Aplicação de polímeros biorreabsorvíveis em medicina cardiovascular

Biopolímeros são polímeros produzidos por várias espécies de organismos vivos incluindo microrganismos ou, até́ mesmo, obtidos sinteticamente. Os biopolímeros, quando comparados aos polímeros sintéticos, apresentam algumas vantagens, como estruturas bem definidas e de maior complexidade, degradabilidade e reciclabilidade, que determinam vantagens em seu uso. Seu emprego industrial é amplo e compreende materiais médicos, embalagens, cosméticos, aditivos para alimentos, tecidos, produtos para tratamento de água, plásticos de emprego industrial, absorventes, biossensores e dispositivos de armazenamento de dados. Neste cenário, diversos biopolímeros vêm sendo aplicados na medicina no preparo de implantes para reparo e substituição de ossos, olhos, orelhas, articulações de joelhos e quadril e, com destaque, para a confecção de implantes cardiovasculares como stents e valvas cardíacas. Dentre os diversos biopolímeros existentes, os polímeros biodegradáveis de poliésteres estão entre os mais utilizados na confecção de aparatos médicos, dentre os quais, destacam-se os derivados de Ácido poliláctico (PLA), Ácido Poliláctico-co-glicólico Poli-4-hidroxibutirato (P4HB), os quais, devidas as suas características de mecânicas e de biocompatibilidade e permitem um alto grau de modificações e seletividade para a produção de artigos médicos. Ainda, com os avanços científicos das últimas décadas, blendas diversas e modificações em sua estrutura/composição contornaram seus principais atributos adversos como a hidrofobicidade e a baixa adesão celular. Assim sendo, um volume substancial de pesquisas científicas vem sendo realizado para conferir aos poliésteres características específicas e distintas daquelas já comercialmente disponíveis. Esta revisão objetivou a produção, biocompatibilidade e na utilização de polímeros biodegradáveis preparados a partir de Ácido Polilático (PLA) e Poli-4-hidroxibutirato (P4HB), assim como em suas blendas com outros polímeros, na manufatura de stents e de substitutos para valvas cardíacas.

Caracterização funcional da proteína MxA: estudo do seu envolvimento com a mauinaria de SUMOilação

The human MxA protein is a member of the superfamily of GTPases dynamins. The so called Mx proteins are present in the majority of the vertebrate organisms investigated so far and contain two structural domains, named GTPase and CID-GED (stalk), besides the capabilities of homo-oligomerization and association with intracellular membranes. Moreover, the Mx proteins are strictly produced upon cell sensibilization with type I and III interferons. The vast antiviral activity against RNA and DNA viruses, including the Influenza virus and members of the bunyaviridae family, is among the functional properties of MxA. Moreover, MX1 epigenetic silencing is associated with cellular immortalization in neoplasias. Therefore, the study of MxA is of great interest as it is a key component of the Interferon-mediated pathways and cell proliferation control. Recentely, in a two-hybrid screen using a fetal brain cDNA library, it was possible to reveal that MxA interacts with proteins related to the post-translational modification process named SUMOylation and to the assemble of the nuclear bodies named PML-NBs and with proteins implicated in the control of transcription and apoptose. In this study, it was investigated the interaction between MxA and the components of the protein SUMOylation pathway. It was possible to confirm the physical interaction between MxA and Ubc9 and SUMO1, using co-immunopreciptation assay. Then, using the yeast two-hybrid system, it was possible to determine that the EIL (E67-interacting loop) region on SUMO1 interacts with the CID-GED domain of MxA without the requirement of the SIM sequences (SUMO-interacting motif) present in MxA. Moreover, it was determined that Ubc9 interacts with the GTPase domain of MxA and that MxA homo-oligomerization is important for its interaction with SUMO1 and Ubc9. Also, we were able to demonstrate for the first time that the protein MxA undergoes SUMOylation by SUMO1, SUMO2 and SUMO3. Finally, it ...A proteína MxA humana é membro da superfamília de GTPases dinaminas. De maneira geral, as chamadas proteínas Mx estão presentes na grande maioria dos organismos vertebrados, estudados até o momento, e possuem dois domínios estruturais, chamados GTPase e CID-GED (stalk), além da capacidade de homooligomerização e associação com membranas intracelulares. Além disso, as proteínas Mx são produzidas unicamente após a sensibilização celular por interferons do tipo I e III. Entre as propriedades funcionais de MxA, destaca-se a sua vasta atividade contra diferentes vírus de RNA e DNA, incluindo o vírus influenza e membros da família dos buniavírus. Além disso, o silenciamento gênico de MxA está associado ao fenótipo de imortalização celular em uma série de neoplasias. Assim, MxA desperta o interesse por ser uma das proteínas chave nas respostas mediadas por interferons e por estar envolvida no controle da proliferação celular. Recentemente, por meio de rastreamento de duplo-híbrido, utilizando uma biblioteca de cDNA preparada a partir de cérebro fetal humano, foi possível mostrar que MxA interage com fatores envolvidos no processo de SUMOilação de proteínas e na formação de corpúsculos nucleares denominados PMLNB e com uma série de proteínas relacionadas com o controle da transcrição e apoptose. Neste estudo, foi investigada a interação entre MxA e as proteínas envolvidas nos processo de SUMOilação. Assim, foi possível confirmar a interação física entre a proteína MxA e os ligantes Ubc9 e SUMO1, por ensaios de coimunoprecipitação. A seguir, através de ensaios de duplo-híbrido, foi possível determinar que a região EIL (E67-interacting Loop) de SUMO1 e o domínio CID-GED de MxA estão envolvidos na interação entre essas proteínas e que esta interação independe de sequências SIM (SUMO-interacting motif) presentes em MxA. Ainda, foi possível determinar que Ubc9 interage diretamente com ..

Busca de parceiros físicos por duplo-híbrido das proteínas ADAM23 e MX1, codificadas por genes metilados em câncer de cabeça e pescoço

A metilação de ilhas CpG em regiões regulatórias de vários genes tem sido descrita como um processo importante no silenciamento de genes supressores de tumor e diretamente envolvida no processo de carcinogênese de uma série de tumores. O estudo desses genes afetados pela metilação em tumores visa identificar possíveis marcadores moleculares para o diagnóstico, prognóstico e tratamento de tumores, além de possibilitar a descoberta de fatores importantes no processo biológico do câncer. Neste sentido, ao estudar o perfil diferencial de metilação de genes em carcinomas de células escamosas de cabeça e pescoço, o gene MX1 foi identificado como diferencialmente expresso. Correlação também foi encontrada entre o silenciamento de ADAM23 e estágios tardios da progressão tumoral neste tipo de câncer. Dessa forma, o presente estudo envolveu a identificação de ligantes celulares das proteínas ADAM23 e MX1 por meio de rastreamentos de duplo- híbrido, usando bibliotecas de cDNA de cérebro fetal humano. Inicialmente, foi realizado rastreamento com os domínios desintegrina e rico em cisteína (DIS-ACR) de ADAM23, com um total de 5,1x105 transformantes obtidos, dos quais somente 1 foi confirmado pelo ensaio de “plasmid linkage”. O candidato confirmado pelo “plasmid linkage”, identificado como SPRY1, foi considerado como falso positivo por ser uma proteína estritamente citoplasmática, não podendo, portanto, interagir fisicamente com os domínios DIS-ACR de ADAM23, que são extracelulares. Ainda, foi realizado rastreamento com a proteína MX1, que resultou em aproximadamente 1,0x106 transformantes, dos quais 74 foram confirmados pelo ensaio de duplo- híbrido e codificam para 9 ligantes já conhecidos e 21 ligantes prováveis de MX1. Entre esses ligantes prováveis estão proteínas que já haviam sido descritas como ligantes de MX1, incluindo a própria proteína MX1,...The methylation of CpG islands at regulatory regions of various genes has been described as an important process for the silencing of tumor suppressor genes and is directly involved in the carcinogenesis of a series of tumors. The study of these methylation-affected genes in tumors aims at identifying possible molecular markers for diagnostic, prognostic and treatment of such tumors, besides making possible the discovery of factors important for cancer biology. On this purpose, the study of differential pattern of gene methylation in head and neck squamous cell carcinoma identified the gene MX1 as differentially methylated. Together with this result, it was found a correlation between ADAM23 silencing and late stages of tumor progression in this type of cancer. In order to identify cellular ligands of ADAM23 and MX1, we performed two-hybrid screenings using fetal brain cDNA libraries. Initially, a screening with the disintegrin and cystein rich (DIS-ACR) domains of ADAM23 was accomplished, with an amount of 5,1x105 transformants obtained, out of which just one was confirmed by plasmid linkage assay and identified as SPRY1. However, it was considered a false positive since this protein is restricted to the cytoplasmatic compartment and, therefore, it may not physically bind the DIS-ACR domains of ADAM23, known to be extracellular. Additionally, a screening with the MX1 protein was performed, resulting in approximately 1.0x106 transformants, out of which 74 were confirmed by two-hybrid assay and revealed 9 already known and 21 putative ligands of MX1. Among the putative ligands there are proteins previously described as MX1 ligands, including MX1 itself, corroborating the results obtained in our screening. Moreover, most of the identified ligands are factors involved in protein SUMOylation, PML-NB assembly and proteins that are related to transcriptional control and apoptosis. The results ... (Complete abstract click electronic access below)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Rhabdoviruses, Antiviral Defense, and SUMO Pathway

WOS:000455313100025Small Ubiquitin-like MOdifier (SUMO) conjugation to proteins has essential roles in several processes including localization, stability, and function of several players implicated in intrinsic and innate immunity. In human, five paralogs of SUMO are known of which three are ubiquitously expressed (SUMO1, 2, and 3). Infection by rhabdoviruses triggers cellular responses through the activation of pattern recognition receptors, which leads to the production and secretion of interferon. This review will focus on the effects of the stable expression of the different SUMO paralogs or Ubc9 depletion on rhabdoviruses-induced interferon production and interferon signaling pathways as well as on the expression and functions of restriction factors conferring the resistance to rhabdoviruses

New ligands of the cellular retinoic acid-binding protein 2 (CRABP2) suggest a role for this protein in chromatin remodeling

Retinoic acid (RA) regulates the transcription of a series of genes involved in cell proliferation, differentiation and apoptosis by binding to the RA Receptor (RAR) and Retinoid X Receptor (RXR) heterodimers. The cellular retinoic acid-binding protein 2 (CRABP2) is involved in the transport of RA from the cytosol to specific RA receptors in the nucleus, acting as a coactivator of nuclear retinoid receptors. In order to have a better understanding of the role of CRABP2 in RA signaling, we used the yeast two-hybrid system as a tool for the identification of physical protein-protein interactions. Twenty-three putative CRABP2-interacting proteins were identified by screening in the presence of RA, five of which are related to transcription regulation or, more specifically, to the process of chromatin remodeling: t-complex 1 (TCP1); H3 histone, family 3A (H3F3A); H3 histone, family 3B (H3F3B); β-tubulin (TUBB) and SR-related CTD-associated factor 1 (SCAF1). These results suggest a more direct role for CRABP2 in chromatin remodeling and may be a starting point for the elucidation of the fine-tuning control of transcription by RA receptors.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Papel da proteína Mx1 na resposta a interferons e no processo neoplásico

The Mx1 protein is encoded by an interferon- induced gene and shares domain organization, homooligomerization capacity and membrane association with the large dynamin-like GTPases. The Mx1 protein is involved in the response to a large number of RNA viruses, such as the bunyavirus family and the influenza virus. Interestingly, it has also been found as a methylation-silenced gene in several types of neoplasm, including head and neck squamous cell carcinoma. In this scenario, MX1 gene silencing is associated with immortalization in several neoplastic cell lines. Thus, Mx1 stands out as one of the key proteins involved in interferon-induced immune response and also plays an important role in cell cycle control. Here we discuss some of the functions of the Mx1 protein, including its antiviral activity, protein folding and involvement in neoplasia, as well as those revealed by investigating its cellular partners.A proteína Mx1 é codificada por um gene induzido por interferon e compartilha a organização de seus domínios, a capacidade de homo-oligomerização e associação com membranas com as grandes dinaminas GTPases. A proteína Mx1 está envolvida na resposta contra um grande número de vírus de RNA, como aqueles pertencentes à família Buniavírus e o vírus influenza. Curiosamente, o gene MX1 foi encontrado como silenciado por metilação em diversos processos neoplásicos, incluindo carcinomas de cabeça e pescoço de células escamosas. Neste cenário, o silenciamento gênico de MX1 está associado à imortalização de uma série de linhagens celulares neoplásicas. Assim, Mx1 se destaca como uma das principais proteínas envolvidas nas respostas imunes induzidas por interferon e também desempenha um importante papel no controle do ciclo celular. Aqui discutimos os aspectos funcionais da proteína Mx1 abordando sua atividade antiviral, organização estrutural, envolvimento com neoplasias e, principalmente, os aspectos funcionais obtidos pela determinação de seus parceiros celulares. Palavras-Chave: Interferons. MX1. JAK/STAT. Vírus. Neoplasia. PML-NBs. SUMOilação