Assinatura estriatal de micrornas no modelo da rotenona e sua modulação por oligonucleotídeo sintético carreado por nanopartícula magnética

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2019.A doença de Parkinson (DP) é uma desordem cerebral complexa que afeta cerca de 3% da população mundial acima de 65 anos. Os sinais motores característicos da doença incluem rigidez, tremores e bradicinesia, sendo resultados da degeneração progressiva de neurônios dopaminérgicos da substância negra pars compacta. Um fator agravante da doença consiste no seu diagnóstico: pacientes quando identificados clinicamente com Parkinson já apresentam perda de 40 - 60% de neurônios dopaminérgicos. O tratamento considerado padrão para DP consiste na reposição do neurotransmissor dopamina mediante medicação com L-dopa. No entanto, é apenas sintomático, e mais efetivo nos estágios iniciais da doença. Além disso, seu uso crônico induz severos efeitos colaterais motores, as discinesias. Fármacos modificadores da doença - disease modifying drugs - capazes de retardar a progressão parkinsoniana possuem potencial em mudar o prognóstico da desordem, mas ainda estão em fase de testes. MicroRNAs são potenciais alvos terapêuticos. O presente trabalho objetivou investigar se microRNAs são expressos de maneira aberrante no estriado de animais parkinsonianos (etapa 1), e se é viável modular esta expressão mediante injeção intracerebroventricular (i.c.v.) de oligonucleotídeos sintéticos carreados por nanopartículas magnéticas (etapa 2). Nesta primeira etapa, ratos receberam injeções da neurotoxina rotenona (2,5 mg/kg, i.p., diariamente por dez dias). A neurotoxina causou prejuízo motor, neurodegeneração com perda de células TH (+) nigroestriatais, bem como neuroinflamação, aqui evidenciada pela microgliose. MicroRNAs apresentaram-se aberrantemente expressos no estriado destes animais, havendo aumento significativo de miR-26a, miR-132 e miR-34a, e depleção de miR-7 e Let7a. Uma vez confirmada a hipótese da expressão aberrante dos miRNAs, a segunda etapa do trabalho consistiu em avaliar o delivery cerebral de modulares de miRNAs por partículas magnéticas - NeuroMag – injetados no ventrículo lateral por cirurgia estereotáxica. NeuroMag transfectou de forma eficiente os oligos no estriado. Oligos marcados com fluoresceína foram visualizados em neurônios estriatais e astrócitos, mediante microscopia confocal. Finalmente, avaliamos se os efeitos da reposição do microRNA-7 (miR-7 mimic, 0,36nmol) carreados por NeuroMag (0,68μL) via injeção i.c.v., em animais submetidos à rotenona por dez dias consecutivos (3mg/kg, i.p.). Os resultados revelaram que o grupo rotenona previamente transfectado com Mimics7 apresentou maior expressão de neurônios nigrais TH positivos, assim como reduzida microgliose na substância negra em relação ao grupo NeuroMag. Tais resultados sugerem que a estratégia de modulação de miR-7 via oligonucleotídeos sintéticos carreados por NeuroMag possui potencial neuroprotetor no modelo de neurodegeneração induzido por rotenona.Fundação de Apoio à pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Parkinson's disease (PD) is a complex brain disorder that affects about 3% of the world's population over 65 years. The motor signals characteristic of the disease include stiffness, tremors, and bradykinesia, being results of the progressive degeneration of dopaminergic neurons of the substantia nigra pars compacta. An aggravating factor of the disease is its diagnosis: patients once clinically identified with Parkinson's already present loss of 40-60% of dopaminergic neurons. The treatment considered standard for PD consists of the replacement of the neurotransmitter dopamine by medication with L-dopa. However, it is only symptomatic and more effective in the early stages of the disease. Furthermore, its prolonged use induces severe motor side effects, as dyskinesias. Disease-modifying drugs - capable of delaying Parkinsonian progression has the potential to change the prognosis of the disorder but are still in the testing phase. MicroRNAs are potential therapeutic targets. The present work aimed to investigate whether microRNAs are aberrantly expressed in the striatum of parkinsonian animals (step 1) and whether it is possible to modulate this expression by intracerebroventricular (i.c.v.) injection of synthetic oligonucleotides carried by magnetic nanoparticles (step 2). In this first step, rats received injections of the neurotoxin rotenone (2.5 mg/kg, i.p., daily for ten days). The neurotoxin caused motor impairment, neurodegeneration with loss of TH (+) nigrostriatal cells, as well as neuroinflammation, evidenced here by microgliosis. Animals presented an aberrant striatal expression of the microRNAs evaluated, with a significant increase of miR-26a, miR-132 and miR-34a, and depletion of miR-7 and Let7a. Once the hypothesis of the aberrant expression of the miRNAs was confirmed, the second stage of the study consisted of evaluating the cerebral delivery of miRNAs by magnetic particles - NeuroMag - injected into the lateral ventricle by stereotactic surgery. NeuroMag efficiently transfected the oligos in the striatum. Fluorescein-labeled oligos were visualized in striatal neurons and astrocytes by confocal microscopy. Finally, we evaluated the effects of replacement of microRNA-7 (miR-7 mimic, 0.36nmol) carried by NeuroMag (0.68μL) via i.c.v. injection in animals submitted to rotenone for ten consecutive days (3mg/kg, i.p.). The results showed that the rotenone group previously transfected with miR-7 mimic showed high expression of TH nigral positive neurons as well as reduced microgliosis in the substantia nigra when compared to the NeuroMag group. Such results suggest that the strategy of miR-7 replacement by Neuromag-structured synthetic oligonucleotides has a neuroprotective potential in the model of neurodegeneration induced by rotenone

PATOLOGIAS NA CONSTRUÇÃO CIVIL: estudo de caso para a Entidade Beneficente

Este paper tem por objetivo, destacar e apresentar técnicas de recuperação de patologias que vêm se destacando nas instalações da lavanderia da Entidade Beneficente, sendo que foi feita avaliação na parte do térreo,que no momento não está em uso devido às más condições da estrutura, e na parte do subsolo, onde se localizam as máquinas de lavagem e secadoras. Todas as obras estão sujeitas ao aparecimento de patologias, porém é necessário o conhecimento para evitá-las, e se aparecerem, deve predominar o conhecimento para a recuperação correta das patologias evidenciadas juntamente com o cumprimento das Normas Técnicas

PATOLOGIAS NA CONSTRUÇÃO CIVIL: estudo de caso para a Entidade Beneficente

Este paper tem por objetivo, destacar e apresentar técnicas de recuperação de patologias que vêm se destacando nas instalações da lavanderia da Entidade Beneficente, sendo que foi feita avaliação na parte do térreo,que no momento não está em uso devido às más condições da estrutura, e na parte do subsolo, onde se localizam as máquinas de lavagem e secadoras. Todas as obras estão sujeitas ao aparecimento de patologias, porém é necessário o conhecimento para evitá-las, e se aparecerem, deve predominar o conhecimento para a recuperação correta das patologias evidenciadas juntamente com o cumprimento das Normas Técnicas

Delivery of miRNA-Targeted Oligonucleotides in the Rat Striatum by Magnetofection with Neuromag®

MicroRNAs (miRNAs) regulate gene expression at posttranscriptional level by triggering RNA interference. In such a sense, aberrant expressions of miRNAs play critical roles in the pathogenesis of many disorders, including Parkinson’s disease (PD). Controlling the level of specific miRNAs in the brain is thus a promising therapeutic strategy for neuroprotection. A fundamental need for miRNA regulation (either replacing or inhibition) is a carrier capable of delivering oligonucleotides into brain cells. This study aimed to examine a polymeric magnetic particle, Neuromag®, for delivery of synthetic miRNA inhibitors in the rat central nervous system. We injected the miRNA inhibitor complexed with Neuromag® into the lateral ventricles next to the striatum, by stereotaxic surgery. Neuromag efficiently delivered oligonucleotides in the striatum and septum areas, as shown by microscopy imaging of fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled oligos in astrocytes and neurons. Transfected oligos showed efficacy concerning miRNA inhibition. Neuromag®-structured miR-134 antimiR (0.36 nmol) caused a significant 0.35 fold decrease of striatal miR-134, as revealed by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). In conclusion, the polymeric magnetic particle Neuromag® efficiently delivered functional miRNA inhibitors in brain regions surrounding lateral ventricles, particularly the striatum. This delivery system holds potential as a promising miRNA-based disease-modifying drug and merits further pre-clinical studies using animal models of PD.The present study received financial support from CAPES [Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (Programa Nacional de Pós-doutorado; grant no. 3731-37/2010)], CNPq [Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (grant no. 467467/2014-5)] and FAP-DF [Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (grant no. 2010/00302-9)]

Relatório Epifloripa Idoso

Relatório técnico científico de pesquisaEste relatório apresenta dados da terceira onda de entrevistas domiciliares do Estudo de Coorte EpiFloripa Idoso, estudo longitudinal de base populacional e domiciliar, que acompanha as condições de vida e saúde de uma amostra de idosos (60 anos ou mais de idade), representativa da zona urbana do município de Florianópolis, capital de Santa Catarina, na Região Sul do Brasil. Este documento também celebra os dez anos do estudo (2009-2019), coordenado pela Professora Eleonora d’Orsi do Departamento de Saúde Pública da Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC), em parceria com pesquisadores dos Departamentos de Educação Física, Nutrição e Fonoaudiologia. Ao longo destes dez anos foram realizadas três ondas de entrevistas domiciliares e uma onda de exames clínicos, pela equipe do estudo, composta pela coordenadora, pesquisadores e estudantes de iniciação científica, mestrado e doutorado dos Programas de Pós-Graduação em Saúde Coletiva, Educação Física, Nutrição, Odontologia e Ciências Médicas da UFSC. Este estudo somente foi possível graças ao empenho desta equipe multidisciplinar extremamente unida, dedicada, competente, solidária e produtiva. O relatório é apresentado em seis seções: no primeiro capítulo é apresentada a introdução e objetivo do documento, no segundo capítulo são apresentados os métodos do estudo, no terceiro capítulo os aspectos sociodemográfico da amostra. Já nos capítulos quatro, cinco e seis são apresentados os resultados dos indicadores comportamentais, de saúde e sociais, indicadores no formato de tabelas e gráficos, respectivamente. Por fim, são apresentadas as considerações finais do relatório, seguidas pelas referências bibliográficas e apêndices.A terceira onda do EpiFloripa foi financiada com recursos do Economic and Social Research Council (ESRC) do Reino Unido através do projeto multicêntrico Promoting Independence in Dementia (PRIDE), valor financiado: R$574.698,20 contrato 75/2017 entre UFSC e FAPEU, período: janeiro de 2016 a fevereiro de 2020