Synthetic Polymyxin-based Peptides Against Multidrug Resistant Bacteria: A Therapeutic Option

[eng] Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus are nosocomial opportunistic pathogens causing a wide variety of both acute and chronic infections, such as pneumonia, bacteraemia, and urinary tract infections. Immunocompromised patients and those suffering cystic fibrosis show a particularly high susceptibility to infection by these microorganisms. Moreover, the increasing frequency of the isolation of multidrug-resistant bacteria (MDR) is a major cause for concern. Polymyxins are cyclic peptides with antimicrobial action against Gram-negative bacteria that have been available since 1949, although they were left largely unused during the seventies because of their nephrotoxicity and the availability of less toxic antimicrobials to which bacteria had not yet developed resistance. The most known polymyxin is colistin; like other cationic polypeptides, colistin is an amphipathic compound and, it is believed that this amphipathic nature is relevant to its activity against bacteria. Hence, the aim of this thesis was to synthesize antimicrobial peptides inspired in colistin scaffold and explore their antimicrobial activity against multidrug resistant bacteria such as P. aeruginosa and S. aureus, determine possible synergistic interactions with commercial antibiotics and explore their mechanisms of action. Synthesis: The main attempt in this first part was to synthesize peptides in solid phase by the Fmoc/tBu method. After synthesis, peptides were purified by preparative HPLC method and finally, peptides were characterized by MALDI-TOF. Antimicrobial activity: This part focused on the study the antimicrobial capacity of our peptides against multidrug resistant bacteria, specially P. aeruginosa and S. aureus. First peptide (AMP38) showed an acceptable antimicrobial activity against P. aureuginosa. Moreover, several imipenem-resistant P. aeruginosa were tested with AMP38 and imipenem showing a quite considerable synergistic action, both with planktonic and sessile bacteria. In addition, two peptides of the same family (CAMP113 and CAMP207) were tested against S. aureus (both planktonic and sessile) showing a surprising antimicrobial action since Gram- positive bacteria are regarding as naturally resistant to polymyxins. Moreover, these peptides showed an inordinately high selectivity index. Mechanisms of action: The final part of this doctoral thesis focused on an initial exploration of mechanisms of action of peptides above mentioned. Transmission electronic microscopy (TEM) assays were performed in order to elucidate possible interactions between peptides and outer membrane of Gram-negative bacteria. In addition, isothermal titration calorimetry assays were carried out to determine peptide-teichoic acid interactions. Data obtained from these studies are promising, being able to be a therapeutic alternative for infections produced by multidrug resistant bacteria.[spa] Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus son patógenos nosocomiales oportunistas causantes de una gran variedad de infecciones tanto crónicas como agudas, tales como neumonía, bacteriemia e infecciones del tracto urinario. Los pacientes inmunocomprometidos y aquellos que padecen fibrosis quística muestran una susceptibilidad particularmente alta a infectarse por estos microorganismos. Además, la mayor frecuencia de aislamientos de P. aeruginosa y S. aureus resistentes a múltiples fármacos (MDR) es una causa importante de preocupación. Las polimixinas son péptidos cíclicos con capacidad antibiótica contra las bacterias Gram- negativas que han estado disponibles desde 1949, aunque se dejaron en gran parte de usar durante los años setenta debido a su nefrotoxicidad y a la disponibilidad de otros antimicrobianos menos tóxicos a los cuales las bacterias aún no habían desarrollado resistencias. La polimixina más conocida es la colistina e, igual que otros polipéptidos catiónicos es un compuesto anfipático. Se cree que esta naturaleza anfipática es relevante en su actividad contra las bacterias. Por lo tanto, el objetivo de esta tesis fue sintetizar péptidos antimicrobianos inspirados en el esqueleto molecular de la colistina y explorar su actividad antimicrobiana contra bacterias resistentes a múltiples fármacos como P. aeruginosa y S. aureus, determinar posibles interacciones sinérgicas con antibióticos comerciales y realizar un primer acercamiento a sus mecanismos de acción. SÍNTESIS: El principal objetivo de esta primera parte fue sintetizar los péptidos en fase solida por el método Fmoc/tBu. Después de la síntesis, los péptidos se purificaron por el método de HPLC preparativo y, finalmente los péptidos se caracterizaron por MALDI-TOF. ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA: Esta parte se centró en el estudio de la capacidad antimicrobiana de nuestros péptidos contra bacterias multirresistentes, especialmente P. aeruginosa y S. aureus. El primer péptido (AMP38) mostró una actividad antimicrobiana aceptable frente a P. aeruginosa. Además, se probaron varias cepas de P. aeruginosa resistentes a imipenem con AMP38 mostrando una actividad sinérgica bastante considerable, tanto en bacterias planctónicas como sésiles. Adicionalmente, se realizaron ensayos con dos péptidos de la misma familia (CAMP113 y CAMP207) frente a S. aureus (tanto planctónicos como sésiles) mostrando una acción antimicrobiana sorprendente, ya que las bacterias Gram-positivas como S. aureus se consideran naturalmente resistentes a las polimixinas. MECANISMOS DE ACCIÓN: La parte final de esta tesis doctoral se centró en una exploración inicial de los mecanismos de acción de los péptidos mencionados anteriormente. Se realizaron ensayos de microscopía electrónica de transmisión (TEM) para aclarar las posibles interacciones entre los péptidos y la membrana externa de las bacterias Gram-negativas. Además, se realizaron ensayos de calorimetría de titulación isotérmica para determinar las interacciones péptido-ácido teicoico. Los datos obtenidos de estos estudios son prometedores, pudiendo ser una alternativa terapéutica para las infecciones producidas por bacterias resistentes a múltiples fármacos

Thermal coupling in ICs: aplications to the test and characterization of analogue and RF circuits

In this presentation we cover how to use low frequency or DC temperature measurements to observe figures of merit of high frequency analogue circuits.Postprint (published version

Recent Evolution of Logistic Spatial Patterns in Metropolitan Contexts: The Case of Madrilenian Urban Region

La actividad logística se ha estudiado bajo distintas ópticas, pero con escasa atención a sus impactos en la reorganización urbana y territorial. Este trabajo investiga su expansión en la Región Urbana de Madrid, considerando la localización preferente en los espacios suburbanos y rurales del área metropolitana y su polarización geográfica. El método analiza cuantitativamente tres variables que ilustran su difusión espaciotemporal: trabajadores y empresas por municipios, superficie logística por provincias y usos del suelo con aprovechamiento logístico. Los resultados confirman la propagación de la logística en los espacios metropolitanos mediante procesos de suburbanización y dispersión, al tiempo que la aparición de nuevas centralidades urbanas, consecuencia de la mayor integración de las economías capitalistas a distintas escalas.The logistic activity has been analysed by different approaches, but with a lack of attention to its impacts in the urban and spatial configuration. This work studies the logistic expansion in the Urban Region of Madrid, considering the geographical polarization and its preferential location in suburban and rural zones in the metropolitan area. The methodology considers three variables enlightening the spatial and temporal diffusion: workers and companies by municipality, logistic land use by province and different types of logistic land use. The results confirm the dissemination of logistics in metropolitan areas according to suburbanization and spread processes, at the same time appears new urban centralities as a consequence of the capitalist integration of the economy at different scales.Universidad de Castilla-La Mancha CGT18001

Anàlisis de cas: La història de la Sara, el Joel i l'Òscar (II)

El document que es presenta és un material docent amb orientacions per a fer un anàlisis de la situació familiar de tres nens (Sara, Joel i Òscar) que pateixen maltractament infantil a l’àmbit domèstic. La pràctica proposada es continuació de la pràctica "anàlisis de cas: la història de la Sara, el Joel i l'Òscar (1)" disponible en: http://hdl.handle.net/2445/62925. En aquesta segona pràctica, "anàlisis de cas: la història de la Sara, el Joel i l'Òscar (2)", es proposa l’estudi del cas des d'un equip d'atenció a la infància i l'adolescència (EAIA). Per desenvolupar la pràctica cal que l'alumnat valori els factors de risc, factors de protecció, factors de pronòstic i indicadors de maltractament del cas que s'exposa. Per fer aquest primer estudi, es proposa la utilització de l'eina de cribatge publicada pel Departament de Treball, Afers Socials i Famílies de la Generalitat de Catalunya. Un cop elaborat aquest primer anàlisis, es demana a l'alumnat, que redacti alguns dels apartats que constitueixen una síntesis avaluativa. En concret, han de redactar, en format informe els següents apartats: la situació actual de la família, la valoració del cas i la proposta administrativa

Frequency characterization of a 2.4 GHz CMOS LNA by Thermal Measurements

© 2006 IEEE. Personal use of this material is permitted. Permission from IEEE must be obtained for all other uses, in any current or future media, including reprinting/republishing this material for advertising or promotional purposes,creating new collective works, for resale or redistribution to servers or lists, or reuse of any copyrighted component of this work in other works.This paper presents a technique to obtain electrical characteristics of analog and RF circuits, based on measuring temperature at the silicon surface close to the circuit under test. Experimental results validate the feasibility of the technique. Simulated results show how this technique can be used to measure the bandwidth and central frequency of a 2.4 GHz low noise amplifier (LNA) designed in a 0.35 microns standard CMOS technology.Peer ReviewedPostprint (published version

Evolución de la política exterior de Colombia en el período 2002-2018

El artículo presenta un análisis de la política exterior colombiana en el período 2002–2018, enmarcando el estudio en tres categorías bá­sicas: la internacionalización del conflicto armado, las sociedades estratégicas del país en el contexto internacional y el servicio exterior. En sumatoria, los dieciséis años de administra­ción presidencial arrojaron que la estrategia de internacionalización del conflicto armado que ambos presidentes eligieron determinó, en gran medida, las sociedades estratégicas que el país forjó. Así, mientras Uribe Vélez privilegió el bilateralismo con Estados Unidos, Santos Calderón se acercó a la región y la Unión Europea en aras de financiar y mantener en marcha el proceso de negociación con las Farc. Con respecto al servicio exterior, aunque existe continuidad en la falta de profesionalización del mismo, el gobierno de Juan Manuel Santos tuvo gestos importantes como un aumento continuo del presupuesto al Ministerio de Relaciones Exteriores y la ampliación de las misiones diplomáticas del país

Alcance de la problemática del contrato realidad en la administración pública en Colombia

El presente artículo tiene como propósito abordar el alcance de la problemática suscitada por la declaración de la existencia de un contrato realidad en Colombia, de allí que se ofrezcan herramientas para identificar su fundamento a la luz del ordenamiento jurídico colombiano, su génesis en el contrato laboral y contrato de prestación de servicios, además de las circunstancias que generan la configuración de esta figura jurídica, puntualmente en el ámbito de la administración pública. Se encontró que el contrato realidad tiene un considerable alcance económico, judicial y laboral que repercute directamente en el Estado, habida cuenta del alto número de procesos judiciales activos y cuantiosas pretensiones en contra de la Nación por configuración del contrato realidad en el último año, sin perjuicio de las condenas ya emitidas en años anteriores. Así mismo, se halló una serie de incidencias de carácter judicial y laboral, las cuales se expresan en las decisiones que toma el funcionario judicial luego de declarar la existencia del contrato realidad, en cuanto a la calidad del demandante y la forma de repararlo. Igualmente, en la discrecionalidad del órgano disciplinante para sancionar al funcionario que haya propiciado la configuración del contrato realidad.Universidad Libre Seccional Pereira -- Facultad de Derecho, Ciencias Políticas y Sociales -- Especialización en Derecho del Trabajo, Pensiones y Riesgos LaboralesThe purpose of this article is to address the scope of the problems raised by the declaration of the existence of a reality contract in Colombia, hence tools are offered to identify its foundation in the light of the Colombian legal system, its genesis in the labor contract and contract for the provision of services, in addition to the circumstances that generate the configuration of this legal figure, specifically in the field of public administration. It was found that the reality contract has a considerable economic, judicial and labor scope that directly affects the State, given the high number of active judicial processes and numerous claims against the Nation due to the configuration of the reality contract in the last year, without prejudice to convictions already issued in previous years. Likewise, a series of incidents of a judicial and labor nature were found, which are expressed in the decisions made by the judicial officer after declaring the existence of the contract a reality, in terms of the quality of the plaintiff and the way to repair it. Likewise, in the discretion of the disciplining body to sanction the official who has led to the configuration of the actual contract

Substrate, moisture, temperature and seed germination of the threatened endemic tree Eriotheca vargasii (Malvaceae)

We studied the germination of Eriotheca vargasii (Malvaceae), a poorly known endemic Peruvian Andean tree species characteristic of the dry forests of the Torobamba river valley, Peru. We determined seed characteristics, embryo morphology, viability, and assessed the influence of substrate (natural soil and commercially prepared media), temperature (controlled at 25 ºC and at ambient temperature between 18-22 ºC), and moisture (25 % and 50 % field capacity) on seed germination. Most seeds were ovoid in shape and although they contained well-developed embryos, only 46 % of them were viable. Substrate moisture levels had no influence on germination capacity or rate. In contrast, temperature and substrate type showed strong effects on germination. We observed the highest proportion of germinated seeds in prepared media at both temperatures tested (> 61 %). Furthermore, substrate types also influenced germination rates, with lower values in natural soil. The strongest effect on germination rates was by temperature, enhancing the difference in responses in substrate types (up to 90 % in commercially prepared media at 25 ºC). The low proportion of germinated seeds in soil (< 39 %), together with external local stress factors (e.g. grazing impact by herbivores), may be the critical factors contributing to the nearly total absence of seedlings and saplings of E. vargasii in the study area despite abundant seed production. In order to ensure a supply of E. vargasii seedlings for reforestation efforts, we recommend producing E. vargasii plants in nurseries and conducting reforestation trials. We suggest that germination of seedlings is done following guidelines from this study