Eventos celulares y tisulares determinantes en la formación/reformación de las adherencias

Premio Extraordinario de Doctorado 2011Premio de la Sociedad de Condueños 2010La formación adherencial peritoneal es una de las principales complicaciones que surgen tras una operación quirúrgica en la mayoría de los pacientes y que pueden generar diversos problemas clínicos como son obstrucción intestinal, dolor abdominal crónico, infertilidad y el incremento de los tiempos quirúrgicos en procedimientos posteriores. Una vez establecidas las adherencias, la única medida a la que se puede recurrir es la resección quirúrgica. Sin embargo, algunos cirujanos desaconsejan la realización de la adhesiolisis debido al elevado porcentaje de pacientes en los que se produce la reformación adherencial, pudiendo empeorar los síntomas. Como hipótesis de trabajo, nos planteamos si era posible definir el momento más adecuado para la resección de las adherencias a partir de las características tisulares del tejido que las constituye, previniendo su reformación. Para ello, diseñamos un modelo adhesiogénico experimental en conejo blanco de Nueva Zelanda que consistió en el implante de una malla de polipropileno sobre el peritoneo parietal del animal y que inducía la formación de adherencias a partir del omentum mayoritariamente. Para dar respuesta a nuestra hipótesis, nos propusimos tres objetivos: 1)Análisis del proceso de formación adherencial y determinación del momento de estabilización e irreversibilidad de las adherencias mediante el estudio evolutivo de la citoarquitectura del tejido adherencial (3 (n=6), 7 (n=6) y 14 días (n=6) post-implante) y el papel funcional de los factores de crecimiento TGF-? y el VEGF en dicho proceso. Como tejido control, se emplearon fragmentos de omentum procedente de animales no intervenidos (n=6). 2)Aislamiento y caracterización de la población celular mesenquimal presente en el omentum activado por la presencia de la malla de polipropileno (n=6) y de la población celular que compone las adherencias a los 7 días post-implante procedente de adherencias de composición mayoritariamente adiposa (n=6) y de composición mayoritariamente fibrosa (n=6). Estudio comparativo de ambas poblaciones celulares en cuanto a su capacidad proliferativa, comportamiento en cultivo y fenotipo. 3)Diseño de un modelo de laparoscopia secuencial para la evaluación del proceso de formación de las adherencias en el grupo control (grupo I, n=8) y la eficacia de la resección adherencial en el momento elegido según los resultados obtenidos en el primer objetivo (3 días post-implante) (grupo II, n=8) en la prevención de su reformación. Análisis de las características tisulares del tejido adherencial a largo plazo (90 días post-implante, n=6). Sobre las muestras procedentes de tejido omental y adherencial de cada tiempo de estudio, se realizaron análisis mediante microscopía electrónica de transmisión; estudios histológicos (tinción con hematoxilina-eosina, tricrómico de Masson, rojo Sirio, orceína y PTAH); estudios inmunohistoquímicos para la determinación de TGF-?1, LAP-TGF?1, TGF-?3, VEGF, betaglicano, colágeno I, colágeno III, CD31, desmina, miosina, ?-actina de músculo liso, Nanog, Oct-3/4, macrófagos (RAM-11) y linfocitos T CD4, T CD8 y B; Western Blot (TGF-?1 y LAP-TGF?1) y RT-PCR (TGF-?1, VEGF, colágeno I y colágeno III). Las poblaciones celulares procedentes del primer subcultivo (obtenidas a partir del omentum y del tejido adherencial) fueron sometidas a ensayos de viabilidad celular mediante la técnica de exclusión del azul tripán, proliferación celular mediante citometría de flujo (Cell Trace TM CFSE Cell Proliferation Kit), ensayos de inmunofluorescencia para la determinación de células positivas para diferentes marcadores (Oct-3/4, SSEA-4, podocalixina, CD9, citoqueratina basal, citoqueratina 18, E-caderina, ?-actina de músculo liso, desmina, miosina, vimentina y CD31) y Western Blot (podocalixina, desmina y ?-actina de músculo liso). En nuestro tercer objetivo, se evaluó el porcentaje de la malla cubierta por adherencias a los 3, 7, 14 y 90 días post-implante en ambos grupos de estudio, la capacidad de reformación de las mismas (grupo II) tras la resección adherencial a los 3 días post-implante y la superficie de la malla a los 90 días en ambos grupos de estudio mediante técnicas histológicas y de microscopía electrónica de barrido. Los resultados obtenidos mostraban que la agresión mecánica producida por la presencia de un biomaterial sobre el omentum, y la reacción inmune/inflamatoria de este último generaban una activación de las células mesenquimales subyacentes para generar un tejido de reparación transitorio y sensible a las señales ambientales que podía culminar en la formación estable de una adherencia omental. En las adherencias de 3 días, se iniciaba discretamente el proceso de cicatrización así como la respuesta inflamatoria (macrófagos y linfocitos T CD8). A los 7 días post-implante, se observaba un ambiente claramente inflamatorio (con un incremento significativo de las poblaciones linfocitarias T CD4 y B, así como de los niveles de TGF-?1, TGF-?3, betaglicano, colágeno III y ?-actina de músculo liso) siendo la formación adherencial irreversible a partir de este momento y observándose la diferenciación tisular hacia dos fenotipos diferentes: adherencias de componente adiposo y adherencias de componente fibroso. Estos dos tipos de respuesta reparadora del omentum venían determinados por el balance local de las isoformas TGF-?1 y TGF-?3 que eran dependientes, a su vez, del lugar de ubicación y patrón de distribución de la respuesta inmunitaria/inflamatoria. La predominancia de la isoforma TGF-?1 en el tejido adherencial omental se observó de forma conjunta a la diferenciación de la célula mesenquimal hacia la estirpe miofibroblástica, dando lugar a un proceso cicatrizal. La predominancia de la isoforma TGF-?3 parecía correlacionarse con un proceso regenerativo del tejido adiposo omental. El tejido adherencial de 14 días de madurez mostró la consolidación de ambos fenotipos tisulares y una disminución en la reactividad tisular. Se producía, a este tiempo, una sobreexpresión génica de TGF-?1, VEGF y colágeno I. La consolidación a largo plazo (90 días) del tejido adherencial y la presencia de glomérulos omentales, macrófagos y linfocitos T CD4 en este tejido indicaban el mantenimiento o perpetuación de la respuesta inmune ante la presencia del biomaterial e independiente de la agresión inicial. El análisis detallado y secuencial de los eventos celulares y tisulares del tejido adherencial omental nos permitió establecer que, a los 3 días post-implante, las adherencias estaban formadas por un tejido mesenquimal no comprometido ubicado en un ambiente moderadamente inflamatorio, lo que hacía de este momento el más idóneo para la prevención eficaz de su reformación tras la resección

Eventos celulares y tisulares determinantes en la formación/reformación de las adherencias

Premio Extraordinario de Doctorado 2011Premio de la Sociedad de Condueños 2010La formación adherencial peritoneal es una de las principales complicaciones que surgen tras una operación quirúrgica en la mayoría de los pacientes y que pueden generar diversos problemas clínicos como son obstrucción intestinal, dolor abdominal crónico, infertilidad y el incremento de los tiempos quirúrgicos en procedimientos posteriores. Una vez establecidas las adherencias, la única medida a la que se puede recurrir es la resección quirúrgica. Sin embargo, algunos cirujanos desaconsejan la realización de la adhesiolisis debido al elevado porcentaje de pacientes en los que se produce la reformación adherencial, pudiendo empeorar los síntomas. Como hipótesis de trabajo, nos planteamos si era posible definir el momento más adecuado para la resección de las adherencias a partir de las características tisulares del tejido que las constituye, previniendo su reformación. Para ello, diseñamos un modelo adhesiogénico experimental en conejo blanco de Nueva Zelanda que consistió en el implante de una malla de polipropileno sobre el peritoneo parietal del animal y que inducía la formación de adherencias a partir del omentum mayoritariamente. Para dar respuesta a nuestra hipótesis, nos propusimos tres objetivos: 1)Análisis del proceso de formación adherencial y determinación del momento de estabilización e irreversibilidad de las adherencias mediante el estudio evolutivo de la citoarquitectura del tejido adherencial (3 (n=6), 7 (n=6) y 14 días (n=6) post-implante) y el papel funcional de los factores de crecimiento TGF-? y el VEGF en dicho proceso. Como tejido control, se emplearon fragmentos de omentum procedente de animales no intervenidos (n=6). 2)Aislamiento y caracterización de la población celular mesenquimal presente en el omentum activado por la presencia de la malla de polipropileno (n=6) y de la población celular que compone las adherencias a los 7 días post-implante procedente de adherencias de composición mayoritariamente adiposa (n=6) y de composición mayoritariamente fibrosa (n=6). Estudio comparativo de ambas poblaciones celulares en cuanto a su capacidad proliferativa, comportamiento en cultivo y fenotipo. 3)Diseño de un modelo de laparoscopia secuencial para la evaluación del proceso de formación de las adherencias en el grupo control (grupo I, n=8) y la eficacia de la resección adherencial en el momento elegido según los resultados obtenidos en el primer objetivo (3 días post-implante) (grupo II, n=8) en la prevención de su reformación. Análisis de las características tisulares del tejido adherencial a largo plazo (90 días post-implante, n=6). Sobre las muestras procedentes de tejido omental y adherencial de cada tiempo de estudio, se realizaron análisis mediante microscopía electrónica de transmisión; estudios histológicos (tinción con hematoxilina-eosina, tricrómico de Masson, rojo Sirio, orceína y PTAH); estudios inmunohistoquímicos para la determinación de TGF-?1, LAP-TGF?1, TGF-?3, VEGF, betaglicano, colágeno I, colágeno III, CD31, desmina, miosina, ?-actina de músculo liso, Nanog, Oct-3/4, macrófagos (RAM-11) y linfocitos T CD4, T CD8 y B; Western Blot (TGF-?1 y LAP-TGF?1) y RT-PCR (TGF-?1, VEGF, colágeno I y colágeno III). Las poblaciones celulares procedentes del primer subcultivo (obtenidas a partir del omentum y del tejido adherencial) fueron sometidas a ensayos de viabilidad celular mediante la técnica de exclusión del azul tripán, proliferación celular mediante citometría de flujo (Cell Trace TM CFSE Cell Proliferation Kit), ensayos de inmunofluorescencia para la determinación de células positivas para diferentes marcadores (Oct-3/4, SSEA-4, podocalixina, CD9, citoqueratina basal, citoqueratina 18, E-caderina, ?-actina de músculo liso, desmina, miosina, vimentina y CD31) y Western Blot (podocalixina, desmina y ?-actina de músculo liso). En nuestro tercer objetivo, se evaluó el porcentaje de la malla cubierta por adherencias a los 3, 7, 14 y 90 días post-implante en ambos grupos de estudio, la capacidad de reformación de las mismas (grupo II) tras la resección adherencial a los 3 días post-implante y la superficie de la malla a los 90 días en ambos grupos de estudio mediante técnicas histológicas y de microscopía electrónica de barrido. Los resultados obtenidos mostraban que la agresión mecánica producida por la presencia de un biomaterial sobre el omentum, y la reacción inmune/inflamatoria de este último generaban una activación de las células mesenquimales subyacentes para generar un tejido de reparación transitorio y sensible a las señales ambientales que podía culminar en la formación estable de una adherencia omental. En las adherencias de 3 días, se iniciaba discretamente el proceso de cicatrización así como la respuesta inflamatoria (macrófagos y linfocitos T CD8). A los 7 días post-implante, se observaba un ambiente claramente inflamatorio (con un incremento significativo de las poblaciones linfocitarias T CD4 y B, así como de los niveles de TGF-?1, TGF-?3, betaglicano, colágeno III y ?-actina de músculo liso) siendo la formación adherencial irreversible a partir de este momento y observándose la diferenciación tisular hacia dos fenotipos diferentes: adherencias de componente adiposo y adherencias de componente fibroso. Estos dos tipos de respuesta reparadora del omentum venían determinados por el balance local de las isoformas TGF-?1 y TGF-?3 que eran dependientes, a su vez, del lugar de ubicación y patrón de distribución de la respuesta inmunitaria/inflamatoria. La predominancia de la isoforma TGF-?1 en el tejido adherencial omental se observó de forma conjunta a la diferenciación de la célula mesenquimal hacia la estirpe miofibroblástica, dando lugar a un proceso cicatrizal. La predominancia de la isoforma TGF-?3 parecía correlacionarse con un proceso regenerativo del tejido adiposo omental. El tejido adherencial de 14 días de madurez mostró la consolidación de ambos fenotipos tisulares y una disminución en la reactividad tisular. Se producía, a este tiempo, una sobreexpresión génica de TGF-?1, VEGF y colágeno I. La consolidación a largo plazo (90 días) del tejido adherencial y la presencia de glomérulos omentales, macrófagos y linfocitos T CD4 en este tejido indicaban el mantenimiento o perpetuación de la respuesta inmune ante la presencia del biomaterial e independiente de la agresión inicial. El análisis detallado y secuencial de los eventos celulares y tisulares del tejido adherencial omental nos permitió establecer que, a los 3 días post-implante, las adherencias estaban formadas por un tejido mesenquimal no comprometido ubicado en un ambiente moderadamente inflamatorio, lo que hacía de este momento el más idóneo para la prevención eficaz de su reformación tras la resección

PolyPurine Reverse Hoogsteen Hairpins Work as RNA Species for Gene Silencing

PolyPurine Reverse Hoogsteen Hairpins (PPRHs) are gene-silencing DNA-oligonucleotides developed in our laboratory that are formed by two antiparallel polypurine mirror repeat domains bound intramolecularly by Hoogsteen bonds. The aim of this work was to explore the feasibility of using viral vectors to deliver PPRHs as a gene therapy tool. After treatment with synthetic RNA, plasmid transfection, or viral infection targeting the survivin gene, viability was determined by the MTT assay, mRNA was determined by RT-qPCR, and protein levels were determined by Western blot. We showed that the RNA-PPRH induced a decrease in cell viability in a dose-dependent manner and an increase in apoptosis in PC-3 and HeLa cells. Both synthetic RNA-PPRH and RNA-PPRH intracellularly generated upon the transfection of a plasmid vector were able to reduce survivin mRNA and protein levels in PC-3 cells. An adenovirus type-5 vector encoding the PPRH against survivin was also able to decrease survivin mRNA and protein levels, leading to a reduction in HeLa cell viability. In this work, we demonstrated that PPRHs can also work as RNA species, either chemically synthesized, transcribed from a plasmid construct, or transcribed from viral vectors. Therefore, all these results are the proof of principle that viral vectors could be considered as a delivery system for PPRHs

Consumo de cigarrillo, ingesta de alcohol y su asociación con la percepción de bajo rendimiento académico en estudiantes de ingeniería de una universidad pública

Antecedentes: El rendimiento académico en estudiantes universitarios se relaciona con un amplio número de factores. Sin embargo, no se reportan estudios que informen la relación entre consumo de cigarrillo e ingesta de alcohol con rendimiento académico (RA) en estudiantes universitarios. Objetivo: Conocer la relación entre consumo de cigarrillo e ingesta de alcohol y la percepción del RA en estudiantes de una universidad pública de Santa Marta, Colombia. Método: Se diseñó un estudio transversal para el que se tomó una muestra probabilística de estudiantes de una universidad pública de Santa Marta (Colombia). Se utilizaron cuestionarios para conocer el consumo de cigarrillo y la ingesta de alcohol; la percepción de RA durante el último mes se preguntó mediante una pregunta del cuestionario VESPA. Se estimó la asociación mediante el cálculo de razón de oportunidad (OR); ésta se ajustó para otras variables mediante regresión logística. Resultados: Un total de 385 estudiantes completaron el cuestionario. La media para edad fue 19,9 años (DE=2,1) y 265 participantes (68,8%) eran hombres. Un grupo de 55 estudiantes (14,3%) informaron consumo ocasional de cigarrillo durante el último mes; 70 estudiantes (18,2%) puntuaron para consumo abusivo de alcohol; y 101 estudiantes (26,2%), regular o mal RA. Se observó una relación estadísticamente significativa entre consumo de cigarrillo, ingesta de alcohol y el RA. Conclusiones: Es importante la relación entre consumo de cigarrillo, ingesta de alcohol y el RA en estudiantes de ingeniería de una universidad pública de Santa Marta. (DUAZARY 2011 No. 2, 169 - 174

Effect of green Spanish-style Manzanilla packaging conditions on the prevalence of the putative probiotic bacteria Lactobacillus pentosus TOMC-LAB2

This work focuses on the persistence of the putative probiotic bacteria Lactobacillus pentosus TOMC-LAB2 on green Spanish-style Manzanilla olives according to different packaging conditions and storage temperatures. The lactic acid bacteria population decreased with time but the highest survival counts (and lowest yeasts) at the end of storage (8 months) were observed in plastic pouches under nitrogen atmosphere and glass jars with brine stored at 20°C. Molecular techniques showed a 100% presence of the putative probiotic bacteria in biofilms adhered to olive epidermis, while it was absent in PPB (plastic pouches with brine) and in olives stored at 7°C. No changes in NaCl, pH or combined acidity were observed during the storage except for a slight increase in titratable acidity at 20°C. The color of the fruits was stable but degraded at 20°C for olives in plastic pouches with brine.The research leading to these results has received funding from the EU's Seventh Framework Program (FP7/2007-2013) under grant agreement n°243471 (PROBIOLIVES) and the Junta de Andalucía (through financial support to group AGR-125). Thanks to JOLCA for supplying the fruits and the packages and to ASEMESA for its support. FNAL thanks the Spanish Government and CSIC for his Ramón y Cajal postdoctoral research contract, while VRG wishes to thank the AgriFood Campus of International Excellence (ceiA3), Bank of Santander, Spanish Government, and ‘Aloreña de Málaga’ Olive Manufacturing Association for her predoctoral fellowship (training program of PhD in companies).EUR 1,172 APC fee funded by the EC FP7 Post-Grant Open Access PilotPeer reviewe

Polymer hernia repair materials: adapting to patient needs and surgical techniques

"Publicación presentada para convocatoria 2023 Proyectos Generación de Conocimiento"Biomaterials and their applications are perhaps among the most dynamic areas of research within the field of biomedicine. Any advance in this topic translates to an improved quality of life for recipient patients. One application of a biomaterial is the repair of an abdominal wall defect whether congenital or acquired. In the great majority of cases requiring surgery, the defect takes the form of a hernia. Over the past few years, biomaterials designed with this purpose in mind have been gradually evolving in parallel with new developments in the different surgical techniques. In consequence, the classic polymer prosthetic materials have been the starting point for structural modifications or new prototypes that have always strived to ccommodate patients? needs. This evolving process has pursued both improvements in the wound repair process depending on the implant interface in the host and in the material?s mechanical properties at the repair site. This last factor is important considering that this site?the abdominal wall?is a dynamic structure subjected to considerable mechanical demands. This review aims to provide a narrative overview of the different biomaterials that have been gradually introduced over the years, long with their modifications as new surgical techniques have unfolded

Fortification of table olive packing with the potential probiotic bacteria Lactobacillus pentosus TOMC-LAB2

© 2014 Rodríguez-Gómez, Romero-Gil, García-García, Garrido-Fernández and Arroyo-López. Dairy products are currently the main carriers of probiotic microorganisms to the human body. However, the development of new matrices for probiotic delivery is convenient for intolerant to milk (or its derivatives) and those requiring low-cholesterol diet consumers. The present work focused on the fortification of previously fermented green Spanish style olives with the autochthonous putative probiotic bacteria Lactobacillus pentosus TOMC-LAB2. The fortification was carried out by inoculating the bacteria into the packing brines using Manzanilla fruits from three different processes: (i) spontaneously fermented (F1), (ii) fermented using L. pentosus TOMC-LAB2 as starter (F2), and (iii) spontaneously fermented and then thermally treated (F3). Data showed that all inoculated treatments had higher population levels (5.49, 4.41, and 6.77 log10 cfu/cm2) than their respective controls (1.66, 4.33, and 0.0 log10 cfu/cm2, for F1, F2, and F3 treatments, respectively). The presence of L. pentosus TOMC-LAB2 on olive surface was confirmed by rep-PCR, with a recovery frequency at the end of the shelf life (200 days) of 52.6, 57.9, and 100.0% for F1, F2, and F3 treatments, respectively. Thus, results obtained in this work show the ability of this microorganism to survive under packing conditions for long period of times as well as to colonize the olive surface which is the food finally ingested by consumers. This opens the possibility for the development of a new and simply probiotic fortified olive product.he research leading to these results has received funding from the EU’s Seventh Framework Programme [FP7/2007-2013] under grant agreement no 243471 (PROBIOLIVES). We also thank the Spanish Government for financial support (projects AGL2009-07436/ALI, and AGL2010-15529/ALI partially financed by European regional development funds, ERDF), and the Junta de Andalucía (through financial support to group AGR-125). Thanks to JOLCA and ASEMESA for supplying the fruits and their own expertise for the development of this work. Francisco N. Arroyo-López wishes to express thanks for his Ramón y Cajal postdoctoral research contract (Spanish government).Peer Reviewe

New insights into the application of 3D-printing technology in hernia repair.

"Publicación presentada para sexenios"Abdominal hernia repair using prosthetic materials is among the surgical interventions most widely performed worldwide. These materials, or meshes, are implanted to close the hernial defect, reinforcing the abdominal muscles and reestablishing mechanical functionality of the wall. Meshes for hernia repair are made of synthetic or biological materials exhibiting multiple shapes and configurations. Despite the myriad of devices currently marketed, the search for the ideal mesh continues as, thus far, no device offers optimal tissue repair and restored mechanical performance while minimizing postoperative complications. Additive manufacturing, or 3D-printing, has great potential for biomedical applications. Over the years, different biomaterials with advanced features have been successfully manufactured via 3D-printing for the repair of hard and soft tissues. This technological improvement is of high clinical relevance and paves the way to produce next-generation devices tailored to suit each individual patient. This review focuses on the state of the art and applications of 3D-printing technology for the manufacture of synthetic meshes. We highlight the latest approaches aimed at developing improved bioactive materials (e.g., optimizing antibacterial performance, drug release, or device opacity for contrast imaging). Challenges, limitations, and future perspectives are discussed, offering a comprehensive scenario for the applicability of 3D-printing in hernia repair.Financial support from the CIBER-BB

Microbiological and Physicochemical Changes in Natural Green Heat-Shocked Aloreña de Málaga Table Olives

11 Páginas; 5 Tablas; 6 FigurasPreserving the highly appreciated natural freshness of Aloreña de Málaga table olives and preventing their progressive darkening during processing is a major challenge. In this work, heat-shocked (60°C, 5 min) fruits were processed according to the three denominations referred to in the Protected Designation of Origen (cured, fresh green, and traditional) and their characteristics compared with those that followed the habitual industrial process (controls). The results revealed that the effects of the heat treatment on the evolution of pH, titratable acidity, salt, sugar, organic acid, ethanol content, texture, and color of fruits as well as on microbial populations (yeasts and lactic acid bacteria) were slight in the case of the fresh green and cured presentations. However, the differences between heat-shocked and its control were remarkable in the traditional process. Notably, the heat treatment favored lactic acid fermentation, retention of the green appearance of the fruits, stability during packaging, and led to the highest sensory evaluation. The metagenomic analysis carried out at the end of the fermentation revealed the presence in all samples of three genera (Lactobacillus, Pediococcus, and Celerinatantimonas) which encompassed most of the sequences. The number of Lactobacillus sequences was statistically higher (p ≥ 0.05) in the case of traditional heat-shocked fruits than in its control.The research leading to these results has received funding from Junta de Andalucía Government through the PrediAlo project (AGR-7755: www.predialo.science.com.es) and FEDER European funds. FA-L wishes to express thanks to the Spanish government for his RyC postdoctoral research contract while VR-G would like to thank ceiA3, Spanish Government, Bank of Santander, IG-CSIC and ‘Aloreña de Málaga’ Olive Manufacturing Association for her predoctoral fellowship. Authors express their gratitude to Dr. Borja Sánchez (IPLA-CSIC) for his invaluable help in the metagenomic analysis.Peer reviewe

Detection of a G-Quadruplex as a Regulatory Element in Thymidylate synthase for Gene Silencing Using Polypurine Reverse Hoogsteen Hairpins

Thymidylate synthase (TYMS) enzyme is an anti-cancer target given its role in DNA biosynthesis. TYMS inhibitors (e.g., 5-Fluorouracil) can lead to drug resistance through an autoregulatory mechanism of TYMS that causes its overexpression. Since G-quadruplexes (G4) can modulate gene expression, we searched for putative G4 forming sequences (G4FS) in the TYMS gene that could be targeted using polypurine reverse Hoogsteen hairpins (PPRH). G4 structures in the TYMS gene were detected using the quadruplex forming G-rich sequences mapper and confirmed through spectroscopic approaches such as circular dichroism and NMR using synthetic oligonucleotides. Interactions between G4FS and TYMS protein or G4FS and a PPRH targeting this sequence (HpTYMS-G4-T) were studied by EMSA and thioflavin T staining. We identified a G4FS in the 5'UTR of the TYMS gene in both DNA and RNA capable of interacting with TYMS protein. The PPRH binds to its corresponding target dsDNA, promoting G4 formation. In cancer cells, HpTYMG-G4-T decreased TYMS mRNA and protein levels, leading to cell death, and showed a synergic effect when combined with 5-fluorouracil. These results reveal the presence of a G4 motif in the TYMS gene, probably involved in the autoregulation of TYMS expression, and the therapeutic potential of a PPRH targeted to the G4FS