SUMOylation Regulates TDP-43 Splicing Activity and Nucleocytoplasmic Distribution

21 pags., 8 figs.The nuclear RNA-binding protein TDP-43 forms abnormal cytoplasmic aggregates in the brains of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and frontotemporal dementia (FTD) patients and several molecular mechanisms promoting TDP-43 cytoplasmic mislocalization and aggregation have been proposed, including defects in nucleocytoplasmic transport, stress granules (SG) disassembly and post-translational modifications (PTM). SUMOylation is a PTM which regulates a variety of cellular processes and, similarly to ubiquitination, targets lysine residues. To investigate the possible regulatory effects of SUMOylation on TDP-43 activity and trafficking, we first assessed that TDP-43 is SUMO-conjugated in the nuclear compartment both covalently and non-covalently in the RRM1 domain at the predicted lysine 136 and SUMO-interacting motif (SIM, 106–110 residues), respectively. By using the SUMO-mutant TDP-43 K136R protein, we demonstrated that SUMOylation modifies TDP-43 splicing activity, specifically exon skipping, and influences its sub-cellular localization and recruitment to SG after oxidative stress. When promoting deSUMOylation by SENP1 enzyme over-expression or by treatment with the cell-permeable SENP1 peptide TS-1, the cytoplasmic localization of TDP-43 increased, depending on its SUMOylation. Moreover, deSUMOylation by TS-1 peptide favoured the formation of small cytoplasmic aggregates of the C-terminal TDP-43 fragment p35, still containing the SUMO lysine target 136, but had no effect on the already formed p25 aggregates. Our data suggest that TDP-43 can be post-translationally modified by SUMOylation which may regulate its splicing function and trafficking, indicating a novel and druggable mechanism to explore as its dysregulation may lead to TDP-43 pathological aggregation in ALS and FTD.This study was financially supported by Fondazione Italiana di Ricerca per la SLA (AriSLA) (Grant SUMALS). M.M. is granted by La Caixa Foundation (Grant LCF/BQ/PR19/11700003).Peer reviewe

Gene-specific mitochondria dysfunctions in human TARDBP and C9ORF72 fibroblasts

Dysregulation of RNA metabolism represents an important pathogenetic mechanism in both amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and frontotemporal dementia (FTD) due to the involvement of the DNA/RNA-binding proteins TDP-43 and FUS and, more recently, of C9ORF72. A potential link between dysregulation of RNA metabolism and mitochondrial dysfunction is recently emerged in TDP-43 disease models. To further investigate the possible relationship between these two pathogenetic mechanisms in ALS/FTD, we studied mitochondria functionality in human mutant TARDBP(p.A382T) and C9ORF72 fibroblasts grown in galactose medium to induce a switch from a glycolytic to an oxidative metabolism. In this condition we observed significant changes in mitochondria morphology and ultrastructure in both mutant cells with a fragmented mitochondria network particularly evident in TARDBP(p.A382T) fibroblasts. From analysis of the mitochondrial functionality, a decrease of mitochondria membrane potential with no alterations in oxygen consumption rate emerged in TARDBP fibroblasts. Conversely, an increased oxygen consumption and mitochondria hyperpolarization were observed in C9ORF72 fibroblasts in association to increased ROS and ATP content. We found evidence of autophagy/mitophagy in dynamic equilibrium with the biogenesis of novel mitochondria, particularly in mutant C9ORF72 fibroblasts where an increase of mitochondrial DNA content and mass, and of PGC1-α protein was observed. Our imaging and biochemical data show that wild-type and mutant TDP-43 proteins do not localize at mitochondria so that the molecular mechanisms responsible for such mitochondria impairment remain to be further elucidated. For the first time our findings assess a link between C9ORF72 and mitochondria dysfunction and indicate that mitochondria functionality is affected in TARDBP and C9ORF72 fibroblasts with gene-specific features in oxidative conditions. As in neuronal metabolism mitochondria are actively used for ATP production, we speculate that TARDBP and C9ORF72 mutations might trigger cell death by impairing not only RNA metabolism, but also mitochondria activity in ALS/FTD neurons

Additional file 1: Figure S1. of Gene-specific mitochondria dysfunctions in human TARDBP and C9ORF72 fibroblasts

Mitochondria morphology in mutant TARDBP and C9ORF72 fibroblasts after 48 h in galactose medium. Representative confocal images of mitochondrial network in primary fibroblasts from three healthy controls (C1, C2, C3), three ALS patients carrying mutation in TARDBP gene (p.A382T; T1, T2, T3) and three ALS//FTD patients with pathological expansion of the hexanucleotide repeat in C9ORF72 (C9.2, C9.3, C9.4) transfected with pDsRed2Mito construct. Bar, 10μm. Figure S2. Mitochondria functionality in mutant TARDBP and C9ORF72 fibroblasts. Measurement of mitochondrial membrane potential by flow cytometry analysis of Mitotracker Red (MTR) positive fibroblasts (from 4 healthy controls, 3 TARDBP and 4 C9ORF72 mutated patients) maintained in medium with galactose and without glucose. Median ± SEM, n = 3 different DIV; One-way ANOVA with Dunnett’s multiple comparison test; **p < 0.01). Figure S3. Analysis of mitochondria membrane potential in mutant TARDBP and C9ORF72 fibroblasts in glycolitic conditions. Measurement of mitochondrial (MMP) by flow cytometry analysis of TMRM-positive fibroblasts (4 healthy controls, 3 TARDBP and 4 C9ORF72), maintained in medium with 2 g/l glucose. Median ± SEM, n = 3 different DIV; One-way ANOVA with Dunnett’s multiple comparison test). Figure S4. Analysis of mitochondria mass in mutant TARDBP and C9ORF72 fibroblasts in glycolitic conditions. Measurement of mitochondrial mass (MM) by flow cytometry analysis of Mitotracker green (MTG)-positive fibroblasts (4 healthy controls, 3 TARDBP and 4 C9ORF72), maintained in medium with 2 g/l glucose. Median ± SEM, n = 3 different DIV; One-way ANOVA with Dunnett’s multiple comparison test). Figure S5. TDP-43 sub-cellular localization in C9ORF72 fibroblasts after 48 h in galactose medium. Representative immunofluorescence images of TDP-43 (green) in primary fibroblasts from healthy controls (four) and ALS/FTD patients carrying mutation in C9ORF72 gene (four), incubated with Mitotracker Red. Bar, 10 μm. Table S1. Clinical features of healthy controls, TARDBP- and C9ORF72-mutated patients. Table S2. Primer sequences and probes for Quantitative Real time PCR. Table S3. Respiratory electron transport chain activity. Values are expressed as nmol/min/mg protein and normalised with citrate synthase activity. (PDF 609 kb

Global attitudes in the management of acute appendicitis during COVID-19 pandemic: ACIE Appy Study

Background: Surgical strategies are being adapted to face the COVID-19 pandemic. Recommendations on the management of acute appendicitis have been based on expert opinion, but very little evidence is available. This study addressed that dearth with a snapshot of worldwide approaches to appendicitis. Methods: The Association of Italian Surgeons in Europe designed an online survey to assess the current attitude of surgeons globally regarding the management of patients with acute appendicitis during the pandemic. Questions were divided into baseline information, hospital organization and screening, personal protective equipment, management and surgical approach, and patient presentation before versus during the pandemic. Results: Of 744 answers, 709 (from 66 countries) were complete and were included in the analysis. Most hospitals were treating both patients with and those without COVID. There was variation in screening indications and modality used, with chest X-ray plus molecular testing (PCR) being the commonest (19\ub78 per cent). Conservative management of complicated and uncomplicated appendicitis was used by 6\ub76 and 2\ub74 per cent respectively before, but 23\ub77 and 5\ub73 per cent, during the pandemic (both P < 0\ub7001). One-third changed their approach from laparoscopic to open surgery owing to the popular (but evidence-lacking) advice from expert groups during the initial phase of the pandemic. No agreement on how to filter surgical smoke plume during laparoscopy was identified. There was an overall reduction in the number of patients admitted with appendicitis and one-third felt that patients who did present had more severe appendicitis than they usually observe. Conclusion: Conservative management of mild appendicitis has been possible during the pandemic. The fact that some surgeons switched to open appendicectomy may reflect the poor guidelines that emanated in the early phase of SARS-CoV-2

Prognostic impact of diabetes and prediabetes on survival outcomes in patients with chronic heart failure: A post-hoc analysis of the GISSI-HF (Gruppo Italiano per lo Studio della Sopravvivenza nella Insufficienza Cardiaca-Heart Failure) trial

826BACKGROUND: The independent prognostic impact of diabetes mellitus (DM) and prediabetes mellitus (pre-DM) on survival outcomes in patients with chronic heart failure has been investigated in observational registries and randomized, clinical trials, but the results have been often inconclusive or conflicting. We examined the independent prognostic impact of DM and pre-DM on survival outcomes in the GISSI-HF (Gruppo Italiano per lo Studio della Sopravvivenza nella Insufficienza Cardiaca-Heart Failure) trial. METHODS AND RESULTS: We assessed the risk of all-cause death and the composite of all-cause death or cardiovascular hospitalization over a median follow-up period of 3.9 years among the 6935 chronic heart failure participants of the GISSI-HF trial, who were stratified by presence of DM (n=2852), pre-DM (n=2013), and non-DM (n=2070) at baseline. Compared with non-DM patients, those with DM had remarkably higher incidence rates of all-cause death (34.5% versus 24.6%) and the composite end point (63.6% versus 54.7%). Conversely, both event rates were similar between non-DM patients and those with pre-DM. Cox regression analysis showed that DM, but not pre-DM, was associated with an increased risk of all-cause death (adjusted hazard ratio, 1.43; 95% CI, 1.28-1.60) and of the composite end point (adjusted hazard ratio, 1.23; 95% CI, 1.13-1.32), independently of established risk factors. In the DM subgroup, higher hemoglobin A1c was also independently associated with increased risk of both study outcomes (all-cause death: adjusted hazard ratio, 1.21; 95% CI, 1.02-1.43; and composite end point: adjusted hazard ratio, 1.14; 95% CI, 1.01-1.29, respectively). CONCLUSIONS: Presence of DM was independently associated with poor long-term survival outcomes in patients with chronic heart failure.openopenDauriz, Marco; Targher, Giovanni; Temporelli, Pier Luigi; Lucci, Donata; Gonzini, Lucio; Nicolosi, Gian Luigi; Marchioli, Roberto; Tognoni, Gianni; Latini, Roberto; Cosmi, Franco; Tavazzi, Luigi; Maggioni, Aldo Pietro*; Moccetti, T.; Rossi, M.G.; Pasotti, E.; Vaghi, F.; Roncarolo, P.; Zunino, M.T.; Matta, F.; Actis Perinetto, E.; Gaita, F.; Azzaro, G.; Zanetta, M.; Paino, A.M.; Parravicini, U.; Vegis, D.; Conte, R.; Ferraro, P.; De Bernardi, A.; Morelloni, S.; Fagnani, M.; Greco Lucchina, P.; Montagna, L.; Bellone, E.; Sappè, D.; Ferraro, F.; Delucchi, M.; Reynaud, S.G.; Dore, M.; La Brocca, A.; Massobrio, N.; Bo, L.; Trinchero, R.; Imazio, M.; Brocchi, G.; Nejrotti, A.; Rissone, L.; Gabasio, S.; Zocchi, C.; Randazzo, S.; Crenna, A.; Giannuzzi, P.; Bonanomi, E.; Mezzani, A.; De Marchi, M.; Begliuomini, G.; Gianonatti, C.A.; Gavazzi, A.; Grosu, A.; Dei Cas, L.; Nodari, S.; Garyfallidis, P.; Bertoletti, A.; Bonifazi, C.; Arisi, S.; Mascaro, F.; Fraccarollo, M.; Dell'Orto, S.; Sfolcini, M.; Bortolini, F.; Raccagni, D.; Turelli, A.; Santarone, M.; Miglierina, E.; Sormani, L.; Jemoli, R.; Tettamanti, F.; Pirelli, S.; Bianchi, C.; Verde, S.; Mariani, M.; Ziacchi, V.; Ferrazza, A.; Russo, A.; Bortolotti, M.; Pasini, G.F.; Volpi, A.; Jones, K.N.; Cuzzucrea, D.; Gullace, G.; Carbone, C.; Granata, A.; De Servi, S.; Del Rosso, G.; Inserra, C.; Renaldini, E.; Zappa, C.; Moretti, M.; Zanini, R.; Ferrari, M.; Moroni, E.; Cei, A.; Lissi, C.; Dovico, E.; Fiorentini, C.; Palermo, P.; Brusoni, B.; Negrini, M.; Heyman, J.; Danzi, G.B.; Finzi, A.; Frigerio, M.; Turazza, F.; Beretta, L.; Sachero, A.; Casazza, F.; Squadroni, L.; Lombardi, F.; Marano, L.; Margonato, A.; Fragasso, G.; Febo, O.C.; Aiolfi, E.; Olmetti, F.; Grieco, A.; Antonazzo, V.; Specchia, G.; Mortara, A.; Robustelli, F.; Songini, M.G.; Schweiger, C.; Frisinghelli, A.; Palvarini, M.; Campana, C.; Scelsi, L.; Ajmone Marsan, N.; Cobelli, F.; Gualco, A.; Opasich, C.; De Feo, S.; Mazzucco, R.; Iannone, M.A.; Diaco, T.; Zaniboni, D.; Milanesi, G.; Nassiacos, D.; Meloni, S.; Giani, P.; Nicoli, T.; Malinverni, C.; Gusmini, A.; Pozzoni, L.; Bisiani, G.; Margaroli, P.; Schizzarotto, A.; Daverio, A.; Occhi, G.; Partesana, N.; Bandini, P.; Rosella, M.G.; Giustiniani, S.; Cucchi, G.; Pedretti, R.; Raimondo, R.; Vaninetti, R.; Fedele, A.; Ghezzi, I.; Rezzonico, E.; Salerno Uriarte, J.A.; Morandi, F.; Salvucci, F.; Valenti, C.; Graziano, G.; Romanò, M.; Cimminiello, C.; Mangone, I.; Lombardo, M.; Quorso, P.; Marinoni, G.; Breghi, M.; Erckert, M.; Dienstl, A.; Mirante Marini, G.; Stefenelli, C.; Cioffi, G.; Buczkowska, E.; Bonanome, A.; Bazzanini, F.; Parissenti, L.; Serafini, C.; Catania, G.; Tarantini, L.; Rigatelli, G.; Boni, S.; Pasini, A.; Masini, E.; Zampiero, A.A.; Zanchetta, M.; Franceschetto, L.; Delise, P.; Marcon, C.; Sacchetta, A.; Borgese, L.; Artusi, L.; Casolino, P.; Corbara, F.; Banzato, A.; Barbiero, M.; Aldegheri, M.P.; Bazzucco, R.; Crivellenti, G.; Raviele, A.; Zanella, C.; Pascotto, P.; Sarto, P.; Milan, S.; Barbieri, E.; Girardi, P.; Dalla Villa, W.; Dalle Mule, J.; Di Sipio, M.L.; Cazzin, R.; Milan, D.; Zonzin, P.; Carraro, M.; Rossi, R.; Carbonieri, E.; Rossi, I.; Stritoni, P.; Meneghetti, P.; Risica, G.; Tenderini, P.L.; Vassanelli, C.; Zanolla, L.; Perini, G.; Brighetti, G.; Chiozza, R.; Giuliano, G.; Baldin, M.G.; Gortan, R.; Cesanelli, R.; Nicolosi, G.L.; Piazza, R.; Mos, L.; Vriz, O.; Pavan, D.; Pascottini, G.; Alberti, E.; Werren, M.; Solinas, L.; Sinagra, G.; Longaro, F.; Fioretti, P.; Albanese, M.C.; Miani, D.; Gianrossi, R.; Pende, A.; Rubartelli, P.; Magaia, O.; Domenicucci, S.; Caruso, D.; Faraguti, A.S.; Magliani, L.; Miccoli, F.; Guglielmino, G.; Bertoli, D.; Cantarelli, A.; Orlandi, S.; Vallebona, A.; Pozzati, A.; Brega, G.; Pancaldi, L.G.; Vandelli, R.; Urbinati, S.; Poci, M.G.; Zoli, M.; Costa, G.M.; Guiducci, U.; Zobbi, G.; Tartagni, F.; Tisselli, A.; Gentili, A.; Pieri, P.; Cagnetta, E.; Bendinelli, S.; Barbieri, A.; Conti, R.; Ferrari, R.; Merlini, F.; Fucili, A.; Moruzzi, P.; Buia, E.; Galvani, M.; Ferrini, D.; Baggioni, G.; Yiannacopulu, P.; Canè, G.; Bonfiglioli, A.; Zandomeneghi, R.; Brugioni, L.; Giannini, A.; Di Ruvo, R.; Giuliani, M.; Rusconi, L.; Del Corso, P.; Piovaccari, G.; Bologna, F.; Venturi, P.; Melandri, F.; Bagni, E.; Bolognese, L.; Perticucci, R.; Zuppiroli, A.; Nannini, M.; Consoli, N.; Petrone, P.; Pipitò, C.; Colombi, L.; Bernardi, D.; Mariani, P.R.; Testa, R.; Mazzinghi, F.; Cosmi, F.; Cosmi, D.; Zipoli, A.; Cecchi, A.; Castelli, G.; Ciaccheri, M.; Mori, F.; Pieri, F.; Valoti, P.; Chiarantini, D.; Santoro, G.M.; Minneci, C.; Marchi, F.; Milli, M.; Zambaldi, G.; Zipoli, A.; Brandinelli Geri, A.A.; Cipriani, M.; Alessandri, M.; Severi, S.; Stefanelli, S.; Comella, A.; Poddighe, R.; Digiorgio, A.; Carluccio, M.; Berti, S.; Rizza, A.; Bonatti, V.; Molendi, V.; Brancato, A.; D'Aprile, N.; Giappichini, G.; Del Vecchio, S.; Mantini, G.; De Tommasi, F.; Meucci, G.; Cordoni, M.; Bechi, S.; Barsotti, L.; Baldini, P.; Romei, M.; Scopelliti, G.; Lauri, G.; Pestelli, F.; Furiozzi, F.; Cocchieri, M.; Severini, D.; Patriarchi, F.; Chiocchi, P.; Buccolieri, M.; Martinelli, S.; Wee, A.; Angelici, F.; Bernardinangeli, M.; Proietti, G.; Biscottini, B.; Panciarola, R.; Marinacci, L.; Perna, G.P.; Gabrielli, D.; Moraca, A.; Moretti, L.; Partemi, L.; Gregori, G.; Amici, R.; Patteri, G.; Capone, P.; Savini, E.; Morgagni, G.L.; Paccaloni, L.; Pezzuoli, F.; Carincola, S.; Papi, S.; De Crescentini, S.; Gerardi, P.; Midi, P.; Gallenzi, E.; Pajes, G.; Mancone, C.; Di Spirito, V.; Di Gennaro, M.; Calcagno, S.; Toscano, S.; Antonicoli, S.; Carta, F.; Giorgi, G.; Comito, F.; Daniele, E.; Ciarla, O.; Gelfo, P.G.; Acquaviva, A.; Testa, D.; Testa, G.; Pagliaro, F.A.; Russo, F.; Vetta, F.; Marchese, I.; Di Sciascio, G.; D'Ambrosio, A.; Leggio, F.; Del Sindaco, D.; Lacchè, A.; Avallone, A.; Risa, M.P.; Azzolini, P.; Baldo, E.; Giovannini, E.; Pulignano, G.; Tondo, C.; Picchio, E.; Biffani, E.; Tanzi, P.; Pozzar, F.; Farnetti, F.; Azzarito, M.; Santini, M.; Varveri, A.; Ferraiuolo, G.; Valtorta, C.; Gaspardone, A.; Barbato, G.; Ceci, V.; Aspromonte, N.; Bellocci, F.; Colizzi, C.; Fedele, F.; Perez, F.I.; Galati, A.; Rossetti, A.; Mainella, A.; Ciuffetta, D.; Matteucci, C.; Busi, G.; De Angelis, A.; Farina, G.; Granatelli, A.; Leone, F.; Frasca, F.; Pajes, G.; Di Giovambattista, R.; Castellani, G.; Massaro, G.; Mastrogiuseppe, G.; Vacri, A.; De Sanctis, F.; Cioli, M.; Di Luzio, S.; Napoletano, C.; Piccioni, L.L.; De Simone, G.; Ottaviano, A.; Mazza, V.; Spedaliere, C.; Staniscia, D.; Calgione, E.; De Marco, G.; Chiacchio, T.; Di Napoli, T.; Romanzi, S.; Salvatore, G.; Golino, P.; Palermo, A.; Mascia, F.; Vetrano, A.; Vinciguerra, A.; Caliendo, L.; Longobardi, R.; De Caro, G.; Di Nola, R.; Piemonte, F.; Prinzi, D.; De Rosa, P.; De Rosa, V.; Riello, F.; Capuano, V.; Vecchio, G.; Landi, M.; Amato, S.; Garofalo, M.; Caruso, D.; D'Avino, M.; Sensale, P.; Maiolica, O.; Santoro, R.; Caso, P.; Miceli, D.; Maurea, N.; Bianchi, U.; Crispo, C.; Chiariello, M.; Perrone Filardi, P.; Russo, L.; Capuano, N.; Ungaro, G.; Vergara, G.; Scafuro, F.; D'Angelo, G.; Campaniello, C.; Bottiglieri, P.; Volpe, A.; Battista, R.; De Risi, L.; Cardillo, G.; Sibilio, G.; Marino, A.P.; Silvestri, F.; Predotti, P.; Iervoglini, A.; Stefanelli, S.; De Matteis, C.; Sarnicola, P.; Matarazzo, M.M.; Baldi, S.; Iuliano, V.; Astarita, C.; Cuccaro, P.; Liguori, A.; Liguori, G.; Gregorio, G.; Petraglia, L.; Antonelli, G.; Amodio, G.; De Luca, I.; Traversa, D.; Franchini, G.; Lenti, M.L.; Cavallari, D.; D'Agostino, C.; Scalera, G.; Altamura, C.M.; Russo, M.; Mascolo, A.R.; Pettinati, G.; Ciricugno, S.A.; Scrutinio, D.; Passantino, A.; Mastrangelo, D.; Di Masi, A.; De Carne, R.; Cannone, M.; Dibiase, F.; Pensato, M.; Loliva, F.; Trapani, F.; Panettieri, I.; Leone, L.; Di Biase, M.; Carrone, M.; Gallone, V.; Cocco, F.; Costantini, M.; Tritto, C.; Cavalieri, F.; Stella, L.; Magliari, F.; Callerame, M.; De Giorgi, A.; Pellegrino, L.; Correra, M.; Portulano, V.; Nisi, G.L.; Grassi, G.; Cristallo, E.; De Laura, D.; Salerno, C.; Fanelli, R.; Villella, M.; Pede, S.; Renna, A.; De Lorenzi, E.; Urso, L.; Lenti, V.; Peluso, A.; Baldi, N.; Polimeni, G.; Galati, A.; Palma, P.; Lauletta, R.; Tagliamonte, E.; Cirillo, T.; Silvestri, B.; Centonze, G.; D'Alessandro, B.; Truncellito, L.; Mecca, D.; Petruzzi, M.A.; Coviello, R.O.M.; Lopizzo, A.; Chiaffitelli, M.; Barbuzzi, S.; Gubelli, S.; Germinario, G.; Cosentino, N.; Mingrone, A.; Vico, R.; Borrello, G.; Mazza, M.L.; Cimino, R.; Galasso, D.; Cassadonte, F.; Talarico, U.; Perticone, F.; Cassano, S.; Catapano, F.; Calemme, S.; Feraco, E.; Cloro, C.; Misuraca, G.; Caporale, R.; Vigna, L.; Spagnuolo, V.; De Rosa, F.; Spadafora, G.; Zampaglione, G.; Russo, R.; Schipani, F.A.; Ferragina, A.F.; Stranieri, D.; Musca, G.; Carpino, C.; Bencardino, P.; Raimondo, F.; Musacchio, D.; Pulitanò, G.; Ruggeri, A.; Provenzano, A.; Salituri, S.; Musolino, M.; Calandruccio, S.; Marrari, A.; Tripodi, E.; Scali, R.; Anastasio, L.; Arone, A.; Aragona, P.; Donnangelo, L.; Comito, M.G.A.; Bilotta, F.; Vaccaro, I.; Rametta, R.; Ventura, V.; Bonvegna, A.; Alì, A.; Cinnirella, C.; Raineri, M.; Pompeo, F.; Cascio Ingurgio, N.; Carini, V.; Coco, R.; Giunta, G.; Leonardi, G.; Randazzo, V.; Di Blasi, V.; Tamburino, C.; Russo, G.; Mangiameli, S.; Cardillo, R.; Castelli, D.; Inserra, V.; Arena, A.; Gulizia, M.M.; Raciti, S.; Rapisarda, G.; Romano, R.; Prestifilippo, P.; Braschi, G.B.; Ledda, G.; Terrazzino, R.; De Caro, M.; Scilabra, G.; Graffagnino, B.; Grassi, R.; Di Tano, G.; Scimone, G.F.; Vasquez, L.; Coppolino, C.; Casale, A.; Castelli, M.; D'Urso, G.; D'Antonio, E.; Lo Presti, L.; Badalamenti, E.; Conti, P.; Sanfilippo, N.; Cirrincione, V.; Cinà, M.T.; Cusimano, G.; Taormina, A.; Giuliano, P.; Bajardi, A.; Mandalà, V.; Canonico, A.; Geraci, G.; Sabella, F.P.; Enia, F.; Floresta, A.M.; Lo Cascio, I.; Gumina, D.; Cavallaro, A.; Piccione, G.; Ferrante, R.; Blandino, M.; Iudicello, M.S.; Mossuti, E.; Romano, G.; Lombardo, L.; Monastra, P.; Di Vincenzo, D.; Porcu, M.; Orrù, P.; Muscas, F.; Giardina, G.; Corda, M.; Locci, G.; Podda, A.; Ledda, M.; Siddi, P.; Lai, C.; Pili, G.; Mercuro, G.; Mureddu, G.; Ganau, A.; Meloni, G.; Poddighe, G.; Sanna, G.; Barlera, Simona; Franzosi, Maria Grazia; Porcu, Maurizio; Yusuf, Salim; Camerini, Fulvio; Cohn, Jay N.; Decarli, Adriano; Pitt, Bertram; Sleight, Peter; Poole-Wilson, Philip A.; Geraci, Enrico; Scherillo, Marino; Fabbri, Gianna; Bartolomei, Barbara; Bertoli, Daniele; Cobelli, Franco; Fresco, Claudio; Ledda, Antonietta; Levantesi, Giacomo; Opasich, Cristina; Rusconi, Franco; Sinagra, Gianfranco; Turazza, Fabio; Volpi, Alberto; Ceseri, Martina; Alongi, Gianluca; Atzori, Antonio; Bambi, Filippo; Bastarolo, Desiree; Bianchini, Francesca; Cangioli, Iacopo; Canu, Vittoriana; Caporusso, Concetta; Cenni, Gabriele; Cintelli, Laura; Cocchio, Michele; Confente, Alessia; Fenicia, Eva; Friso, Giorgio; Gianfriddo, Marco; Grilli, Gianluca; Lazzaro, Beatrice; Lonardo, Giuseppe; Luise, Alessia; Nota, Rachele; Orlando, Mariaelena; Petrolo, Rosaria; Pierattini, Chiara; Pierota, Valeria; Provenzani, Alessandro; Quartuccio, Velia; Ragno, Anna; Serio, Chiara; Spolaor, Alvise; Tafi, Arianna; Tellaroli, Elisa; Ghio, Stefano; Ghizzardi, Elisa; Masson, Serge; Crociati, Lella; La Rovere, Maria Teresa; Corrà, Ugo; Di Giulio, Paola; Finzi, Andrea; Gorini, Marco; Milani, Valentina; Orsini, Giampietro; Bianchini, Elisa; Cabiddu, Silvia; Cangioli, Ilaria; Cipressa, Laura; Cipressa, Maria Lucia; Di Bitetto, Giuseppina; Ferri, Barbara; Galbiati, Luisa; Lorimer, Andrea; Pera, Carla; Priami, Paola; Vasamì, AntonellaDauriz, Marco; Targher, Giovanni; Temporelli, Pier Luigi; Lucci, Donata; Gonzini, Lucio; Nicolosi, Gian Luigi; Marchioli, Roberto; Tognoni, Gianni; Latini, Roberto; Cosmi, Franco; Tavazzi, Luigi; Maggioni, Aldo Pietro; Moccetti, T.; Rossi, M. G.; Pasotti, E.; Vaghi, F.; Roncarolo, P.; Zunino, M. T.; Matta, F.; Actis Perinetto, E.; Gaita, F.; Azzaro, G.; Zanetta, M.; Paino, A. M.; Parravicini, U.; Vegis, D.; Conte, R.; Ferraro, P.; De Bernardi, A.; Morelloni, S.; Fagnani, M.; Greco Lucchina, P.; Montagna, L.; Bellone, E.; Sappè, D.; Ferraro, F.; Delucchi, M.; Reynaud, S. G.; Dore, M.; La Brocca, A.; Massobrio, N.; Bo, L.; Trinchero, R.; Imazio, M.; Brocchi, G.; Nejrotti, A.; Rissone, L.; Gabasio, S.; Zocchi, C.; Randazzo, S.; Crenna, A.; Giannuzzi, P.; Bonanomi, E.; Mezzani, A.; De Marchi, M.; Begliuomini, G.; Gianonatti, C. A.; Gavazzi, A.; Grosu, A.; Dei Cas, L.; Nodari, S.; Garyfallidis, P.; Bertoletti, A.; Bonifazi, C.; Arisi, S.; Mascaro, F.; Fraccarollo, M.; Dell'Orto, S.; Sfolcini, M.; Bortolini, F.; Raccagni, D.; Turelli, A.; Santarone, M.; Miglierina, E.; Sormani, L.; Jemoli, R.; Tettamanti, F.; Pirelli, S.; Bianchi, C.; Verde, S.; Mariani, M.; Ziacchi, V.; Ferrazza, A.; Russo, A.; Bortolotti, M.; Pasini, G. F.; Volpi, A.; Jones, K. N.; Cuzzucrea, D.; Gullace, G.; Carbone, C.; Granata, A.; De Servi, S.; Del Rosso, G.; Inserra, C.; Renaldini, E.; Zappa, C.; Moretti, M.; Zanini, R.; Ferrari, M.; Moroni, E.; Cei, A.; Lissi, C.; Dovico, E.; Fiorentini, C.; Palermo, P.; Brusoni, B.; Negrini, M.; Heyman, J.; Danzi, G. B.; Finzi, A.; Frigerio, M.; Turazza, F.; Beretta, L.; Sachero, A.; Casazza, F.; Squadroni, L.; Lombardi, F.; Marano, L.; Margonato, A.; Fragasso, G.; Febo, O. C.; Aiolfi, E.; Olmetti, F.; Grieco, A.; Antonazzo, V.; Specchia, G.; Mortara, A.; Robustelli, F.; Songini, M. G.; Schweiger, C.; Frisinghelli, A.; Palvarini, M.; Campana, C.; Scelsi, L.; Ajmone Marsan, N.; Cobelli, F.; Gualco, A.; Opasich, C.; De Feo, S.; Mazzucco, R.; Iannone, M. A.; Diaco, T.; Zaniboni, D.; Milanesi, G.; Nassiacos, D.; Meloni, S.; Giani, P.; Nicoli, T.; Malinverni, C.; Gusmini, A.; Pozzoni, L.; Bisiani, G.; Margaroli, P.; Schizzarotto, A.; Daverio, A.; Occhi, G.; Partesana, N.; Bandini, P.; Rosella, M. G.; Giustiniani, S.; Cucchi, G.; Pedretti, R.; Raimondo, R.; Vaninetti, R.; Fedele, A.; Ghezzi, I.; Rezzonico, E.; Salerno Uriarte, J. A.; Morandi, F.; Salvucci, F.; Valenti, C.; Graziano, G.; Romanò, M.; Cimminiello, C.; Mangone, I.; Lombardo, M.; Quorso, P.; Marinoni, G.; Breghi, M.; Erckert, M.; Dienstl, A.; Mirante Marini, G.; Stefenelli, C.; Cioffi, G.; Buczkowska, E.; Bonanome, A.; Bazzanini, F.; Parissenti, L.; Serafini, C.; Catania, G.; Tarantini, L.; Rigatelli, G.; Boni, S.; Pasini, A.; Masini, E.; Zampiero, A. A.; Zanchetta, M.; Franceschetto, L.; Delise, P.; Marcon, C.; Sacchetta, A.; Borgese, L.; Artusi, L.; Casolino, P.; Corbara, F.; Banzato, A.; Barbiero, M.; Aldegheri, M. P.; Bazzucco, R.; Crivellenti, G.; Raviele, A.; Zanella, C.; Pascotto, P.; Sarto, P.; Milan, S.; Barbieri, E.; Girardi, P.; Dalla Villa, W.; Dalle Mule, J.; Di Sipio, M. L.; Cazzin, R.; Milan, D.; Zonzin, P.; Carraro, M.; Rossi, R.; Carbonieri, E.; Rossi, I.; Stritoni, P.; Meneghetti, P.; Risica, G.; Tenderini, P. L.; Vassanelli, C.; Zanolla, L.; Perini, G.; Brighetti, G.; Chiozza, R.; Giuliano, G.; Baldin, M. G.; Gortan, R.; Cesanelli, R.; Nicolosi, G. L.; Piazza, R.; Mos, L.; Vriz, O.; Pavan, D.; Pascottini, G.; Alberti, E.; Werren, M.; Solinas, L.; Sinagra, G.; Longaro, F.; Fioretti, P.; Albanese, M. C.; Miani, D.; Gianrossi, R.; Pende, A.; Rubartelli, P.; Magaia, O.; Domenicucci, S.; Caruso, D.; Faraguti, A. S.; Magliani, L.; Miccoli, F.; Guglielmino, G.; Bertoli, D.; Cantarelli, A.; Orlandi, S.; Vallebona, A.; Pozzati, A.; Brega, G.; Pancaldi, L. G.; Vandelli, R.; Urbinati, S.; Poci, M. G.; Zoli, M.; Costa, G. M.; Guiducci, U.; Zobbi, G.; Tartagni, F.; Tisselli, A.; Gentili, A.; Pieri, P.; Cagnetta, E.; Bendinelli, S.; Barbieri, A.; Conti, R.; Ferrari, R.; Merlini, F.; Fucili, A.; Moruzzi, P.; Buia, E.; Galvani, M.; Ferrini, D.; Baggioni, G.; Yiannacopulu, P.; Canè, G.; Bonfiglioli, A.; Zandomeneghi, R.; Brugioni, L.; Giannini, A.; Di Ruvo, R.; Giuliani, M.; Rusconi, L.; Del Corso, P.; Piovaccari, G.; Bologna, F.; Venturi, P.; Melandri, F.; Bagni, E.; Bolognese, L.; Perticucci, R.; Zuppiroli, A.; Nannini, M.; Consoli, N.; Petrone, P.; Pipitò, C.; Colombi, L.; Bernardi, D.; Mariani, P. R.; Testa, R.; Mazzinghi, F.; Cosmi, F.; Cosmi, D.; Zipoli, A.; Cecchi, A.; Castelli, G.; Ciaccheri, M.; Mori, F.; Pieri, F.; Valoti, P.; Chiarantini, D.; Santoro, G. M.; Minneci, C.; Marchi, F.; Milli, M.; Zambaldi, G.; Zipoli, A.; Brandinelli Geri, A. A.; Cipriani, M.; Alessandri, M.; Severi, S.; Stefanelli, S.; Comella, A.; Poddighe, R.; Digiorgio, A.; Carluccio, M.; Berti, S.; Rizza, A.; Bonatti, V.; Molendi, V.; Brancato, A.; D'Aprile, N.; Giappichini, G.; Del Vecchio, S.; Mantini, G.; De Tommasi, F.; Meucci, G.; Cordoni, M.; Bechi, S.; Barsotti, L.; Baldini, P.; Romei, M.; Scopelliti, G.; Lauri, G.; Pestelli, F.; Furiozzi, F.; Cocchieri, M.; Severini, D.; Patriarchi, F.; Chiocchi, P.; Buccolieri, M.; Martinelli, S.; Wee, A.; Angelici, F.; Bernardinangeli, M.; Proietti, G.; Biscottini, B.; Panciarola, R.; Marinacci, L.; Perna, G. P.; Gabrielli, D.; Moraca, A.; Moretti, L.; Partemi, L.; Gregori, G.; Amici, R.; Patteri, G.; Capone, P.; Savini, E.; Morgagni, G. L.; Paccaloni, L.; Pezzuoli, F.; Carincola, S.; Papi, S.; De Crescentini, S.; Gerardi, P.; Midi, P.; Gallenzi, E.; Pajes, G.; Mancone, C.; Di Spirito, V.; Di Gennaro, M.; Calcagno, S.; Toscano, S.; Antonicoli, S.; Carta, F.; Giorgi, G.; Comito, F.; Daniele, E.; Ciarla, O.; Gelfo, P. G.; Acquaviva, A.; Testa, D.; Testa, G.; Pagliaro, F. A.; Russo, F.; Vetta, F.; Marchese, I.; Di Sciascio, G.; D'Ambrosio, A.; Leggio, F.; Del Sindaco, D.; Lacchè, A.; Avallone, A.; Risa, M. P.; Azzolini, P.; Baldo, E.; Giovannini, E.; Pulignano, G.; Tondo, C.; Picchio, E.; Biffani, E.; Tanzi, P.; Pozzar, F.; Farnetti, F.; Azzarito, M.; Santini, M.; Varveri, A.; Ferraiuolo, G.; Valtorta, C.; Gaspardone, A.; Barbato, G.; Ceci, V.; Aspromonte, N.; Bellocci, F.; Colizzi, C.; Fedele, F.; Perez, F. I.; Galati, A.; Rossetti, A.; Mainella, A.; Ciuffetta, D.; Matteucci, C.; Busi, G.; De Angelis, A.; Farina, G.; Granatelli, A.; Leone, F.; Frasca, F.; Pajes, G.; Di Giovambattista, R.; Castellani, G.; Massaro, G.; Mastrogiuseppe, G.; Vacri, A.; De Sanctis, F.; Cioli, M.; Di Luzio, S.; Napoletano, C.; Piccioni, L. L.; De Simone, G.; Ottaviano, A.; Mazza, V.; Spedaliere, C.; Staniscia, D.; Calgione, E.; De Marco, G.; Chiacchio, T.; Di Napoli, T.; Romanzi, S.; Salvatore, G.; Golino, P.; Palermo, A.; Mascia, F.; Vetrano, A.; Vinciguerra, A.; Caliendo, L.; Longobardi, R.; De Caro, G.; Di Nola, R.; Piemonte, F.; Prinzi, D.; De Rosa, P.; De Rosa, V.; Riello, F.; Capuano, V.; Vecchio, G.; Landi, M.; Amato, S.; Garofalo, M.; Caruso, D.; D'Avino, M.; Sensale, P.; Maiolica, O.; Santoro, R.; Caso, P.; Miceli, D.; Maurea, N.; Bianchi, U.; Crispo, C.; Chiariello, M.; Perrone Filardi, P.; Russo, L.; Capuano, N.; Ungaro, G.; Vergara, G.; Scafuro, F.; D'Angelo, G.; Campaniello, C.; Bottiglieri, P.; Volpe, A.; Battista, R.; De Risi, L.; Cardillo, G.; Sibilio, G.; Marino, A. P.; Silvestri, F.; Predotti, P.; Iervoglini, A.; Stefanelli, S.; De Matteis, C.; Sarnicola, P.; Matarazzo, M. M.; Baldi, S.; Iuliano, V.; Astarita, C.; Cuccaro, P.; Liguori, A.; Liguori, G.; Gregorio, G.; Petraglia, L.; Antonelli, G.; Amodio, G.; De Luca, I.; Traversa, D.; Franchini, G.; Lenti, M. L.; Cavallari, D.; D'Agostino, C.; Scalera, G.; Altamura, C. M.; Russo, M.; Mascolo, A. R.; Pettinati, G.; Ciricugno, S. A.; Scrutinio, D.; Passantino, A.; Mastrangelo, D.; Di Masi, A.; De Carne, R.; Cannone, M.; Dibiase, F.; Pensato, M.; Loliva, F.; Trapani, F.; Panettieri, I.; Leone, L.; Di Biase, M.; Carrone, M.; Gallone, V.; Cocco, F.; Costantini, M.; Tritto, C.; Cavalieri, F.; Stella, L.; Magliari, F.; Callerame, M.; De Giorgi, A.; Pellegrino, L.; Correra, M.; Portulano, V.; Nisi, G. L.; Grassi, G.; Cristallo, E.; De Laura, D.; Salerno, C.; Fanelli, R.; Villella, M.; Pede, S.; Renna, A.; De Lorenzi, E.; Urso, L.; Lenti, V.; Peluso, A.; Baldi, N.; Polimeni, G.; Galati, A.; Palma, P.; Lauletta, R.; Tagliamonte, E.; Cirillo, T.; Silvestri, B.; Centonze, G.; D