Maintaining Identity within Chaos

"Epithelial wound healing is an inherent ability of all organisms to deal with aggressions from the surrounding environment and maintain tissue barrier integrity. Wounds can result from accidental trauma, surgery or various pathological conditions. Independently on the cause, all wounds need to be properly solved to avoid complications, ranging from infection to fibrosis and tumour initiation. Understanding the cellular and molecular basis of wound repair is an important asset for biomedical research. The process of wound healing is attained in a highly regulated and efficient manner to ensure correct return to homeostatic conditions.(...)

Forma selvagem e formas mutantes da fenilalanina hidroxilase humana (hPAH) recombinante:avaliação de interacções com diferentes chaperones moleculares

Tese de mestrado, Biologia (Biologia Molecular e Genética), 2008, Faculdade de Ciências, Universidade de LisboaOs chaperones moleculares desempenham um papel crucial nos vários processos celulares relacionados com a aquisição e manutenção da conformação proteica, sendo por isso peças importantes na patogénese das doenças conformacionais, nomeadamente da fenilcetonúria (PKU), uma doença genética causada por uma deficiente actividade da fenilalanina hidroxilase (hPAH). Embora seja presentemente reconhecido que a maior parte das proteínas hPAH mutantes apresentam alterações na sua conformação, são ainda escassos os conhecimentos acerca das interacções entre estas proteínas e os chaperones moleculares. Utilizando um sistema procariota, a forma selvagem e as formas de hPAH mutantes I65T, R261, R270K e V388M foram co-expressas com os sistemas de chaperones moleculares GroESL, DnaKJ e DnaKJ/GrpE. Após purificação, as proteínas hPAH recombinantes foram caracterizadas relativamente à quantidade obtida, actividade enzimática e perfil de oligomerização. A mesma estratégia experimental foi utilizada para estudar o efeito da adição do chaperone químico glicerol sobre as proteínas hPAH mutantes. Os resultados obtidos indicam que a co-expressão dos chaperones moleculares, embora induza um aumento das proteínas totais da célula, não resulta num aumento do rendimento das proteínas hPAH mutantes. No entanto, a presença de GroESL conduziu a um aumento da actividade enzimática das formas mutantes que variou entre 1,3 (I65T) e 2,8 vezes (R261Q). Na presença do sistema DnaKJ, apenas as formas mutantes I65T e R270K apresentaram um aumento de actividade de 1,3 e 2,6 vezes, respectivamente. Este aumento da actividade não foi, no entanto, acompanhado por incremento na percentagem dos tetrâmeros. Curiosamente, não foi possível observar um efeito aditivo após adição de glicerol ao sistema de co-expressão. Os dados obtidos indicam que, embora o sistema GroESL não apresente especificidade relativamente às proteínas mutantes, o efeito do sistema DnaKJ será dependente da forma mutante. Adicionalmente, os chaperones moleculares não parecem estar envolvidos no processo de montagem pós-tradução da estrutura tetramérica da proteína. Finalmente, as interacções que ocorram entre as proteínas mutantes e os chaperones moleculares não serão estabilizadas pela presença de chaperones químicos.Molecular chaperones play a crucial role in the several celular processes related to the acquisition and maintenance of protein folding, being important pieces in the pathogenesis of conformational diseases, namely phenylketonuria (PKU), a genetic disorder caused by a deficient activity of phenylalanine hydroxylase (hPAH). Although it is now recognized that most of the hPAH mutant proteins present conformational changes, there is a lack of knowledge concerning the interactions between these proteins and molecular chaperones. Using a prokaryotic system, the wild type hPAH and the mutant forms I65T, R261Q, R270K and V388M were co-expressed with the molecular chaperone systems GroESL, DnaKJ and DnaKJ/GrpE. After purification, the yield, activity and oligomerization profile of hPAH recombinant proteins were characterized. The same experimental strategy was used for the study of the effect of the chemical chaperone glycerol on the hPAH mutant proteins. The results indicate that co-expression of molecular chaperones, although induci in the yield of the purified mutant hPAH enzymes. However, in the presence of GroESL, the enzyme activity of I65T and R261Q presented an increment of 1.3 and 2.8 fold, respectively. A similar result was obtained in the presence of DnaKJ system, where a 1.3 and 2.6 fold increase was observed for the mutant forms I65T and R270K, respectively. Contrarily to the expected, an higher level of tetrameric forms were not obtained. Furthermore, after the addition of glycerol to the co-expression system, an additive effect was not observed. The obtained data indicate that, although the GroESL system interactions are not mutant-specific, contrarily to the effect of the DnaKJ system (mutant dependent). Additionally, the molecular chaperones do not seem to be involved in the process of post-translation assembly of the tetrameric structure of the protein. Finally, the interactions that occur between the mutant protein and molecular chaperone are not stabilized by the presence of a chemical chaperone

Thermal Behaviour Studies of Solid State Lanthanide (III) and Yttrium (III) Compounds of Cinnamylidenepyruvic Acid in an Atmosphere of Air

Compostos Ln-CP foram preparados no estado sólido, onde Ln representa os lantanídios trivalentes (exceto promécio) e itrio e CP é o cinamalpiruvato. As técnicas termogravimetria (TG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), difratometria de raios X e complexometria foram utilizadas para caracterizar e estudar o comportamento térmico destes compostos. Os resultados proporcionaram informações com respeito a desidratação, estabilidade e decomposição térmica.Solid state Ln-CP compounds, where Ln represents trivalent lanthanides (except for promethium) and yttrium, and CP is cinnamylidenepyruvate, were prepared. Thermogravimetry (TG), differential scanning calorimetry (DSC), X-ray diffraction powder patterns and complexometry were used to characterize and to study the thermal behaviour of these compounds. The results provide information about dehydration, thermal stability and thermal decomposition

Tascas, Taverns and Botequins in Lisbon and Rio de Janeiro: from commoner to upper classes (19th-21st centuries)

Dissertação de Mestrado em Alimentação: Fontes, Cultura e Sociedade apresentada à Faculdade de LetrasEste trabalho tem como objeto o processo de valorização das tascas e tabernas de Lisboa e dos botequins do Rio de Janeiro, entre os séculos XIX e XXI. Antes reservados à plebe, eram ambientes rejeitados pelas elites, que os tinham como lugares indignos de serem frequentados, considerados verdadeiros "templos da vadiagem", e estavam sob constante vigilância policial. Por meio da análise de publicações da imprensa periódica das duas cidades, assim como de livros temáticos sobre essas casas de restauração, como guias turísticos e livros de receitas, buscamos demonstrar a mudança de discurso em relação a esses espaços de comensalidade popular. Uma vez que estes estabelecimentos se encontram atualmente em pleno processo de extinção, os movimentos de valorização são abordados neste estudo enquanto fenômeno nostálgico, qual seja, a tentativa de recuperação de uma memória definidora das identidades dos moradores de Rio e Lisboa. Tais fenômenos se desenrolam nas duas cidades, ao longo do século XX, e encontram seu auge entre finais do século passado e os dias de hoje, em que tabernas, tascas e botequins são reconhecidos como locais importantes para a cultura urbana local, seja pelo poder público, seja pelo seu entorno social. A análise feita permitiu demonstrar que o reconhecimento do valor cultural das casas tradicionais leva ao surgimento de novos bares e restaurantes destinados às classes média e alta cuja decoração e gastronomia são explicitamente inspiradas nos estabelecimentos antigos e populares.The object of this work is the process of valuing the taverns and the "tascas" (traditional Portuguese popular restaurants) in Lisbon and the “botequins” (traditional Brazilian taverns) in Rio de Janeiro, between the 19th and 21st centuries. Previously reserved for the plebs, they were rejected by the elites, who saw them as unworthy places to be frequented, and were under constant surveillance by the State. Through the analysis of publications in the periodical press of the two cities, as well as thematic books about these restaurants, such as tourist guides and cookbooks, we seek to demonstrate the change in thinking (and discourses) in relation to these spaces of popular dining. Since these taverns are currently in the process of extinction, the appreciation movements are addressed in this study as a nostalgic phenomenon, that is, the attempt to recover a memory that defines the identities of the residents of Rio and Lisbon. Such phenomena unfold in both cities throughout the 20th century, and reach their peak between the end of the last century and the present day, in which taverns, “tascas” and “botequins” are recognized as important places for local urban culture, whether by power public or by society. As demonstrated in this investigation, the recognition of the cultural value of traditional houses leads to the emergence of new bars and restaurants aimed at the middle and upper classes, whose decoration and cuisine are explicitly inspired by old and popular establishments

Qualidade espermática em paciente com infertilidade de origem desconhecida.

Dissertação de Mestrado em Bioquímica apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaA infertilidade é uma doença cuja incidência cresceu de tal forma que se tornou um dos mais graves problemas sociais, especialmente nos países desenvolvidos. Embora revele o problema de um casal, sabe-se que a contribuição de homens e mulheres varia de acordo com o fator masculino, sendo este responsável por quase 50% dos casos. No entanto, em metade deles, não é possível identificar nenhuma causa, a chamada infertilidade masculina de origem desconhecida, que pode ser dividida em infertilidade masculina idiopática (DI) e inexplicada (UMI). Estes subtipos diferem apenas na análise seminal: normal na UMI e com pelo menos um parâmetro alterado na ID. Esta análise, embora a pedra angular para o diagnóstico de infertilidade masculina, é limitada, nomeadamente na previsão da funcionalidade espermática e capacidade de fertilização. Isto, aliado à falta de caracterização e às contradições da literatura em relação a esses subtipos de Infertilidade de origem desconhecida, suscita a necessidade de incluir a avaliação de aspetos funcionais mais confiáveis na análise seminal. Este projeto visa atender a essa necessidade por meio de uma análise inovadora, integrada e completa num grupo bem caracterizado de pacientes com ID e UMI. Para isso, foram obtidas amostras de dadores saudáveis (grupo CTRL), pacientes idiopáticos (grupo DI) e pacientes inexplicados (grupo UMI) e, foram avaliadas quanto a parâmetros funcionais e bioenergéticos. Foram avaliados também alguns dados de estilo de vida bem como o perfil psicológico dos pacientes e algum resultado de técnicas de procriação medicamente assistida. Por outro lado, a otimização de técnicas de proteómica foi utilizada para identificar e quantificar várias proteínas presentes nos espermatozoides que eventualmente poderão contribuir para um diagnóstico de base molecular. No geral, para quase todos os parâmetros avaliados o mesmo padrão foi encontrado, com o grupo ID apresentando os piores resultados em vários aspetos funcionais, revelando uma funcionalidade comprometida a vários níveis. Por outro lado, o grupo UMI mostrou resultados muito semelhantes aos do grupo controlo, surgindo um novo desafio que é entender como esses dois grupos variam do ponto de vista funcional.Infertility is a disease whose incidence has grown in such a way that it has become one of the most serious social problems, especially in developed countries. Although representing a couples’ problem, the contribution of males and females to is known to vary, with male factor being responsible for nearly 50% of cases. Yet, in half of them no cause can be identified, the so-called male infertility of unknown origin, that can be divided in idiopathic (ID) and unexplained male infertility (UMI). These subtypes only differ in seminal analysis parameters: normal in UMI and with at least one altered parameter in ID. This analysis, though the cornerstone for male infertility diagnosis, is limited namely in the prediction of sperm functionality and fertilization capacity. This, allied with the lack of characterization and the contradictions in the literature regarding these subtypes of Infertility of unknown origin, suggest the need to include the evaluation of more reliable functional aspects in seminal analysis for these cases. Our project aims to meet that need through an innovative, integrated and complete analysis in a well- characterized group of patients with ID and UMI. For this purpose, samples from healthy donors (CTRL group), idiopathic (ID group) and unexplained infertility patients (UMI group) were obtained and, after gradient centrifugation, were evaluated for functional and bioenergetics parameters. The lifestyle data and the psychological profile of our patients as well as some fertility outcomes were also evaluated, and we also started optimization for a proteomic analysis, to identify and quantify sperm proteins that may be useful in a more molecular-based diagnosis. Overall, for almost all parameters evaluated the same pattern was found, with the ID group presenting the worst results in several functional aspects, therefore revealing compromised sperm functionality at several levels. On the other side, the UMI group showed very similar results to that of the control group, raising a new challenge to understand how these two groups vary at a functional level.Outro - POCI-01-0145-FEDER 028599 (INFERT 2 EXPLAIN

Thermal Behaviour Studies of Solid State Lanthanide (III) and Yttrium (III) Compounds of Cinnamylidenepyruvic Acid in an Atmosphere of Air

Solid state Ln-CP compounds, where Ln represents trivalent lanthanides (except for promethium) and yttrium, and CP is cinnamylidenepyruvate, were prepared. Thermogravimetry (TG), differential scanning calorimetry (DSC), X-ray diffraction powder patterns and complexometry were used to characterize and to study the thermal behaviour of these compounds. The results provide information about dehydration, thermal stability and thermal decomposition

Systematic analysis of RhoGEF/GAP localizations uncovers regulators of mechanosensing and junction formation during epithelial cell division

International audienceCell proliferation is central to epithelial tissue development, repair, and homeostasis. During cell division, small RhoGTPases control both actomyosin dynamics and cell-cell junction remodeling to faithfully segregate the genome while maintaining tissue polarity and integrity. To decipher the mechanisms of RhoGTPase spatiotemporal regulation during epithelial cell division, we generated a transgenic fluorescently tagged library for the 48 Drosophila Rho guanine exchange factors (RhoGEFs) and GTPase-activating proteins (GAPs), and we systematically characterized their endogenous distributions by time-lapse microscopy. Therefore, we unveiled candidate regulators of the interplay between actomyosin and junctional dynamics during epithelial cell division. Building on these findings, we established that the conserved RhoGEF Cysts and RhoGEF4 play sequential and distinct roles to couple cytokinesis with de novo junction formation. During ring contraction, Cysts via Rho1 participates in the neighbor mechanosensing response, promoting daughter-daughter cell membrane juxtaposition in preparation to de novo junction formation. Subsequently and upon midbody formation, RhoGEF4 via Rac acts in the dividing cell to ensure the withdrawal of the neighboring cell membranes, thus controlling de novo junction length and cell-cell arrangements upon cytokinesis. Altogether, our findings delineate how the RhoGTPases Rho and Rac are locally and temporally activated during epithelial cytokinesis, highlighting the RhoGEF/GAP library as a key resource to understand the broad range of biological processes regulated by RhoGTPases