Caracterización del agente etiológico de la necrosis hepatopancreatica (nhp) y su impacto en cultivos de camarón Litopenaeus vannamei en Sonora, México

La necrosis hepatopancreatica (NHP) es una seria enfermedad que afecta los cultivos de camarón Litopenaeus vannamei Boone, 1931, desde Texas hasta Centro y Sudamérica. En este trabajo se realizó el primer monitoreo sistemático durante el ciclo 2004 en seis granjas de Sonora, debido a la falta de estudios sobre infecciones causadas por rickettsias en L. vannamei. El diagnóstico presuntivo se efectuó por microscopia de luz (ML, análisis en fresco y cortes histológicos con hematoxilina y eosina) y el confirmativo se basó en el aislamiento de la bacteria por gradientes de Percoll, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y tinciones negativas al microscopio electrónico de transmisión (MET), para diferenciar esta de la vibriosis. Por ML, los hepatopancreas presentaron atrofia, estrangulamiento y necrosis en túbulos hepatopancreáticos con masas de bacterias NHP, infiltración hemocitica y melanizacion. Por PCR se amplificaron productos de 209 pb correspondientes a una región específica del 16S rDNA de la rickettsia NHP. Al MET, se registró la presencia de bacterias pleomorficas, ovoides a cilíndricas (0.2 μm de ancho x 0.6 μm a 0.9 μm de longitud), con menor frecuencia se presentaron formas helicoidales, con siete a doce giros o torciones (0.23 μm x 2.43 a 5.27 µm). La aplicación de herramientas de diagnóstico tradicional y molecular, permitieron identificar con certeza al agente causal de las epizootias en Sonora como la bacteria NHP y descartar etiologías similares como las ocasionadas por bacterias del genero Vibrio. Las prevalencias mas altas se observaron en la granja Lombardo Acuícola (86%) y la mas baja en Accion Acuícola (14.2 %), con salinidades entre 42 a 45.5 ppt. Abstract Necrotizing Hepatopancreatitis (NHP) is a severe disease of farm raised white shrimp, Litopenaeus vannamei Boone, 1931 from Texas to Central and South America. On this study, the first systematic monitoring for NHP in six shrimp farms located in Sonora was performed during the 2004 culture cycle, mainly by the scarcity of studies over rickettsial infections in L. vannamei. Presumptive diagnosis was based in light microscopy (LM, wet-mounts and H&E stained sections of hepatopancreata) while confirmative identification were realized by isolation of the bacteria in Percoll gradients, polymerase chain reaction (PCR) and negative stains for transmission electron microscopy (TEM), looking for differentiate NHP from bacteria genus vibrio. By ML, atrophy of the hepatopancreas, necrosis of the hepatopancreatic tubules filled with masses of the NHP bacterium within the tubular epithelium, together with hemocytic infiltrates and tubular melanization were observed. By PCR, products of 209 bp, which correspond to a specific region of 16S rDNA of the rickettsia NHP were amplified. By TEM, pleomorphic ovoid to rod-shaped bacteria (0.2 x 0.6-0.9 m) and helical forms with seven to twelve spiral turns (0.23 x 2.43-5.27 m), were observed. Application of traditional and molecular diagnostic tools, allowed to identify exactly the causative agent of the epizootic mortalities as the bacterium NHP, whth higher prevalence registered in Lombardo Acuícola (86 %) and lower in Accion Acuícola (14.6 %), where the salinities reached 42 to 45.5 ppt

Epizootiología de las enfermedades detectadas en el cultivo de camarón azul Litopenaeus stylirostris en el parque acuícola El Siari, Sonora, México

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Parasitología) UANLUANLhttp://www.uanl.mx

Evaluación in vitro del efecto antagonista de bacterias marinas contra Vibrio parahaemolyticus AHPND

Dentro del sector acuícola, uno de los mayores sectores de producción de alimentos es el cultivo de camarón, sin embargo, se ha visto afectado por enfermedades, entre ellas la Enfermedad de la Necrosis Aguda del Hepatopáncreas (AHPND, por sus siglas en inglés) la cual es causada por Vibrio parahaemolyticus. Un método alternativo para controlar el agente causal es la aplicación de probióticos, los cuales, al ser consumidos por el camarón, le confieren un mecanismo de defensa frente a patógenos. En esta investigación se evaluaron ecosistemas marinos y se aislaron bacterias marinas las cuales, con la prueba de difusión en pozo, mostraron un efecto antagónico en contra de la cepa patógena de camarón, donde se observaron halos de inhibición desde 1cm hasta casi 4 cm de diámetro; además, se caracterizaron estas bacterias por un perfil bioquímico con el sistema API BioMérieux y por secuenciación del gen 16S rADN donde se presentaron los géneros Shewanella sp., Vibrio sp. y Bacillus sp. Es de suma importancia la capacidad que presentan estas bacterias para ser potencialmente utilizadas como una medida profiláctica y/o terapéutica en granjas camaronícolas.In the aquaculture sector, one of the largest sectors of food production is shrimp farming, however, it has been affected by diseases, including Acute Hepatopancreas Necrosis Disease (AHPND). which is caused by Vibrio parahaemolyticus. An alternative method to control the pathogen is the application of probiotics, when consumed by the shrimp, give it a defense mechanism against pathogens. In this investigation marine ecosystems were evaluated and marine bacteria were isolated which, with the well diffusion test, showed an antagonistic effect against the pathogenic shrimp strain, where inhibition halos were observed from 1cm to almost 4 cm in diameter; In addition, these bacteria were characterized by a biochemical profile with the BioMérieux API system and by sequencing the 16S rDNA gene where the genera Shewanella sp., Vibrio sp. and Bacillus sp. The ability of these bacteria to be potentially used as a prophylactic and / or therapeutic measure in shrimp farms is of paramount importance

Actividad antagónica de bacterias aisladas de ecosistemas marinos frente a vibrio parahaemolyticusAHPND como patógeno de camarón en cultivos

Regards the aquaculture sector, one of the largest sectors of food production is shrimp farming, however, it has been affected by diseases, including Acute Hepatopancreas Necrosis Disease (AHPND). which is caused by Vibrio parahaemolyticus, which host a plasmid who produce toxins PirA and Pir B. An alternative method to control the pathogen is the application of probiotics, when consumed by the shrimp, give it a defense mechanism against pathogens. In this investigation marine ecosystems were evaluated and marine bacteria were isolated which, with the well diffusion test, showed an antagonistic effect against the pathogenic shrimp strain, where inhibition halos were observed from 1cm to almost 4 cm in diameter; In addition, these bacteria were characterized by a biochemical profile with the BioMérieux API system and by sequencing the 16S rDNA gene where the genera Shewanella sp., Vibrio sp. and Bacillus sp. The ability of these bacteria to be potentially used as a prophylactic and / or therapeutic measure in shrimp farms is of paramount importance, and avoid the use of antibiotics.  Referente al sector acuícola, uno de los mayores sectores de producción de alimentos es el cultivo de camarón, sin embargo, se ha visto afectado por enfermedades, entre ellas la Enfermedad de la Necrosis Aguda del Hepatopáncreas (AHPND, por sus siglas en inglés) la cual es causada por Vibrio parahaemolyticus que hospeda un plásmido productor de tóxinas PirA y Pir B. Un método alternativo para controlar el agente causal es la aplicación de probióticos, los cuales, al ser consumidos por el camarón, le confieren un mecanismo de defensa frente a patógenos. En esta investigación se evaluaron bacterias de ecosistemas marinos y se aislaron con la prueba de difusión en pozo, al mostrar un efecto antagónico en contra de la cepa patógena de camarón, produciendo halos de inhibición desde uno a casi cuatro centímetros de diámetro; además, se caracterizaron estas bacterias por un perfil bioquímico con el sistema API BioMérieux y por secuenciación del gen 16S rADN identificándose en los géneros Shewanella sp., Vibrio sp. y Bacillus sp. Es de suma importancia la capacidad que presentan estas bacterias para ser potencialmente utilizadas como una medida profiláctica y/o terapéutica en granjas camaronícolas evitándose el uso de antibióticos. &nbsp

Minisatélites del virus del síndrome de la mancha blanca (Whispovirus) en México

El virus del síndrome de la mancha blanca causa serios problemas en cultivos de camarón en México. El objetivo de este estudio fue analizar los minisatelitales del genoma viral, ubicadas en el ORF 94, para su aplicación como marcadores moleculares. En muestras de 2000 se identificaron cuatro diferentes cepas de virus, caracterizadas por 4, 8, 9 y 12 UR´s. En 2005, se identificaron cepas de 4, 8 y 9 UR´s. Éstas son similares a las cepas de Tailandia, a excepción de la cepa de 4 UR´s, que al parecer tuvo su evolución en nuestro país. La asociación de éstas con el grado de virulencia está por definirse. White spot syndrome virus causes the most serious losses to shrimp farmers in Mexico. The objective of this study was to analyze minisatellites located at ORF 94 of the viral genome to apply our results as molecular markers. Four different virus strains, characterized by repeat units (RU´s) of 4, 8, 9, and 12 were identified from outbreaks occurred in 2000. Virus strains with 4, 8, and 9 UR´s were identified from outbreaks from 2005. Mexican WSSV strains are similar to those identified in Thailand, with exception of the strain with 4 UR´s, which perhaps evolved particularly in our country

Virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa (IHHNV) y virus del síndrome de Taura (TSV) en camarón silvestre (Farfantepenaeus aztecus Ives, 1891 y Litopenaeus setiferus Linnaeus, 1767) de La Laguna Madre, Golfo de México

Se reporta la presencia del virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa (IHHNV) y del virus del síndrome de Taura (TSV) en camarones silvestres Litopenaeus setiferus (camarón blanco) y Farfantepenaeus aztecus (camarón café) capturados en el estero de La Pesca, en La Laguna Madre, Tamaulipas, México. El estudio se realizó por histopatología y amplificación de ácidos nucleicos. La prevalencia de TSV fue 6,6% (12/180) y 4,4% para IHHNV (8/180). La mayoría de los casos se presentaron de noviembre a marzo (15/180). La presencia de estos virus en camarones silvestres de La Laguna Madre, alerta sobre el riesgo en que se encuentran las poblaciones silvestres y las granjas camaroneras colindantes con el Golfo de México, por lo que se sugiere establecer un programa de monitoreo sanitario y verificar el impacto de ambos virus en camarones de granjas vecinas a La Laguna Madre.The occurrence of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) and Taura syndrome virus (TSV) in wild shrimp Litopenaeus setiferus (white shrimp) and Farfantepenaeus aztecus (brown shrimp) captured from the estuary of La Pesca in La Laguna Madre Tamaulipas, Mexico, are reported. This study was performed for histopathology and amplification of nucleic acids. The prevalence of TSV was 6.6% (12/180) and 4.4% for IHHNV (8/180). Most cases were observed from November to March (15/180). The presence of these viruses in wild shrimp from the La Laguna Madre, alerts about the risk that are having the wild populations and the shrimp farms that are contiguous with the Gulf of Mexico, so it is suggested to establish a program of sanitary monitoring and to verify the impact of both viruses in the near shrimp farms of the La Laguna Madre

Genotyping of white spot syndrome virus on wild and farm crustaceans from Sonora, Mexico

White spot syndrome is a viral disease affecting wild and farm crustaceans that serve as reservoirs. Previous reports have demonstrated high genomic variation in WSS viruses (WSSV) isolated from distinct geographical regions. In this study, we collected wild shrimps (Litopenaeus stylirostris), crabs (Callinectes arcuatus) and farmed shrimp (L. vannamei) in Sonora, Mexico, between 2008 and 2010. DNA was extracted, and the variable regions and transposase genes were subjected to PCR and sequencing. Compared to strains of WSSV from other sites, Mexican samples exhibited a distinct number of repeat units (RUs) in ORF94, ORF75 and ORF125, which ranged between 1-11, 3-15, and 8-11 RUs respectively, and a unique single nucleotide polymorphism (SNP) at position 48 of ORF94. A total of six Mexican genotypes were found in organism from shrimp farm and natural environment