Estudio de la regulación de la asparraginasa de pino

La asparraginasa (ASPG, EC 3.5.1.1) de plantas pertenece a la familia de Ntn-hidrolasas, enzimas que se sintetizan como un precursor inactivo, el cual es activado mediante un procesamiento autocatalítico que genera dos subunidades (α y β). Estas subunidades forman un tetrámero (αβ)2, que constituye la forma madura de la enzima, en la cual cada subunidad β presenta un residuo nucleófilo (Thr) en su extremo amino como resultado del procesamiento. La asparraginasa está implicada en la movilización del nitrógeno contenido en el grupo amido de la asparragina, el metabolito principal para la reserva y el transporte de nitrógeno en plantas. Nuestro objetivo es determinar cómo se regula esta enzima en pino, tanto a nivel transcripcional como postraduccional. A nivel transcripcional estamos realizando una caracterización estructural y funcional de la región promotora del gen, así como el análisis del patrón de expresión del gen en diferentes tejidos y condiciones. A nivel postraduccional nos hemos centrado en determinar las características del procesado y activación de la ASPG en pino. Debido a los bajos niveles de la proteína en pino, este estudio se abordó con proteína recombinante purificada desde sistemas heterólogos. La expresión de la proteína recombinante de Pinus pinaster en células de E. coli resulta en una proteína inmadura sin capacidad de autocatálisis in vitro, a diferencia de lo que se ha descrito para ASPG de otras especies angiospermas. Por el contrario, la expresión heteróloga en plantas de tabaco genera una proteína madura. En comparación con la estructura primaria de las ASPG de especies cuyo genoma ha sido secuenciado, las ASPG de coníferas presentan una extensión de unos 70 aminoácidos en la posición que precede al residuo nucleófilo, sitio donde ocurre el procesamiento que activa a la enzima. Un análisis mediante espectrometría de masas ha demostrado que esta extensión forma parte de la proteína de Pinus pinaster en su forma madura. En la actualidad estamos analizando el efecto de esta extensión sobre el autoprocesamiento del precursor.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Enfermedad respiratoria en vacas Holstein alimentadas con silaje de maíz: reporte de caso

An outbreak of respiratory distress was observed in Holstein cows immediately after consuming a new batch of corn-silage, presumably due to the presence of pneumotoxic gases. Signs were observed in 10% of the cows, and characterized as tachypnea, orthopneic position, cough and notable anxiety a few minutes after offering the silage. No deaths were recorded. Mild leucocytosis was observed in the hemogram. Nutritional analysis and nitrate determination of the corn-silage revealed usual values. Nitrous oxide and methane concentration were evaluated by gas chromatography and nitrogen oxides concentration directly with a portable device, resulting in acceptable values. Although high concentrations of toxic gases could not be evidenced in the air sampled on farm, the clinical signs observed coincide with those reported in cases of exposure to gases formed during corn silage processes. A greater emphasis is required in the evaluation of the corn to be ensiled, given the possible existence of factors that can generate the accumulation of potentially toxic gases for cattle that affect negatively their health and productivity.Se describe un brote de enfermedad respiratoria en vacas Holando Argentino, inmediatamente luego del consumo de un nuevo silaje de planta entera de maíz, presuntamente con presencia de gases neumotóxicos. Se observaron signos en el 10% de las vacas, caracterizados como taquipnea, posición ortopnéica, episodios de tos y ansiedad, unos minutos luego del ofrecimiento del silaje. No se registraron muertes. En el hemograma se observó leucocitosis leve. El análisis de calidad nutricional del alimento y la concentración de nitratos en el silaje de maíz resultó con los valores habituales. Se evaluó la concentración de óxido nitroso y metano en una muestra de silaje de maíz recolectada herméticamente por cromatografía gaseosa, así como la concentración de óxidos de nitrógeno in situ con un instrumento portátil, resultando en valores aceptables. Aunque no se pudieron evidenciar concentraciones de gases elevadas en el aire del silaje muestreado en el tambo, los signos clínicos observados coinciden con los casos reportados de exposición a gases que se forman durante la fermentación del ensilado. Se debería tener en cuenta la evaluación del maíz a ser ensilado, dadas las posibilidades de que se genere la acumulación de gases potencialmente tóxicos para el ganado, que puedan afectar negativamente su salud y productividad

The Diachronic Spanish Sonnet Corpus (DISCO): TEI and Linked Open Data Encoding, Data Distribution and Metrical Findings

We present a corpus covering 4094 sonnets in Spanish by 1204 authors, from the 15th to the 19th centuries, extracted from HTML sources. The corpus was encoded in TEI. Author metadata not available in a standardized format in the sources were systematically retrieved or inferred from the sources and added to the corpus, e.g. author gender or VIAF IDs. RDFa was used to render TEI semantics in the Linked Open Data paradigm. Scansion was annotated automatically with the ADSO Scansion System. Enjambment was annotated automatically with our enjambment detection tool (ANJA). Stanza types were also annotated. The corpus covers both canonical and non-canonical authors, from Europe and Latin America. The range of authors and periods, the use of both TEI and RDFa for interoperability, and the combination of metrical and enjambment annotations goes beyond previously available digital resources for the study of poetry in Spanish. This corpus is a contribution within an area where digital resources are scarce. We also present some literary analysis results that illustrate the type of research questions that can be answered with the corpus

Aspectos estructurales y funcionales de la asparraginasa en pino

La asparragina es un metabolito clave en plantas para el transporte y reserva temporal de nitrógeno. La principal vía de movilización del nitrógeno contenido en el grupo amido de este aminoácido implica a la enzima asparraginasa (ASPG, EC 3.5.1.1), que cataliza la hidrólisis de asparragina a aspartato y amonio. Las asparraginasas de plantas, al igual que todas las enzimas de la familia Ntn-hidrolasas, son sintetizadas como precursores inactivos. La enzima activa es un heterotetrámero con dos tipos distintos de angiospermas se han identificado genes que codifican dos subtipos de asparraginasas (Bruneau et al. 2006), las K+-independientes y las K+-dependientes, con al menos un gen codificante para cada tipo en los genomas que han sido secuenciados. La caracterización de ambos subtipos indica que la forma K+-dependiente sería más eficiente en la movilización del nitrógeno amido de la asparragina bajo condiciones de alta demanda metabólica de nitrógeno (Bruneau et al. 2006), mientras que el papel de las K+-independientes estaría relacionado con su actividad isoaspartil dipeptidasa. Sin embargo, hasta la fecha no se ha realizado una caracterización de las distintas formas presentes y sus funciones en gimnospermas. Una búsqueda en el transcriptoma disponible de Pinus pinaster (Canales et al. 2014) nos permitió identificar un total de tres genes con similitud a asparraginasa. Sólo uno (PpASPG1), identificado previamente por nuestro grupo de investigación (Cañas et al. 2006), presenta mayor similitud con las asparraginasas K+-dependientes. El principal inconveniente para la caracterización de estas proteínas es su baja abundancia. Para soslayar este impedimento se expresaron transitoriamente los tres genes de pino en un sistema heterólogo, se purificaron las proteínas recombinantes y se compararon sus características. Por otro lado, esta aproximación nos ha permitido también estudiar cómo afecta al procesamiento del precursor y a la actividad de la enzima la presencia de una extensión de 70 aminoácidos proteínas ortólogas de especies angiospermas. Finalmente, con el objetivo de dilucidar posibles funciones, hemos realizado un análisis de expresión de los tres genes identificados, así como el aislamiento y análisis del promotor del gen PpASPG1. Referencias Bruneau L. et al (2006) Co-occurrence of both L-asparaginase subtypes in Arabidopsis: At3g16150 encodes a K+-dependent L-asparaginase. Planta, 224:668–679, doi: 10.1007/s00425-006-0245-9. Canales J. et al. (2014) De novo assembly of maritime pine transcriptome: implications for forest breeding and biotechnology. Plant Biotechnology Journal, 12:286–299. doi: 10.1111/pbi.12136. Cañas RA et al. (2006) Coordination of PsAS1 and PsASPG expression controls timing of re-allocated N utilization in hypocotyls of pine seedlings. Planta, 225:1205– 1219. doi: 10.1007/s00425-006-0431-9.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Potenciales causas de pérdidas reproductivas en llamas (Lama glama) de Jujuy, Argentina

La cría de llamas es una importante actividad de impacto socioeconómico en la región Puna de la Provincia de Jujuy, sin embargo, la misma tiene una baja tasa de procreo. Con el objetivo de estudiar potenciales causas de pérdidas reproductivas y perinatales, se controló una tropa nativa de llamas durante toda la etapa gestacional y se establecieron los índices de preñez, abortos, natimortos, teratogenia y muerte perinatal. Además, se realizaron estudios serológicos de brucelosis, leptospirosis, diarrea viral bovina, herpes virus bovino, neosporosis, sarcocystosis y toxoplasmosis en las hembras que presentaron pérdidas de gestación. El 82,8% (24/29) de las pérdidas reproductivas no pudieron asociarse a la infección con los agentes virales y bacterianos investigados. Los niveles de anticuerpos contra N. caninum, T. gondii y diferentes serovares de Leptospira sp podrían sugerir infecciones crónicas con baja relación con las pérdidas reproductivas detectadas. Astragalus garbancillo fue identificado entre la vegetación de pastoreo, y su consumo podría estar asociado a la presentación de crías con deformaciones y posiblemente abortos y mortalidad de crías débiles, siendo que los animales con mayor exposición a su consumo, tuvieron más de 4 veces mayor riesgo de padecer pérdidas peri-post-natales que los menos expuestos. Se requieren mayores estudios para establecer la asociación de estas potenciales causas con las pérdidas reproductivas, principalmente abortos y teratogenia en llamas

Virulence genes and subclone status as markers of experimental virulence in a murine sepsis model among Escherichia coli sequence type 131 clinical isolates from Spain

Objective: To assess experimental virulence among sequence type 131 (ST131) Escherichia coli bloodstream isolates in relation to virulence genotype and subclone. Methods: We analysed 48 Spanish ST131 bloodstream isolates (2010) by PCR for ST131 subclone status (H30Rx, H30 non-Rx, or non-H30), virulence genes (VGs), and O-type. Then we compared these traits with virulence in a murine sepsis model, as measured by illness severity score (ISS) and rapid lethality (mean ISS >= 4). Results: Of the 48 study isolates, 65% were H30Rx, 21% H30 non-Rx, and 15% non-H30; 44% produced ESBLs, 98% were O25b, and 83% qualified as extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC). Of 49 VGs, ibeA and iss were associated significantly with non-H30 isolates, and sat, iha and malX with H30 isolates. Median VG scores differed by subclone, i.e., 12 (H30Rx), 10 (H30 non-Rx), and 11 (non-H30) (p < 0.01). Nearly 80% of isolates represented a described virotype. In mice, H30Rx and non-H30 isolates were more virulent than H30 non-Rx isolates (according to ISS [p = 0.03] and rapid lethality [p = 0.03]), as were ExPEC isolates compared with non-ExPEC isolates (median ISS, 4.3 vs. 2.7: p = 0.03). In contrast, most individual VGs, VG scores, VG profiles, and virotypes were not associated with mouse virulence. Conclusions: ST131 subclone and ExPEC status, but not individual VGs, VG scores or profiles, or virotypes, predicted mouse virulence. Given the lower virulence of non-Rx H30 isolates, hyper-virulence probably cannot explain the ST131-H30 clade's epidemic emergence

Clinical and epidemiological characterization of a lymphogranuloma venereum outbreak in Madrid, Spain: co-circulation of two variants

AbstractThe lymphogranuloma venereum (LGV) outbreak described in the Netherlands in 2003, increased the interest in the genotyping of Chlamydia trachomatis. Although international surveillance programmes were implemented, these studies slowly decreased in the following years. Now data have revealed a new accumulation of LGV cases in those European countries with extended surveillance programmes. Between March 2009 and November 2011, a study was carried out to detect LGV cases in Madrid. The study was based on screening of C. trachomatis using commercial kits, followed by real-time pmpH-PCR discriminating LGV strains, and finally ompA gene was sequenced for phylogenetic reconstruction. Ninety-four LGV infections were identified. The number of cases increased from 10 to 30 and then to 54 during 2009–2011. Incidence of LGV was strongly associated with men who have sex with men; but in 2011, LGV cases were described in women and heterosexual men. Sixty-nine patients were also human immunodeficiency virus (HIV) positive, with detectable viral loads at the moment of LGV diagnosis, suggesting a high-risk of co-transmission. In fact, in four patients the diagnosis of HIV was simultaneous with LGV infection. The conventional treatment with doxycycline was prescribed in 75 patients, although in three patients the treatment failed. The sequencing of the ompA gene permitted identification of two independent transmission nodes. One constituted by 25 sequences identical to the L2b variant, and a second node including 37 sequences identical to L2. This epidemiological situation characterized by the co-circulation of two LGV variants has not been previously described, reinforcing the need for screening and genotyping of LGV strains

Multidrug resistant Kluyvera ascorbata septicemia in an adult patient: a case report

<p>Abstract</p> <p>Introduction</p> <p><it>Kluyvera ascorbata </it>has become increasingly significant due to its potential to cause a wide range of infections, as well as its ability to transfer gene encoding for CTX-M- type extended spectrum B-lactamases (ESBLs) to other Enterobacteriaceae.</p> <p>Case presentation</p> <p>We report the case of a 64-year-old African-American male diagnosed with severe sepsis due to a multidrug resistant <it>Kluyvera ascorbata</it>, which was isolated from his blood. He was treated with meropenem and had a favorable outcome.</p> <p>Conclusion</p> <p>To the best of our knowledge, this is the first case report of a multidrug resistant <it>Kluyvera ascorbata </it>isolated from the blood in an adult patient with sepsis.</p