Análise espacial da hidrogeoquímica do sistema aquífero Moura-Ficalho

Foram aplicadas as análises univariada, bivariada, multivariada de dados e geoestatística a uma matriz de 75 parâmetros físico-químicos analisados em 72 pontos de água no Sistema Aquífero Moura-Ficalho. Utilizou-se estatística descritiva, matrizes de correlação, análise em componentes principais, classificação ascendente hierárquica, variografia e krigagem. Foram identificadas algumas características e particularidades hidrogeoquímicas que corroboram o modelo de funcionamento do aquífero

Development of a novel fusion system for soluble protein overexpression and purification in Escherichia coli

Recombinant protein production is a useful technology for therapeutic and diagnostic applications. The bacterium Escherichia coli is widely used for the bioproduction of proteins, but still presents some drawbacks. Recombinant proteins with biomedical interest have proved difficult to express properly in this host system, resulting in insoluble protein aggregates. Fusion protein technology has been applied to overcome these drawbacks and to optimize protein expression in E. coli. This research aims at the evaluation of a novel fusion system (Fh8 and H tags) effects on protein production. Target proteins used in this work present biomedical interest and results obtained here showed that these novel fusion tags increased protein production yields. This novel fusion system is a promising tool for the production of recombinant proteins with biomedical interest

Evaluation of a novel Escherichia coli fusion system for the production of recombinant immunogenic proteins

Recombinant protein production has been widely applied for therapeutic and diagnostic applications, namely for polyclonal antibody production. Antibodies are usually raised against a specific protein by immunisation of animals with the purified protein. The Escherichia coli host cell is widely used for the bioproduction of proteins with biomedical interest but some of them are still difficult to express properly in this host system, resulting in insoluble protein aggregates. Gene fusion technology has been employed to optimise recombinant protein production in E. coli. Fusion partners have also been used to increase protein immunogenicity. In this work, the immunopotentiating properties of a novel fusion partner (H partner) were studied. The H partner was fused to three target proteins with diagnostic interest: CP12, a 12 kDa surface protein from Cryptosporidium parvum oocysts; CWP, a cyst wall protein from Giardia lamblia; and ENT, a surface protein from Entamoeba histolytica trophozoites. The results obtained here show the H partner as a promising tool for immunodiagnostic and immunoprophylactic purposes

Utilização de ferramentas informáticas no âmbito do estudo dos recursos hídricos subterrâneos do Alentejo, ERHSA

No âmbito do projecto Estudo dos Recursos Hídricos Subterrâneos do Alentejo (ERHSA) desenvolvido durante os últimos 4 anos sob a coordenação da Comissão de Coordenação da Região Alentejo (CCRA), foram estabelecidas redes de monitorização e aplicadas ferramentas matemáticas que actualmente apoiam a gestão dos recursos hídricos. Estas redes integradas na rede regional de monitorização da qualidade e quantidade da água subterrânea, gerida pela Direcção Regional do Ambiente e Ordenamento do Território - Alentejo (DRAOT), encontram-se equipadas com sistemas electrónicos de aquisição de dados e, nalguns casos, com teletransmissão (via rede móvel) para monitorização dos potenciais hidráulicos. No processamento e análise dos dados foram utilizados modelos analíticos, geoestatísticos, de simulação de fluxo e de rastreio de partículas. Os outputs gerados foram introduzidos num sistema de informação geográfica que permitiu a análise espacial de diversos parâmetros, o cruzamento entre variáveis e a produção de mapas temáticos

Síndrome de Down, Impacto, Satisfação e Preocupação Materna (Des) Encanto Materno

Neste trabalho será utilizada a terminologia Síndrome de Down, sendo esta a designação mais usada na literatura, pois é um termo com maior abrangência, sendo que, existem vários tipos de Síndrome de Down e, a Trissomia 21 é apenas um deles. A investigação que se apresenta pretende contribuir, explorar e compreender através das mães, quais as suas maiores preocupações e qual o impacto familiar de um/a filho/a portador/a de Síndrome de Down. Mais especificamente pretende-se analisar as crenças vivenciadas pelas mães, face ao nascimento de uma criança portadora de Síndrome de Down, o processo de adaptação materna e qual a forma de envolvimento no processo interativo na díade mãe-criança. Elaborando-se uma abordagem pelas crenças maternas, uma definição da vinculação à luz das suas teorias e do seu enquadramento teórico e empírico e uma abordagem sobre a Síndrome de Down. A amostra é composta por 58 mulheres com filhos/as portadores/as de Síndrome de Down, de vários concelhos de Portugal Continental. Para a recolha de dados utilizaram-se quatro instrumentos, um Questionário Sociodemográfico, a Escala de Satisfação Parental (Halverson & Duke, 1991: Martins Maroco & Leal, 2007), a Escala de Impacto Familiar de um Filho (Donenberg & Baker, 1993; Martins & Leal, 2007) e a Escala de Preocupações Parentais (Algarvio, Leal & Maroco, 2009) a mães com filhos/as portadores/as de Síndrome de Down. Os resultados revelaram que os valores médios encontrados para as Escalas de Satisfação Parental e Impacto Familiar de um Filho são ligeiramente superiores às encontradas na literatura. Relativamente à Escala de Preocupações Parentais, os valores médios são superiores aos existentes na literatura para outros grupos de mães. Existem relações estatisticamente significativas entre algumas escalas, pelo que se conclui que à medida que aumenta o impacto familiar de um filho aumenta a satisfação parental e diminuem as preocupações parentais. É possível também observar existência de diferenças estatisticamente significativas entre as diferentes escalas e algumas variáveis sóciodemográficas. / In this work it will be utilized the terminology Down Syndrome, due to the designation being the most commonly used in the literature, also it is a term with greater coverage, despite of other various types of Down Syndrome and Trisomy 21existing, this is just one type. The investigation presented here and what is the family impact of a son carrier of Down Syndrome. More specifically we intend to analyze the beliefs experienced by mothers, with the birth of a child with Down syndrome aims to contribute to explore and understand through the mothers, what their biggest concerns are, the process of maternal adaptation and witch form of involvement in the interactive process in the mother-child dyad. Elaborating an approach for maternal beliefs, a definition of linking based on their theories, within theoretical, empirical framework and an approach to Down syndrome. The sample consists of 58 women with children carriers of Down syndrome, done in several municipalities in mainland Portugal Continental. For the collection of data four instruments were used, one Sociodemographic Questionnaire, the Parental Satisfaction Scale (Halverson & Duke, 1991: Martins Maroco & Leal, 2007), the Scale for Family Impact of a Son (Donenberg & Baker, 1993; Martins & Leal, 2007) and the Parental Concerns Scale (Algarve, Maroco & Leal, 2009) to mothers with children carriers of Down Syndrome. The results reveled that the average values found for the Scales of Parental Satisfaction and Family Impact of a Son are slightly higher than those found in the literature. Relative to Parental Concerns Scale, the average values are higher than those existing in the literature for other groups of mothers. There is a statistically significant relation between some scales, can be concluded, that there is increases in the family impact of a child, increases parental satisfaction and reduces parental concerns. It is also possible to observe the existence of differences statistically significant between different scales and some variables sociodemographic

À propos des déesses Maliades et de quelques épiclèses gréco-asianiques

Después de la apertura de las Escuelas de Campo en Brasil, fue en Maranhão donde se basó la Investigación de Acción. Para este fin, analizamos "textos mixtos" (Rose, 2005). Tratamos de entender el fracaso escolar, utilizando "técnicas para hacer comparaciones" (Strauss y Corbin, 1990, pp. 77-81, pp. 84-91), entre discursos, textos y dibujos, en la clase de 5º grado de la Escuela Agrícola Familiar ¿Cómo enfrentar la imposición de un proyecto de vida? El análisis metodológico siguió un curso de capacitación en el campo del "buen carácter". Una "codificación abierta" introdujo futuras motivaciones y recuerdos. El marco teórico abordó dos autoimágenes: "ideal / debería ser yo mismo" (Higgins et al., 1994, p. 276). Para despertar nuestra "sensibilidad teórica" (Strauss y Corbin, 1990, págs. 41-47), se realizó el "análisis de palabras, frases, párrafos"; y se utilizó la técnica de "lanzadera" entre fenómenos. Se colocó una "bandera roja" para no hacer ciertas preguntas a los estudiantes "no motivados". En la dimensión "camino pasado - deseo futuro", se construyeron tres códigos: yo ideal (futuro), cambio (pasado) y soledad presente. En el primero, las categorías eran ambiciones y profesiones, con subcategorías según el sexo. Las ambiciones profesionales nunca estuvieron dentro del campo agrícola. En el segundo código, la atención se centró en cambiar la apariencia física, la personalidad, las amistades, las citas y el rechazo, la transición, la admisión a la EPT, los días conmemorativos ... En el tercer código, hubo un traslado forzado de los padres, su aislamiento y los roles de género. No se detectó indisciplina y/o revuelta contra las normas. El guión de los niños en el trabajo de desbrozado es muy diferente de los patrones de acción de las niñas. La asignación de recursos, la capacitación de maestros, en particular el incentivo para el éxito, se requiere cuando la proporción alumno-maestro es baja y la proporción escuela-familia agrícola (REFA) es efectiva. Es difícil separar el resultado REFA del efecto placebo, que los estudiantes se benefician cada vez que los adultos se involucran en un dispositivo en el que "creen".After the installation of Field Schools in Brazil, it was in Maranhão that the Action Research was grounded. For this end, we analyzed “mixed texts” (Rose, 2005). We tried to understand school failure, using “techniques for making comparisons” (Strauss & Corbin, 1990, pp. 77-81, pp. 84-91), between speeches, texts and drawings, in the class of 5th grade from the Agricultural Family School. How to face the imposition of a Life Project? The methodological analysis followed a training course in the field of “good character”. An “open coding” introduced future motivations and memories. The theoretical framework addressed two self-images: “ideal/ought self” (Higgins et al., 1994, p. 276). In order to awaken our “theoretical sensitivity” (Strauss & Corbin, 1990, pp. 41-47), the “analysis of words, phrases, paragraphs” was carried out; and the “shuttle” technique was used between phenomena. A “red flag” was placed by not asking certain questions to “not motivated” students. In the dimension “past path-future desire”, three codes were constructed: ideal self (future), change (past) and present loneliness. In the first one, the categories were ambitions and professions, with subcategories according to sex. The ambitious professions were never from the agricultural field. In the second code, the focus was on changing physical appearance, personality, friendships, dating and rejection, transition, admission to EFA, memorial days... In the third code, there was the forced removal of parents, their isolation and gender roles. No indiscipline and/or revolt against norms were detected. The script of boys in the brushcutting work is distinct different from girls’ action patterns. Allocation of resources, teacher training, particularly the incentive to success, is required when the student-teacher ratio is low and the agricultural school-family ratio (REFA) is effective. It is difficult to separate the REFA result from the placebo effect, which students benefit whenever adults get involved in a device they “believe” in.Constatada a instalação, no Brasil, de Escolas de Campo, foi no Maranhão que a Pesquisa-Ação foi “fundamentada” (“grounded”). Para o efeito, analisámos “textos mistos” (Rose, 2005). Procurámos compreender o insucesso escolar, utilizando-se “técnicas para se estabelecerem comparações” (Strauss & Corbin, 1990, pp. 77-81, pp. 84-91), entre falas, textos e desenhos, na turma de 5ª série, da Escola Família Agrícola. Como encarar a imposição dum Projeto de Vida? A análise metodológica acompanhou uma ação de formação no domínio do “bom carácter”. Na “codificação aberta” se introduziram as motivações futuras e as recordações. O enquadramento teórico ainda abordou duas autoimagens: “eu obrigatório” e “eu ideal” (Higgins et al., 1994, p. 276). Para o despertar da nossa “sensibilidade teórica” (Strauss & Corbin, 1990, pp. 41-47), efetuou-se a “análise de palavras, frases, parágrafos”; e usou-se a técnica de “vaivém” entre fenómenos. Uma “bandeira vermelha” foi colocada ao não se formularem certas perguntas a alunos “desmotivados”. Na dimensão “trajeto passado-desejo futuro”, construíram-se três códigos: Eu ideal (futuro), mudança (passado) e solidão atual. No primeiro, as categorias foram ambições e profissões, com subcategorias por sexo. As profissões ambicionadas nunca foram da área agrícola. No segundo código, o relevo foi para a mudança no aspeto físico, personalidade, amizades, namoros e rejeição, transição, admissão na EFA, datas comemorativas… No terceiro código, evidenciou-se o afastamento forçado de pais, o isolamento delas e papéis de género. Não se detetou indisciplina ou revolta contra normas. O roteiro de rapazes no trabalho de roçar mato é distinto dos padrões de ação delas. Impõe-se a afetação de recursos, formação docente, nomeadamente o incentivo ao sucesso, quando o ratio alunosdocente seja baixo e a relação escola-família agrícola (REFA) seja efetiva. Difícil é separar o resultado REFA do efeito placebo, de que beneficiam alunos sempre que adultos se envolvem em um dispositivo em que “acreditam”.peerReviewe

Development of a novel fusion system for recombinant protein production and purification in Escherichia coli

Tese de doutoramento Programa Doutoral em Engenharia Química e BiológicaProteins are now widely produced in diverse microbial cell factories. The Escherichia coli is still the dominant host for recombinant protein production but, as a bacterial cell, it presents several issues limiting the efficiency of this production. The aggregation of foreign proteins into insoluble inclusion bodies is perhaps the main limiting problem found when expressing eukaryotic proteins in E. coli. Gene fusion technology has been widely used for the improvement of soluble protein expression and/or purification in E. coli. Fusion partners/tags are highly soluble and stable proteins that promote target protein solubility, possibly because of the protection of nascent polypeptides from the cytoplasm milieu and the given conditions for their proper folding. The Fh8 is a calcium-binding protein from excreted-secreted antigens of Fasciola hepatica that showed to be highly soluble and stable when produced as a recombinant protein in E. coli. This recombinant protein is also a useful tool for the diagnosis of fasciolosis, and its N-terminal sequence of eleven amino acid residues (denominated as H) was suggested to play an important key role in the production and immunological properties of the entire protein. These Fh8 interesting features suggested this protein usage as a fusion partner for enhanced recombinant protein production in E. coli. This is the main focus of this thesis work. The Fh8 and H peptides were analyzed as expression and solubility fusion partners, and at the same time, compared to commonly used fusion tags (Chapter 2). A broad range evaluation was conducted using six target proteins, eight fusion tags, two different induction conditions, and four E. coli expression strains. The results showed that Fh8 acts as an effective solubility enhancer tag, being ranked among the best solubility tags. It is also an excellent candidate to be used with other fusion tags in parallel high throughput screenings, presenting advantages over large tags for the evaluation of protein solubility. Results from this work also showed that the H tag did not function as a solubility enhancer tag, but it improves protein expression levels in E. coli. The H tag was then suggested for the recombinant production and adjuvant-free administration of immunogens (Chapter 3). By using a 12-kDa antigen from Cryptosporidium parvum as example, the H tag demonstrated to be an attractive tool for the production of polyclonal antibodies, overcoming several limitations of the process, namely, the availability of antigen, its immunogenicity, adverse effects of adjuvants, and unspecific antibody production. The Fh8 fusion partner was further investigated as purification handle (Chapter 4). Taking into account its calcium-binding properties, the Fh8 offered a rapid, inexpensive and efficient singlestep purification of biologically active target proteins via hydrophobic interaction chromatography (HIC), and under mild conditions. The efficiency of this purification strategy was comparable to that obtained using the His6 tag, and both purification technologies were also combined into a dual affinity strategy to improve further the purity level of target proteins. Proteins purified by the Fh8-HIC strategy have the extra feature of being free of E. coli endotoxins. Taking into account the versatility of the Fh8 fusion system, a novel strategy for the soluble production of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) and interleukin-10 was developed (Chapter 5). Fh8 fusion proteins were directly soluble produced in E. coli, presenting dimeric and oligomeric ordered conformations. The Fh8BMP-2 was, however, not functional, rising intriguing questions about the final structure of the fusion protein. Indeed, the Fh8 might direct the BMP-2 to a soluble folding pathway, but BMP-2 presents a different conformation from that required for its biological function. Two novel variants of Fh8 were then developed as fusion partners, conducting the mutation of its single cysteine residue to alanine or tyrosine (Chapter 6). Fh8Ala and Fh8Tyr fusion proteins achieved similar solubility as Fh8-fused ones, presenting less calcium-dependent conformational changes and less oligomer forms than the Fh8-fused ones. These two mutations demonstrated the importance of the cysteine residue in Fh8 oligomerization, though other residues may also contribute to this state. This thesis work reported for the first time the efficient use of the calcium-binding protein Fh8 as a promising gene fusion technology. The Fh8 fusion system is a robust tool for the recombinant protein production in E. coli, combining four main skills into such a small partner: protein expression, solubility, purification and immunogenicity.As proteínas são atualmente produzidas em diversas fábricas celulares microbianas, sendo a Escherichia coli o hospedeiro dominante na produção de proteínas recombinantes. Contudo, este hospedeiro apresenta alguns problemas que limitam a eficiência desta produção, sendo a agregação em corpos de inclusão insolúveis uma das suas principais limitações na expressão de proteínas eucariotas em E. coli. A tecnologia de fusão genética tem sido muito usada para melhorar a expressão e purificação de proteínas solúveis em E. coli. Os tags /parceiros de fusão são proteínas altamente solúveis e estáveis que promovem a solubilidade de proteínas alvo, possivelmente conferindo-lhes proteção no citoplasma, reunindo as condições necessários para o seu folding adequado. O Fh8 é uma proteína de ligação ao cálcio, excretada-secretada pelos antigénios do Fascíola hepatica, que mostrou ser altamente solúvel e estável quando produzida em E. coli. O Fh8 é também uma ferramenta útil no diagnóstico da fasciolose, e a sua sequência N-terminal de onze aminoácidos (denominada de H) poderá ser importante na produção e nas propriedades imunológicas da proteína total. Todas estas características do Fh8 realçam o seu possível uso como parceiro de fusão para uma melhor produção de proteínas recombinantes em E. coli, sendo esse o objetivo principal do presente trabalho. Os péptidos Fh8 e H foram analisados como parceiros de expressão e solubilidade, tendo sido também comparados com outros parceiros de fusão regularmente usados (Capítulo 2). Realizouse uma profunda avaliação com recurso a seis proteínas alvo, oito tags de fusão, duas condições de indução diferentes e quatro estirpes de expressão de E. coli. Os resultados mostraram que o Fh8 é de facto um parceiro de fusão que promove a solubilidade, enquadrando-se entre os melhores tags de solubilidade. O Fh8 é também um bom candidato para ser usado com outros tags em extensas avaliações paralelas, apresentando vantagens em relação a tags maiores na avaliação da solubilidade das proteínas. Os resultados deste trabalho também mostraram que o tag H não funcionou como parceiro de solubilidade, mas este parceiro de fusão aumentou os níveis de expressão de proteínas em E. coli. O tag H foi usado para a produção recombinante de imunogénios e para a sua administração sem adjuvantes (Capítulo 3). Usando um antigénio de 12 kDa de Cryptosporidium parvum como exemplo, o tag H demonstrou ser uma ferramenta interessante para a produção de anticorpos policlonais, contornando várias limitações do processo, tais como, a disponibilidade do antigénio, a sua imunogenicidade, os efeitos adversos dos adjuvantes e uma produção de anticorpos pouco específica. O parceiro de fusão Fh8 foi também estudado como tag de purificação (Capítulo 4). Tendo em conta as suas propriedades de ligação ao cálcio, o Fh8 possibilitou uma purificação rápida, barata e eficiente de proteínas biologicamente ativas numa só etapa, através da cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) e em condições moderadas. Esta estratégia de purificação teve uma eficiência semelhante à obtida usando o tag His6, e estas duas tecnologias de purificação foram ainda combinadas numa dupla purificação para aumentar o nível de pureza das proteínas alvo. A purificação por Fh8-HIC apresenta a mais-valia de obter proteínas livres de endotoxinas de E. coli. Tendo em conta a versatilidade do sistema de fusão Fh8, desenvolveu-se uma nova estratégia para a produção solúvel da bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) e da interleukin-10 (Capítulo 5). As proteínas de fusão com o Fh8 foram diretamente produzidas de forma solúvel em E. coli, apresentando dímeros e oligómeros numa conformação ordenada. No entanto, a Fh8BMP-2 não foi funcional, levantando questões sobre a estrutura final da proteína de fusão. O Fh8 poderá direcionar a BMP-2 para uma via de folding solúvel, sendo que, no entanto, a BMP-2 apresenta uma conformação diferente daquela exigida para a sua atividade biológica. Neste trabalho, foram ainda desenvolvidos dois novos parceiros de fusão variantes do Fh8, tendo-se efetuado uma mutação no único aminoácido cisteína para alanina ou tirosina (Capítulo 6). As proteínas de fusão com Fh8Ala e Fh8Tyr alcançaram uma solubilidade semelhante à obtida pelas proteínas de fusão com Fh8, apresentando uma menor alteração conformacional dependente de cálcio e uma menor oligomerização comparativamente às proteínas de fusão com Fh8. Estes dois mutantes demonstraram a importância do aminoácido cisteína na oligomerização do Fh8; outros aminoácidos podem, porém, contribuir para este estado. Este trabalho apresentou pela primeira vez o uso eficiente da proteína de ligação ao cálcio, o Fh8, como uma tecnologia de fusão genética promissora. O sistema de fusão Fh8 é uma ferramenta robusta para a produção de proteínas recombinantes em E. coli, combinando quatro características principais num pequeno tag: expressão proteica, solubilidade, purificação e imunogenicidade

The novel Fh8 fusion technology for protein expression in Escherichia coli: a comparison with the traditionally used fusion systems

[Excerpt] The recombinant expression of natural proteins in Escherichia coli is limited by the lack of efficient methods for soluble production. Several efforts have been made to overcome this limitation, including the genetic fusion of highly soluble protein domains (fusion partners) to the target proteins. Among the available fusion partners, the E. coli maltose-binding protein (MBP), glutathione S-transferase (GST) and N-utilization substance A (NusA) are often used to enhance protein solubility. However, due to their large size, these partners can be problematic for structural and functional analyses, requiring their removal using specific proteases. The removal of the fusion partner is not always successful and the resulting cleaved target protein may also precipitate into insoluble aggregates.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Study of mortality by Diabetes Mellitus in Portugal

A diabetes mellitus (DM) é considerada um dos problemas de saúde pública de maior importância a nível mundial, pela elevada prevalência, morbilidade e mortalidade (Sousa, 2006), prevendo-se um agravamento na próxima década relacionado com o envelhecimento da população e com as alterações progressivas no estilo de vida (Cruz, 2005). A Organização Mundial de Saúde (WHO) estima que a diabetes possa vir a ser responsável pela primeira regressão na esperança média de vida dos últimos 200 anos. Pretende-se, com o presente estudo, avaliar a evolução temporal e a distribuição geográfica da mortalidade por DM em Portugal

Searching for chemical elements: a multidisciplinary activity in the 150th anniversary of the Periodic Table of Chemical Elements

[Excerpt] 2019 is the 150th anniversary of the Periodic Table of Chemical Elements and has therefore been proclaimed the "International Year of the Periodic Table of Chemical Elements (IYPT2019)" by the United Nations General Assembly and UNESCO [1]. A working tool very useful to various professionals and in diverse scientific areas, this table would not exist if someone had not distributed and ordered the chemical elements according to the value of their atomic weights. The father of the Periodic Table, the Russian chemist Dmitri Mendeleev (1834-1907), was so visionary that his Table allows housing not only the known chemical elements at that time but also the ones still unknown that came to be discovered or synthesized. When we come across this Table, with so many chemical elements, we ask ourselves how we use them and where we can find each of them, in our real world