Distribución de los genotipos de fimA en cepas de Porphyromonas gingivalis aisladas de placas subgingivales y de sangre durante bacteriemias

Introduction. Porphyromonas gingivalis is considered as a major etiological agent in the onset and progression of chronic destructive periodontitis. Porphyromonus gingivalis fimA type has been correlated to the virulence potential of the strain; therefore this gene could be involved in the ability of P. gingivalis to reach blood stream.Objective. The classifications of P. gingivalis fimA types will be compared in subgingival plaque and blood samples collected after scaling and root root planing of periodontitis patients.Materials and methods. Fifteen periodontitis patients requiring scaling and root planing were enrolled. P. gingivalis isolates were classed to genotype with fimA type-specific PCR assay. fimA gene was sequenced if the isolate was listed as unclassifiable after PCR technique.Results. Six patients showed positive P. gingivalis bacteremia. The most frequent fimA was fimA type II, followed by Ib, III and IV. In blood strains, type II was followed by IV, Ib and III.Conclusion. Type II was the most frequent genotype in blood samples and in subgingival plaque samples. However, no correlation was found between the frequency of any fimA type with SRP induced bacteremia. P. gingivalis fimA type appears to be conserved within individual patients throughout the times of sample collection. fimA gene sequence results were not in agreement with results of fimA genotyping by PCR.Introducción. Porphyromonas gingivalis es el principal agente etiológico de la periodontitis. El gen fimA ha sido relacionado con la virulencia del microorganismo, lo cual sugiere la participación de dicho gen en la capacidad del microorganismo para alcanzar el torrente sanguíneo.Objetivo. Estudiar la distribución de los tipos de fimA de P. gingivalis en muestras de placa subgingival y de sangre obtenidas durante bacteriemias después de raspaje y alisado radicular.Materiales y métodos. Se practicó un alisado radicular a 15 pacientes con periodontitis. Se obtuvieron aislamientos clínicos de P. gingivalis de la placa subgingival y durante la bacteriemia inducida por el procedimiento. Para la genotipificación se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) específica para fimA. En los aislamientos no clasificables por PCR se realizó secuenciación del gen fimA.Resultados. Seis pacientes fueron positivos para bacteriemia por P. gingivalis. La distribución de fimA evaluada en 30 aislamientos de placa subgingival y de sangre mostró una mayor frecuencia del fimA tipo II de P. gingivalis. En los aislamientos de placa subgingival, la detección de fimA tipo II fue seguida por Ib, III y IV; sin embargo, en los aislamientos de sangre el tipo II fue seguido por los tipos IV, Ib y III.Conclusión. En los aislamientos de sangre y de placa subgingival de pacientes con periodontitis el fimA más frecuente fue el tipo II; no fue posible correlacionar el tipo de fimA con la bacteriemia inducida por el alisado radicular. Los resultados de la secuenciación del gen fimA no concuerdan con los obtenidos por PCR

Faible virulence naturelle de souches de Listeria monocytogenes (dépistage et caractérisation phénotypique et génotypique)

RENNES1-BU Sciences Philo (352382102) / SudocSudocFranceF

Validation of an Easy Handling Sample Preparation and Triplex Real Time PCR for Rapid Detection of T. equigenitalis and Other Organisms Associated with Endometritis in Mares

International audienceIsolation and identification of Taylorella equigenitalis, the causative agent of contagious equine metritis, by bacteriology is laborious and does not permit differentiation from the other member of the genus, Taylorella asinigenitalis. Moreover, other organisms such as Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa can also cause endometritis in mares and warrant diagnostic detection. Our objectives were to develop a rapid preparation method for field swab samples and to validate this protocol using new multiplex real-time polymerase chain reaction (rtPCR) detection tools for identification of these four pathogens. The complete analytical process from sample preparation to PCR analysis was then evaluated against bacteriology, the World Organisation for Health's (OIE) gold standard method for T. equigenitalis and commonly used for the other three pathogens. The diagnostic sensitivity and specificity of this method, which used direct lysis and a multiplex rtPCR, were 100% and >92%, respectively. This study provided a simple-to-use method for prebreeding screening of mares and stallions

The impact of porcine reproductive and respiratory syndrome virus genetic heterogeneity on molecular assay performances

The remarkable economic losses due to porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) have stated the control and eradication of this disease is one of the main issues of swine modern farming. The limited cross-protection of vaccine-induced immunity compelled the adoption of strict biosecurity measures that must be associated with the prompt diagnosis of infection. In our study four RT-PCR methods, a RT-PCR, a SYBR Green I and two hydrolysis probes, were compared to evaluate their respective benefits and disadvantages. One hundred and seventy samples originating from 50 farms located in northern Italy were tested with all assays and performances were evaluated using a Bayesian approach to deal with the absence of a Gold Standard. Sequencing the complete of ORF7, the segment targeted by all methods, allowed a gain of insight into the genetic variability of Italian strains and to investigate the role of mismatches on assay sensitivity. Our study evidenced that methods based only on primers-genome interaction better tolerate PRRSV genetic variability, demonstrating a greater sensitivity (Se): SYBR Green I (Se. = 98.4%) and RT-PCR (Se. = 99%) outperform both in-house (Se. = 71.4%) and commercial (Se. = 91.7%) probe-based methods. On the other hand, probe-based assays allowed an easier genotyping of PRRSV strains and implementation of the internal control system (IC). Phylogenetic analysis allowed demonstration of a presence of two clades circulating continuously in northern Italy since 1996, when their probable ancestors were collecte

Reliable ELISAs showing differences between resistant and susceptible lines in hens orally inoculated with Salmonella Enteritidis

Reliable ELISAs were investigated with the aim to select hen lines resistant to Salmonella Enteritidis and producing high levels of antibodies. In the first experiment, the relation between the humoral response and the bacteriological results was assessed on hens from the Y11 resistant line and the L2 susceptible line, orally inoculated with 10$^8$ CFU S. Enteritidis per animal. Anti- lipopolysaccharide (LPS) IgG titres were higher but the liver and spleen were less contaminated in hens from the Y11 line than in hens from the L2 line ($p = 0.013$, 0.031 and 0.026 respectively). In the second experiment, the hens were inoculated orally with $1.7 \times 10^8$ CFU S. Enteritidis per animal in order to select the ELISA methods showing the more significant differences. ELISAs were based on LPS, flagella, LPS from rough (LPS-R) and smooth strains (LPS-S) and detected IgG and IgM antibodies from sera and yolks. No between-line host response variation was observed in the yolk, with LPS-S and R antigens nor with anti-LPS IgM in the sera. Otherwise, significant differences were encountered between hen lines with the ELISAs performed on the sera detecting anti-LPS IgG, anti-flagella IgG or IgM ($p = 0.017$, 0.017 and $p < 0.001$ respectively). When comparing the kinetics of the selected ELISAs, the IgG antibodies against LPS detected between-line variations as early as 1 to 4 weeks pi, whereas with IgG against flagella, the differences were only detected at 1 and 2 weeks pi and with IgM against flagella, the differences were significant at 1, 2, 4 and 8 weeks pi. In conclusion, resistant hen lines producing higher levels of antibodies than the susceptible hen lines may be selected with these ELISAs.Méthodes ELISA permettant de différencier des lignées de poules résistante et sensible à Salmonella Enteritidis inoculées par voie orale. Des méthodes ELISA ont été recherchées pour sélectionner les lignées de poules résistantes à Salmonella Enteritidis produisant des taux élevés d'anticorps. Dans la première expérience, la relation entre la réponse sérologique et les résultats bactériologiques a été évaluée sur les poules des lignées résistante Y11 et sensible L2, inoculées par voie orale avec 10$^8$ UFC S. Enteritidis par animal. Les titres en anticorps IgG anti- lipopolysaccharidiques (LPS) étaient supérieurs mais les foies et rates étaient moins contaminés chez les poules de la lignée Y11 que chez les poules de la lignée L2 ($p = 0.013$, 0.031 et 0.026 respectivement). Dans la seconde expérience, les deux lignées de poules ont été inoculées par voie orale avec $1.7 \times 10^8$ UFC S. Enteritidis par animal afin de sélectionner les méthodes ELISA les plus discriminantes. Les ELISA utilisaient comme antigènes des LPS, flagelles, LPS des souches rough (LPS-R) et smooth (LPS-S), et détectaient des anticorps IgG et IgM dans le sérum et le vitellus. Aucune différence significative n'a été observée à partir du vitellus, ou avec les antigènes LPS-S et R, ainsi qu'avec les IgM anti-LPS dans le sérum. En revanche, les tests ELISA réalisés sur les sérums et basés sur le dépistage des IgG anti-LPS, des IgG ou IgM anti-flagellaires permettent de montrer une différence significative entre les deux lignées ($p = 0.017$, 0.017 et $p < 0.001$ respectivement). La comparaison des cinétiques obtenues avec les tests ELISAs retenus a montré que les IgG anti-LPS permettaient de détecter des différences entre lignées dès 1 semaine jusqu'à 4 semaines après inoculation, alors qu'avec les IgG anti-flagellaires les différences apparaissaient seulement à 1 et 2 semaines, et avec les IgM anti-flagellaires les différences étaient significatives à 1, 2, 4 et 8 semaines après inoculation. En conclusion, les lignées de poules résistantes et produisant des taux d'anticorps plus élevés que les lignées de poules sensibles peuvent être sélectionnées avec ces tests ELISA

Reliable ELISAs showing differences between resistant and susceptible lines in hens orally inoculated with Salmonella Enteritidis

Reliable ELISAs were investigated with the aim to select hen lines resistant to Salmonella Enteritidis and producing high levels of antibodies. In the first experiment, the relation between the humoral response and the bacteriological results was assessed on hens from the Y11 resistant line and the L2 susceptible line, orally inoculated with 10$^8$ CFU S. Enteritidis per animal. Anti- lipopolysaccharide (LPS) IgG titres were higher but the liver and spleen were less contaminated in hens from the Y11 line than in hens from the L2 line ($p = 0.013$, 0.031 and 0.026 respectively). In the second experiment, the hens were inoculated orally with $1.7 \times 10^8$ CFU S. Enteritidis per animal in order to select the ELISA methods showing the more significant differences. ELISAs were based on LPS, flagella, LPS from rough (LPS-R) and smooth strains (LPS-S) and detected IgG and IgM antibodies from sera and yolks. No between-line host response variation was observed in the yolk, with LPS-S and R antigens nor with anti-LPS IgM in the sera. Otherwise, significant differences were encountered between hen lines with the ELISAs performed on the sera detecting anti-LPS IgG, anti-flagella IgG or IgM ($p = 0.017$, 0.017 and $p < 0.001$ respectively). When comparing the kinetics of the selected ELISAs, the IgG antibodies against LPS detected between-line variations as early as 1 to 4 weeks pi, whereas with IgG against flagella, the differences were only detected at 1 and 2 weeks pi and with IgM against flagella, the differences were significant at 1, 2, 4 and 8 weeks pi. In conclusion, resistant hen lines producing higher levels of antibodies than the susceptible hen lines may be selected with these ELISAs.Méthodes ELISA permettant de différencier des lignées de poules résistante et sensible à Salmonella Enteritidis inoculées par voie orale. Des méthodes ELISA ont été recherchées pour sélectionner les lignées de poules résistantes à Salmonella Enteritidis produisant des taux élevés d'anticorps. Dans la première expérience, la relation entre la réponse sérologique et les résultats bactériologiques a été évaluée sur les poules des lignées résistante Y11 et sensible L2, inoculées par voie orale avec 10$^8$ UFC S. Enteritidis par animal. Les titres en anticorps IgG anti- lipopolysaccharidiques (LPS) étaient supérieurs mais les foies et rates étaient moins contaminés chez les poules de la lignée Y11 que chez les poules de la lignée L2 ($p = 0.013$, 0.031 et 0.026 respectivement). Dans la seconde expérience, les deux lignées de poules ont été inoculées par voie orale avec $1.7 \times 10^8$ UFC S. Enteritidis par animal afin de sélectionner les méthodes ELISA les plus discriminantes. Les ELISA utilisaient comme antigènes des LPS, flagelles, LPS des souches rough (LPS-R) et smooth (LPS-S), et détectaient des anticorps IgG et IgM dans le sérum et le vitellus. Aucune différence significative n'a été observée à partir du vitellus, ou avec les antigènes LPS-S et R, ainsi qu'avec les IgM anti-LPS dans le sérum. En revanche, les tests ELISA réalisés sur les sérums et basés sur le dépistage des IgG anti-LPS, des IgG ou IgM anti-flagellaires permettent de montrer une différence significative entre les deux lignées ($p = 0.017$, 0.017 et $p < 0.001$ respectivement). La comparaison des cinétiques obtenues avec les tests ELISAs retenus a montré que les IgG anti-LPS permettaient de détecter des différences entre lignées dès 1 semaine jusqu'à 4 semaines après inoculation, alors qu'avec les IgG anti-flagellaires les différences apparaissaient seulement à 1 et 2 semaines, et avec les IgM anti-flagellaires les différences étaient significatives à 1, 2, 4 et 8 semaines après inoculation. En conclusion, les lignées de poules résistantes et produisant des taux d'anticorps plus élevés que les lignées de poules sensibles peuvent être sélectionnées avec ces tests ELISA