: Species of the tick-transmitted spirochete group Borrelia burgdorferi sensu lato (B. burgdorferi) cause Lyme borreliosis. Acute borrelial infection of the skin has unusual characteristics with only a mild local inflammatory response suggesting that the interaction between borreliae and the cells of the first-line defence might differ from that of other bacteria. It has been reported that human neutrophils phagocytose motile borreliae through an unconventional mechanism (tube phagocytosis) which is not observed with non-motile borreliae. Therefore, it would be of great interest to visualise the bacteria by a method not affecting motility and viability of borreliae to be able to study their interaction with the cells of the innate immunity. Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester (CFSE) labelling has been previously used for studying the adhesion of labelled bacteria to host cells and the uptake of labelled substrates by various cells using flow cytometry. RESULTS: In this study, CFSE was shown to efficiently stain different genospecies of B. burgdorferi without affecting bacterial viability or motility. Use of CFSE staining allowed subsequent quantification of borreliae associated with human neutrophils with flow cytometry and confocal microscopy. As a result, no difference in association between different borrelial genospecies (Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii, Borrelia garinii), or between borreliae and the pyogenic bacterium Streptococcus pyogenes, with neutrophils could be detected. Borrelial virulence, on the other hand, affected association with neutrophils, with significantly higher association of a non-virulent mutant B. burgdorferi sensu stricto strain compared to the parental virulent wild type strain. CONCLUSION: These results suggest that the flow cytometric assay using CFSE labelled borreliae is a valuable tool in the analysis of the interaction between borreliae and human neutrophils. The results also indicate a clear difference in the association with neutrophils between virulent and non-virulent borrelial strains

Katsaus valtion taloudellisiin vastuisiin ja riskeihin, syksy 2020

Valtion vastuut ovat kasvaneet pitkään. Valtionvelka oli vielä finanssikriisin kynnyksellä vuonna 2008 54 mrd. euroa. Vuoden 2019 lopussa se ylitti 106 mrd.. Vastaavalla ajanjaksolla takausvastuut ovat kasvaneet noin 37 mrd. eurolla ollen 60,2 mrd. vuonna 2019. Viime vuosien suotuisa talouskehitys koki keväällä äkkipysäyksen koronakriisin myötä. Talous lähti supistumaan, työttömyys kasvamaan ja työllisyys heikentymään. Samaan aikaan valtio on erilaisin tukitoimenpitein pyrkinyt lieventämään kriisin haittoja talouteen. Tämä on kuitenkin lisännyt merkittävästi valtion vastuita, jotka olivat jo valmiiksi kasvu-uralla. Valtion riskiasemaa arvioitaessa myös ns. piilevillä vastuilla on merkitystä. Ne eivät ole valtiota oikeudellisesti velvoittavia, mutta yhteiskunnallisten tekijöiden takia valtion odotetaan kantavan niistä vastuun. Yksi keskeinen piilevä vastuu liittyy paikallishallintoon. Myös sen vastuut ovat kasvaneet huomattavasti viime vuosina. Pelkästään vuonna 2019 kuntien lainamäärä kasvoi 1,7 mrd. eurolla lainakannan ollessa viime vuoden lopussa yli 18 mrd. euroa. Valtion vastuiden kasvun hillitseminen on osoittautunut viime vuosina vaikeaksi verrattain suotuisasta talouskehityksestä huolimatta. Koronakriisin jälkeisinä vuosina vastuiden kasvun taittaminen on vieläkin haastavampaa. Tuleviin kriiseihin varautumiseksi valtion riskinkantokyvyn parantaminen on kuitenkin tärkeää

Borrelia burgdorferi specific serum and cerebrospinal fluid antibodies in Lyme neuroborreliosis

Publisher Copyright: © 2022 The Author(s)We used definite Lyme neuroborreliosis (LNB) adult patient acute and convalescent phase serum (n = 63 and 61, respectively) and cerebrospinal fluid (CSF; acute n = 63, 3 weeks timepoint n = 41) samples to characterize Borrelia burgdorferi specific antibody responses in patient subgroups categorized by demographics, infection manifestation and phase, infecting B. burgdorferi genospecies, received antibiotic treatments, and treatment outcome. B. burgdorferi antibodies were analyzed using 4 different assays incorporating a large array of antigens. We observed that B. burgdorferi specific serum antibodies show a universal, antigen independent declining trend after antibiotic treatment of LNB at 1 year. Antibodies declined similarly among women and men over time, and the decline was independent of patient age. The antibody responses were independent of the predominant LNB manifestation, treatment received by the patient, infecting B. burgdorferi genospecies, or the subjective improvement experienced by the patients. Finally, the antibody specificities in CSF reflected the specificities observed in serum samples.Peer reviewe

Atmospheric impact of abandoned boreal organic agricultural soils depends on hydrological conditions

Peer reviewe

Toisintokuume : Infektio, joka tulee huomioida maahantulijan kuumetaudin erotusdiagnostiikassa

English summaryPeer reviewe

C6 peptide enzyme immunoassay in Lyme borreliosis serology

The cut-off values used in C6 peptide-based enzyme immunoassay (EIA), a widely used test in Lyme borreliosis (LB) serology, have not been thoroughly analysed. The objective of the study was to examine the performance of the C6 EIA, and to determine optimal cut-off values for the test. The analysed data contained results of 1368 serum samples. C6 EIA index values were compared statistically with the immunoblot (IB) test results. The identified cut-off values were further tested in a well-defined LB patient cohort. Cut-off value 1.6 appeared to be optimal when C6 EIA was used as a stand-alone test. When using C6 EIA as the first-tier test, the optimal cut-off values were 0.9 and 2.4 for negative and positive results. When C6 EIA was used as a second-tier test, samples yielding C6 index values >= 3.0 could be considered positive. The identified cut-off values had also a high sensitivity to identify seropositivity among definite LB patients. The identified cut-off values refine the role of C6 EIA in LB serology. Importantly, the use of C6 EIA leads to a reduction in the number of samples that need to be analysed using an IB, thus also reducing the costs. Two alternative workflows for LB serology including the C6 EIA are suggested.Peer reviewe