TIM23-mediated insertion of transmembrane alpha-helices into the mitochondrial inner membrane

While overall hydrophobicity is generally recognized as the main characteristic of transmembrane (TM) alpha-helices, the only membrane system for which there are detailed quantitative data on how different amino acids contribute to the overall efficiency of membrane insertion is the endoplasmic reticulum (ER) of eukaryotic cells. Here, we provide comparable data for TIM23-mediated membrane protein insertion into the inner mitochondrial membrane of yeast cells. We find that hydrophobicity and the location of polar and aromatic residues are strong determinants of membrane insertion. These results parallel what has been found previously for the ER. However, we see striking differences between the effects elicited by charged residues flanking the TM segments when comparing the mitochondrial inner membrane and the ER, pointing to an unanticipated difference between the two insertion systems. Keywords: CoxVa , membrane protein , Mgm1p , mitochondria , TIM2

Sistema de informação geográfica das zonas balneares da ilha do Pico (Açores)

XII Expedição Científica do Departamento de Biologia - Pico 2005.Os trabalhos promovidos pela Secção de Geografia, no decorrer da “Expedição Cientifica – Pico 2005”, incidiram na recolha e sistematização de dados para a implementação de um Sistema de Informação Geográfica (SIG) das Zonas Balneares (ZB) da ilha do Pico. O estudo enquadra-se numa linha de investigação em curso que visa a gestão integrada da orla costeira dos Açores. Os levantamentos de campo foram realizados por uma equipa composta por nove elementos com formações multidisciplinares. Os dados coligidos, concluídos que estão os procedimentos de integração em ambiente SIG, não se destinam apenas à comunidade científica, mas sobretudo aos agentes e instituições com competências na promoção do turismo, conservação da natureza e gestão da orla costeira, incluindo os diferentes níveis de administração (local e regional). A metodologia de recolha de informação baseia-se na adaptação da proposta desenvolvida por Rita Norberto (Zonas Balneares Costeiras da Ilha de São Miguel. Contributos para o seu conhecimento, 2004). Os resultados obtidos permitem, desde logo, constatar o enorme potencial lúdico e conservacionista da costa do Pico, atendendo à quantidade ediversidade das zonas balneares inventariadas (44) e à presença de elementos naturais singulares. Por sua vez, o SIG revelou-se uma ferramenta de análise espacial extremamente eficaz na visualização dos elementos registados na base de dados geográfica

Sistema de Informação Geográfica da orla costeira da Ilha Graciosa

XI Expedição Científica do Departamento de Biologia - Graciosa 2004.Na continuidade da linha de investigação em curso que visa a gestão integrada das zonas costeiras dos Açores, a Secção de Geografia do Departamento de Biologia da Universidade dos Açores deslocou uma equipa pluridisciplinar, composta por 9 elementos, para participar na “Expedição Científica Graciosa 2004”, evento que decorreu entre 07 e 15 de Junho. O objectivo central consistiu na recolha, registo e validação de dados georeferenciados, passíveis de integração num Sistema de Informação Geográfica desenhado especificamente para o efeito. A área de estudo corresponde à orla costeira da Graciosa, definida pela linha dos 500 m de distância contados para o interior da ilha a partir da linha de costa. Os critérios de delimitação decorrem da correspondência aproximada com a área de intervenção dos Planos de Ordenamento da Orla Costeira. Nos termos propostos, o Sistema de Informação Geográfica da Orla Costeira da Graciosa poderá constituir uma ferramenta de apoio à elaboração deste instrumento de planeamento territorial, assim como responder às orientações da União Europeia relativas à Gestão Integrada das Zonas Costeiras, respectivamente

TIM23-mediated insertion of transmembrane α-helices into the mitochondrial inner membrane

This comprehensive analysis of the sequence determinants for TIM23-mediated insertion of mitochondrial inner membrane proteins reveals strikingly different requirements for protein insertion into the mitochondrial inner membrane and the endoplasmic reticulum

Engineering NK-CAR.19 cells with the IL-15/IL-15Rα complex improved proliferation and anti-tumor effect in vivo

IntroductionNatural killer 92 (NK-92) cells are an attractive therapeutic approach as alternative chimeric antigen receptor (CAR) carriers, different from T cells, once they can be used in the allogeneic setting. The modest in vivo outcomes observed with NK-92 cells continue to present hurdles in successfully translating NK-92 cell therapies into clinical applications. Adoptive transfer of CAR-NK-92 cells holds out the promise of therapeutic benefit at a lower rate of adverse events due to the absence of GvHD and cytokine release syndrome. However, it has not achieved breakthrough clinical results yet, and further improvement of CAR-NK-92 cells is necessary.MethodsIn this study, we conducted a comparative analysis between CD19-targeted CAR (CAR.19) co-expressing IL-15 (CAR.19-IL15) with IL-15/IL-15Rα (CAR.19-IL15/IL15Rα) to promote NK cell proliferation, activation, and cytotoxic activity against B-cell leukemia. CAR constructs were cloned into lentiviral vector and transduced into NK-92 cell line. Potency of CAR-NK cells were assessed against CD19-expressing cell lines NALM-6 or Raji in vitro and in vivo in a murine model. Tumor burden was measured by bioluminescence.ResultsWe demonstrated that a fourth- generation CD19-targeted CAR (CAR.19) co-expressing IL-15 linked to its receptor IL-15/IL-15Rα (CAR.19-IL-15/IL-15Rα) significantly enhanced NK-92 cell proliferation, proinflammatory cytokine secretion, and cytotoxic activity against B-cell cancer cell lines in vitro and in a xenograft mouse model.ConclusionTogether with the results of the systematic analysis of the transcriptome of activated NK-92 CAR variants, this supports the notion that IL-15/IL-15Rα comprising fourth-generation CARs may overcome the limitations of NK-92 cell-based targeted tumor therapies in vivo by providing the necessary growth and activation signals

Práticas artísticas no ensino básico e secundário

A educação artística passa por circunstâncias paradoxais, que se originam na sua essencialidade plástica: o desenho cada vez é menos praticado no papel e cada vez é mais praticado no ecrã. A experiência plástica do corpo a corpo, da “afinidade” através da convenientia, da aemulatio, da analogia, e das simpatias (Foucault), pode já ser cada vez mais reduzida, ou mesmo residual. Hoje a experiência digital antecede a experiência analógica desde a mais tenra idade, e este é um novo contexto que nos mostra águas desconhecidas. Haverá uma “fraqueza analógica” contemporânea? Como fundar uma experiência quando o digital já quase antecede o analógico, na educação e no desenvolvimento da criança?Como compreender o desconhecido com base no desconhecido? Diga-se, no mínimo, que em Educação Artística, a Matéria-Prima complicou-se. Os 18 artigos aqui presentes dão um contributo vivo para uma reflexão, tanto sobre a sua operacionalização como sobre a sua concetualização, atenta às contradições e paradoxos, disponível para os novos contributos, as novas intervenções.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Translocation of proteins into and across the bacterial and mitochondrial inner membranes

Translocons are dynamic protein complexes with the ability to respond to specific signals and to transport polypeptides between two distinct environments. The Sec-type translocons are examples of such machineries that can interconvert between a pore forming conformation that translocates proteins across the membrane, and a channel-like conformation that integrates proteins into the membrane by lateral opening. This thesis aims to identify the signals encoded in the amino acid sequence of the translocating polypeptides that trigger the translocon to release defined segments into the membrane. The selected systems are the SecYEG translocon and the TIM23 complex responsible for inserting proteins into the bacterial and the mitochondrial inner membrane, respectively. These two translocons have been challenged in vivo with designed polypeptide segments and their insertion efficiency into the membrane was measured. This allowed identification of the sequence requirements that govern SecYEG- and TIM23-mediated membrane integration. For these two systems, “biological” hydrophobicity scales have been determined, giving the contributions of each of the 20 amino acids to the overall free energy of insertion of a transmembrane segment into the membrane. A closer analysis of the mitochondrial system has made it possible to additionally investigate the process of membrane dislocation mediated by the m-AAA protease. The threshold hydrophobicity required for a transmembrane segment to remain in the mitochondrial inner membrane after TIM23-mediated integration depends on whether the segment will be further acted upon by the m-AAA protease. Finally, an experimental approach is presented to distinguish between different protein sorting pathways at the level of the TIM23 complex, i.e., conservative sorting vs. stop-transfer pathways. The results suggest a connection between the metabolic state of the cell and the import of proteins into the mitochondria.At the time of doctoral defence the following papers were unpublished and had a status as follows: Paper nr. 1: Manuscript; Paper nr. 4: Manuscript</p