The Budgeting of Portuguese Public Museums: a dynamic panel data analysis

In this paper, the first panel on sources of funding for Portuguese publicly owned museums is explored. There has been little work in this field worldwide, and none for Portugal. Evidence in this paper seems contrary to that relating to the UK and to the US. We find that incremental budgeting still plays a major role on the funding of Portuguese museums, allowing for inefficient management and moral hazard: the interests of museums’ management may diverge clearly from those of the authorities ruling them and from those of the general public. We also find that the ability to generate their own revenues plays no role in the funding allocated to museums every year. Budgeting is mainly determined by past operating costs. Policy changes seem to be advisable. The scarce relevance of museum patronage by the private sector makes a discussion of possible crowding out effects irrelevant in the current Portuguese context.museums; incremental budgeting; moral hazard; dynamic panel data;

Molecular characterization and functional analysis of ORF P1192R from African swine fever virus

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias. Especialidade de Ciências Biológicas e BiomédicasAfrican swine fever virus (ASFV) is a nucleo-cytoplasmic large DNA arbovirus and the single member of the family Asfarviridae. It infects soft ticks of the genus Ornithodoros as well as all members of the family Suidae, representing a global threat for pig husbandry for which there is currently no effective vaccine or treatment. Since the ASFV viral cycle is mainly cytoplasmic, it has been found/predicted to code for many components of the replicative and transcriptional machineries. Of these, and based in sequence homologies, a putative type II DNA topoisomerase-coding ORF (P1192R) was identified in the ASFV genome. DNA topoisomerases are enzymes that modulate the topological state of DNA molecules. They are ubiquitous and essential, participating in processes such as DNA replication, recombination and repair and also in transcription. Since ASFV has a large linear genome, with 170 to 190 kbp depending on the isolate, containing terminal inverted repeats and covalently closed ends, a type II topoisomerase may be indispensable for viral replication and/or transcriptional events. The main objectives of this work were to deepen the study on ORF P1192R and determine if it indeed codes for a type II DNA topoisomerase and, if so, to characterize its activity. Bioinformatics and phylogenetic analyses showed that ORF P1192R is highly conserved among the fourteen ASFV isolates analyzed and, although its amino acid sequence clearly diverges from other type II topoisomerases, the structural organization is preserved and conserved motifs and domains essential for activity are present. Transient expression of GFP-pP1192R in COS-7 cells revealed an exclusively cytoplasmic distribution of the protein, which remained unaltered by treatment with leptomycin B. Using Vero cells or swine macrophages infected with ASFV isolate Ba71V or L60, respectively, expression of pP1192R was observed in the late phase of infection, co-localizing with the viral factories, where the bulk of viral replication and transcription occurs. Heterologous expression of pP1192R in Saccharomyces cerevisiae demonstrated that it functionally complements a top2 thermo-sensitive mutation and that it exhibits ATP-dependent decatenation activity. The purified recombinant pP1192R was found to efficiently decatenate kDNA and to processively relax supercoiled plasmid DNA, which are characteristics of a type II topoisomerase. The optimal requirements in terms of pH, temperature and salt, divalent ions and ATP concentrations for pP1192R activity in vitro were determined and its sensitivity to a panel of topoisomerase poisons and inhibitors was tested. Our results indicate that P1192R may be a target for studying, and possibly controlling, ASFV transcription and replication.RESUMO - O vírus da peste suína africana (VPSA) é um arbovírus icosaédrico núcleo-citoplasmático de DNA de cadeia dupla, classificado no género Asfivirus da família Asfarviridae, da qual é o único membro conhecido. Este vírus infecta carraças do género Ornithodoros assim como todos os membros da família Suidae, constituindo uma ameaça global para a suinicultura para a qual não existe actualmente qualquer vacina ou tratamento. A prevenção da peste suína africana é feita através de medidas que visam reduzir o risco de introdução de animais ou produtos de origem animal infectados em regiões livres da doença, enquanto o controlo de um surto se baseia exclusivamente em medidas que incluem o abate sanitário de todos os animais susceptíveis na área do foco e a proibição de movimentos e comercialização de animais. Embora o VPSA tenha sido inicialmente descrito como um vírus com replicação exclusivamente citoplasmática, actualmente sabe-se que o núcleo da célula hospedeira é indispensável na fase inicial da infecção. Contudo, a grande maioria do ciclo infeccioso ocorre no citoplasma da célula infectada, não sendo por isso surpreendente que, das 150 a 167 grelhas de leitura aberta (ORF, do inglês “open reading frame”) identificadas no genoma do VPSA, algumas codifiquem para componentes das maquinarias de replicação e de transcrição. Dentre estas, prevê-se, com base em homologia de sequências aminoacídicas, que a ORF P1192R codifique para uma topoisomerase de DNA do tipo II. As topoisomerases de DNA estão presentes em todas as células e são responsáveis pela modulação do estado topológico do DNA, estado esse que se altera durante processos como a replicação, a recombinação e a reparação do DNA, assim como a transcrição, e dos quais resultam torções das moléculas de DNA que, não sendo resolvidas, podem comprometer a integridade genómica e consequentemente a viabilidade celular. Todas as topoisomerases exercem a sua actividade através da criação de quebras no DNA devido ao ataque nucleofílico de um resíduo de tirosina catalítico ao esqueleto fosfodiéster da molécula de DNA, gerandose assim uma ligação fosfotirosina covalente. As topoisomerases são classificadas em dois tipos, tendo por base a forma como quebram a molécula de DNA: as topoisomerases do tipo I, cuja actividade é independente de ATP e que geram quebras em cadeia única no DNA, facilitando assim o desenrolamento; e as topoisomerases do tipo II, que necessitam de ATP para gerar uma quebra nas duas cadeias do DNA, através da qual fazem passar uma dupla cadeia intacta. Considerando que o VPSA tem um genoma linear de grandes dimensões, com 170 a 190 quilopares de bases dependendo do isolado, e que contém repetições terminais invertidas fechadas covalentemente, uma topoisomerase do tipo II pode efectivamente ser essencial para eventos de replicação e/ou transcrição virais. Os objectivos centrais deste trabalho foram os seguintes: (i) realização de um estudo bioinformático e filogenético aprofundado da ORF P1192R do VPSA; (ii) estudo da proteína codificada por esta ORF (pP1192R), através da sua clonagem, expressão em sistema heterólogo, purificação da proteína recombinante e caracterização in vitro da sua actividade; (iii) determinação do efeito sobre a actividade da proteína recombinante dum painel de compostos químicos descritos como sendo inibidores de topoisomerases; (iv) identificação dos níveis de expressão e da localização intracelular da pP1192R em células infectadas pelo VPSA, a diferentes tempos de infecção; (v) avaliação do efeito de mutações dirigidas em resíduos ou motivos identificados como reguladores da actividade enzimática ou localização subcelular da pP1192R, tendo por base a informação gerada nos estudos bioinformáticos acima mencionados. A ORF P1192R do isolado L60 do VPSA foi amplificada por PCR e clonada e a sua sequência nucleotídica foi determinada e utilizada em análises bioinformáticas e filogenéticas. Verificou-se que esta ORF é altamente conservada entre os catorze isolados do VPSA cujo genoma se encontrava disponível nas bases de dados e, embora a sua sequência aminoacídica seja claramente divergente das de outras topoisomerases do tipo II incluídas neste estudo, quer sejam elas de origem procariota, eucariota ou viral, a organização estrutural da proteína está preservada e estão presentes motivos e domínios conservados que são essenciais para a actividade enzimática. O estudo da localização celular da pP1192R iniciou-se com a construção de plasmídeos quiméricos para a expressão da pP1192R em fusão com a proteína verde fluorescente (GFP) ou com uma variante vermelha (RFP). Transfectaram-se transientemente células de linha COS-7 com estas construções tendo-se observado que a proteína de fusão se distribuía exclusivamente pelo citoplasma. Esta distribuição não foi alterada após tratamento com leptomicina B que bloqueia uma das vias de exportação de proteínas do núcleo. Já a infecção das células a expressarem GFP-pP1192R com um isolado do VPSA adaptado a células Vero (Ba71V) induziu uma redistribuição da proteína de fusão, deixando de estar homogeneamente distribuída pelo citoplasma para estar principalmente concentrada nas fábricas virais a partir das 8 horas pós-infecção. Utilizando células de linha Vero infectadas com o isolado Ba71V, utilizado como modelo de infecção, ou macrófagos derivados de monócitos de sangue periférico de suíno (células alvo do vírus na infecção natural) infectados com o isolado virulento L60, e utilizando um soro anti-pP1192R produzido no decurso destes trabalhos, foi possível constatar que a pP1192R viral é produzida na fase intermédia/tardia da infecção (observável a partir das 6/8 horas pós-infecção) e que acumula nas fábricas virais ao longo da infecção. A expressão em sistema heterólogo da pP1192R iniciou-se num sistema procariota, baseado em Escherichia coli, mas embora tenha sido possível obter proteína recombinante em grandes quantidades, a sua purificação só foi conseguida recorrendo a agentes desnaturantes, impedindo a obtenção de proteína activa. Assim, avançou-se para um novo sistema de expressão baseado na levedura Pichia pastoris que apresenta diversas vantagens sobre o anterior, nomeadamente o facto de ser um sistema eucariota e por isso mais semelhante ao contexto em que a pP1192R é expressa em condições naturais. Contudo, neste sistema não foi possível obter proteína recombinante e o sistema foi abandonado. Tentou-se por fim a expressão heteróloga na levedura Saccharomyces cerevisiae. Neste organismo, a utilização das estirpes JCW26 e SD117 que contêm uma mutação termo-sensível no gene que codifica para a topoisomerase do tipo II endógena, permitiu demonstrar, quer in vivo através da complementação da mutação termo-sensível, quer in vitro recorrendo a ensaios funcionais de decatenação, que a pP1192R é efectivamente uma topoisomerase do tipo II funcional. Utilizando ainda S. cerevisiae como sistema de expressão, foi possível obter e purificar pP1192R recombinante para caracterização da sua actividade em ensaios funcionais in vitro. Observou-se que a pP1192R é capaz de relaxar DNA superenrolado, de decatenar DNA catenado e, quando em elevadas concentrações, de catenar DNA plasmídico, não tendo sido detectada actividade de superenrolamento de DNA relaxado. Determinaram-se também as condições óptimas de funcionamento em termos de temperatura, pH e concentrações de sal (NaCl ou KCl), ATP ou iões divalentes (Mg2+, Mn2+, Zn2+, Cu2+ e Ca2+), que foram posteriormente utilizadas para avaliar a sensibilidade da pP1192R recombinante a um painel de inibidores de topoisomerases, entre os quais se incluem drogas frequentemente utilizadas como agentes antimicrobianos ou antitumorais. Dos compostos testados, aqueles para os quais foram obtidos resultados mais promissores, i.e., os que revelaram níveis de inibição mais elevados, foram a coumermicina A1, a doxorubicina, a amsacrina e a genisteína. Pelo contrário, as quinolonas, normalmente utilizadas como antibióticos visando infecções provocadas por organismos procariotas, foram dos compostos com menor eficácia. Em suma, os resultados deste trabalho indicam que a ORF P1192R é um alvo promissor para o estudo e, eventualmente, o controlo dos processos replicativos e transcricionais do vírus da peste suína africana

Brand extensions: A marketing plan for the launching of a tea product line applied to Luso

This thesis project has the main goal of developing a strategic and operational marketing plan to support the launching of a tea product range by Luso directed to healthy minded consumers. The launching process will take place in Portuguese market during the summer of 2013. In this marketing plan was identified the potential market size and set actions for the new product proposal implementation, Luso Tea. This was achieved through the acquisition of knowledge from scientific research analysis that contributed to more consistent action plan definition. In an intermediary step was made a deep and crucial market, company and competitive analysis becoming possible to do a coherent product concept, support and communication. To really understand how to make an optimal product to healthy minded consumers was made a complete profiling of these target, leading to an adapted marketing strategy where was design all marketing mix components.Este projeto de tese tem o objetivo principal de desenvolver um plano de marketing estratégico e operacional para servir de base ao lançamento de uma gama de produtos de chá pela Luso, direcionado para os consumidores com uma mentalidade saudável. O processo de lançamento terá lugar no mercado Português durante o verão de 2013. Neste plano de marketing foi identificada a dimensão potencial do mercado e foram definidas ações para a implementação da nova proposta de produto, Luso Tea. Isto foi conseguido através da aquisição de conhecimentos a partir da análise de artigos científicos, o que contribuiu para a definição de um plano de ações mais consistente. Num passo intermédio foi feita uma profunda e crucial análise do mercado, da empresa e do ambiente competitivo tornando possível fazer um produto coerente ao nível do conceito, serviços de apoio e comunicação. Para realmente se compreender como fazer um produto adaptado aos consumidores com uma mentalidade saudável foi feita uma caracterização completa deste público-alvo, levando á elaboração de uma estratégia de marketing adaptada, onde foram desenhados todos componentes do marketing mix

Spot Tours : animação turística na Ilha Terceira

Mestrado (Relatório de Estágio), Gestão do Turismo Internacional (Gestão de Destinos Turísticos), 19 de março de 2021.O presente relatório de estágio intitulado “Spot Tours – Animação Turística na Ilha Terceira” tem como objetivo descrever e analisar as funções desempenhadas pelo estagiário, João Coelho, na referida empresa localizada na cidade de Angra do Heroísmo, ilha Terceira. O estágio foi realizado ao abrigo do programa Estagiar L, promovido pelo Governo Regional dos Açores, tendo a duração de onze meses, iniciando-se no dia um de outubro de 2019 e terminando no dia 31 de agosto de 2020. A atividade desenvolvida incidiu no ramo do turismo, mais propriamente na animação turística, tendo como objetivo o aprofundamento do conhecimento e aquisição de experiência nesta especialidade, algo que foi concretizado através de contacto direto e recorrente com profissionais da área. Após uma caracterização da animação turística e dos seus pressupostos legais, procede-se a uma breve síntese sobre a história e recursos turísticos da ilha Terceira com base nos quais se criam e oferecem os produtos turísticos em que assenta a atividade da empresa. De seguida, descreve-se a origem e o processo evolutivo da organização, bem como as atividades realizadas no estágio, principalmente ligadas à animação turística. O relatório finaliza com uma reflexão crítica sobre as experiências vividas durante a realização do estágio.ABSTRACT: This internship report entitled “Spot Tours - Animação Turística na Ilha Terceira” aims to describe and analyze the activities performed by the intern, João Coelho, in the referred company located in the city of Angra do Heroísmo, Terceira Island. The internship was carried out under the Estagiar L program, promoted by the Regional Government of the Azores, lasting eleven months, starting on the first of October, 2019 and ending on the thirty-first of August, 2020. The developed activities focused on the tourism field, specifically on touristic recreational services, with the objective of deepening knowledge and acquiring experience in this expertise, something that was achieved through direct and recurring contact with professionals in the area. After characterizing the touristic recreational services and its legal assumptions, we proceed to a brief synthesis about the history and tourist resources of Terceira Island, on which the company activity is based on. Subsequently there is a description of the organization's past and the activities carried out during the internship, mainly linked to tourist entertainment. The report ends with a critical reflection on the experiences felt during the internship

The budgeting of portuguese public museums: a dynamic panel data approach

In this paper, the first panel on sources of funding for Portuguese publicly owned museums is explored. There has been little work in this field worldwide, and none for Portugal. Evidence in this paper seems contrary to that relating to the UK and to the US. We find that incremental budgeting still plays a major role on the funding of Portuguese museums, allowing for inefficient management and moral hazard: the interests of museums’ management may diverge clearly from those of the authorities ruling them and from those of the general public. We also find that the ability to generate their own revenues plays no role in the funding allocated to museums every year. Budgeting is mainly determined by past operating costs. Policy changes seem to be advisable. The scarce relevance of museum patronage by the private sector makes a discussion of possible crowding out effects irrelevant in the current Portuguese context.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Reparação de estruturas de betão após incêndio

Um incêndio numa estrutura de betão pode provocar danos muito leves, cuja intervenção é simples e superficial, ou muito graves podendo exigir a demolição total ou parcial da estrutura. A seguir ao incêndio será necessário fazer uma avaliação e classificação dos danos seguida duma selecção dos métodos e materiais de reparação mais apropriados. Nesta comunicação apresenta-se uma visão geral dos diferentes aspectos da avaliação e classificação dos danos das estruturas após incêndio e suas técnicas de reparação

Resistência à compressão residual de betões calcários após incêndio

Com o objectivo de conhecer a resistência residual à compressão dos betões calcários após incêndio, desenvolveu-se um programa experimental no qual se consideraram como variáveis de estudo: o processo de arrefecimento (arrefecimento ao ar e arrefecimento por jacto de água); a temperatura máxima a que o betão esteve sujeito (20ºC, 300ºC, 500ºC e 700ºC) e o nível de carregamento (0.3fcd e 0.7fcd)

Influência do processo de arrefecimento e do carregamento na resistência residual à compressão de betões normais após incêndio

O betão apresenta em geral um bom comportamento ao fogo, no entanto em incêndios de grande severidade e longa duração, os elementos de betão podem perder parcial ou totalmente a sua capacidade de carga. Por outro lado, as condições de extinção do incêndio têm uma influência significativa nas propriedades mecânicas do betão sendo a sua degradação tanto maior quanto mais brusco for o processo de arrefecimento. Com o objectivo de conhecer a resistência residual à compressão dos betões normais após incêndio realizaram-se um conjunto de ensaios em que se testou a influência do nível de carregamento e do processo de arrefecimento nesta propriedade