Assessment of seed quality and sex determination in hop seedlings using molecular markers

Brazil is the world's third largest beer consumer and currently imports all of its hops for the brewing industry. Such a fact justifies the selection of hop genotypes adapted for cultivation locally, which requires high quality seeds and efficient sex determination of the seedlings. The objectives of this study were to develop a methodology to assess hop seed quality and to efficiently determine hop seedling sex through the use of male-specific molecular markers. Freshly harvested hop seeds were germinated with and without pre-chilling (3-5 ° C) for 3, 6 and 12 weeks and then germinated at 20 or 25 ° C in the presence or absence of light, evaluating germination percentage and germination speed index. F1 progenies were obtained from after seed germination in a greenhouse and seedlings sex was determined using male-specific molecular markers. The best conditions for physiological quality assessment of hop seeds used in the present study were pre-chilling for 12 weeks, followed by germination at 25 ° C, and normal seedling counts at 7 and 15 days. The progeny submitted to molecular marker sexing was composed of 61.3% female plants. The established methodologies presented here can be considered efficient and may contribute to expedite hops breeding programs

Cones and essential-oil production in hop with different nitrogen levels in the south of Brazil

Hop crop requires a substantial amount of nitrogen (N) to meet growth and quality of production. Despite the increase of hop cultivated areas in Brazil in the last years, there is scarce information about hop nutrient requirements for soils of different regions of the country. The main objective of this work was to evaluate the effect of nitrogen levels in hop-cone production and its essential-oil yield and composition in the south of Brazil during the first year of cultivation. The field experiment was carried out in completely randomized blocks by comparing five nitrogen doses (50, 100, 150, 200 and 250 kg ha-1) to non-fertilized plants, with four replications, each one with six plants. Urea was used as the nitrogen source being applied 20 kg ha-1 for the fertilized treatments at the moment of planting which was complemented with a second dose 30 days after planting. Essential oil samples were obtained by hydrodistillation for two hours and their components were identified and quantified by GC/MS. The highest cone number per plant was obtained when 100 or 150 kg N ha-1 were applied (2,677,066 and 2,518,082 cones ha-1, respectively). Plants fertilized with 100 kg N ha-1 had the greatest biomass (dry matter, DM) production (219.1 kg DM ha-1), but with no statistical difference compared to plants fertilized with 150 or 200 kg N ha-1 (210.1 and 199.6 kg DM ha-1, respectively). The cone essential-oil yield varied from 0.46 to 0.69% but no statistical differences were found comparing all treatments. The major constituents of the essential-oil samples were myrcene (35.1-56.7%), (E)-β-farnesene (14.9-22.9%), β-selinene (6.6-11%), δ-selinene (7.2-12%), (E)-caryophyllene (3.5-2.6%) and linalool (0.28-0.47%). The results show that 100 kg N ha-1 can be recommended for the first year of hop cultivation in the south of Brazil to obtain a greater cone number and biomass production with no effect on the essential-oil yield and composition

Proporção macho: fêmea de embriões bovinos cultivados na presença ou ausência de glicose após FIV com espermatozóides selecionados por Swim-up ou Gradiente de Percoll

No sistema de PIV em bovinos, tem sido obtida uma elevada porcentagem de embriões machos. Este experimento foi realizado para determinar se a presença de glicose no meio de cultivo afeta a proporção macho:fêmea (M:F) dos embriões bovinos PIV a partir da FIV com espermatozóides preparados pelos métodos do swim-up (S) ou do gradiente de Percoll (P). Após a MIV, os COCs foram divididos em dois grupos e inseminados com espermatozóides preparados por um dos métodos. Os zigotos foram cultivados em meio com ou sem 5,56mM de glicose, totalizando 4 tratamentos: S-Gli, S+Gli, P-Gli e P+Gli e 48h após a inseminação, os embriões de cada tratamento foram submetidos à sexagem por PCR (n=845). O efeito da glicose no meio de cultivo sobre a proporção M:F dos embriões PIV a partir dos dois métodos foi semelhante (teste do c²), resultando em uma porcentagem de machos menor do que 50% no estágio de 2-C (S: 30,8%; P: 23,8%: P<0,01) e maior do que 50% no estágio de 8-C (S: 79,4%; P: 68,8%: P<0,01). Estas porcentagens foram diferentes (P<0,05) das observadas quando os embriões foram cultivados sem glicose, tanto no estágio de 2-C (S: 48,5%; P: 41,5%) como no de 8-C (S: 62,5%; P: 50,8%). A presença de glicose não afetou a proporção M:F no total de embriões produzidos (S: 56,7%; P: 49,0%), que foi semelhante à observada na ausência de glicose (S: 55,7%; P: 46,2%). Portanto, a glicose exacerbou a diferença na velocidade de desenvolvimento entre os embriões machos e fêmeas.In the bovine IVP system, it has been obtained a high percentage of male embryos. This experiment was carried ou to determine if the glucose presence in the culture medium affects the sex ratio of bovine embryos IVP from the IVF with spermatozoa prepared for the swim-up (S) or Percoll gradient (P) methods. After the IVM, the COCs had been divided in two groups and inseminated with spermatozoa prepared for one of the methods. The zygotes had been cultivated in medium with or without 5.56mM of glucose, totalizing 4 treatments: S-Glu, S+Glu, P-Glu and P+Glu, and 48h post-insemination, the embryos of each treatment had been sexed for the PCR method (n=845). The effect of glucose in the culture medium on sex ratio of embryos IVP from the two methods was similar (c² test), resulting in a percentage of males lower than 50% in the 2-C stage (S: 30.8%; P: 23.8%: P<0.01) and higher than 50% in the 8-C stage (S: 79.4%; P: 68.8%: P<0.01). These percentages were different (P<0.05) of the observed when the embryos were cultivated without glucose, as much in the 2-C stage (S: 48.5%; P: 41.5%) as in the 8-C stage (S: 62.5%; P: 50.8%). The glucose presence did not affect the sex ratio in the total of produced embryos (S: 56.7%; P: 49.0%), that was similar to the observed in the glucose absence (S: 55.7%; P: 46.2%). Therefore, the glucose exacerbated the difference in the development speed between the female and male embryos

Efeitos do tratamento com inibidor da rock durante o estágio de pós-aquecimento de oócitos bovinos vitrificados sobre desenvolvimento embrionário / Effects of treatment with rock inhibitor during the post-warming stage of vitrified bovine oocytes on embryo development

Diversas biotécnicas vem sendo utilizadas para a preservação de material genético e manutenção a medio e longo prazo de gametas e embrioes de elevado valor genético, contribuindo para o avanço das estratégias para produção pecuária. O processo de vitrificação de oocitos bovinos é uma delas, entretanto com aplicação ainda restrita, pois durante o processo  podem ocorrer varias crio injurias. Afim de reduzir os danos causados pelo congelamento de oócitos e melhorar as taxas de  clivagem e desenvolvimento embrionário obtidas no cultivo in vitro, utilizou-se a exposição a Y-27632, um inibidor seletivo de quinases de proteínas específicas associadas com Rho durante o estágio de pós-aquecimento.  Nosso estudo demonstrou que a utilização de Y-27632 em oocitos bovinos maturados e submetidos a vitrificação promoveu  taxas mais elevadas de sobrevivência bem como maior número de embriões atingindo o etágio de blastocisto.

ASSOCIAÇÃO ENTRE A PRESENÇA DE UM FATOR DE 38 kDa NO PLASMA SEMINAL E A INIBIÇÃO DA MOTILIDADE ESPERMÁTICA NO JUNDIÁ Rhamdia quelen

Fatores proteicos tem sido indentificados no plasma seminal de peixes e mamíferos e, em algumas situações, associados com indicadores de qualidade espermática. Entretanto, para o jundiá (Rhamdia quelen), tais fatores como aqueles com potenciais associações ainda não foram descritos. Os objetivos deste estudo foram de identificar alguns fatores proteicos presentes no plasma seminal do jundiá e avaliar suas associações com a motilidade espermática. Através de eletroforese do tipo SDS-PAGE foram identificadas 14 bandas proteicas com peso molecular entre 217.1 e 7.1 kDa.  A motilidade espermática foi avaliada em 21 machos. Quatro bandas proteicas (81.5; 60.4; 33.6 e 25.5 kDa) foram detectadas em todas as amostras de plasma seminal analisadas. Uma banda proteica com peso molecular de 38.3 kDa foi associada com a baixa motilidade espermática no jundiá (P< 0,01), uma vez que foi detectada em 91.4% das amostras com motilidade menor que 80%. Estes resultados sugerem que esta banda proteica seminal associada com a baixa motilidade espermática poderá ser considerada como um potencial marcador bioquímico de qualidade seminal. Palavras-chaveS: Motilidade espermática, plasma seminal, proteínas, Rhamdia quelen, SDS-PAGE

RECUPERAÇÃO DE OÓCITOS EQÜINOS COM Cumulus oophorus COMPACTO POR CURETAGEM DA PAREDE FOLICULAR

Este trabalho teve como objetivo determinar a eficiência da técnica de curetagem da parede folicular (scraping) para a obtenção de complexos Cumulus oophorus compactos, bem como descrever as etapas do processo. Submeteram-se ovários eqüinos coletados em abatedouro à dissecação da túnica albugínea, para identificação e individualização dos folículos com diâmetro entre 10 e 30 mm. Esses foram abertos individualmente em placa de Petri e, posteriormente, realizou-se raspagem da camada granulosa com auxílio de cureta e exame do líquido folicular em lupa estéreo-microscópica. Classificaram-se os oócitos quanto à integridade do ooplasma e as características das células do Cumulus oophorus. De um total de 527 ovários dissecados, obtiveram-se 3,5 folículos/ovário e uma média de 2,5 oócitos/ovário, compreendendo uma taxa de recuperação de 71,0% (oócitos/folículos), sendo 70,2% classificados como Cumulus oophorus compactos e ooplasma homogêneo. A média de oócitos Cumulus oophorus compactos por ovário foi de 1,7. A utilização da curetagem da camada granulosa de folículos entre 10 e 30 mm de diâmetro comprovou ser satisfatória para a obtenção de um elevado percentual de oócitos eqüinos com Cumulus oophorus compacto,o que é adequados para estudos de maturação in vitro. PALAVRAS-CHAVE: Curetagem da parede folicular, maturação in vitro, oócitos eqüinos, scraping

EFEITO DE CRIOPROTETORES IMPERMEÁVEIS SOBRE A VIABILIDADE IN VITRO DE ESPERMATOZOIDES CONGELADOS DE CAMUNDONGOS (Mus musculus) DAS LINHAGENS SWISS-ALBINA e BALB/c

O trabalho objetivou avaliar os efeitos dos dissacarídeos sacarose, trealose e lactose, como crioprotetores impermeáveis à membrana plasmática em diluentes para criopreservação de sêmen de camundongos. Para avaliação do sêmen utilizaram-se os seguintes parâmetros: motilidade progressiva (MOT) das células espermáticas, e a taxa de clivagem embrionária (TXCL) obtida por meio de fertilização in vitro, nas linhagens SWISS-ALBINA e BALB/c. Os tratamentos avaliados foram: S1=sacarose; S2=trealose; S3=lactose, para SWISS-ALBINA e B1=lactose; B2=trealose para BALB/c. Avaliou-se a MOT durante as seguintes etapas: descongelação (DES), centrifugação e ressuspensão no meio P-1 (CEN) e após dez minutos de incubação (10M). A MOT no S2 para a linhagem SWISS-ALBINA nas três etapas (47% no DES; 66,5% na CEN e 67,2% no 10M) foi superior (