180 research outputs found
O impacto da experiência de estágio no processo de exploração vocacional em alunos dos cursos tecnológicos e profissionais do ensino secundário
O estágio surge, no processo de formação, como um contacto formal e estruturado com o
mundo do trabalho. Vários autores salientam o valor da experiência directa em contexto de trabalho,
apontando-a como a modalidade mais realista de exploração vocacional. Porém, o resultado das
experiências de trabalho (nomeadamente os estágios) é extremamente variável e depende de vários
aspectos. Os estudos empíricos que procuram relacionar a qualidade das experiências de trabalho,
estágios incluídos, com o desenvolvimento global e vocacional / carreira dos estudantes não são
suficientemente conclusivos, tendo em consideração a expectativa teórica de que a experiência de
trabalho afecta claramente o desenvolvimento vocacional dos adolescentes. No corolário desta
observação, surge o principal objectivo deste estudo – esclarecer a relação entre as diferentes
qualidades do estágio curricular e o comportamento de exploração vocacional.
Recorrendo a um desenho longitudinal (pré e pós – estágio), este estudo (N=309) explora a
relação entre as qualidades percebidas do estágio (autonomia, variedade e oportunidades de
aprendizagem, feedback dos colegas, suporte social e supervisão) e quatro dimensões do processo de
exploração vocacional (exploração do meio, exploração de si próprio, exploração sistemática e
quantidade de informação). Os resultados sugerem que entre o pré e o pós - estágio, os alunos
assinalam um aumento da actividade exploratória, sobretudo naquela que se orientou para o meio. As
análises de variância e de covariância com medições repetidas sugerem interacção entre algumas das
qualidades do estágio e o comportamento exploratório. São discutidas as implicações destes resultados
para a intervenção vocacional e para as futuras investigações neste domínio
Work experience quality and vocational development
The provision of workplace-based experiences (internship/placement) is an important component of the training program of students attending technological and professional courses (VET), in secondary education. Regarding the effect of such experiences in vocational development, research results are not conclusive enough, mostly, if we consider the theoretical expectation that work experiences clearly affects the vocational development of adolescents (e.g., Dawis, 2002, 2005; Lent, Brown & Hackett, 1994; Mitchell & Krumboltz, 1996; Savickas, 2005; Super, 1957; Super, Savickas & Super, 1996; Vondracek, Lerner & Schulenberg, 1986). As a corollary of this observation, the main purpose of this study is to clarify the relationship between work experience quality and students vocational development. Using a longitudinal design (pre and post - internship), we conducted a study (N = 346) that explores the relationship between perceived qualities of the training experience (IQE - autonomy, colleagues feedback, social support, task variety, learning opportunities, instructions clarity, training, supervisor feedback and support ) and career exploration (CES – Stumpf et al., 1983; Taveira, 1997), career decision-making (CDS– Osipow, Carney, Winer, Yanico & Koschier, 1976; Silva, 1997), Decision-Making Self-Efficacy (CDMSE-SF (Betz, Klein & Taylor, 1996; Silva & Paixão, 2005) and career commitment (CCCS Blustein, Ellis & Devenis, 1987; Silva, 1997). The results suggest that the quality of work experience is relevant for the vocational development of students, mainly, in what concerns the process of career exploration
Creación de un manual de puestos y un manual de procedimientos para la cooperativa de ahorro y crédito de los Educadores de la Región Huetar Norte, COOPEANDE Nº 7 R.L.
Proyecto de graduación (Bachillerato en Administración de Empresas) Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela Administración de Empresas, 2006El presente estudio tuvo por objetivo desarrollar un manual de puestos y un manual de
procedimientos para Coopeande Nº 7, R.L., cooperativa ubicada en la Zona Norte, a
noviembre de 2006.
El estudio se desarrolló entre los meses de julio y noviembre de 2006. Para el manual de
puestos se desarrolló un cuestionario para recabar la información de los funcionarios de la
Cooperativa con respecto a la descripción de sus respectivos puestos. Adicionalmente cada
funcionario completó una bitácora de control durante una semana en las que anotaban
puntualmente todas sus actividades. Para el manual de procedimientos se realizaron
entrevistas a los encargados de cada procedimiento con el fin de levantar la información de
los mismos.
Al final se dotó a Coopeande Nº 7, R.L. de un manual de puestos y un manual de
procedimientos con base en los hallazgos del estudio. Cada documento representa la
situación actual de la Cooperativa en cuanto a estos dos temas, y aportan una serie de
recomendaciones al respecto
Effectiveness of a career intervention program for career exploration
A exploração vocacional pode constituir um importante facilitador da organização subjetiva da experiência de estágio
e do consequente ajustamento e satisfação com esta atividade. Por esta razão, levamos a cabo uma intervenção
vocacional, na modalidade programa, que teve como principal objetivo incrementar a atividade exploratória
vocacional de um grupo de alunos estagiários do ensino secundário. Para avaliar o impacto do referido programa
nas diferentes dimensões da exploração vocacional, recorreu-se a um desenho quasi-experimental, pré-teste/pósteste,
com grupos não equivalentes. Globalmente, os resultados parecem-nos relevantes, uma vez que a intervenção
vocacional teve um impacto positivo e signifi cativo nas duas principais dimensões da exploração vocacional: o self
e o meio.For students attending vocational education courses, career exploration might be considered an important facilitator
of the subjective organization of their training experience. For this reason, we implemented a career intervention
program, aiming at improving the vocational exploratory activities by a group of high school students. In order
to evaluate the impact of that program on the different dimensions of career exploration, a study with a quasiexperimental
(pre-test/post-test) design was conducted, with non equivalent groups. Overall, the results seem
relevant, since the career intervention had a positive and signifi cant impact relating the two major dimensions of
career exploration: environment exploration and self exploration
The quality of the training experience: predictor variables of career exploration
Many young people attending secondary education will do an apprenticeship by the end of their training, which will come as a new context of learning. The quality of this
new context can have differentiated impacts on student’s lives and on their vocational development. For many students, it can be their first formal and structured contact
with the workplace – experiencing a reality that, until then, has always been mediated by other sources and agents of information. Authors like Ducat (1980), Brooks et
al. (1995) and Super (1963) evoke the value of work experience as the most realistic way of vocational exploration. However, the efficiency of work experiences is
extremely variable (Ainley, P., 1990; Smith & Harris, 2000) and seems to depend significantly on factors like supervision, feedback, autonomy, learning opportunities and
peer support. Several studies suggest that the quality of the work experience and the exploratory behavior associated to this have a considerable influence on the
vocational development (e.g. Brooks et al.,1995; Carless & Prodan, 2003; Loughlin & Barling, 1998; Mortimer, 2003; Vondracek, 1997). The present study seeks to
highlight which qualities of the apprenticeship are predictors of career exploration in a group of students attending the 12th grade
Lacasas: un enfoque “In Silico” para la inactivación de antibióticos usos en humanos y animales Laccases: an “In Silico” approach for the inactivation of antibiotics uses in humans and animals
Las lacasas (Lac, E.C 1.10.3.2) pertenecen a la superfamilia de las cupredoxinas, familia de las
oxidasas multicobre azul. Actualmente son de gran importancia ambiental e industrial, ya que
catalizan la oxidación de una gran cantidad de compuestos recalcitrantes que contaminan el
ambiente. Los antibióticos son contaminantes emergentes, considerados los segundos fármacos
en incidencia en medios acuáticos a nivel mundial. La persistencia de los antibióticos en el medio
ambiente en concentraciones subletales genera un grave problema, ya que favorece la adaptación
y la proliferación de bacterias multirresistentes. El objetivo de este trabajo fue simular
computacionalmente el uso de las lacasas GlLCC 1 de Ganoderma lucidum y POXA 1B de Pleurotus
ostreatus en la degradación de antibióticos de uso humano y animal. Para esto, se generó un modelo
basado en el molde de la lacasa producida por el hongo Lentinus tigrinus y se determinó la calidad
del modelo mediante el cálculo del QMEAN (0.78). Igualmente, el modelo fue validado con el fin
de evaluar la calidad de la estructura; superando los umbrales de calidad esperados para cada
análisis. El siguiente paso fue la parametrización de los cobres del centro activo y el análisis de las
variaciones estructurales (en ausencia de ligandos) a lo largo de la etapa de producción de la
dinámica molecular; las estructuras de GILCC 1 y POXA 1B fueron estables durante toda la
trayectoria (200 ns), (RMSD y RMSF <2 Å).
Para el estudio se seleccionaron 16 antibióticos (ligandos), de importancia crítica según la OMS,
con uso aprobado por diferentes entidades regulatorias (FDA, INVIMA, ICA), de amplio espectro
y con un peso molecular entre 100 y 500 Da. Se evaluó la interacción molecular con los modelos
3D de las enzimas GILCC 1 y POXA 1B y los ligandos a pH 3.0 y 7.0.
Ambos modelos 3D presentaron mayor afinidad por los ligandos a pH 3.0, lo que coincidió con
los análisis experimentales que ha realizado el grupo de investigación, cuando determinaron el pH
óptimo para la actividad de las lacasas rGILCC 1 y rPOXA 1B, utilizando ABTS como sustrato.
Los valores de energía libres de unión indicaron una mayor afinidad entre el modelo 3D de GILCC
1 y los ligandos y una afinidad menor entre el modelo 3D de POXA 1B y los ligandos. Los
resultados más bajos de energía libre de Gibbs (ΔG) indicaron mayor afinidad a pH 3.0 entre
GILCC 1 con levofloxacina (LVX; -8.2 Kcal mol-1
), sulfisoxazol (FIS; -7.8 Kcal mol-1
), cefuroxima
(CXM ; -7.5 Kcal mol-1
), cefradina (BAN; -7.5 Kcal mol-1
), ABTS (-7.6 Kcal mol-1
) y tetraciclina
(TE; -7.5 Kcal mol-1
). Los resultados de GILCC 1 pueden explicarse por la topología del bolsillo
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y el gran número de interacciones (puentes de hidrógeno e interacciones de van der Waals) que se
forman entre la enzima y los antibióticos. Es posible que la transferencia de electrones en GILCC
1 ocurra por medio de una cadena de residuos de aminoácidos que incluye la His395 y la Phe239.
A pesar de que a pH 7.0 la afinidad entre los antibióticos y GILCC 1 fue menor que a pH 3.0, no
se descarta la posibilidad de que la lacasa pueda degradar los antibióticos a pH 7.0; por lo que se
recomienda evaluar experimentalmente la degradación de los antibióticos con GILCC 1 a pH 7.0
en presencia de un mediador como el ABTS, para tratar de incrementar la afinidad entre las
moléculas.
Para POXA 1B a pH 3.0 los resultados más bajos de ΔG indicaron mayor afinidad por cefazolina
(CZ; -6.8 Kcal mol-1
), levofloxacina (LVX; - 6.3 Kcal mol-1
), linezolid (LZD; -6.3 Kcal mol-1
), ABTS
(-6.7 Kcal mol-1
) y tetraciclina (TE; -6.4 Kcal mol-1
). La interacción entre los grupos ionizables de
los antibióticos y ciertos aminoáciodos claves de POXA 1B como la His458, la Phe238 y el Asp206,
facilitaron la transferencia de electrones hasta el centro activo para dar inicio a la degradación. A
pH 7.0, no fue posible parametrizar la enzima ya que se formó un enlace entre la Cis451 y la His395
del centro activo, esta conformación no es la correcta, ni es coherente con la estructura reportada
para las lacasas, por lo que no se presentan los resultados de acoplamiento ni de dinámica con
POXA 1B a pH 7.0. Sin embargo, la parametrización de este modelo a pH 7.0 sigue en estudio
por el grupo de investigación.
Los complejos enzima-ligando más estables fueron evaluados por dinámica molecular; estos
fueron inmersos en una caja de aguas TIP3P y se evaluó el comportamiento del sistema a 300 K.
Se realizó la simulación de equilibrio y producción utilizando un ensamblaje isotérmico-isobárico
(NPT).
Los resultados de la dinámica molecular mostraron una alta estabilidad de los complejos GILCC
1-ligando a pH 3.0. GILCC 1 mostró que la Tetracilina (TE), la cefuroxima (CXM), la
levofloxacina (LVX) y la cefradina (BAN) tenían una interacción estable con el centro activo y sólo
el antibiótico sulfisoxazol (FIS) se salía del bolsillo a los 4.0 ns. El análisis del MMGBSA confirmó
la estabilidad de los complejos. Estos resultados promisorios, sugieren que GILCC 1 puede
degradar los antibióticos tetraciclina (TE), levofloxacina (LVX), cefuroxima (CXM) y cefradina
(BAN) a pH 3.0.
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En el modelo 3D de POXA 1B, sólo la cefazolina (CZ) permaneció en el bolsillo del modelo,
mientras que la tetraciclina (TE), la levofloxacina (LVX) y el linezolid (LZD) se salieron a los 7.4,
40.2 y 19.6 ns, respectivamente. La estructura del modelo 3D de POXA 1B presentó regiones de
alta fluctuación cercanas al bolsillo de unión, lo que explicaría la salida de la mayoría de los ligandos.
Sin embargo, no se descarta la posibilidad de que POXA 1B pueda degradar estos antibióticos,
pues la presencia de un mediador podría contribuir a la estabilidad del sistema.
Este estudio computacional predijo de forma acertada el comportamiento de un sistema lacasa antibiótico. Es una representación a nivel atómico de las interacciones moleculares que pueden
darse bajo condiciones reales entre las lacasas y los antibióticos y significa un complemento para
los estudios a nivel práctico. Se sugiere validar experimentalmente estos resultados y evaluar la
degradación en presencia de diferentes compuestos químicos que pueden encontrarse en aguas
residuales. Además, se sugiere realizar estudios de mutagénesis para evaluar si los aminoácidos de
POXA 1B, que presentaron altas fluctuaciones (Val162 y Ser264) afectan la degradación de los
antibióticosLaccases (Lac, E.C 1.10.3.2) belong to the cupredoxin superfamily, a family of multi-copper blue
oxidases. They are currently of high environmental and industrial importance, as they catalyse the
oxidation of several recalcitrant compounds that pollute the environment. Antibiotics are
emerging pollutants, considered the second most prevalent drugs in aquatic environments
worldwide. The environmental persistence of antibiotics at sub-lethal concentrations is a problem,
as it favours the adaptation and proliferation of multi-resistant bacteria. This work aimed to
computationally simulate the use of the laccases GlLCC 1 from Ganoderma lucidum and POXA 1B
from Pleurotus ostreatus in the degradation of antibiotics for human and animal use. Then, we
obtained a 3D model based on the laccase template produced by Lentinus tigrinus, and its quality
expressed as the QMEAN was 0.78. Likewise, the model validation allowed us to evaluate the
structure quality, exceeding the expected thresholds for each analysis. The next step was the
parameterisation of the active centre coppers and structural variations (in the absence of ligands)
along the molecular dynamics production step; the structures of GILCC 1 and POXA 1B were
stable during the whole trajectory (200 ns) (RMSD and RMSF <2 Å).
For the study, 16 antibiotics (ligands) were selected, of critical importance according to the WHO,
with approved use by different regulatory bodies (FDA, INVIMA, ICA), of broad spectrum and
with a molecular weight between 100 and 500 Da. The molecular interaction between 3D
structures models of GILCC 1 and POXA 1B and ligands was at pH 3.0 and 7.0.
Both 3D models showed higher affinity for the ligands at pH 3.0, which agreed with the
experimental analyses performed by the research group when they determined the optimum pH
for the activity of the rGILCC 1 and rPOXA 1B laccases, using ABTS as substrate.
The binding free energy values indicated a higher affinity between the 3D model of GILCC 1 and
the ligands and a low affinity for the 3D model of POXA 1B and the ligands. Lower Gibbs free
energy (ΔG) results indicated high pH 3.0 affinity between GILCC 1 with Levofloxacin (LVX; -
8.2 Kcal mol-1
), sulfisoxazole (FIS; -7.8 Kcal mol-1
), Cefuroxime (CXM; -7.5 Kcal mol-1
),
Cephradine (BAN; -7.5 Kcal mol-1
), ABTS (-7.6 Kcal mol-1
) and Tetracycline (TE; -7.5 Kcal mol- 1
). The GILCC 1 results could occur by the topology of the pocket and a large number of
interactions (hydrogen bridges and van der Waals interactions) that form between the enzyme and
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the antibiotics. Electron transfer in GILCC 1 may occur via a chain of amino acid residues,
including His395 and Phe239.
Although at pH 7.0, the affinity between the antibiotics and GILCC 1 was lower than at pH 3.0.
Then, the degradation of antibiotics at pH 7.0 by laccases should not be excluded. Therefore,
should be interesting to experimentally evaluate the degradation of the antibiotics with GILCC 1
at pH 7.0 in the presence of a mediator such as ABTS to try to increase the affinity between the
molecules.
For POXA 1B at pH 3.0, the lowest ΔG results indicated a higher affinity for Cefazolin (CZ; -6.8
Kcal mol-1
), Levofloxacin (LVX; -6.3 Kcal mol-1
), linezolid (LZD; -6.3 Kcal mol-1
), ABTS (-6.7
Kcal mol-1
) and Tetracycline (TE; -6.4 Kcal mol-1
). The interaction between the ionisable groups
of the antibiotics and certain amino acids of POXA 1B, such as His458, Phe238 and Asp206, facilitated
electron transfer to the active centre to initiate degradation. At pH 7.0, it was not possible to
parameterise the enzyme due to a bond formed between Cis451 and His395 of the catalytic centre.
This structure does not comply with the previously reported laccases structures, so neither
acoplamiento nor dynamics results are presented with POXA 1B at pH 7.0. However, the
parameterisation of this model at pH 7.0 is still under study by the research group.
For the most stable enzyme-ligand complexes molecular dynamics evaluation, they were immersed
in a TIP3P water box to determine the system behaviour at 300 K. Equilibrium and production
simulation was performed using an isothermal-isobaric assembly (NPT).
Molecular dynamics results showed high stability of the GILCC 1-ligand complexes at pH 3.0.
GILCC 1 showed that tetracycline (TE), cefuroxime (CXM), levofloxacin (LVX) and cephradine
(BAN) had a stable interaction with the active centre, and only the antibiotic sulfisoxazole (FIS)
dropped out of the pocket at 4.0 ns. MMGBSA analysis confirmed the stability of the complexes.
These promising results suggest that GILCC 1 can degrade the antibiotics tetracycline (TE),
levofloxacin (LVX), cefuroxime (CXM) and cephradine (BAN) at pH 3.0.
In the POXA 1B 3D model, only cefazolin (CZ) remained in the model pocket, while tetracycline
(TE), levofloxacin (LVX) and linezolid (LZD) dropped out at 7.4, 40.2 and 19.6 ns, respectively.
The 3D model structure of POXA 1B showed regions of high fluctuation close to the binding
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pocket, which would explain the active centre exit of most ligands. However, the possibility that
POXA 1B could degrade these antibiotics should not be discarded, as the presence of a mediator
could contribute to the system's stability.
This computational study accurately predicted the behaviour of a laccase-antibiotic system. It is a
representation at the atomic level of the molecular interactions that can occur, between laccases
and antibiotics, and it supports studies at the practical level. We suggest experimentally validating
these results and evaluating the degradation in the presence of different chemical compounds
found in wastewater. In addition, targeted mutagenesis studies will allow us to know if the amino
acids of POXA 1B, which have high fluctuations (Val162 and Ser264), affect the degradation of
antibiotics.Magíster en Ciencias BiológicasMaestrí
La problemática definición del principio in dubio pro natura
In this work I process the most widespread definitions of the emerging principle in dubio pro natura, which are three: the definition associated with scientific doubt; the closed definition, associated with the interpretative doubt of the law; and, the open definition, associated with other principles of Law. Through a theoretical analysis, I point out the origin and concept of each definition and the applicability problems that result from two of the three definitions...En este trabajo trato las definiciones más difundidas del emergente principio in dubio pro natura, que son tres: la definición asociada a la duda científica; la definición cerrada, asociada a la duda interpretativa de la ley; y, la definición abierta, asociada a otros principios del Derecho. Por medio de un análisis teórico, señalo el origen y concepto de cada definición y los problemas de aplicabilidad que resultan de dos de las tres definiciones..
Mejora en la comunicación en el equipo directivo de la institución educativa Alumno Hermano Único y Particular : aplicación de herramientas de coaching organizacional para incrementar la confianza
Ayudas Técnicas para el Trasiego de Pacientes Internos del CENARE.
Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Diseño Industrial). Instituto Tecnológico de Costa Rica. Escuela de Ingeniería en Diseño Industrial, 2010.El trabajo que se desarrolla a continuación tiene como objetivo general generar un sistema auxiliar que optimice el trasiego de los pacientes internos en el Centro de Rehabilitación Nacional (CENARE), se busca reducir esfuerzos por parte del personal, optimizar el recurso humano en las actividades de transferencia y traslado y minimizar la manipulación del paciente por parte de enfermeros y auxiliares.
Se diseña específicamente para pacientes que sufren hemiplejía, esta se define como una parálisis de un lado del cuerpo, que se da cuando se daña un hemisferio del cerebro, es por esta razón que el paciente es sometido diariamente a terapias que lo ayudan a ir estimulando los músculos y nervios que necesita para poder incorporarse de nuevo a su vida cotidiana.
Existen dos áreas de encamados en el CENARE con capacidad para cuarenta y cuatro pacientes cada una y están ubicadas en lados opuestos del pasillo principal. Para movilizar un paciente desde el área de encamados hasta el área de terapia toma aproximadamente de 20 a 30 minutos, que corresponden a preparar al paciente hasta llevarlo al área correspondiente. Se cuenta con únicamente dos enfermeros para preparar y transportar a cuatro pacientes a cada sesión, lo cual debería realizarse, idealmente, en menos de quince minutos.
Como primera etapa del proyecto se realiza un análisis del problema y se divide para lograr una solución focalizada para concluir en una solución integrada, luego se plantean los objetivos del proyecto para alcanzar la solución del problema.
La segunda etapa consiste en un análisis extensivo de procesos y ayudas existentes en el mercado para solucionar problemas similares. También se hacen análisis complementarios de antropometría, ergonomía, materiales, procesos de producción, etc. Todo esto con el fin de tener las herramientas para diseñar la propuesta ideal.
La tercera etapa o gestión de diseño se basa en la generación de conceptos y elección de concepto-propuesta por medio de criterios de evaluación basados en los requisitos. Como última etapa se desarrolla la propuesta que cumple a cabalidad los objetivos propuestos.
La propuesta final de diseño es un sistema compuesto de dos partes diferenciables por la función que cada una realiza. El sistema permite mejorar la calidad de vida del personal del Centro Nacional de Rehabilitación, minimiza el esfuerzo del personal del Centro, reduce la cantidad de personal necesaria para atender a cada paciente, disminuye el esfuerzo físico y estrés de los pacientes, maximiza el tiempo de terapia, reduce el tiempo de recuperación de los pacientes, entre otros.Instituto Tecnológico de Costa Rica, Escuela de Ingeniería en Diseño Industrial
Caracterización de la región génica plu3309 – plu3314 de Photorhabdus luminescens SL0708
Photorhabdus luminescens es una enterobacteria caracterizada por presentar un ciclo de vida complejo. Esta bacteria tiene la capacidad de alternar su ciclo de vida entre dos fases, una simbiótica, en donde se aloja en el intestino de nematodos entomopatógenos de la familia Heterorhabditidiae. Estos nematodos se caracterizan por infectar larvas de insectos de Coleópteros y Lepidopteros. Tras la infección, la bacteria es regurgitada en las cavidades internas de las larvas en donde esta alterna su ciclo, presentando actividad patogénica contra los insectos. P. luminescens comparte algunos genes que codifican sistemas transductores de señales extracelulares, conocidos como sistemas de dos componentes (SDC), con otras enterobacterias patógenas de animales como Yersinia enterocolitica (GlnK y GlnR) y E. coli enterohemorrágica (EHEC) (YfhK y YfhA). En estas bacterias aún no es clara la molécula señal sensada por este sistema, sin embargo, se predice un papel hipotético en la regulación del metabolismo de nitrógeno y amino azúcares e involucrado en la interacción con el hospedero. Esto convierte a este sistema de dos componentes en un candidato de interés a estudiar, particularmente con respecto a su posible relación con la alternancia de estados simbiótico/patogénico de P. luminescens. Por tanto, el objetivo de este trabajo fue caracterizar molecularmente la organización transcripcional de los genes contenidos en la región génica plu3309 – plu3314 de P. luminescens SL0708. Se realizó una RT-PCR de las regiones intergénicas contenidas entre los genes plu3309 – plu3314, en donde se determinó que los genes plu3310, plu3311, plu3312 y plu3313, pertenecen a un mismo operón, por lo que es probable que este sistema regulador de respuesta esté relacionado con la regulación del metabolismo de nitrógeno. Igualmente, no se evidenció promotor de este operón en la región intergénica plu3313 – plu3314, por lo que existe un sobrelapamiento del promotor con el gen plu3314. Adicionalmente, se logró clonar la región candidata a promotor en el vector pCR2.1 para facilitar su subclonación al vector de destino final pPROBE. Finalmente, se realizó una estandarización preliminar de medición de fluorescencia de GFP en placa con el fin de contar con un sistema que permita a futuro la evaluación y monitoreo, dentro de cada hospedero, de la expresión transcripcional del SDC plu3313-plu3311 por medio de una fusión transcripcional a GFP. Se evidenció interferencia del medio de cultivo y de los pozos translucidos de la microplaca sobre las mediciones de fluorescencia.Photorhabdus luminescens is an enterobacteria characterized by a complex life cycle. This bacterium has the ability to alternate its life cycle between two phases, a symbiotic, where it is lodged in the intestine of entomopathogenic nematodes of the Heterorhabditidiae family. These nematodes are characterized by infecting insect larvae of beetles and Lepidopters. After the infection, the bacteria is regurgitated in the internal cavities of the larvae where it alternates its cycle, presenting pathogenic activity against insects. P. luminescens shares some genes that encode extracellular signal transducers, known as two component systems (CDS), with other pathogenic enterobacteria of animals such as Yersinia enterocolitica (GlnK and GlnR) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) (YfhK and YfhA). In these bacteria it is still not clear the molecule signal sensed by this system, however, a hypothetical role is predicted in the regulation of the metabolism of nitrogen and amino sugars and involved in the interaction with the host. This makes this system of two components a candidate of interest to study, particularly with respect to its possible relationship with the alternation of symbiotic/pathogenic states of P. luminescens. Therefore, the objective of this work was to characterize molecularly the transcriptional organization of the genes contained in the gene region plu3309 – plu3314 of P. luminescens SL0708. A RT-PCR of the intergenic regions contained in the plu3309 – plu3314 genes was performed, and it determined that the plu3310, plu3311, plu3312 and plu3313 genes belong to the same operon, so this regulatory response system is likely to be related to the regulation of nitrogen metabolism. Similarly, no promoter of this operon was found in the intergenic region plu3313 – plu3314, so there is an overlapping of the promoter with the gene plu3314. In addition, the candidate region was cloned in the vector pCR2.1 to facilitate its subcloning to the final destination vector pPROBE. Finally, a preliminary standardization of the fluorescence measurement of GFP on a plate was carried out in order to have a system that allows in the future the evaluation and monitoring, inside each host house, of the transcriptional expression of the SDC plu3313-plu3311 by means of a transcriptional merger with GFP. Interference of the culture medium and translucent microplate wells on fluorescence measurements was evident.Microbiólogo (a) IndustrialPregrad
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