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    ATIVIDADE CITOTÓXICA DE Piper xylosteoides STEUD

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    Algumas espécies da família Piperaceae, tais como: Piper betle, Piper aborescens e Piper nigrumtêm sido relatadas na literatura por apresentarem substâncias com atividade citotóxica. A espécie Piperxylosteoides foi coletada no Estado do Rio Grande do Sul para investigação da atividade citotóxica.Inicialmente, extratos orgânicos e aquosos foram preparados a partir de folhas e galhos secos e adicionadosem cultivos de linhagens celulares provenientes de adenocarcinoma de células não pequenas de pulmão(NCI-H460) e carcinoma de cólon retal (HT29) derivadas de humanos. A atividade citotóxica foi avaliadaapós 72 horas de incubação pelo ensaio de Sulforodamina B (SRB), tendo sido encontrado resultadopositivo para o extrato orgânico de folhas e galhos. A partir do extrato ativo foi realizado fracionamentocom solventes de polaridade crescente (hexano e clorofórmio). Os experimentos evidenciaram a presençade compostos ativos tanto na fração hexânica como na clorofórmica desta espécie, sendo os menoresvalores de IC50 (concentração de extrato necessária para promover inibição de 50% do crescimento celular)encontrados para a segunda fração: 0,62 e 0,66 μg/ml nas linhagens HT29 e NCI-H460, respectivamente. Esta fração ativa encontra-se atualmente na fase de separação e purificação bioguiada de seuscompostos ativos

    Engineering high-level production of fatty alcohols by Saccharomyces cerevisiae from lignocellulosic feedstocks

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    Fatty alcohols in the C12-C18 range are used in personal care products, lubricants, and potentially biofuels. These compounds can be produced from the fatty acid pathway by a fatty acid reductase (FAR), yet yields from the preferred industrial host Saccharomyces cerevisiae remain under 2% of the theoretical maximum from glucose. Here we improved titer and yield of fatty alcohols using an approach involving quantitative analysis of protein levels and metabolic flux, engineering enzyme level and localization, pull-push-block engineering of carbon flux, and cofactor balancing. We compared four heterologous FARs, finding highest activity and endoplasmic reticulum localization from a Mus musculus FAR. After screening an additional twenty-one single-gene edits, we identified increasing FAR expression; deleting competing reactions encoded by DGA1, HFD1, and ADH6; overexpressing a mutant acetyl-CoA carboxylase; limiting NADPH and carbon usage by the glutamate dehydrogenase encoded by GDH1; and overexpressing the Δ9-desaturase encoded by OLE1 as successful strategies to improve titer. Our final strain produced 1.2\ua0g/L fatty alcohols in shake flasks, and 6.0\ua0g/L in fed-batch fermentation, corresponding to ~ 20% of the maximum theoretical yield from glucose, the highest titers and yields reported to date in S. cerevisiae. We further demonstrate high-level production from lignocellulosic feedstocks derived from ionic-liquid treated switchgrass and sorghum, reaching 0.7\ua0g/L in shake flasks. Altogether, our work represents progress towards efficient and renewable microbial production of fatty acid-derived products
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