New cell lines for the manufacture of lentivirus

Background: Gene therapy consists on medical treatment that aims to modulate an individual’s gene expression. To this end, many different gene transfer vehicles called vectors have been developed, including virus derived vectors. Showing promising characteristics, lentiviral vectors still have problems associated to them, especially in their production process, limited by low titers. To increase viral vector titer and producer cell growth, oncogenes such as SV40 Large T (T-Ag) antigen are expressed in producer cell lines, which decrease the safety of the vector preparations. Objectives: With the objective to find alternative cell substrates to HEK293T suitable for high titer vector production, three non-human cell lines were transformed with T-Ag oncogene and transfected with a lentiviral construct. Their vector production and transfection efficiency was characterized. The strength of several promoters to drive the expression of viral components was also evaluated in these cell lines. Results and conclusions: CAG and CMV revealed to be the most promising, although CAG delivers lower titers. In this work, it was shown that Age1.CR and Vero cell lines have the potential to deliver enhanced lentivector titers when expressing T-Ag, which conferred higher transfection efficiencies. Also, HEK293 cells expressing T-Ag were compared to their parental cell line in terms of cell growth and glycolysis in an attempt to understand cellular alterations induced by the oncogene. The results herein obtained will contribute to the development of stable lentivector producer cell lines and for the further understanding of the T-Ag’s influence in virus production.Contexto: A terapia génica consiste num tratamento médico que visa a modulação da expressão génica de um individuo. Com este fim, foram desenvolvidos diversos veículos de transferência de genes, denominados vectores. Estes incluem os vectores derivados de vírus. Apresentando características promissoras, os vectores lentivirais ainda têm problemas a si associados, especialmente no processo de produção, que é limitado pelos baixos títulos obtidos. Para aumentar os títulos de vectores virais e o crescimento das células produtoras, estas expressam oncogenes, tais como o Large T antigen (T-Ag) do SV40, a custo de preparações do vector menos seguras. Objectivos: Com o objectivo de encontrar linhas celulares alternativas às HEK293T adequadas à produção de elevados títulos de vectores virais, três linhas celulares não humanas foram transformadas com o oncogene T-Ag e transfectadas com uma construção lentiviral. A produção do vector e eficiência de transfecção foram caracterizadas. Também foi avaliada a força de vários promotores para a expressão dos componentes virais nestas células. Resultados e conclusões: O CAG e o CMV foram os mais promissores, mas com o CAG obtiveram-se títulos mais baixos. Neste trabalho, foi observado que as linhas celulares Age1.CR e Vero têm potencial para produzir títulos de vectores superiores quando expressam o T-Ag, o que pode estar ligado a maiores eficiências de transfecção. Para além disso, células HEK293 que expressam o T-Ag foram comparadas à sua linha parental em termos de crescimento celular e glicólise, tentando compreender melhor as alterações induzidas pelo oncogene. Os resultados obtidos neste trabalho vão contribuir para o desenvolvimento de linhas celulares estáveis para produção de vectores lentivirais, e para o aumento da compreensão da influência do T-Ag na produção viral

Estresse e qualidade de vida de profissionais bombeiros militares do município de Primavera do Leste – Mato Grosso

Estudos recentes apontam que o ambiente de trabalho pode desencadear estresse, a partir das pressões sofridas durante as atividades executadas. Entre os profissionais bombeiros militares, o principal fator que contribui para o estresse envolve a pressão das responsabilidades. Esta investigação tem o objetivo de analisar o estresse e a qualidade de vida dos bombeiros militares lotados na 6ª CIBM do município de Primavera do Leste-MT. A pesquisa caracteriza-se como exploratória e descritiva, sendo entrevistados 81% da população total de bombeiros. O instrumento utilizado para a coleta constituiu-se de questionário com questões objetivas sobre os distúrbios do sono; do Inventário de Sintomas de Estresse para Adultos de Lipp (ISSL) e do Instrumento de Escala de Avaliação da Qualidade de Vida da OMS–WHOQOL-bref. Os principais resultados apontam para a insatisfação com a jornada de trabalho, aparecimento de moléstias relacionadas ao estresse e menor satisfação com domínio físico.

Fish communities in the lower Tagus inland wetlands: from anthropogenic pressures to conservation management

Inland wetlands are important biodiversity hotspots and amongst the most impacted ecosystems worldwide. Conservation management and restauration actions in wetlands are thus urgently needed to reverse trends in species loss and habitat degradation, particularly in regions harbouring already endangered endemic species. Inland wetlands may play an important role in supporting endemic endangered fishes in the Lower Tagus basin, where anthropogenic pressures have been increasing, but there is a lack of studies on fish communities, and few areas are identified as inland wetlands. Here, we aim to identify small inland wetlands in the Lower Tagus River and their potential role in supporting fish species, constituting the first study to identify and evaluate the most important fish communities. Inland wetlands were identified through the usage of remote sensing techniques and the calculation of a Normalized Difference Water Index (NDWI) with Sentinel-2 imagery for the Lower Tagus region. From a total of 486 locations identified, 31 were recognized as wetlands as having potential to host fish communities, with 11 being selected for sampling after in loco assessment. Fish sampling was conducted between 6 May and 11 June 2021. Furthermore, for each wetland, we evaluated anthropogenic stressors and land use changes between 2007 and 2018, using national land use data (i.e., Carta de Uso e Ocupação do Solo). A total of 7727 fishes from eight non-native and five native species were captured. Overall, fish communities were dominated by non-native species (97% catches), but both European eel (Anguilla anguilla) and Lisbon arched-mouth nase (Iberochondrostoma olisiponense), which are globally classified as critically endangered (CR), were found in at least two wetlands. Our results suggest that, over the last 10 years, intensive agriculture decreased (on average ≈ 3%) in the areas surrounding these wetlands, being replaced by extensive agriculture or natural uses. Despite non-native fish prevalence, some wetlands may act as refuge habitats for CR fish species. These results are important for guiding the restoration of inland wetlands and promoting conservation management actions to help reverse fish diversity loss.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Bradykinin-induced Ca2+ signaling in human subcutaneous fibroblasts involves ATP release via hemichannels leading to P2Y12 receptors activation

Chronic musculoskeletal pain involves connective tissue remodeling triggered by inflammatory mediators, such as bradykinin. Fibroblast cells signaling involve changes in intracellular Ca2+ ([Ca2+]i). ATP has been related to connective tissue mechanotransduction, remodeling and chronic inflammatory pain, via P2 purinoceptors activation. Here, we investigated the involvement of ATP in bradykinin-induced Ca2+ signals in human subcutaneous fibroblasts. Bradykinin, via B2 receptors, caused an abrupt rise in [Ca2+]i to a peak that declined to a plateau, which concentration remained constant until washout. The plateau phase was absent in Ca2+-free medium; [Ca2+]i signal was substantially reduced after depleting intracellular Ca2+ stores with thapsigargin. Extracellular ATP inactivation with apyrase decreased the [Ca2+]i plateau. Human subcutaneous fibroblasts respond to bradykinin by releasing ATP via connexin and pannexin hemichannels, since blockade of connexins, with 2- octanol or carbenoxolone, and pannexin-1, with 10Panx, attenuated bradykinin-induced [Ca2+]i plateau, whereas inhibitors of vesicular exocytosis, such as brefeldin A and bafilomycin A1, were inactive. The kinetics of extracellular ATP catabolism favors ADP accumulation in human fibroblast cultures. Inhibition of ectonucleotidase activity and, thus, ADP formation from released ATP with POM-1 or by Mg2+ removal from media reduced bradykinin-induced [Ca2+]i plateau. Selective blockade of the ADP-sensitive P2Y12 receptor with AR-C66096 attenuated bradykinin [Ca2+]i plateau, whereas the P2Y1 and P2Y13 receptor antagonists, respectively MRS 2179 and MRS 2211, were inactive. Human fibroblasts exhibited immunoreactivity against connexin-43, pannexin-1 and P2Y12 receptor. Bradykinin induces ATP release from human subcutaneous fibroblasts via connexin and pannexin-1-containing hemichannels leading to [Ca2+]i mobilization through the cooperation of B2 and P2Y12 receptors

Histamine Induces ATP Release from Human Subcutaneous Fibroblasts, via Pannexin-1 Hemichannels, Leading to Ca2+Mobilization and Cell Proliferation

Changes in the regulation of connective tissue ATP-mediated mechano-transduction and remodeling may be an important link to the pathogenesis of chronic pain. It has been demonstrated that mast cell-derived histamine plays an important role in painful fibrotic diseases. Here we analyzed the involvement of ATP in the response of human subcutaneous fibroblasts to histamine. Acute histamine application caused a rise in intracellular Ca(2+) ([Ca(2+)]i) and ATP release from human subcutaneous fibroblasts via H1 receptor activation. Histamine-induced [Ca(2+)]i rise was partially attenuated by apyrase, an enzyme that inactivates extracellular ATP, and by blocking P2 purinoceptors with pyridoxal phosphate-6-azo(benzene-2,4-disulfonic acid) tetrasodium salt and reactive blue 2. [Ca(2+)]i accumulation caused by histamine was also reduced upon blocking pannexin-1 hemichannels with (10)Panx, probenecid, or carbenoxolone but not when connexin hemichannels were inhibited with mefloquine or 2-octanol. Brefeldin A, an inhibitor of vesicular exocytosis, also did not block histamine-induced [Ca(2+)]i mobilization. Prolonged exposure of human subcutaneous fibroblast cultures to histamine favored cell growth and type I collagen synthesis via the activation of H1 receptor. This effect was mimicked by ATP and its metabolite, ADP, whereas the selective P2Y1 receptor antagonist, MRS2179, partially attenuated histamine-induced cell growth and type I collagen production. Expression of pannexin-1 and ADP-sensitive P2Y1 receptor on human subcutaneous fibroblasts was confirmed by immunofluorescence confocal microscopy and Western blot analysis. In conclusion, histamine induces ATP release from human subcutaneous fibroblasts, via pannexin-1 hemichannels, leading to [Ca(2+)]i mobilization and cell growth through the cooperation of H1 and P2 (probably P2Y1) receptors.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Avaliação da vulnerabilidade em adolescentes do Bairro Kenedy i em Poços de Caldas / Vulnerability assessment in adolescents in the Kenedy i neighborhood of Poços de Caldas

O presente trabalho investiga possíveis indicadores de vulnerabilidade entre adolescentes, alunos do 8° e 9° anos, da Escola Municipal Doutor Pedro Afonso Junqueira, no bairro Jardim Kennedy, que apresenta baixo nível socioeconômico, em Poços de Caldas (Minas Gerais). O objetivo se estrutura na identificação dos problemas para elaboração de estratégias que contribuam para sua resolução, por meio de atividades educativas que promovam a socialização da informação e incentivo às políticas públicas capazes de oportunizar a transformação social do indivíduo e seu meio. Trata-se de um estudo exploratório, qualitativo, do tipo pesquisa de campo, em que, por meio de um questionário aplicado a 137 adolescentes com média de 13,5 anos, percebemos os seguintes problemas: 20% relatam não gostar do próprio corpo, enquanto 49% referem tristeza por comentários recebidos acerca do próprio corpo. 57% responderam que já sofreram bullying e 25% diz sofrer por um ou mais transtornos mentais já diagnosticados. Quanto a saúde sexual, 37% não sabem o que são Infecções Sexualmente Transmissíveis, mas 24% já iniciaram a vida sexual. Quanto às drogas, referem fazer ou já ter feito uso de: 27% bebida alcoólica, 14% drogas ilícitas e 13% uso de tabaco. Diante dos resultados preocupantes, reforçamos a necessidade de tomarmos medidas que disseminem conhecimento. Para esse fim, o mais adequado seria rodas de conversa educativas, abordando o bullying, autoestima, autopercepção e educação sexual. Além disso, enfatizamos também a importância da participação dos responsáveis para que compreendam melhor o papel deles no processo e ainda consigam identificar comportamentos problemáticos nos adolescentes.O presente trabalho investiga possíveis indicadores de vulnerabilidade entre adolescentes, alunos do 8° e 9° anos, da Escola Municipal Doutor Pedro Afonso Junqueira, no bairro Jardim Kennedy, que apresenta baixo nível socioeconômico, em Poços de Caldas (Minas Gerais). O objetivo se estrutura na identificação dos problemas para elaboração de estratégias que contribuam para sua resolução, por meio de atividades educativas que promovam a socialização da informação e incentivo às políticas públicas capazes de oportunizar a transformação social do indivíduo e seu meio. Trata-se de um estudo exploratório, qualitativo, do tipo pesquisa de campo, em que, por meio de um questionário aplicado a 137 adolescentes com média de 13,5 anos, percebemos os seguintes problemas: 20% relatam não gostar do próprio corpo, enquanto 49% referem tristeza por comentários recebidos acerca do próprio corpo. 57% responderam que já sofreram bullying e 25% diz sofrer por um ou mais transtornos mentais já diagnosticados. Quanto a saúde sexual, 37% não sabem o que são Infecções Sexualmente Transmissíveis, mas 24% já iniciaram a vida sexual. Quanto às drogas, referem fazer ou já ter feito uso de: 27% bebida alcoólica, 14% drogas ilícitas e 13% uso de tabaco. Diante dos resultados preocupantes, reforçamos a necessidade de tomarmos medidas que disseminem conhecimento. Para esse fim, o mais adequado seria rodas de conversa educativas, abordando o bullying, autoestima, autopercepção e educação sexual. Além disso, enfatizamos também a importância da participação dos responsáveis para que compreendam melhor o papel deles no processo e ainda consigam identificar comportamentos problemáticos nos adolescentes

CARACTERÍSTICAS FITOTÉCNICAS E NUTRICIONAIS DE BANANEIRAS SUBMETIDAS A FONTES DE FERTILIZANTES PARA O MANEJO ORGÂNICO

Objetivou-se com este trabalho avaliar o estado nutricional e características agronômicas de bananeiras tipo prata sob adubação orgânica, no quarto ciclo de produção, em solos de elevada fertilidade construída. Os tratamentos, duas cultivares (Prata-Anã e BRS Platina) e cinco doses de adubação compostas por esterco bovino e farinha de rocha Naturalplus® foram dispostos em esquema fatorial 2 x 5, em delineamento em blocos casualizados, com três repetições. Foram avaliados: os teores de nutrientes nas folhas; altura de plantas; perímetro do pseudocaule; número de folhas; massa do cacho (kg) e pencas (kg); massa média das pencas (kg) e fruto (g) e massa das cinco primeiras pencas (kg); número de pencas; número de frutos por cacho e penca; massa (g), diâmetro (mm) e comprimento interno e externo do fruto (cm). Doses crescentes de K2O incrementam os teores de N, P e Cu para cultivares Prata-Anã e BRS Platina, que diferem entre si quanto aos teores de Fe, Zn e S. A ‘Prata-Anã’ se destaca com número de folhas e frutos por penca, enquanto a ‘BRS Platina’ maior massa média das pencas e do fruto e comprimento do fruto. As doses aplicadas não influenciam a produção das cultivares BRS Platina e Prata-Anã no quarto ciclo em solos de elevada fertilidade construída.Palavras chave: farinha de rocha; esterco bovino; sustentabilidade. PHYTOTECHNICAL AND NUTRITIONAL CHARACTERISTICS OF BANANA SUBMITTED TO FERTILIZER SOURCES FOR ORGANIC MANAGEMENT ABSTRACT:The objective of this work was to evaluate the nutritional status and agronomic characteristics of silver - type banana under organic fertilization, in the fourth cycle of production, in soils with high fertility. The treatments, two cultivars (Prata-Anã and BRS Platina) and five fertilizer doses composed of bovine manure and Naturalplus® rock flour were arranged in a 2 x 5 factorial scheme, in a randomized block design, with three replications. Leaf nutrient contents were evaluated; plant height; perimeter of the pseudostem; number of leaves; mass of the bunch (kg) and hands (kg); average mass of the hands (kg) and fruit (g) and mass of the first five hands (kg); number of leaves; number of fruits per bunch and hands; mass (g), diameter (mm) and internal and external length of the fruit (cm). Increasing doses of K2O increases N, P and Cu contents for Prata-Anã and BRS Platina cultivars, which differ in Fe content, Zn and S. The ‘Prata-Anã’ stands out with the highest number of leaves and fruits per hands, whereas the 'BRS Platina' presents higher average mass of the fruit and the length of the fruit. The applied doses do not influence the production of the cultivars BRS Platina and Prata-Anã in the fourth cycle in soils with high constructed fertility.Keywords: rock dust; bovine manure; sustainability

Intervenção fisioterapêutica nos comprometimentos da hanseníase/Physiotherapeutic intervention in leprosy commitments

Introdução: A hanseníase é uma doença infectocontagiosa crônica, causada pelo Mycobacterium leprae, que é altamente infeccioso e pouco patogênico. Tais particularidades não acontecem apenas em função de suas características intrínsecas, mas, também dependem da relação do agente com o hospedeiro e do grau de endemicidade do meio. Segundo a classificação de Madri esta patologia pode se manifestar de quatro formas: indeterminada, tuberculóide, virchowiana e dimorfa. Se as alterações nervosas não forem identificadas, monitoradas e controladas precoce e apropriadamente, poderá existir deformidades e incapacidade funcional. Assim, há necessidade de maior atenção sobre a doença. Objetivo: Identificar os benefícios do tratamento fisioterapêutico na recuperação do comprometimento motor e sensitivo de um paciente portador de Hanseníase do tipo virchowiana residente em Campina Grande-PB. Metodologia: O estudo desenvolveu-se através de um relato de caso, realizado entre setembro e novembro de 2017 uma vez a cada semana, totalizando oito atendimentos, visando melhoria nos comprometimentos causados pela doença e o tratamento realizado foi através de alongamento e fortalecimento muscular, mobilização articular, treino de equilíbrio e força e trabalho de motricidade fina. Resultados: Desde a juventude o paciente começou a perceber manchas no corpo, bolhas e nódulos nas orelhas, nariz, além de perda de cílios e sobrancelhas, relatando também ter começado a sentir câimbras no 5º quirodáctilo da mão esquerda. Atualmente, não apresenta sinais de infecção, mas possui úlceras abertas nos pés. Após os atendimentos percebeu-se uma melhora no quadro clínico, resultando na recuperação da sensibilidade tátil, térmica e dolorosa, como também aumento da flexibilidade, através dos estímulos do tratamento fisioterapêutico. Conclusão: Por meio do tratamento utilizado percebeu-se recuperação da sensibilidade, restauração de funções e capacidades motoras, de fato a fisioterapia contribuiu para ma  qualidade de vida e competência nas atividades diárias

Microbiological evaluation of homemade mayonnaise and self-serve acai sold in Araguaína, Tocantins

Abstract Foodborne diseases are common illnesses caused by the consumption of food contaminated with microorganisms, such as viruses, fungi, bacteria, and protozoa. Every year, 600 million people become ill and 420,000 people die as a result of consuming contaminated food. Therefore, food safety is an important issue. In this study, samples of homemade spiced mayonnaise and self-serve acai sold in the city of Araguaína, Tocantins, Brazil were analyzed for microbiological contaminants. Acai was collected from 10 stores, one sample from each store, and tested for mold, yeast, and coliforms, as well as coliform identification and total and thermotolerant coliform counts. Mayonnaise was collected from 20 snack bars, one sample from each. These samples were inoculated on MacConkey and Salmonella Shigella agar plates, and the plates were analyzed for growth. Salmonella spp. were detected in some Mayonnaise samples, and coliforms were detected in all acai samples; 60% of samples had thermotolerant coliforms, and only 40% were within the limits established by ANVISA. The collected samples of mayonnaise and acai were contaminated with molds and yeasts above the established limit of 103 CFU/g. Thus, the analyzed mayonnaise and acai samples were contaminated and unfit for consumption, demonstrating the importance of hygienic-sanitary measures in food handling

Protocol for evaluating the in vitro effect of violet light-emitting diodes (LEDs) 410 nm ± 10 nm on yeast cultures

BACKGROUND: Candida spp and Malassezia spp cause superficial infections that may be resistant to conventional treatments. Violet light-emitting diodes (LEDs) therapy is a therapeutic alternative. PURPOSE: To describe the protocol for evaluating the antifungal effect of violet LEDs 410 nm ± 10 nm on Candida spp and Malassezia spp in vitro. PROTOCOL: LEDs 410 nm ± 10 nm are applied to a fungal suspension at fluences of 61.13 J/cm2, 91.70 J/cm2, and 183.39 J/cm2. The isolates are cultured for 48 to 72 hours. Colony forming units (CFUs) are quantified by visual counting and percent culture plate occupancy by digital analysis. Morphology is assessed by light microscopy and Gram staining, and yeast metabolism/function by transmission electron microscopy, assessment of reactive oxygen species, and DNA fragmentation. DATA ANALYSIS: the percentage of LEDs inhibition is calculated considering the growth of the negative control condition and the percentage of plate occupancy by yeasts by dividing the number of pixels classified as colonies by the total number of pixels on the plate. The morphological and functional aspects are described for the intervention and negative control. The ANOVA test is used to compare the mean percentages of growth inhibition and plate occupancy between the three fluences of LEDs 410 nm ± 10 nm and the negative control. ESTIMATED RESULTS: We intend to determine the antifungal effect of the different fluences of LEDs 410 nm ± 10 nm on Candida spp and Malassezia spp. The evaluation of other fungal species by this protocol should be investigated