Targeted mutagenesis of the Sap47 gene of Drosophila: Flies lacking the synapse associated protein of 47 kDa are viable and fertile

BACKGROUND: Conserved proteins preferentially expressed in synaptic terminals of the nervous system are likely to play a significant role in brain function. We have previously identified and molecularly characterized the Sap47 gene which codes for a novel synapse associated protein of 47 kDa in Drosophila. Sequence comparison identifies homologous proteins in numerous species including C. elegans, fish, mouse and human. First hints as to the function of this novel protein family can be obtained by generating mutants for the Sap47 gene in Drosophila. RESULTS: Attempts to eliminate the Sap47 gene through targeted mutagenesis by homologous recombination were unsuccessful. However, several mutants were generated by transposon remobilization after an appropriate insertion line had become available from the Drosophila P-element screen of the Bellen/Hoskins/Rubin/Spradling labs. Characterization of various deletions in the Sap47 gene due to imprecise excision of the P-element identified three null mutants and three hypomorphic mutants. Null mutants are viable and fertile and show no gross structural or obvious behavioural deficits. For cell-specific over-expression and "rescue" of the knock-out flies a transgenic line was generated which expresses the most abundant transcript under the control of the yeast enhancer UAS. In addition, knock-down of the Sap47 gene was achieved by generating 31 transgenic lines expressing Sap47 RNAi constructs, again under UAS control. When driven by a ubiquitously expressed yeast transcription factor (GAL4), Sap47 gene suppression in several of these lines is highly efficient resulting in residual SAP47 protein concentrations in heads as low as 6% of wild type levels. CONCLUSION: The conserved synaptic protein SAP47 of Drosophila is not essential for basic synaptic function. The Sap47 gene region may be refractory to targeted mutagenesis by homologous recombination. RNAi using a construct linking genomic DNA to anti-sense cDNA in our hands is not more effective than using a cDNA-anti-sense cDNA construct. The tools developed in this study will now allow a detailed analysis of the molecular, cellular and systemic function of the SAP47 protein in Drosophila

Basler Vegetative State Assessment - BAVESTA : Validierung eines neu entwickelten, interprofessionellen Verlaufsbeobachtungsinstruments für Menschen mit schweren Bewusstseinsstörungen nach erworbenen Hirnverletzungen

Das Wachkoma nach erworbener Hirnschädigung stellt, sofern nicht eine chronische neurodegenerative Erkrankung zugrunde liegt, ein postkomatöses Zustandsbild dar. Es wird zu den schweren Bewusstseinsstörungen gezählt. Vom Koma unterscheidet es sich in erster Linie durch das Geöffnetsein der Augen und den Fähigkeitsrückgewinn selbstständiger Atmung. Oftmals ist das Wachkoma ein transienter Zustand unbestimmter Zeitdauer und geht dann in das Zustandsbild des Minimally Conscious State über. Sehr selten kann eine vollständige Genesung erfolgen. Einerseits stellt die Differenzierung zwischen diesen Zustandsbildern sowie die gesamte Verlaufsbeobachtung während der Rehabilitation das behandelnde Team vor grosse Herausforderungen, was sich in einer Fehldiagnoserate von bis zu 40 Prozent widerspiegelt. Die hohe Fehldiagnoserate ist nicht zuletzt auf einen Mangel an sensitiven Beobachtungsinstrumenten zurückzuführen. Die klinische Praxis in der Rehabilitation von Menschen mit schweren erworbenen Hirnschädigungen stellt unterschiedliche Anforderungen an Beobachtungsinstrumente. Einerseits soll ein Verlaufsbeobachtungsinstrument den Bewusstseinszustand zur Differenzialdiagnostik zwischen den Zustandsbildern und sich klinisch ähnlich präsentierenden Krankheitsbildern wie dem Locked-In-Syndrom aufdecken, andererseits braucht es zur Therapieplanung und Zielformulierung funktionelle Aspekte. Das Problematische dabei stellt die Bedside-Erfassung des Bewusstseins dar, zumal das Bewusstsein nicht als homogene Entität definiert werden kann. Bisher wurden Beobachtungsinstrumente in diesem Bereich entweder zur Feststellung des Bewusstseinszustandes oder zur Erhebung funktioneller Parameter entwickelt. Unterschiedliche Bewusstseinsqualitäten werden nicht differenziert. Bestehende Instrumente unterliegen hinsichtlich ihrer Entwicklung dem Grundgedanken des bio-medizinischen Modells zu Gesundheit und Krankkheit. Seit 2001 besteht jedoch diesbezüglich ein Perspektivenwechsel. Das bio-psycho-soziale Modell zur Gesundheit und die Einführung der International Classification of Functioning (ICF) geben eine Fähigkeits- und Ressourcenorientierung hinsichtlich der Einstufung des Gesundheitszustandes vor. Zudem integrieren sie psychische, soziale und partizipative Aspekte. Bestehende Beobachtungsinstrumente im Bereich der schweren Hirnverletzungen werden diesen Aspekten jeweils nur zum Teil gerecht. Sie sind entweder zur Erhebung des Bewusstseinszustandes oder zur Erfassung funktioneller Aspekte entwickelt worden. Eine Verbindung dieser Aspekte ist nicht gegeben. Um diesen Defiziten entgegenzutreten, wurde das interprofessionelle Basler Vegetative State Assessment (BAVESTA) auf der Basis der ICF entwickelt. Die empirische Überprüfung dieses Instruments steht im Fokus dieser Arbeit und führte zu folgender Fragestellung: Fragestellung Erweist sich das interprofessionelle Basler Vegetative State Assessment (BAVESTA) als reli-ables und valides Instrument zur Verlaufsbeobachtung von schwer hirnverletzten erwachse-nen Patienten/-innen mit schweren Bewusstseinsstörungen unter Berücksichtigung klinisch-therapeutischer Anforderungen an ein Beobachtungsinstrument? Methode Das Basler Vegetative State Assessment (BAVESTA) wurde unter Einbezug von Experten/-innen in der Arbeit mit Menschen im Wachkoma und Anwendern/-innen entwickelt und auf seine psychometrischen Eigenschaften hin überprüft. Die Überprüfung wurde auf der Wachkomastation des REHAB Basel über 5 Jahre hinweg (2007–2012) durchgeführt. Die Reliabilitäts- und Validitätsüberprüfung entspricht klassischen, testtheoretischen Vorgaben. Neben interner Konsistenz, Inter-Rater-Reliabilität, Retest-Reliabilität, konvergenter und prognostischer Validität wurden die Masse der diagnostischen Validität und die Effizienz berechnet. Ein Cut-off-Wert zur Differenzialdiagnostik zwischen Menschen im Wachkoma und Menschen im MCS wurde anhand einer ROC-Analyse mittels des Youden-Index definiert. Zudem wurde der Standard Error of Measurement berechnet. Als Referenzinstrument wurde die Glasgow Coma Scale genutzt. Als weitere Vergleichsinstrumente wurden die Koma-Remissions-Skala, das Functional Independent Measurement und das Early Functional Ability Assessment verwendet. Zur Überprüfung der Frage, ob das BAVESTA den Anforderungen der Praxis entspricht, wurde eine Anwenderbefragung durchgeführt. Ergebnisse Das BAVESTA zeigt sich als reliables und valides Beobachtungsinstrument, das einerseits Bewusstseinsaspekte und funktionelle Informationen verbindet, andererseits aber auch unterschiedliche Qualitäten des Bewusstseins zu erfassen vermag. Des Weiteren scheint es die interprofessionelle Zusammenarbeit zu unterstützen und eine gemeinsame Sprachentwicklung innerhalb eines interprofessionellen Behandlungsteams zu unterstützen. Diskussion Trotz einer Vielzahl von bestehenden Beobachtungsinstrumenten im Bereich der Rehabilitation von Menschen im Wachkoma wurde das BAVESTA unter Berücksichtigung bewusstseinsorientierter und funktioneller Aspekte mit dem Ziel, diese in einem Beobachtungsinstrument zu verbinden, entwickelt. Der klinische Alltag führte zu einer deutlichen Rate an fehlenden Werten. Dies führte zu einem Ausschluss von ca. 25 Prozent der Beobachtungen. Die Items des BAVESTA entsprechen im klinischen Alltag beobachteten Reaktionen und Fähigkeiten von Menschen im Wachkoma. Da es sich im Verlauf um sehr feine Veränderungen handelt, ist eine genaue Beobachtungsgabe seitens des behandelnden Teams unumgänglich. Dies birgt jedoch auch die Gefahr eines Beobachterbias im Sinne von Wunschdenken. Um einen Beoachterbias auszuschliessen, wäre die Hinzunahme elektrophysiologischer oder bildgebender Verfahren als Referenzmessungen geeigneter als ein weiteres Beobachtungsinstrument. Da diese Verfahren jedoch nicht zu den klinischen Routineuntersuchunen zählen, wurde in dieser Arbeit darauf verzichtet. Mittels des BAVESTA lassen sich einerseits funktionelle Aspekte und unterschiedliche Qualitäten des Bewusstseins bedside abbilden. Zudem ist eine direkte Verbindung zum in der Rehabilitation vorgegebenen Rahmen durch die ICF gegeben. Dennoch sollten weitere Untersuchungen bezüglich des Einsatzbereiches und der differenzialdiagnostischen Eigenschaften des BAVESTA durchgeführt werden. Fazit Das BAVESTA stellt ein den Anforderungen des klinischen Alltags entsprechendes Beobachtungsinstrument dar, mittels dessen sowohl unterschiedliche Qualitäten des Bewusstseins als auch funktionelle Aspekte abgebildet werden können. Es basiert auf einer fähigkeitsorientierten Perspektive hinsichtlich der zu beobachtenden Merkmale. Dennoch sollte es weiteren Untersuchungen unterzogen werden

BK viremia in critically ill surgical patients with hemorrhagic or septic shock

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Infections with polyomavirus BK virus (BKV) are a common cause of renal dysfunction after renal transplantation and may also be harmful in surgical patients with shock. The aim of the present study was to determine the frequency of BKV viremia in critically ill surgical patients with septic or hemorrhagic shock, and, if viremia is detectable, whether viremia may be associated with renal dysfunction.</p> <p>Findings</p> <p>A total of 125 plasma samples from 44 critically ill surgical patients with septic or hemorrhagic shock were tested by real-time polymerase chain reaction (PCR) for BKV DNA during their stay on the intensive care unit (ICU). BKV viremia occurred in four patients, i.e. in three of the septic and in one of the hemorrhagic shock group. There was no association between viremia and renal dysfunction. All positive samples contained a low viral load (< 500 copies/ml).</p> <p>Conclusions</p> <p>Since BK viremia was rarely found and with low viral load only in critically ill surgical patients with shock, it is very unlikely that BK viremia results in BK nephropathy later on.</p

Perceptions of who is in the healthcare team? A content analysis of social media posts during COVID-19 pandemic

Publisher PDFNon peer reviewe

Diagnostic validity of the Basler Vegetative State Assessment - BAVESTA

Introduction: Clinical assessments should meet the general psychometric properties of reliability and validity. Furthermore there are requirements in matters of diagnostic validity and usability. In regards to patients with severe brain damage, both issues can mainly be implemented by detecting and assessing returning abilities as early as possible, in order to use them for treatment planning. Main aim of this article is to investigate whether the newly developed and validated interprofessional Basel Vegetative State Assessment (BAVESTA) meets these practice criteria. Method: Data were collected as part of validity assessment of BAVESTA. Using the Glasgow Coma Scale as a reference, predictive parameters and measures of effect are calculated. Moreover, expert users were interviewed and results are presented in a descriptive way. Results: With a sensitivity of 0.84 and a specificity of 0.85, the BAVESTA can be regarded as suitable in differentiating between vegetative state and further states of remission such as the minimally conscious state. Expert users regard BAVESTA as eligible for mapping rehabilitative process of patients with severely impaired consciousness. They agree upon the fact that all relevant areas are covered by BAVESTA. Discussion: The BAVESTA displays high levels of differentiation, in regards to both sensitivity and specificity. However, measures of effect ought generally to be regarded with caution, as reference standards have not been developed for the area of rehabilitation. Considering time expenditure, BAVESTA is rated as only marginally feasible by expert users. It should be continued to investigate BAVESTA in regards to its diagnostic quality, integrating electrophysical diagnostic tools as reference standards

Is animal-assisted therapy for minimally conscious state beneficial? A case study

The goal of this single case study was to qualitatively investigate the effects of animal-assisted therapy in a patient in a minimally conscious state.; We present a 28-year-old female patient in a minimally conscious state following polytrauma after a sports accident leading to cerebral fat embolism causing multiple CNS ischemic lesions. She received eight animal-assisted therapy sessions and eight paralleled control therapy sessions over 4 weeks. We investigated the reactions of the patient during these sessions; via; qualitative behavior analysis.; The patient showed a broader variability and higher quality of behavior during animal-assisted therapy compared to control therapy sessions.; The observed behavioral changes showed higher arousal and increased awareness in the presence of an animal. The presented case supports the assumption that animal-assisted therapy can be a beneficial treatment approach for patients in a minimally conscious state

Glutathione-conjugating and membrane-remodeling activity of GDAP1 relies on amphipathic C-terminal domain

Mutations in the ganglioside-induced differentiation associated protein 1 (GDAP1) cause severe peripheral motor and sensory neuropathies called Charcot-Marie-Tooth disease. GDAP1 expression induces fission of mitochondria and peroxisomes by a currently elusive mechanism, while disease causing mutations in GDAP1 impede the protein’s role in mitochondrial dynamics. In silico analysis reveals sequence similarities of GDAP1 to glutathione S-transferases (GSTs). However, a proof of GST activity and its possible impact on membrane dynamics are lacking to date. Using recombinant protein, we demonstrate for the first time theta-class-like GST activity for GDAP1, and it’s activity being regulated by the C-terminal hydrophobic domain 1 (HD1) of GDAP1 in an autoinhibitory manner. Moreover, we show that the HD1 amphipathic pattern is required to induce membrane dynamics by GDAP1. As both, fission and GST activities of GDAP1, are critically dependent on HD1, we propose that GDAP1 undergoes a molecular switch, turning from a pro-fission active to an auto-inhibited inactive conformation.ISSN:2045-232

Unilateral Asterixis in Arm and Leg Caused by Internal Capsula Stroke

We report an unusual clinical manifestation of ischemic stroke with acute right-sided asterixis affecting the arm as well as the leg due to a lesion in the left posterior limb of the internal capsula. After treatment with intravenous thrombolysis the patient made a good recovery. Notably, in this case unilateral asterixis affected the armas well as the leg, resulting in postural and gait instability. In addition, damage in the basal ganglia-thalamo-cortical network, as in our patient, has to be distinguished fromother supratentorial causes of acute asterixis like thalamic or frontal lobe lesions linked to the cerebello-brainstem-thalamo-frontal lobe circuits

Vernetzen sich Fachleute, nützt das den Familien

Kinder brauchen einen guten Start ins Leben. Damit das gelingen kann, vernetzt das Projekt GUSTAF im Kanton Nidwalden Fachpersonen der frühen Förderung. Die Zürcher Hochschule für Angewandte Wissenschaften (ZHAW) hat GUSTAF unter die Lupe genommen. Dabei zeigte sich, dass die Zusammenarbeit zwischen den Fachleuten gewachsen und dass der Einbezug der Familien entscheidend ist

CXCL13 and CXCL9 CSF Levels in Central Nervous System Lymphoma-Diagnostic, Therapeutic, and Prognostic Relevance

Background: Diagnostic delay and neurologic deterioration are still a problem for the treatment of rapidly progressing CNS lymphoma (CNSL); there is an unmet need for a diagnostic test with a high diagnostic yield and limited risk, minimizing the time to the initiation of effective treatment. Methods: In this prospective monocentric study, we analyzed the utility of CXCL13 and CXCL9 as diagnostic, therapeutic and prognostic biomarkers for CNSL. Cerebrospinal fluid (CSF) from 155 consecutive patients admitted with brain lesions of various origins was collected. Levels of CXCL13 and CXCL9 were analyzed by ELISA. Additionally, CSF was analyzed during CNSL disease course (relapse, remission, progress) in 17 patients. Results: CXCL13 and CXCL9 CSF levels were significantly increased in patients with CNSL compared to control patients with lesions of other origin. Using logistic regression and a minimal-p-value approach, a cut-off value of 80 pg/ml for CXCL13 shows high sensitivity (90.7%) and specificity (90.1%) for the diagnosis of active CNSL. CXCL9 at a cut-off value of 84 pg/ml is less sensitive (61.5%) and specific (87.1%). Both cytokines correlate with the clinical course and response to therapy. Conclusions: Our results confirm the excellent diagnostic potential of CXCL13 and introduce CXCL9 as a novel albeit less powerful marker for PCNSL