Identification and functional characterization of the human and murine OSTL gene, which encodes a RING-DRIL-RING domain protein possibly involved in B cell differentiation and leukemogenesis

The OSTL gene is localized at the band q23 in the chromosome 6. Its localization corresponds to a translocation breakpoint between chromosomes 6 and 12, the t(6;12)(q23;p13), that was characterized in our group in an acute lymphoblastic leukemia cell line. This translocation involves the ETV6 (translocation ETs leukemia) gene localized in chromosome 12 with the STL (six twelve leukemia gene) gene localized in chromosome 6. The STL gene shares the first exon with a novel gene, that we named OSTL (opposite STL), but they are transcribed in opposite directions. Since the fusion gene ETV6/STL encodes only for a very small protein which lacks any known functional domain, we speculate that the main leukemogenic effect of this translocation is the deregulation of OSTL. OSTL has a RING-Finger motif that is highly conserved between species and has a significant homology with other genes in human as well as C. elegans, D. melanogaster, and S. cerevisiae. OSTL showed a very specific expression pattern during the mouse embryogenesis. The aim of this project was the functional characterization of OSTL, with special emphasis in normal hematopoiesis and leukemogenesis. Therefore we have sequenced the whole human and mouse OSTL cDNA by using OSTL cDNA clones from the RZPD (“Resource Zentrum Primäre Datenbank”) in Berlin. These sequences encode for a 307 (mouse) and a 275 (human) amino acids length protein. The protein length differences between human and mouse are explained because of the existence of alternative spliced exons. The homology between human and mouse sequence is 99% at the protein level. The expression of GFP-OSTL fusion protein in mouse fibroblast cell line enable us to observe the subcellular localization of OSTL protein. GFP-OSTL is localized mainly in the cytoplasm, showing small spots, probably in the mitochondrial region. In a mouse multiple tissue Northern blot, we could show that OSTL is expressed in testis, ovary and liver. In an human multiple tissue Northern, OSTL expression was observed in skeletal muscle, testis, ovary, heart, placenta, pancreas and prostate. Northern blotting with different human cell lines revealed expression of OSTL in three EBV (Epstein Barr Virus) transformed lymphoblastoid cell lines (LCL B, LCL D, and LCL R) and in one NHL (Non-Hodgkin Lymphoma) cell line (Karpas 422). In Reverse Transcriptase PCR experiments using B cell in different maturation stages, the expression of OSTL was observed in naive, memory B and plasma cells, and in leukemic patient samples, expression was observed in several AML and ALL cDNAs. Whole mount in situ hybridization experiments were performed to investigate the temporo-spatial expression pattern of OSTL during mouse embryogenesis. There was distinct expression of Ostl in the somites (myotome), first and second branchial arches, optic and otic vesicles, in the hair follicles of the vibrissae, and limb buds in mouse embryos of embryonal days 9.5 to 14.5. This expression pattern suggests an important role for Ostl in the early development of these structures. Aiming to find protein interaction partners of OSTL, we performed a Yeast Two Hybrid assay using a Hela cDNA library. Among others we found interaction of OSTL with the antiapoptotic protein, HAX-1 (HS1-associated protein X-1), that is involved in the regulation of B-cell signal transduction, and interaction with the pro-apoptotic protein, SIVA. SIVA was originally identified as an interaction partner of CD27 (TNFRSF7), a member of the TNF-receptor superfamily, which is expressed in B cells. These interactions were confirmed by in vitro (cotransformation in yeast, CoIP) and in vivo (colocalization of these proteins in mammalian cells and CoIP) assays. Overexpression of Ostl in primary mouse hematopoietic cells followed by injection of the cells into lethally irradiated mice resulted in a T-Acute-Lymphoblastic-Leukemia (T-ALL) phenotype. In summary, our experiments could demonstrate that OSTL is important in B cell development and signaling and deregulation of this gene can contribute to the development of hematologic malignancies

Identification and characterization of OSTL (RNF217) encoding a RING-IBR-RING protein adjacent to a translocation breakpoint involving ETV6 in childhood ALL

Genomic aberrations involving ETV6 on band 12p13 are amongst the most common chromosomal abnormalities in human leukemia. The translocation t(6;12)(q23;13) in a childhood B-cell acute lymphoblastic leukemia (ALL) cell line fuses ETV6 with the putative long non-coding RNA gene STL. Linking STL properties to leukemia has so far been difficult. Here, we describe a novel gene, OSTL (annotated as RNF217 in Genbank), which shares the first exon and a CpG island with STL but is transcribed in the opposite direction. Human RNF217 codes for a highly conserved RING finger protein and is mainly expressed in testis and skeletal muscle with different splice variants. RNF217 shows regulated splicing in B cell development, and is expressed in a number of human B cell leukemia cell lines, primary human chronic myeloid leukemia, acute myeloid leukemia with normal karyotype and acute T-ALL samples. Using a yeast two-hybrid screen, we identified the anti-apoptotic protein HAX1 to interact with RNF217. This interaction could be mapped to the C-terminal RING finger motif of RNF217. We propose that some of the recurring aberrations involving 6q might deregulate the expression of RNF217 and result in imbalanced apoptosis signalling via HAX1, promoting leukemia development

Longitudinal Analysis Of Patents On Colorectal Cancer

Colorectal cancer is epidemiologically relevant worldwide because it is the fourth leading cause of death from cancer. This study aims to present the mapping of technologies related to colorectal cancer. The search took place during the months of May and June 2019. The Leans database was used, which collects global patent information. The search occurred through the term "colorectal cancer", inserted in the title or abstract fields. Patents with publication date between January 1, 2000 and June 1, 2019 were selected. Only the patents granted and those filed were filtered (patent application; granted patent). A total of 6,850 patents were identified, of which 5,445 (79.48%) correspond to patents filed and 1,405 (20.51%) are patents granted in the period from 2000 to 2019. In 2000, 47 patents on colorectal cancer were published. The quantitative growth of technologies filed and granted was constant. In 2017 there was a total of 911 applications, indicating a growth of 1938.29% in relation to the year 2000. The first patent of the period was on the APC gene mutation, associated with colorectal cancer in families of Ashkenazi Jews, developed by Laken and collaborators (2000), and belongs to Johns Hopkins University, Baltimore, Maryland, in the United States. It can be concluded that the mapping of patents is important to trace a panorama of the world technological advance, as well as it can also be used as an instrument to identify scientific articles that cite patents developed in a given time space

Cytotoxicity evaluation of indomethacin-loaded polymeric nanoparticles in a human breast adenocarcinoma cell model/ Avaliação da citotoxicicidade de nanopartículas poliméricas contendo indometacina em modelo celular de adenocarcinoma de mama humano

Novas pesquisas indicam que anti-inflamatórios podem ser aplicados como agentes anti-cancerígenos como indometacina para hepatocarcinoma humano, canceres de colon e estômago. Como sabe-se, indometacina possui efeitos adversos gastrointestinais, cardiovasculares e renais. Uma vez que cancer de mama tem alta incidência e não há estudo da indometacina carreada em nanopartículas para esta aplicação, este estudo envolve o desenvolvimento de nanocapsulas de poli-epsilon-caprolactona carregadas com indometacina para a redução de citotoxicidade como agente quimioprotetor para cancer de mama. O nanocarreador foi preparado por método de deposição interfacial e sua caracterização foi realizada por determinação de pH, diâmetro médio e índice de polidispersão por espalhamento dinâmico de luz, potencial zeta por mobilidade eletroforética, eficiência de encapsulação por método de cromatografia líquida de alta eficiência e seu ensaio de citotoxicidade com linhagem de células queratinócitos (HaCaT) e células de cancer de mama (MCF-7). As formulações branca (C-NC) e contendo indometacina (Ind-OH-NC) mostraram leve pH ácido, diâmetros em torno de 200 nm e PDI<0,2 com potencial zeta em torno de -20 mV e eficiência de encapsulação de 99% (1 mg.mL-1), cujo coeficiente de distribuição indicou efeito de permeação e retenção (efeito EPR). Ambas formulações não foram citotóxicas às células HaCaT, provando serem seguras às células normais e Ind-OH-NC teve uma permeação concentração e tempo-dependente e teve eficácia em reduzir a viabilidade celular da linhagem MCF-7

Identification and characterization of OSTL (RNF217) encoding a RING-IBR-RING protein adjacent to a translocation breakpoint involving ETV6 in childhood ALL

Genomic aberrations involving ETV6 on band 12p13 are amongst the most common chromosomal abnormalities in human leukemia. The translocation t(6;12)(q23;13) in a childhood B-cell acute lymphoblastic leukemia (ALL) cell line fuses ETV6 with the putative long non-coding RNA gene STL. Linking STL properties to leukemia has so far been difficult. Here, we describe a novel gene, OSTL (annotated as RNF217 in Genbank), which shares the first exon and a CpG island with STL but is transcribed in the opposite direction. Human RNF217 codes for a highly conserved RING finger protein and is mainly expressed in testis and skeletal muscle with different splice variants. RNF217 shows regulated splicing in B cell development, and is expressed in a number of human B cell leukemia cell lines, primary human chronic myeloid leukemia, acute myeloid leukemia with normal karyotype and acute T-ALL samples. Using a yeast two-hybrid screen, we identified the anti-apoptotic protein HAX1 to interact with RNF217. This interaction could be mapped to the C-terminal RING finger motif of RNF217. We propose that some of the recurring aberrations involving 6q might deregulate the expression of RNF217 and result in imbalanced apoptosis signalling via HAX1, promoting leukemia development

Células-tronco adultas no tratamento do diabetes mellitus tipo I: uma revisão de literatura

Objective - to clarify the applicability of cell therapy with adult stem cells in the treatment of type I diabetes mellitus in the national and international scenario. Methodology - exploratory descriptive bibliographic review, developed between March and October 2012. For this purpose, the databases Scielo, PubMed, Lilacs and Bireme were used, being considered original scientific articles published from 2002 to 2012. Results - five papers addressed the proposed theme, which presented the different cell therapy alternatives in type I diabetes mellitus worldwide. Conclusions - this study made it possible to conclude that the practice of cell therapy may be accessible to the entire population within a few years and has greater benefits than possible risks for the treatment of chronic diseases such as type I diabetes, providing improvements in the quality of life of patients. treated patientsObjetivo – esclarecer a aplicabilidade da terapia celular com células-tronco adultas no tratamento do diabetes mellitus tipo I no cenário nacional e internacional. Metodologia - revisão bibliográfica do tipo exploratória descritiva, desenvolvida entre março e outubro de 2012. Para tal, foram utilizadas as bases de dados Scielo, PubMed, Lilacs e Bireme, sendo considerados artigos científicos originais publicados no período de 2002 a 2012. Resultados – cinco trabalhos abordaram o tema proposto, os quais apresentaram as diferentes alternativas de terapia celular no diabetes mellitus tipo I mundialmente. Conclusões – esse estudo possibilitou concluir que a prática da terapia celular poderá ser acessível para toda a população dentro de poucos anos e apresenta benefícios maiores do que possíveis riscos para o tratamento de doenças crônicas como o diabetes tipo I, proporcionando melhorias na qualidade de vida dos pacientes tratado

Tucumã extracts decreases PML/RARΑ gene expression in NB4/APL cell line

Acute promyelocytic leukemia (APL) is a cancer pharmacologically treated with all-trans retinoic acid (ATRA), although well tolerated by most patients, some develop toxicity to ATRA, Differentiation Syndrome. The Amazon Biome has several fruits and oil plants rich in micronutrients, particularly carotenoids as the fruit tucumã (Astrocaryum aculeatum). This study analyzed the antitumor and cytoprotective activity of tucumã with and without concomitant exposure of ATRA in high concentration mimicking the toxicity of differentiation syndrome, as the potential cytotoxic effect of chemotherapeutic in an APL cell line. The cultured NB4 cells were exposed to ethanolic extracts of tucumã and to synergism with extracts and ATRA. Determination of proliferation, cell viability, caspases 1, 3, 8 and cell differentiation by nested RT-qPCR. The ATRA control had a strong inhibitory effect and toxicity as expected. The extracts also reduced cell proliferation by triggering apoptosis in concentration-dependent and reversing chromosome translocation, especially the lowest tested concentration of tucumã pulp extract. In the synergism, extracts act to maintain the levels of viability and apoptosis equal to the ATRA control but in contrast to drug that causes death and destruction of the genetic material, tucumã demonstrated a reduction of the gene expression indicating a possible protection against the toxicity of high concentrations of ATRA. These results suggest that fruits rich in retinoid molecules may have a cytotoxic effect against APL cells and reduced concentrations of carotenoids may act as cytoprotectors in APL cells treated with high concentrations of ATRA promoting cellular/molecular differentiation

Expectativas de escolares de uma comunidade vulnerável: qualidade de vida e esperança sobre profissionais/governantes

Objetivou-se conhecer às expectativas/anseios de escolares sobre mudanças pessoais que possibilitariam melhorias na sua qualidade de vida e o que esperam dos profissionais da saúde e governantes. Estudo transversal, realizado com 435 escolares, de dez anos ou mais, matriculados do quinto ano do ensino fundamental até o último ano do ensino médio. Utilizou-se um questionário com questões fechadas e após a análise estatística descritiva. 45,3% dos pesquisados respondeu que gostaria de estudar mais; 26,7% de valorizar mais os pais. Praticamente metade dos sujeitos gostaria que os profissionais de saúde lhes dessem mais atenção e orientações. Destes, 19,7% consideravam importante o profissional de saúde na escola. 40% dos estudantes esperam honestidade dos governantes e 34,9% que estes pensem mais no povo. Os escolares têm noção dos seus direitos de cidadania, expressam de forma consciente às expectativas/anseios em relação às mudanças pessoais e o que esperam de profissionais da saúde e governantes.Objetivou-se conhecer às expectativas/anseios de escolares sobre mudanças pessoais que possibilitariam melhorias na sua qualidade de vida e o que esperam dos profissionais da saúde e governantes. Estudo transversal, realizado com 435 escolares, de dez anos ou mais, matriculados do quinto ano do ensino fundamental até o último ano do ensino médio. Utilizou-se um questionário com questões fechadas e após a análise estatística descritiva. 45,3% dos pesquisados respondeu que gostaria de estudar mais; 26,7% de valorizar mais os pais. Praticamente metade dos sujeitos gostaria que os profissionais de saúde lhes dessem mais atenção e orientações. Destes, 19,7% consideravam importante o profissional de saúde na escola. 40% dos estudantes esperam honestidade dos governantes e 34,9% que estes pensem mais no povo. Os escolares têm noção dos seus direitos de cidadania, expressam de forma consciente às expectativas/anseios em relação às mudanças pessoais e o que esperam de profissionais da saúde e governantes

Expectativas de escolares de uma comunidade vulnerável: qualidade de vida e esperança sobre profissionais/governantes

Objetivou-se conhecer s expectativas/anseios de escolares sobre mudanas pessoais que possibilitariam melhorias na sua qualidade de vida e o que esperam dos profissionais da sade e governantes. Estudo transversal, realizado com 435 escolares, de dez anos ou mais, matriculados do quinto ano do ensino fundamental at o ltimo ano do ensino mdio. Utilizou-se um questionrio com questes fechadas e aps a anlise estatstica descritiva. 45,3% dos pesquisados respondeu que gostaria de estudar mais; 26,7% de valorizar mais os pais. Praticamente metade dos sujeitos gostaria que os profissionais de sade lhes dessem mais ateno e orientaes. Destes, 19,7% consideravam importante o profissional de sade na escola. 40% dos estudantes esperam honestidade dos governantes e 34,9% que estes pensem mais no povo. Os escolares tm noo dos seus direitos de cidadania, expressam de forma consciente s expectativas/anseios em relao s mudanas pessoais e o que esperam de profissionais da sade e governantes.Objetivou-se conhecer s expectativas/anseios de escolares sobre mudanas pessoais que possibilitariam melhorias na sua qualidade de vida e o que esperam dos profissionais da sade e governantes. Estudo transversal, realizado com 435 escolares, de dez anos ou mais, matriculados do quinto ano do ensino fundamental at o ltimo ano do ensino mdio. Utilizou-se um questionrio com questes fechadas e aps a anlise estatstica descritiva. 45,3% dos pesquisados respondeu que gostaria de estudar mais; 26,7% de valorizar mais os pais. Praticamente metade dos sujeitos gostaria que os profissionais de sade lhes dessem mais ateno e orientaes. Destes, 19,7% consideravam importante o profissional de sade na escola. 40% dos estudantes esperam honestidade dos governantes e 34,9% que estes pensem mais no povo. Os escolares tm noo dos seus direitos de cidadania, expressam de forma consciente s expectativas/anseios em relao s mudanas pessoais e o que esperam de profissionais da sade e governantes

Atividade in vitro da secreção de Lucilia cuprina frente à Leishmania amazonensis, Ttrypanosoma cruzi e linhagens celulares / In vitro activity of larval secretions from Lucilia cuprina against Leishmania amazonensis, Trypanosoma cruzi and cell lines

As pesquisas com produtos naturais representam um valioso recurso, pois são fonte de compostos biologicamente ativos que podem ter atividade contra uma variedade de patógenos que afetam a saúde humana e animal. Os dípteros da espécie Lucilia cuprina, pertencente à família Calliphoridae, conhecidos como moscas varejeiras, são cosmopolitas e têm importante função na natureza devido ao desenvolvimento de suas larvas em matéria orgânica em decomposição. Alguns estudos chegaram à conclusão de que a produção de enzimas digestivas secretadas pelas larvas são importantes para o estabelecimento e  sobrevivência desses insetos no hospedeiro e no ambiente  devido a sua  secreção ter ação bactericida, antiparasitária e antifúngica e ao hábito alimentar necrobiontófago, esses dipteros têm sido utilizados em bioterapia e pesquisas contra vários patógenos, entretanto, são poucos os estudos com foco na secreção desta espécie. Portanto, o objetivo deste trabalho foi verificar a atividade da secreção larval in vitro de L. cuprina, extraída de larvas L3 em diferentes concentrações por um período de 24 horas, frente à Leishmania amazonensis, Trypanosoma cruzi, linhagem tumoral de melanoma B16-F10 e HFF-1 de fibroblasto humano. Evidenciou-se uma redução na viabilidade de promastigotas de L. amazonensis nos tratamentos com secreção larval de 0,25%, 1% e 2% (viabilidade reduzida para 43,33%, 60% e 37,33% respectivamente). No ensaio com T. cruzi as concentrações 0,25% e 0,5% de secreção larval foi ativa mostrando diminuição de viabilidade de epimastigotas para 35,28% e 43,07%. A secreção larval mostrou capacidade citotóxica para as células tumorais. A concentração de 2% foi significativa em todos os ensaios, MTT, Vermelho Neutro (NR) e Crystal Violeta (VC), com redução de viabilidade para 79,3%, 85% e 85,6%, respectivamente. O tratamento a 1% mostrou diferença significativa tanto para NR (viabilidade de 74%) como VC (viabilidade de 83,6%). A concentração de 0,5% no NR diminuiu viabilidade para 80,6%. Nos ensaios com linhagem não tumoral a secreção mostrou baixa toxicidade, demonstrando segurança. O ensaio fluorimétrico realizado para quantificação de dsDNA (Picogreen) indicou um aumento de 14% à 25% de DNA extracelular. Os resultados fluorimétricos com o marcador 2,7’-diclorofluoresceína (DCFH-DA) mostraram um aumento de 20% e 22% de espécies reativas nas concentrações de 0,25 e 2%, sendo indicativo de um possível mecanismo de morte celular por radicais livres. Os resultados revelam que a secreção larval de L. cuprina, em diferentes concentrações, demonstrou atividade antiprotozoária e citotóxica na linhagem tumoral