Detección molecular de un fragmento del virus de lengua azul en borregos de diferentes regiones de México

Bluetongue disease (BTD) affects various species of wild and domestic ruminants. In Mexico, the disease, caused by the bluetongue virus (BTV) is still regarded as exotic, despite the fact that antibodies have been detected on several occasions. The objective was to establish molecular techniques using a synthetic gene, including the genes NS1 and NS3 as positive controls for the diagnosis of BTV in samples of sheep from different regions of the country. A total of 320 total whole blood samples were obtained from sheep. The samples obtained were evaluated by end-point RT-PCR and real-time RT-PCR, the conditions having been established by the work group. Twelve sheep samples were found to be positive for the detection of NS1; these samples were sequenced, and a fragment of 101 base pairs was obtained. Upon alignment, were obtained identities with sequences reported in GenBank with NS1 fragments ranging from 89 % (p= 1e-12) to 98 % (p= 4e-13), corresponding to serotypes 10, 11 and 12. From these samples, two positive sheep samples were obtained using real-time PCR (RT-PCR): one from Chiapas (Chiapas breed), and the other, from Tamaulipas (Suffolk breed). The results of the RT-PCR were corroborated by CPA-SENASICA. This work provides evidence, for the first time in Mexico, of the importance of using a synthetic gene as a positive control to perform BSL-2 detection in official laboratories, which in a health emergency is of utmost importance.La enfermedad de la lengua azul (LA) afecta diferentes especies de rumiantes silvestres y domésticos. En México, la enfermedad producida por el virus de la lengua azul (VLA), aún es reconocida como exótica, a pesar de que, en diferentes ocasiones se han detectado anticuerpos. El objetivo fue establecer técnicas moleculares usando un gen sintético que incluye los genes NS1 y NS3 como control positivo para establecer el diagnóstico del VLA en muestras de ovinos de diferentes regiones del país, mediante técnicas moleculares. Se obtuvieron 320 muestras totales de sangre completa de ovinos. Las muestras obtenidas se evaluaron mediante RT-PCR punto final y RT-PCR en tiempo real estableciendo las condiciones por el grupo de trabajo. Se encontraron 12 muestras positivas de ovinos a la detección de NS1; estas muestras se secuenciaron obteniendo un fragmento de 101 pares de bases. Al realizar el alineamiento se obtuvieron identidades con secuencias reportadas en el GenBank con fragmentos de NS1 desde 89 % (p= 1e-12) a 98 % (p= 4e-13), correspondientes a los serotipos 10, 11 y 12.  De estas muestras, se obtuvieron dos muestras positivas de ovinos mediante el PCR tiempo real (PCR-tr), uno proveniente de Chiapas (raza Chiapas) y el otro de Tamaulipas (raza Suffolk). Los resultados de la PCRtr fueron corroborados por la CPA-SENASICA. Este trabajo, aporta por primera vez en México, la importancia de usar un gen sintético como control positivo, para realizar la detección en laboratorios oficiales BSL-2, lo cual en una emergencia sanitaria es de suma importancia

Advances in the Characterization of Creole Cattle from Nayarit, Chihuahua, and Baja California Sur.

Objective. This manuscript aims to contribute to disseminating the research conducted on creole cattle from Nayarit, Chihuahua, and Baja California, as these regions have been the focus of numerous studies. These studies include identifying the areas of opportunity that need to be addressed for the conservation of this zoogenetic resource present in Mexico. Description. Cattle farming in Mexico began with the arrival of the first bovines from the Iberian Peninsula to New Spain over 500 years ago. These cattle established itself in various regions of the country, developing specific characteristics that have allowed it to adapt primarily to harsh environmental conditions. As a result, these bovines are considered a productive alternative in various agroecological environments to address the challenges of climate change and mitigate the negative effects on the ecosystem. Limitations. To date, research on the morphological, productive, and genetic characterization, as well as the production environment of Creole cattle in Mexico, remains limited. Therefore, it is necessary to develop studies in this area to contribute to the conservation of this resource and, above all, to identify mechanisms for its rational use that justify its existence in a modern economic and productive environment. Conclusions. The documentary review conducted to present the current state of research on creole cattle herds in Nayarit, Chihuahua, and Baja California Sur revealed that the studies have primarily focused on productive aspects in various environments. Therefore, it is necessary to encourage research directed towards other productive areas of cattle, such as reproduction, animal health, and adaptation, in order to develop strategies that contribute to the conservation of this zoogenetic resource

Vaccine production in plant systems — An aid to the control of viral diseases in domestic animals. A review

Plants have been identified as promising expression systems for the commercial production of vaccines because of the possibility of introducing exogenous genes into them, which permits the development of a new generation of biological products called edible vaccines. The advantages of oral vaccines of this new type are that they induce mucosal, humoral, cellular and protective immunity, they are cheaper, easier to store, distribute and administer, they do not require cold chain management, and some species can be stored for long periods of time without any spoilage and may be administered as purified proteins. Owing to these benefits, plant-produced vaccines represent a valuable option for animal health. The aim of this paper is to present a review of plant-produced vaccines against viruses affecting domestic animals. Some aspects of the feasibility of their use and the immune response elicited by such vaccines are also discussed, as the balance between tolerance and immunogenicity is a major concern for the use of plant-based vaccines

Study of the Genetic Expression of Antiretroviral Restriction Factors and Acute Phase Proteins in Cattle Infected with Bovine Leukemia Virus

The goal of this study was to analyze the genetic expression of antiretroviral restriction factors (ARF) and acute phase proteins (APP), as well as their correlation with proviral and viral loads in cattle with aleukemic (AL) and persistent lymphocytosis (PL). Complete blood samples were collected from a herd of dairy cows, and we extracted genetic material from peripheral blood leukocytes. Absolute quantification of the expression of ARF (APOBEC-Z1, Z2, and Z3; HEXIM-1, HEXIM-2, and BST2) and APP (haptoglobin (HP), and serum amyloid A (SAA)) was performed by qPCR. Statistical significance was observed in the expression of APOBEC-Z3 in BLV-infected animals. We only found positive correlations with a strong expression of the ARF genes in the AL group. The participation of APOBEC (Z1 and Z3), HEXIM-1, and HEXIM-2 was more frequently identified in BLV-infected animals. HEXIM-2 showed active gene expression in the AL group. Although the expression of ARF in early stages of infection (AL) maintains an important participation, in late stages (PL) it seems to have little relevance

ENFOQUES GENÓMICOS Y TRANSCRIPTÓMICOS PARA ESTUDIAR ÁRBOLES MADERABLES: PERSPECTIVAS PARA EL ESTUDIO DE CEDRO ROJO (Cedrela odorata L.)

Introducción: El enfoque genómico y transcriptómico de alto rendimiento se ha desarrollado e implementado para tratar los principales desafíos que el sector forestal maderable afronta como, el crecimiento poblacional, cambio climático, deforestación y la pérdida de los servicios ecosistémicos forestales. Objetivo: Realizar una revisión bibliográfica enfocada en los genomas y transcriptomas de árboles maderables reportados en las bases de datos, con especial atención en el cedro rojo (Cedrela odorata L.), debido a la importancia como madera preciosa en México. Metodología: Se realizó una revisión de literatura, dirigida en el estudio de los árboles maderables con estrategias genómica y transcriptómica, en diferentes bases de datos como Pubmed, Scopus, Google Scholar, ScienceDirect, Wiley Online Library, MDPI y Scielo para identificar las especies maderables que cuentan con genomas y transcriptomas reportados. La estructura de la revisión fue: la genómica de árboles maderables, la transcriptómica de la madera, las especies potenciales de estudio por su importancia y finalmente, las bases de datos para consulta. Posteriormente se realizó un estudio bibliométrico con la librería de bibliometrix en R Studio. Resultados principales: El primer genoma forestal en ser ensamblado a nivel de cromosoma fue el álamo negro. Entre los árboles maderables, están reportados los genomas de álamo negro, álamo del desierto, eucalipto y roble con una longitud de 392, 496, 691 y 789 Mb. Con el estudio del transcriptoma, ha sido posible identificar genes relacionados con la formación de la madera en un álamo híbrido (Populus alba L. × P. glandulosa) y P. tremula L. y con la tolerancia a la sequía en Pinus massoniana y Pinus pinaster Aiton. En cedro rojo (Cedrela odorata L.), se obtuvo el transcriptoma con la secuenciación de una sola hoja, identificando 52,181 modelos de genes. En las bases de datos NCBI, EMBL-EBI, TreeGenes, PLAZA y el sitio web de la genómica de la madera dura es posible encontrar información relacionada con la genómica y transcriptómica de las especies maderables. Implicaciones: Se requieren más investigaciones en el área de las ómicas en maderables, particularmente en cedro rojo, ya que la búsqueda en estos temas arrojó poca información Conclusión: A través de la revisión bibliográfica en las bases de datos, se identificaron los árboles maderables que cuentan con genoma y transcriptoma descritos. Dicha información puede ser utilizada para el ensamble y anotación de nuevos genomas, identificación de genes y marcadores moleculares, entre otras aplicaciones

Detection of rabies virus in organs unrelated to the central nervous system of experimentally-inoculated vampire bats

The aim of this research was to detect rabies virus in peripheral tissues in captive vampires. Vampire bats were inoculated with 106 MICLD50 of homologous rabies virus. Bats displayed clinical signs of rabies beginning on d 8 until the 19th d post-inoculation (pi). Rabies virus antigens were found in the brain of all rabid bats. Viral RNA was detected in brain, salivary gland and tongue tissue by RT-PCR and nested PCR (nPCR). Viral genome was also detected in organs unrelated to the central nervous system. Rabies virus was not detected in saliva nor documented from any tissues without occurrence of viral antigens in the brain. Host humoral response was most pronounced via the induction of viral neutralizing antibodies (VNA) from d 8 to 20 pi, having a peak at d 14 with 0.9 IU. Antibody levels were variable, but tended to remain high after inoculation, showing significant differences to the negative control group (P=0.001). This research is one of the few recent studies focused upon Desmodus rotundus and contributes to the basic knowledge of rabies virus pathogenesis, which is required for an understanding of perpetuation in a major viral reservoir in Latin America

Respuesta de IFN-ɤ e IL-4 en ratones inoculados con una proteína G recombinante del virus de la rabia

The aim  of  this study was  to compare the  performance  of  IFN- and  IL-4 in mice  inoculated  with  recombinant rabiesvirus  G  protein  that  was  expressed  either  in  transgenic  maize  or  baculovirus.  For  this  purpose,  groups  of  mice  wereinoculated as  follows: Group  1, inactivated  rabies vaccine  im; Group  2,  plant-derived recombinant  G protein  orally;Group  3,  baculovirus-expressed  G  protein  im;  Group  4,  baculovirus-expressed  G  protein  orally;  and  group  5,untransformed  maize  orally.  The  levels  of  IFN-  and  IL-4  and  specific  antibodies  were  evaluated  every  15  d.    Achallenge  was  performed  at  d  60  post-inoculation  (pi).  Groups  1  and  3  promoted  the  best  humoral  response.  Onthe  other  hand,  the  results  showed  that  the  same  groups  showed  the  best  levels  of  IFN-  at  d  10  pi;  while  thepick  of  IL4  was  detected  at  d  15  pi.  For  the  survival  study,  83 %  of  the  mice  immunized with  inactivated  vaccine,maize  or  im  baculovirus  extracts  survived  viral  infection.  The  recombinant  rabies  G  protein  expressed  in  baculoviruspromoted  IFN-  and  antibodies  in  a  similar  way  to  the  inactivated  rabies  vaccine.  In  spite  of  this,  mice  fed  withtransgenic  maize  survived  to  the  challenge  at  the  same  percentage  than  group  3.El objetivo de este estudio fue comparar el comportamiento de El objetivo de este estudio fue comparar el comportamiento de El objetivo de este estudio fue comparar el comportamiento de IFN-ɤ e IL-4 en ratones inoculados con proteína G recombinante del virus de la rabia, que se expresa en maíz transgénico o baculovirus. Para este propósito, grupos de ratones se inocularon de la siguiente manera: Grupo 1, vacuna contra el virus de la rabia inactivado vía im; Grupo 2, proteína G recombinante derivada de plantas por vía oral; Grupo 3, proteína G expresada en baculovirus vía im; Grupo 4, proteína G expresada en baculovirus por vía oral; Grupo 5, maíz no transformado por vía oral. Los niveles de IFN-ɤ e IL-4 y los anticuerpos específicos se evaluaron cada 15 días. El desafío se realizó a los 60 días post inoculación (pi). Los grupos 1 y 3 promovieron una mejor respuesta humoral. Por otro lado, los resultados mostraron que los mismos grupos mostraron los mejores niveles de IFN-ɤ en el día 10 pi; mientras que la IL-4 se detectó en el día 15 pi. Para el estudio de  supervivencia, el 83 % de los ratones inmunizados con vacuna inactivada, maíz y los inoculados im con extractos de baculovirus sobrevivieron la infección viral. La proteína G de la rabia recombinante expresada en baculovirus promovió IFN-ɤ y los anticuerpos de una manera similar a la vacuna de rabia inactivada. A pesar de esto los ratones alimentados con maíz transgénico sobrevivieron al desafío en el mismo porcentaje que el grupo 3. e IL-4 en ratones inoculados con proteína G recombinante del virus de la rabia, que se expresa en maíz transgénico o baculovirus. Para este propósito, grupos de ratones se inocularon de la siguiente manera: Grupo 1, vacuna contra el virus de la rabia inactivado vía im; Grupo 2, proteína G recombinante derivada de plantas por vía oral; Grupo 3, proteína G expresada en baculovirus vía im; Grupo 4, proteína G  expresada en baculovirus por vía oral; Grupo 5, maíz no transformado por vía oral. Los niveles de IFN-ɤ e IL-4 y los anticuerpos específicos se evaluaron cada 15 días. El desafío se realizó a los 60 días post inoculación (pi). Los grupos 1 y 3 promovieron una mejor respuesta humoral. Por otro lado, los resultados mostraron que los mismos grupos mostraron los mejores niveles de IFN-ɤ en el día 10 pi; mientras que la IL-4 se detectó en el día 15 pi. Para el estudio de supervivencia, el 83 % de los ratones inmunizados con vacuna inactivada, maíz y los inoculados im con extractos de baculovirus sobrevivieron la infección viral. La proteína G de la rabia recombinante expresada en baculovirus promovió IFN-ɤ y los anticuerpos de una manera similar a la vacuna de rabia inactivada. A pesar de esto los ratones alimentados con maíz transgénico sobrevivieron al desafío en el mismo porcentaje que el grupo 3. e IL-4 en ratones inoculados con proteína G recombinante del virus de la rabia, que se expresa en maíz transgénico o baculovirus. Para este propósito, grupos de ratones se inocularon de la siguiente manera: Grupo 1, vacuna contra el virus de la rabia inactivado vía im; Grupo 2, proteína G recombinante derivada de plantas por vía oral; Grupo 3, proteína G expresada en baculovirus vía im; Grupo 4, proteína G expresada en baculovirus por vía oral; Grupo 5, maíz no transformado por vía oral. Los niveles de IFN-ɤ e IL-4 y los anticuerpos específicos se evaluaron cada 15 días. El desafío se realizó a los 60 días post inoculación (pi). Los grupos 1 y 3 promovieron una mejor respuesta humoral. Por otro lado, los resultados mostraron que los mismos grupos mostraron los mejores niveles de IFN-ɤ en el día 10 pi; mientras que la IL-4 se detectó en el día 15 pi. Para el estudio de supervivencia, el 83 % de los ratones inmunizados con vacuna inactivada, maíz y los inoculados im con extractos de baculovirus sobrevivieron la infección viral. La proteína G de la rabia recombinante expresada en baculovirus promovió IFN-ɤ y los anticuerpos de una manera similar a la vacuna de rabia inactivada. A pesar de esto los ratones alimentados con maíz transgénico sobrevivieron al desafío en el mismo porcentaje que el grupo 3

Uso de una PCR anidada para el diagnóstico del virus de la necrosis pancreática infecciosa (VNPI) en truchas de campo

The isolation of the infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) in cell culture is currently the main diagnostic method. Although it is a reliable method, it is expensive, and the results take three weeks. This study aimed to establish and evaluate the use of a nested PCR (nPCR) for the rapid diagnosis of the IPNV, decreasing the diagnosis time and increasing its sensitivity. Therefore, two pairs of primers were designed based on Mexican sequences. The first pair (RT-PCR) amplified a 682 bp product, and the second pair (nPCR) 229 bp of the VP2 gene. Subsequently, 70 rainbow trout fry (Oncorhynchus mykiss) were infected with the virulent strain MEX3-CSM-05 at a dose of 1X105.8 TCID50/0.02 ml. From each organism, the kidney, spleen, pyloric caeca, liver, intestine, and gills were collected. To evaluate the tests, a total of 26 clinically healthy adult trouts from commercial farms in the State of Mexico were used.  The detection frequency of the  IPNV  using  RT-PCR was 87.1 % in gills, 61.4 % in liver, 61.4 % in pyloric caeca, 58.6 % in kidney, 35.7 % in the intestine, and 32.9 % in the spleen (P<0.05). RT-PCR negative samples were positive in the nPCR. Similarly, samples from the wild trout organs were positive. In conclusion, the RT-PCR was less sensitive than the nPCR, which showed a sensitivity of 100 %. Therefore, nPCR is the best option for a reliable diagnosis of the IPNV in infected and sick fish.El aislamiento en cultivo celular es el método principal para el diagnóstico del virus de la necrosis pancreática infecciosa (VNPI). Aunque es un método confiable, resulta costoso y conlleva tres semanas en proporcionar un resultado. Para disminuir el tiempo en el diagnóstico y aumentar la sensibilidad para la detección del VNPI, el objetivo del presente estudio fue establecer y evaluar el uso de una PCR anidada (PCRa) para un diagnóstico rápido del VNPI. Para ello, se diseñaron dos pares de iniciadores basados en secuencias mexicanas. El primer par (RT-PCR) amplificó un producto de 682 pb y el segundo par (PCRa) 229 pb del gen VP2. Posteriormente, se infectaron 70 crías de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) con la cepa virulenta MEX3-CSM-05 a una dosis de 1X105.8 DICC50%/0.02 ml. De cada organismo se colectó el riñón, el bazo, los sacos pilóricos, el hígado, el intestino y las branquias. Para evaluar las pruebas, se utilizaron 26 truchas adultas clínicamente sanas de granjas comerciales del Estado de México. La frecuencia de detección del VNPI mediante RT-PCR en las branquias fue de 87.1 %, en el hígado 61.4 %, en los sacos pilóricos 61.4 %, en el riñón 58.6%, en el intestino 35.7 % y en el bazo 32.9 % (P<0.05). Las muestras negativas a la RT-PCR resultaron positivas en la PCRa. Asimismo, se mostraron positivas las muestras de los órganos de las truchas de campo. En conclusión, la RT-PCR tuvo menor sensibilidad que la PCRa, la cual mostró una sensibilidad del 100%. Por lo tanto, la PCRa es mejor para un diagnóstico confiable del VNPI en peces infectados y enfermos