In vitro functional exploration of mechanisms causing acrodysostosis without hormonal resistance by mutation of the PDE4D gene : comparison with acrodysostosis and multi-hormonal resistance (mutations of the PRKAR1A gene) and pseudo-hypoparathyroidism 1a (mutations in the GNAS gene)

L’acrodysostose est une chondrodysplasie associant une petite taille et des anomalies des extrémités et de la face. Les mécanismes moléculaires sous-jacents ont récemment été identifiés, et deux types d’acrodysostose sont individualisés : 1) l’acrodysostose avec résistance hormonale (acroR1a), en lien avec des mutations du gène PRKAR1A, codant pour une sous-unité régulatrice de la PKA et 2) l’acrodysostose « sans » résistance hormonale (acroPDE), en lien avec des mutations du gène PDE4D, codant pour la phosphodiestérase 4D. Dans les deux cas, il existe une altération de la voie de signalisation de l’AMPc entraînant une résistance au PTHrp à l’origine du phénotype osseux des patients, similaire à celui observé dans la PHP 1a due à des mutations inactivatrices du gène GNAS, codant pour la protéine Gsα. Je me suis intéressée dans ce travail aux mécanismes cellulaires à l’origine du phénotype de l’acroPDE et pouvant expliquer ses différences phénotypiques avec l’acroR1a et la PHP1a. Ces trois pathologies offrent un outil précieux pour l’étude de la voie de signalisation des RCPG puisqu’elles sont toutes dues à un défaut génétique altérant cette voie, mais s’exprimant cliniquement de façon différente bien que proche, notamment en ce qui concerne les résistances hormonales autres que celle du PTHrp dans les chondrocytes. Dans la première partie, afin de mettre en évidence une spécificité tissulaire pouvant expliquer les différences d’expression phénotypique de ces mutations, j’ai utilisé deux modèles cellulaires humains, des fibroblastes et la lignée HEK293, et observé les effets de l’inhibition sélective de la PDE4 par du rolipram à différentes étapes de la voie de signalisation, après stimulation par deux agonistes, la PTH et la PGE2. Les résultats indiquent que l’impact du rolipram est d’autant plus important que la stimulation par l’agoniste est faible. La modulation du signal par la PDE4 dépend donc à la fois du type cellulaire et de l’intensité initiale du stimulus par l’agoniste. Dans la seconde partie, pour comparer plus directement l’effet des mutations de ces trois gènes au niveau cellulaire, j’ai réalisé une étude détaillée du phénotype des fibroblastes de témoins et de patients atteints de PHP1a, d’acroR1a et d’acroPDE, à différentes étapes de la voie de signalisation, après stimulation par la PTH et la PGE2, et en présence ou non d’inhibiteur des PDE. Il n’existe pas de différence significative dans l’expression des transcrits ou la traduction des protéines impliquées dans la voie de signalisation dans les différents groupes de fibroblastes. En revanche, l’effet de l’inhibition des PDE4 sur la quantité d’AMPc intracellulaire est plus important dans les fibroblastes mutés PDE4D, allant dans le sens de mutations activatrices. Nous n’avons pas pu mettre en évidence de différence significative dans la phosphorylation de CREB dans ce modèle. Et enfin, dans la 3ème partie, je présente la mise au point d’une technique de BRET permettant l’étude fonctionnelle des différentes mutations de PDE4D connues pour être responsables d’acroPDE. Les résultats sont en faveur d’un caractère activateur des mutations de PDE4D à l’origine d’une dégradation plus rapide d’AMPc aboutissant à une diminution de l’activité PKA. En conclusion, ces résultats concordent à montrer que les mutations de PDE4D sont activatrices, augmentant ainsi la dégradation de l’AMPc ce qui serait à l’origine des résistances hormonales. Ce phénomène est d’autant plus important dans les situations où l’augmentation d’AMPc est modeste, expliquant probablement l’absence de résistance hormonale dans certains tissus. Bien sûr, ces résultats sont à pondérer par le fait qu’il existe de nombreuses autres phosphodiestérases pouvant compenser ces phénomènes, qu’il existe une troisième voie d’utilisation de l’AMPc (Epac), et qu’il faudrait poursuivre les investigations notamment en étudiant les phénomènes de compartimentalisation de la cellule pour élucider ces mécanismes.No abstrac

Exploration fonctionnelle in vitro des mécanismes à l'origine de l'acrodysostose sans résistance hormonale par mutation du gène de la PDE4D : comparaison avec l'acrodysostose et résistance plurihormonale (mutations du gène PRKAR1A) et la pseudo-hypoparathyroïdie 1a (mutations du gène GNAS)

No abstractL’acrodysostose est une chondrodysplasie associant une petite taille et des anomalies des extrémités et de la face. Les mécanismes moléculaires sous-jacents ont récemment été identifiés, et deux types d’acrodysostose sont individualisés : 1) l’acrodysostose avec résistance hormonale (acroR1a), en lien avec des mutations du gène PRKAR1A, codant pour une sous-unité régulatrice de la PKA et 2) l’acrodysostose « sans » résistance hormonale (acroPDE), en lien avec des mutations du gène PDE4D, codant pour la phosphodiestérase 4D. Dans les deux cas, il existe une altération de la voie de signalisation de l’AMPc entraînant une résistance au PTHrp à l’origine du phénotype osseux des patients, similaire à celui observé dans la PHP 1a due à des mutations inactivatrices du gène GNAS, codant pour la protéine Gsα. Je me suis intéressée dans ce travail aux mécanismes cellulaires à l’origine du phénotype de l’acroPDE et pouvant expliquer ses différences phénotypiques avec l’acroR1a et la PHP1a. Ces trois pathologies offrent un outil précieux pour l’étude de la voie de signalisation des RCPG puisqu’elles sont toutes dues à un défaut génétique altérant cette voie, mais s’exprimant cliniquement de façon différente bien que proche, notamment en ce qui concerne les résistances hormonales autres que celle du PTHrp dans les chondrocytes. Dans la première partie, afin de mettre en évidence une spécificité tissulaire pouvant expliquer les différences d’expression phénotypique de ces mutations, j’ai utilisé deux modèles cellulaires humains, des fibroblastes et la lignée HEK293, et observé les effets de l’inhibition sélective de la PDE4 par du rolipram à différentes étapes de la voie de signalisation, après stimulation par deux agonistes, la PTH et la PGE2. Les résultats indiquent que l’impact du rolipram est d’autant plus important que la stimulation par l’agoniste est faible. La modulation du signal par la PDE4 dépend donc à la fois du type cellulaire et de l’intensité initiale du stimulus par l’agoniste. Dans la seconde partie, pour comparer plus directement l’effet des mutations de ces trois gènes au niveau cellulaire, j’ai réalisé une étude détaillée du phénotype des fibroblastes de témoins et de patients atteints de PHP1a, d’acroR1a et d’acroPDE, à différentes étapes de la voie de signalisation, après stimulation par la PTH et la PGE2, et en présence ou non d’inhibiteur des PDE. Il n’existe pas de différence significative dans l’expression des transcrits ou la traduction des protéines impliquées dans la voie de signalisation dans les différents groupes de fibroblastes. En revanche, l’effet de l’inhibition des PDE4 sur la quantité d’AMPc intracellulaire est plus important dans les fibroblastes mutés PDE4D, allant dans le sens de mutations activatrices. Nous n’avons pas pu mettre en évidence de différence significative dans la phosphorylation de CREB dans ce modèle. Et enfin, dans la 3ème partie, je présente la mise au point d’une technique de BRET permettant l’étude fonctionnelle des différentes mutations de PDE4D connues pour être responsables d’acroPDE. Les résultats sont en faveur d’un caractère activateur des mutations de PDE4D à l’origine d’une dégradation plus rapide d’AMPc aboutissant à une diminution de l’activité PKA. En conclusion, ces résultats concordent à montrer que les mutations de PDE4D sont activatrices, augmentant ainsi la dégradation de l’AMPc ce qui serait à l’origine des résistances hormonales. Ce phénomène est d’autant plus important dans les situations où l’augmentation d’AMPc est modeste, expliquant probablement l’absence de résistance hormonale dans certains tissus. Bien sûr, ces résultats sont à pondérer par le fait qu’il existe de nombreuses autres phosphodiestérases pouvant compenser ces phénomènes, qu’il existe une troisième voie d’utilisation de l’AMPc (Epac), et qu’il faudrait poursuivre les investigations notamment en étudiant les phénomènes de compartimentalisation de la cellule pour élucider ces mécanismes

Place du mitotane dans le traitement de la maladie de Cushing de l'enfant et de l'adolescent

Introduction : la maladie de Cushing (MDC) chez l'enfant se distingue par la prédominance du retard statural. Le traitement de référence est l'adénomectomie mais ce dernier a un taux d'échec de 50%, rendant fréquent un traitement médical pour contrôler l'hypercorticisme. Le mitotane est un agent adrénolytique utilisé pour traiter les corticosurrénalomes. L'objectif de cette thèse est de rapporter son efficacité dans la MDC, afin d'évaluer s'il peut être une alternative à la chirurgie. Population : ce travail est une étude rétrospective sur 26 enfants avec MDC, dont 7 ont été traités au long cours par mitotane. Les groupes "chirurgie" et "mitotane" sont comparés selon vitesse de croissance, taille, indice de masse corporelle et puberté. Résultats : 54% des patients sont en rémission prolongée après la chirurgie. Les critères prédictifs de réussite sont l'expérience du chirurgien, la visualisation d'un adénome à l'IRM et une insuffisance surrénale transitoire. Il pourrait en outre favoriser l'augmentation de taille de l'adénome rendant son exérèse plus facile. Il n'existe pas de corrélation entre la cortisolurie et la mitotanémie. Conclusion : le mitotane utilisé à doses non adrénolytiques semble avoir sa place dans le traitement de la MDC pédiatrique, notamment après échec de l'adénomectomie, ou quand l'adénome n'est pas visualisable. Ces proposititons thérapeutiques pourraient faire l'objet d'une étude protocolisée à plus grande échelle.Introduction : the main clinical feature of pediatric Cushing's disease (CD) is growth retardation. The conventional treatment is the transphenoidal adenomectomy yet with a 50% failure rate, it is therefore necessary to control the cortisol secretion through a medical treatment. Mitotane is an adrenolytic drug used in adrenocortical carcinomas. The aim of this study is to describe its efficacy and safety in pediatric Cushing's disease as an alternative to the surgery. Population : this a retrospective study reporting 26 pediatric CD patients, 7 out of 26 were treated with mitotane. I compared growth velocity, height, body mass index and puberty in "surgery" and "mitotane" groups. Results : 54 % of the patients were cured after surgery. Surgeon experience, visualization of the adenoma on MRI and postoperative corticotrope deficiency were predictive factors of successful adenomectomy. After 3 months treatment, the cortisol secretion was controlled. In our hands, mitotane was safe, except for transient adrenal insufficiency in some patients. We found no correlation between urinary cortisol and mitotane blood levels, which should not be used to monitor the traitment. Low-dose mitotane traitment restores the growth velocity, puberty development and improves the body mass index z-score. Moreover, in one patient, we observed the progressive growth of the pituitary adenoma on MRI, which allowed a successful surgery. Conclusion : low-dose mitotane may be used in pediatric CD, after surgery failure or in patients without adenoma identified on MRI. There is a need for a multicenter clinical trial to demonstrate the efficacy and safety of mitotane after these pilot observations.ST QUENTIN EN YVELINES-BU (782972101) / SudocSudocFranceF

Bilan scientifique de l’île de La Réunion 2016 - 2017 - 2018

International audienceCe bilan scientifique régional a été conçu afin que soient diffusés largement les résultats des travaux archéologiques de terrain

Bio-ingénierie de la gestation : vers la fin de l’utérus ?

International audienceThe uterus is the specialised female organ that enables a pregnancy to result in a birth. In order to treat or circumvent uterine infertility, various therapeutic strategies are currently used. This review presents and discusses recent advances in the fields of in vitro development of peri-implantation embryo, biotechnological devices that mimic placental function and regenerative medicine applied to the uterus. To date, none of the available approaches allows the uterus to be bypassed in order to ensure the development of the embryo from implantation to term, outside the maternal body.L'utérus est l'organe femelle spécialisé permettant qu'une grossesse aboutisse à une naissance. Afin de traiter ou de contourner les infertilités d'origine utérine, diverses stratégies thérapeutiques sont aujourd'hui appliquées. Cette revue présente et discute les avancées récentes réalisées dans les domaines du développement péri-implantatoire de l'embryon in vitro, des dispositifs biotechnologiques mimant la fonction placentaire et de la médecine regénérative de l'utérus. À ce jour, aucune des approches disponibles ne permet de s'affranchir de l'utérus pour assurer le développement de l'embryon de l'implantation jusqu'à terme, hors de l'organisme maternel

Maladie veineuse thromboembolique et survie chez les patients cancéreux. Vers de nouvelles implications du traitement par héparines de bas poids moléculaire?

SCOPUS: cp.jinfo:eu-repo/semantics/publishe

Self-assemblies of silver sulfide nanocrystals on various substrates

The influence of the substrate on the morphology of 2D and 3D superlattices made of 5.8 nm silver sulfide nanocrystals coated with dodecanethiol is reported. The two substrates used are highly oriented pyrolytic graphite (HOPG) and molybdenum disulfide (MoS2). The self-assemblies of nanocrystals were characterized with scanning electron microscopy and atomic force microscopy techniques, and it was found that the self-organization in 2D and 3D superlattices markedly differs with the substrate used. These changes in behavior are explained in terms of particle-particle and particle-substrate van der Waals interactions and capillary force

Neonatal cyanosis with Hb St Mandé, a low O 2 affinity hemoglobin variant affecting β‐globin

International audienc

Glucocorticoid-Induced Hyperinsulinism in a Preterm Neonate with Inherited ABCC8 Variant

International audienceGlucose homeostasis is a real challenge for extremely preterm infants (EPIs) who have both limited substrate availability and immature glucose metabolism regulation. In the first days of life, EPIs frequently develop transient glucose intolerance, which has a complex pathophysiology that associates unregulated gluconeogenesis, immature insulin secretion, and peripheral insulin resistance. In this population, glucocorticoid therapy is frequently administrated to prevent severe bronchopulmonary dysplasia. During this treatment, glucose intolerance classically increases and may lead to hyperglycemia. We report a case of neonatal hypoglycemia that was concomitant to a glucocorticoids administration, and that led to a congenital hyperinsulinism diagnosis in an EPI with a heterozygous ABCC8 variant. The variant was inherited from his mother, who had developed monogenic onset diabetes of the youth (MODY) at the age of 23. ABCC8 encodes a beta-cell potassium channel unit and causes congenital hyperinsulinism or MODY depending on the mutation location. Moreover, some mutations have been observed in the same patient to cause both hyperinsulinism in infancy and MODY in adulthood. In our case, the baby showed repeated and severe hypoglycemias, which were undoubtedly time-associated with the betamethasone intravenous administration. This hyperinsulinism was transient, and the infant has not yet developed diabetes at three years of age. We take the opportunity presented by this unusual clinical presentation to provide a review of the literature, suggesting new insights regarding the pathophysiology of the beta-pancreatic cells’ insulin secretion: glucocorticoids may potentiate basal insulin secretion in patients with ABCC8 mutation