Characterization of the penicillin G acylase from Bacillus megaterium ATCC 14945

The purpose of this work was to characterize the enzyme penicillin G acylase (PGA) produced by Bacillus megaterium. Purification of the enzyme by ultra/diafiltration did not allow the detection of the PGA band by SDS-PAGE electrophoresis due to the high content of remaining proteins. However, using the DNA of the microorganism, it was possible to replicate the genes of the two B. megaterium PGA reported in literature, showing that the enzyme consisted of two sub-units, having 245 and 537 amino acids each and an average molecular mass of 26950 and 59070 Da, respectively. The parameters studied were: 1) the influence of temperature in the 25-60(0)C range, 2) pH in the 5-10 range and 3) substrate concentration, this was tested to obtain results on the Penicillin G hydrolysis reaction rate, using the initial velocities approach. The maximum hydrolysis rate was obtained at 37ºC and pH 8.0. The Michaelis-Menten model fitted well, resulting in estimated Km and Vmax parameters values of 1.83 mM and 0.165*10-3 mmol/min/UI, respectively.O objetivo deste trabalho foi caracterizar a enzima penicilina G acilase (PGA) produzida por Bacillus megaterium, uma importante enzima industrial que catalisa a hidrólise de penicilina G, para produção de antibióticos semi-sintéticos. Purificação da enzima por ultra/diafiltração não permitiu detectar a banda de PGA por eletroforese SDS-PAGE devido ao elevado conteúdo de outras proteínas remanescentes. Contudo, utilizando DNA do microrganismo que vem sendo estudado, foi possível amplificar os genes das duas sub-unidades de PGA previstas na literatura, mostrando que a enzima em estudo é também constituída de duas sub-unidades, 245 e 537 aminoácidos cada, com massas moleculares médias de 26950 e 59070 Da, respectivamente. Foram estudadas as influências da temperatura 25-60(0)C, pH 5-10, e concentração do substrato na velocidade da reação de hidrólise da penicilina G. A temperatura e pH ótimos foram de 37(0)C e 8,0, respectivamente. O modelo de Michaelis-Menten representou bem a cinética da reação, com valores de parâmetros estimados de 1,83 mM para Km e Vmáx= 0,165*10-3 mmol/min/UI

UMA REVISÃO SOBRE A PLASTICIDADE DO MÚSCULO ESQUELÉTICO: EXPRESSÃO DE ISOFORMAS DE CADEIA PESADA DE MIOSINA E CORRELAÇÃO FUNCIONAL

INTRODUÇÃO: o músculo esquelético é um tecido dinâmico com a habilidade intrínseca de se adaptar aos estímulos ambientais como resultado de mudanças qualitativas e quantitativas na expressão gênica, sendo esta capacidade definida como plasticidade. Este tecido é composto por populações de fibras rápidas e lentas que diferem fenotipicamente por expressarem diferentes isoformas de cadeias pesadas de miosina (CPM). Miosinas constituem uma família de proteínas chamadas motores moleculares com atividade ATPásica conhecidas por seu importante papel no processo de contração muscular. OBJETIVO: realizar um levantamento, por meio de dados expostos na literatura, da relação existente entre a expressão de diferentes CPM no processo de remodelamento muscular em condições fisiológicas e patológicas. METODOLOGIA: a pesquisa foi realizada por meio de levantamento de dados descritos na literatura, sendo consultados os bancos de dados internacionais Pubmed e Highwire Press e os bancos de dados nacionais Scielo e Lilacs, no período de janeiro a abril de 2008. Fisioter Mov. 2009 abr/jun; 22(2): 211-220 ISSN 0103-5150 Fisioter. Mov., Curitiba, v. 22, n. 2, p. 211-220, jan./mar. 2009 Licenciado sob uma Licença Creative Commons 212Piovesan RF, Martins MD, Fernandes KPS, Bussadori SK, Selistre-de-Araújo HS, Mesquita-Ferrari RA. RESULTADOS: A fibra muscular pode alterar suas características contráteis por meio de mudanças nas quantidades das CPM. A velocidade de encurtamento do músculo esquelético varia de acordo com a isoforma de CPM que possui, conferindo assim ao tecido muscular a capacidade de adaptação frente a estímulos fisiológicos e patológicos. CONCLUSÃO: A fibra muscular pode alterar suas propriedades contráteis por meio de mudanças nas quantidades de isoformas de CPM que a constitui

Remodeling process in bone of aged rats in response to resistance training

Aims We investigate the effects of RT on the mechanical function, gene, and protein expression of key factors involved in bone remodeling during aging. Main methods Male rats of 3 and 21 months of age were randomly allocated into four groups (8 per group): young sedentary (YS), young trained (YT), old sedentary (OS), and old trained (OT). RT was performed three times per week (12 weeks). Bone tenacity and stiffness were measured by biomechanical tests and mRNA levels of COL1A1, MEPE, SOST, OPG, BMP-2, PPAR-y, MMP-2-9-13, and TIMP-1 were evaluated by quantitative PCR. COL1A1 protein and MMP-2 activity were detected by western blotting and zymography assays. Key findings Aging increased stiffness, while BMP-2, OPG, COL1A1 and MMP-2 mRNA levels reduced (OS vs YS; p ≤ 0.05). RT increased the tenacity of the femur and reduced PPAR-γ regardless of age (YT vs. YS; OT vs. OS; p ≤ 0.05). RT downregulated SOST mRNA levels only in the OT group (vs. OS group, p ≤ 0.05). RT mitigated the age-associated increase in MMP-9 mRNA levels (p ≤ 0.05). In young animals, upregulation in MEPE, MMP-13, TIMP-1 were observed after RT, as well an increase in COL1A1 protein and MMP-2 activity (p ≤ 0.05). Significance RT improved bone tenacity independent of aging, which is relevant for mechanical function, while, at protein levels, RT upregulated MMP-2 activity and collagen 1 only in young rats. This study highlights the importance of exercise on bone health and identifies specific molecular changes in response to RT. Our findings provide insights into the mechanisms involved in age-related changes