Isolamento e caracterização parcial do gene que codifica gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase do fungo Metarhizium anisopliae

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Prevalence, antifungal susceptibility and virulence determinants of oral yeast species isolated from immunodeficient patients in Northeastern Brazil

Background and Objectives: Oral candidiasis has a common occurrence in immunocompromised patients. However, other emergent infections have become increasingly common. The aim of this study was to investigate the prevalence, virulence determinants and the antifungal susceptibility of yeast colonizing the mucosa of immunocompromised patients in Northeastern Brazil. Methods: Samples from sixty HIV-positive patients seen at the Specialized Service / Hospital Dia - Hospital Universitário Prof. Alberto Antunes from the Federal University of Alagoas were collected from subgingival sites and seeded on CHROMagar for presumptive confirmation of Candida spp. followed by PCR and sequencing. In addition, we tested virulence determinants, phospholipase and protease and evaluated in vitro the Minimum Inhibitory Concentration of antifungals amphotericin B and fluconazole. This project was approved by the Research Ethics Committee of the Center for Higher Studies in Maceió. Results: Approximately 63% of the patients were colonized by yeasts, with C. albicans as the predominant species, while non-Candida albicans species accounted for 49% of the isolates, with C. dubliniensis and C. parapsilosis being the commonest, but C. intermedia, Bullera penniseticola and Naganishia liquefaciens were also found. The virulence determinants protease and/or phospholipase were also produced by Candida spp. and some uncommon opportunistic isolates such as Kodamaea ohmeri, N. liquefaciens and Saitozyma podzolica. Furthermore, most of Candida spp. strains and some uncommon opportunistic species showed high values of minimal inhibitory concentration. Conclusion: Results obtained indicate that C. albicans continues to be the predominant species in oral cavity of immunodeficient patients and along with other unusual species may present high resistance to the antifungals tested

Influência do fotoperíodo e da intensidade de radiação solar no crescimento e produção de tubérculos de rabanete

O rabanete (Raphanus sativus L.) é uma planta herbácea de porte reduzido, da família das brassicáceas, apresentando ciclo rápido. O fotoperíodo bem como a radiação, são dois dos principais fatores que influenciam no desenvolvimento vegetativo. Portanto, este trabalho teve por objetivo avaliar a interferência do fotoperíodo e da radiação na cultura do rabanete. O trabalho foi conduzido em casa de vegetação, onde a testemunha ficou sobre a influência do fotoperíodo e radiações naturais, enquanto em um tratamento foi reduzido o fotoperíodo e em outro a radiação. A redução da radiação ou do fotoperíodo inibiu a tuberização das plantas, já sob condições normais, observou-se a tuberização das plantas, sendo assim a redução no fotoperíodo ou radiação tornam inviável o cultivo de rabanete devido a não formação da parte comercializável

Métodos de estimativa da evapotranspiração de referência para o município de Ibirubá, Rio Grande do Sul

O conhecimento preciso e a correta quantificação da evapotranspiração são essenciais para programas de irrigação e cálculo da demanda evaporativa da atmosfera. Objetiva-se com este trabalho comparar métodos de estimativa da evapotranspiração de referência para o município de Ibirubá-RS. Os dados utilizados correspondem às variáveis climatológicas no período de 1° de outubro de 2017 a 31 de maio de 2018. Estas informações são constituídas pelas séries horárias de temperatura média (Tmed), mínima (Tmin) e máxima (Tmax), umidade relativa média (URmed), mínima (URmin) e máxima (URmax), velocidade média dos ventos a 2 metros de altura (u2), temperatura média do ponto de orvalho (Td) e radiação solar incidente (K?). Os métodos de determinação da evapotranspiração de referência (ETo) utilizados no trabalho foram Penman-Monteith (FAO-56), Penman, Priestley & Taylor, Tanner & Pelton, Makkink, Jensen-Haise, Hargreaves-Samani, Camargo, Benevides-Lopes, Turc e Linacre. Para fins de comparação, adotou-se o método de Penman-Monteith como método padrão para a estimativa ETo, comparando-se a os valores obtidos pelos demais métodos. Foram realizadas análises estatísticas de regressão, correlação e multivariada como critério de sumarização dos dados. Os resultados expressos a partir da análise de correlação e dos componentes principais, evidenciaram de forma adequada os reais efeitos das variáveis climatológicas sobre os métodos de estimativa testados. O efeito da radiação solar (Q*) tem maior impacto sobre os métodos de estimativas de ETo

Isolamento e caracterização do gene que codifica a proteína gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase do fungo Metarhizium anisopliae

Resumo não disponível

Isolamento e caracterização do gene que codifica a proteína gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase do fungo Metarhizium anisopliae

Resumo não disponível

Caracterização funcional da proteína gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase na superfície celular do entomopatógeno Metarhizium anisopliae

A proteína gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) é uma enzima essencial na via da glicólise e da gliconeogênese, catalisando a fosforilação oxidativa do substrato gliceraldeído-3-fosfato em 1,3- bifosfoglicerato na presença de NAD+ e fosfato inorgânico, sendo também capaz de catalisar a reação inversa. A enzima é um homotetrâmero, tendo monômeros com massa de 36 kDa. Além desta atividade, a proteína pode ainda desempenhar outras funções importantes em vários processos celulares. A partir da descrição da expressão diferencial do gene gpdh1 (GAPDH) do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae em condições que mimetizam a infecção, desenvolvemos este estudo para caracterizar a sua possível participação em outros processos celulares. Diversas análises foram realizadas para caracterizar o gene gpdh1 e sua proteína cognata. Os padrões de expressão, tanto em nível transcricional como em nível protéico foram avaliados sob condições de regulação fisiológica, evidenciando um padrão de regulação hierárquico em resposta às diferentes fontes de carbono adicionadas a culturas do fungo. Utilizando 2D-SDS-PAGE, anti-soro anti GAPDH e espectrometria de massas, identificamos isoformas de GAPDH sendo expressas pelo fungo, sendo uma majoritária. Com base nos relatos encontrados na literatura de localização da proteína GAPDH na superfície celular de diferentes patógenos, direcionamos o trabalho no sentido de verificar a localização sub-celular da GAPDH em Metarhizium. Utilizando técnicas de imuno-microscopia, mostramos a localização na superfície celular dos diferentes estágios de desenvolvimento do fungo. Mostramos também que a GAPDH localizada na superfície celular mantém a sua atividade enzimática. Utilizando ensaios de adesão de conídios de M. anisopliae em asas de insetos (Dysdercus peruvianus), mostramos que a GAPDH pode desempenhar uma função importante no processo de adesão do fungo na superfície do hospedeiro. Este trabalho descreve pela primeira vez a presença de isoformas de GAPDH, a sua localização na superfície celular e sua possível participação na adesão ao hospedeiro.GAPDH is essential in glycolysis and gluconeogenesis pathways and catalyzes the oxidative phosphorylation of glyceraldehyde-3-phosphate into 1,3- biphosphoglycerate in the presence of nicotinamide adenine nucleotide (NAD+) and inorganic phosphate, as well as the reverse reaction. The enzyme is an homotetramer of 36 kDa subunits. GAPDH has other important roles in various cellular processes. The gene gpdh1 (GAPDH) was found to display differential expression during growth of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae cultured in conditions mimicking host infection. This led us to search for other possible functions of the GAPDH in the fungus. Therefore, we characterized the expression patterns of GAPDH, both at the transcription and protein level; we characterized isoforms of the protein; we immunolocalized GAPDH in different cell types and assayed its participation in adhesion to host surface. The expression of transcripts and GAPDH is hierarchily regulated by the carbon source available in the cultures (glucose, glycerol, ethanol and complex substrates, such as chitin and cuticle). By using 2D-SDS-PAGE, anti- GAPDH serum and mass spectrometry, isoforms of the protein were detected. As GAPDH has been reported at cell surface of pathogenic microorganisms, we directed efforts to localize GAPDH in Metarhizium. By using immunomicroscopy we showed the presence of GAPDH at the surface of the different developmental cell types of the fungus. We have also shown that the GAPDH at cell surface has enzyme activity. In adhesion assays, using Metarhizium conidia and insect wings (Dysdercus peruvianus), we showed that the GAPDH may be important during the adhesion step of the fungus to the host during infection. In this work, for the first time, we show that GAPDH from Metarhizium anisopliae has isoforms; that the active GAPDH is present at the fungal cell surface and is probably important for fungal to host adhesion