The role of Jagged1 in adult angiogenesis and in solid tumor development

Tese especialmente elaborada para obtenção do grau de Doutor em Ciências Veterinárias, especialidade de Ciências Biológicas e BiomédicasJagged1 (Jag1) is a Notch signaling ligand, which has been described as essential for developmental angiogenesis and to play an important role in several aspects of tumor biology. However the underlying mechanism related to Jagged1/Notch signaling still remain incompletely understood. Therefore this thesis analyzed Jagged1 driven Notch signaling enrolment in adult angiogenesis settings, and in tumor development. To address the role of endothelial Jag1 in physiological and tumoral angiogenesis, endothelial-specific Jag1 mutants driven angiogenic phenotypes were assessed in skin wound healing and in transplanted tumors and prostatic autochthonous tumor growth, respectively. An extensive transcription and expression analysis of Notch signaling members in the tumorigenic development of the mouse prostate was also performed to identify ectopically expressed Notch members. Lastly, the therapeutic potential of an Anti-Jagged1/2 antibody in mouse prostate cancer was evaluated. Altogether, results presented here demonstrate that Jagged1 is a pro-angiogenic ligand due to its ability to antagonize Dll4/Notch1 mediated signaling. It also has a pro-maturation function by both endothelial Notch4 and perivascular Notch3 mediated signaling. Both these functions contribute to accelerated wound healing and tumor growth, by inducing a more functional vasculature. Moreover, we have identified a new angiocrine function for endothelial Jagged1, mediated through Notch3/Hey1 activation in tumor cells. Finally, we have demonstrated that either by mediated endothelial-specific angiocrine function or by tumor cells mediated Jagged1 ectopic expression, this ligand regulated tumor cell proliferation, apoptosis, de-differentiation, epithelial-to-mesenchymal transition and cancer stem-like cells proliferation and survival. Ultimately, we have demonstrated that blocking Jagged-mediated Notch signaling inhibited development and progression of mouse prostate cancer and therefore constitutes a promising therapeutic approach in prostate cancer treatment.RESUMO - Avaliação do papel do ligando Jagged1 na regulação da angiogénese do adulto e no desenvolvimento de tumores sólidos - A via Notch é uma via de sinalização intercelular altamente conservada que está envolvida na determinação do destino, e na regulação da proliferação e diferenciação celulares. Jagged1 é um ligando desta via, que tem sido descrito como essencial ao processo de angiogénese durante o desenvolvimento embrinário e que desempenha um papel crucial em diversos aspectos de biologia tumoral. No processo do desenvolvimento angiogénico da retina, Jagged1 foi descrito como tendo um efeito contrário ao de outro ligando da via, o Dll4, mas esta interacção continua por demonstrar noutros contextos angiogénicos. Além de ser expresso na vasculatura, Jagged1 também é detectado em células epiteliais de vários órgãos. Em tumores já foi descrito que a expressão epitelial de Jagged1 aumenta ao longo do desenvolvimento tumoral. Jagged1 é desta forma considerado um marcador de mau prognóstico e de elevado potencial metastático em diversos tipos de cancro, nomeadamente da mama e da próstata. No entanto, o mecanismo intrínseco de sinalização Jagged1/Notch nos contextos acima referidos ainda permanence pouco compreendido. Como tal, o trabalho apresentado nesta tese descreve o papel do ligando Jagged1 na regulação da angiogénese fisiológica e sua interacção com o ligando Dll4. Descreve ainda o seu papel na angiogénese tumoral do adulto, no desenvolvimento de tumores da próstata e finalmente o potencial terapêutico do bloqueio dos ligandos Jagged no tratamento do cancro da próstata. Para investigar o papel do ligando Jagged1 no processo angiogénico do adulto recorreu-se ao uso de mutantes endoteliais específicos de ganho e perda-de-função de Jag1 (eJag1OE e eJag1cKO, respectivamente) num modelo de cicatrização de feridas cutâneas. Ainda neste contexto, para investigar as interacções entre os dois ligandos Notch, Jagged1 and Dll4, os mesmos modelos genéticos foram combinados com inibição farmacológica de Dll4 ou Jagged1, respectivamente. Além disso, os mesmos mutantes endoteliais específicos foram ainda utilizados na investigação do papel do ligando Jagged1 na angiogénese tumoral. Para este fim recorreu-se a dois modelos diferentes de tumores no ratinho: o modelo de tumores transplantados subcutaneamente de células Lewis Lung Carcinoma (LLC) e o modelo autóctone de tumor da próstata murino- Transgenic Adenocarcinoma of the Mouse Prostate (TRAMP). Em relação aos processos angiogénicos foram avaliados nos diferentes mutantes, e combinações, diversos parâmetros tais como: densidade, maturidade, funcionalidade e permeabilidade vasculares. Simultaneamente, as populações endoteliais e perivasculares dos diferentes mutantes foram isoladas e efectuada uma análise específica de transcrição de genes envolvidos na regulação da angiogénese nestes tipos celulares. Na avaliação do contributo do ligando Jagged1 expresso no endotélio para o desenvolvimento de tumores da próstata foram ainda analisados os pesos da próstata nos términos das experiências, as lesões classificadas histológicamente bem como outros aspectos de biologia tumoral, tais como proliferação, apoptose e diferenciação celulares e transição epitélio-mesenquimal. Foi também efectuada uma análise da transcrição e expressão dos membros da via de sinalização Notch, incluindo ligandos (Dll1, 3, 4 e Jagged1 e 2), receptores (Notch1-4) e efectores (Hes1, 2, 5 e Hey1, 2, L), em próstatas de ratinhos saudáveis e de ratinhos TRAMP. Esta análise foi efectuada para descrever a dinâmica dos membros da via de sinalização Notch na tumorigénese da próstata de forma a poder identificar membros ectopicamente expressos na próstata tumoral quando comparados com a próstata normal. Foram ainda isoladas as diferentes subpopulações celulares da próstata, basal, luminal e do estroma e os seus perfis transcripcionais comparados entre próstatas normais e com lesões tumorais (TRAMP). Por fim, avaliou-se o potencial terapêutico de um anticorpo anti-Jagged1/2 no tratamento do cancro da próstata, administrando um anticorpo bloqueador anti-Jagged1/2 aos ratinhos TRAMP. Estes ensaios terapêuticos foram realizados em duas janelas temporais distintas: numa fase precoce do desenvolvimento de tumores da próstata, das 12 às 18 semanas de idade e numa fase mais tardia, das 18 às 24 semanas de idade, simulando uma detecção precoce e tardia da doença nos humanos. A eficácia terapêutica foi avaliada pelos pesos da próstata no término da experiência, classificação histopatológica das lesões, análise da vasculatura, proliferação, apoptose e diferenciação celulares, alterações nos compartimentos celulares da próstata, transição epitélio-mesenquimal, e alterações da população de células cancerosas estaminais (CSCs). Nestes trabalhos foram utilizadas técnicas de imunofluorescência, imunohistoquímica, “fluorescent associated cell sorting” (FACS), e “quantitative real time PCR” (qRT-PCR). Colectivamente, os resultados aqui apresentados demonstram que Jagged1 é um ligando pró-angiogénico em contextos de angiogénese do adulto, tanto fisiológica como tumoral. No modelo de cicatrização de feridas foi demonstrado que os mutantes de ganho-de-função (eJag1OE) exibiam um processo de cicatrização de feridas cutâneas e de desenvolvimento de tumores sólidos acelerado, relativamente aos respectivos controlos, enquanto os mutantes de perda-de-função exibiam o fenótipo oposto. Estas diferenças fenotípicas entre os mutantes deveram-se aos primeiros exibirem uma vasculatura mais densa, com maior número de células de suporte, e portanto mais funcional e menos permeável, enquanto que os segundos exactamente o oposto. O papel pró-angiogénico do ligando Jagged1 foi também demonstrado ser exercido através de complexas interações com diferentes receptores Notch. Utilizando o modelo de cicatrização de feridas foi demonstrado que Jagged1 presente no endotélio regula negativamente a transcrição e activação de Notch1, e portanto bloqueia a activação de Notch1 mediada por Dll4. Ao contrário do que acontece com Notch1, foi também demonstrado que Jagged1 regula positivamente a transcrição e activação de Notch4. Esta observação foi averiguada tanto no contexto angiogénico fisiológico como tumoral. Adicionalmente, a sinalização por Jagged1/Notch4 foi implicada na maturação vascular, uma vez que quer as feridas e tumores dos mutantes eJag1OE quer as feridas de ratinhos administrados com um anticorpo Notch4 agonista exibiram aumento da maturação vascular. Também foi demostrado que Jagged1 endotelial é capaz de activar Notch3/HeyL expresso nas células perivasculares e assim também contribuir para a regulação do recrutamento dessas mesmas células de suporte, tornando a vasculatura mais funcional e menos permeável, contribuindo para a cicatrização e desenvolvimento tumorais. Adicionalmente, foi demonstrado que o ligando endotelial Jagged1 contribui para a displasia tumoral não só pela sua função pró-angiogénica, limitando o aporte de nutrientes e oxigénio às células tumoriais, mas também por uma função angiócrina mediada pela activação de Notch3 e expressão de Hey1 nas células tumorais. Desta forma, este ligando regula ainda a proliferação, apoptose e diferenciação das células tumorais prostáticas, assim como o processo de transição epitélio-mesenquimal. Inclusivamente, através do estudo da expressão dos diferentes components Notch na próstata tumoral versus próstata normal, o eixo Jagged1/2/Notch3/Hey1 foi identificado como estando ectopicamente expresso no tecido prostático tumoral. Esta observação sugere então que para a regulação dos processos tumorigénicos referidos anteriormente, não só é importante o papel pró-angiogénico e angiócrino do ligando Jagged1 endotelial, mas também o seu papel directo decorrente da expressão aumentada ao nível das células tumorais. Por último, foi demonstrado que o bloqueio da sinalização Notch mediada pelos ligandos Jagged inibe o desenvolvimento e progressão de tumores da próstata do ratinho e que como tal, pode constituir uma nova potencial abordagem terapêutica no tratamento do cancro da próstata. O bloqueio de Jagged1/2 mimetizou o fenótipo vascular decorrente da perda-de-função endotelial específica de Jagged1, produzindo uma neo-vascularização menos densa, imatura e consequentemente menos funcional e mais permeável, inibindo fortemente o desenvolvimento de tumores da próstata murinos. De forma semelhante ao verificado nos mutantes de perda-de-função, o bloqueio de ambos os ligandos Jagged levou à inibição do crescimento celular próstático, restingindo a proliferação e promovendo a apoptose celular e inibindo a transição epitélio-mesenquimal. Adicionalmente, o tratamento com o anticorpo bloqueador também teve um efeito protector relativamente às alterações nos compartimentos celulares decorrentes da displasia prostática. O tratamento minimizou a perda da identidade celular luminal, inibiu a proliferação do compartimento basal e a des-diferenciação de um fenótipo luminal para um mais basal. O bloqueio de Jagged1/2 também apresentou um efeito benéfico ao nível da regulação do “pool” de células cancerosas estaminais da próstata, apresentado um efeito inibitório sobre a sua proliferação e sobrevivência. Adicionalmente, as amostras tratadas com anti-Jagged1/2 apresentaram uma significativa sub-expressão de Notch3 e Hey1 nesta subpopulação celular. Em conclusão, os resultados aqui apresentados contribuem para uma compreensão mais abrangente do papel do ligando Jaged1 no organismo adulto, fora do sistema nervoso central, inclusivamente em cenários tumorais, como o caso do cancro da próstata. De forma mais específica, a sinalização mediada por Jagged1, foi demonstrada ser uma rede complexa envolvendo múltiplos aspectos em diferentes tipos celulares e dependente do receptor envolvido. No endotélio Jagged1 actua como um ligando pró-angiogénico através de um efeito antagonístico a Dll4/Notch1 e mediado quer pela activação de Notch4/Hey1 no endotélio quer pela activação de Notch3/HeyL nas células perivasculares. Também foi importante verificar que ambas estas funções da sinalização por Jagged1/Notch são altamente conservadas em diferentes contextos no adulto, incluindo nos processos angiogénicos fisiológicos e patológicos. O ligando Jagged1 expresso por células endoteliais exerce ainda um papel angiócrino mediado pela activação de Notch3 e expressão de Hey1 na regulação do desenvolvimento tumoral da próstata. Esta função angiócrina juntamente com a expressão ectópica dos ligandos Jagged nos tecidos tumorais da próstata do ratinho constituem importantes fontes de regulação dos diversos aspectos da biologia tumoral. O bloqueio de Jagged1 pode desta forma vir a constituir um nova e promissora forma terapêutica no tratamento do cancro da próstata.CIISA - Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Anima

um mediador expressivo mobilizado pelo enfermeiro com adolescentes em sofrimento mental

A adolescência, é conceptualizada como o período ocorrido entre a infância e a vida adulta, sendo uma etapa do ciclo de vida, marcada por profundas transformações físicas, psicológicas, sociais, afetivas e emocionais, podendo constituir-se, momento de vulnerabilidade, foco do cuidado da Enfermagem. Estudos recentes, desenvolvidos no decorrer da realidade pandémica, pela infeção COVID -19, causada pelo SARS-COV-2, veem espelhar o grande impacto que esta situação de saúde pública, trouxe à sociedade e em particular aos adolescentes, traduzindo-se em comportamentos desadaptativos, preditores de sofrimento mental. Sensível a estas necessidades emergentes, o Enfermeiro Especialista em Enfermagem de Saúde Mental e Psiquiátrica, tem um papel fulcral em promover/facilitar/capacitar uma transição mais equilibrada e harmoniosa, junto do adolescente em sofrimento mental. Este, detentor de uma compreensão singular do fenómeno de sofrimento e de quanto isto implica no projeto de vida do indivíduo, desenvolve conhecimentos e vivencias que lhe conferem competências, e que por sua vez lhe permitem mobilizar-se como instrumento terapêutico, junto do individuo em sofrimento. Posto isto, contrariando o paradigma vivencial de algumas realidades atuais, as abordagens terapêuticas não farmacológicas adquirem particular importância, onde o recurso a mediadores expressivos, nomeadamente a música, se apresenta como um precioso instrumento na intervenção com adolescentes, por esta assumir parte integrante da sua vida. O percurso construído e descrito neste relatório, tem como objetivo: desenvolver competências na intervenção clínica especializada, mobilizando a música como mediador expressivo com adolescentes em sofrimento mental. Dividido em dois grandes momentos, contexto clínico e comunitário, em Unidades de Psiquiatria da Infância e da Adolescência, conseguiu-se demonstrar, através da narrativa dos jovens, que a música é um impactante mediador expressivo mobilizado pelo Enfermeiro, junto dos adolescentes em sofrimento mental, em intervenções individuais ou grupais, facilitando a expressão e a transição

A hidroterapia como método natural de alívio da dor durante o trabalho de parto

A elaboração do presente relatório de estágio pretende demonstrar o processo de aquisição de competências específicas, no decorrer do estágio de natureza profissional, nas áreas de gravidez com complicações, trabalho de parto, parto e pós-parto. Tem como suporte ao seu desenvolvimento o Regulamento de Competências de Cuidados Especializados definido pela Ordem dos Enfermeiros, bem como o regulamento do segundo ciclo do Curso de Mestrado em Enfermagem de Saúde Materna e Obstétrica, da Escola Superior de Enfermagem do Porto. Neste contexto, encontram-se descritas e fundamentadas, pela evidência científica mais atual, as intervenções que resultaram da tomada de decisão, subjacente a uma reflexão crítica constante, tendo por base a identificação dos focos de atenção, os diagnósticos de enfermagem e as respetivas intervenções em cuidados prestados à mulher, casal, recém-nascido e família, em prol de uma experiência de parto positiva e da promoção de uma transição para a parentalidade saudável e significativa, rumo a uma maior satisfação do novo papel (tornar-se mãe/pai). Partimos do pressuposto que o parto e o nascimento se revelam como sendo um dos acontecimentos mais importantes na vida do ser humano e, obviamente, da sociedade. Uma vez que a dor percecionada pela mulher durante o trabalho de parto está associada a este acontecimento, apresentamos um estudo sob forma de uma revisão integrativa da literatura, relativo à hidroterapia como um dos métodos de alívio da dor não farmacológicos, que pode ser um recurso utilizado pelos Enfermeiros Especialistas em Saúde Materna e Obstétrica. No sentido de promover a autoconfiança da parturiente para assumir o autocontrolo da dor e minimizar a ansiedade. O objetivo deste estudo é conhecer os benefícios da hidroterapia para promover o autocontrolo e minimizar a dor da parturiente durante o trabalho de parto. A questão estruturante deste estudo é: Qual a pertinência do recurso à hidroterapia pelo Enfermeiro Especialista em Saúde Materna e Obstétrica, como método natural, para promover o controlo da dor durante o trabalho de parto? Os resultados do estudo mostram que a hidroterapia pode e deve ser usada como estratégia de alívio da dor, sobretudo com maior impacto no primeiro estadio do trabalho de parto. Após reflexão, salienta-se que os objetivos propostos, bem como as competências preconizadas pela Ordem dos Enfermeiros foram atingidos

A Perceção da Necessidade do Tratamento Ortodôntico Por Parte dos Alunos de Uma Escola Básica e Secundária

O conceito de saúde oral relacionada com a qualidade de vida refere-se ao impacto que a saúde oral tem na qualidade de vida da população. Distúrbios da cavidade oral, como a má oclusão, podem afetar o bem-estar dos indivíduos afetados. A má oclusão é considerada um problema de saúde pública, visto que tem alta prevalência e pode afetar de forma negativa a qualidade de vida dos indivíduos. Os adolescentes consideram os diastemas e a mordida cruzada anterior como as más oclusões mais urgentes no que toca a necessidade de tratamento ortodôntico. Objetivos: Avaliar a perceção da necessidade do tratamento ortodôntico e estética do sorriso por parte dos alunos de uma escola básica e secundária. Materiais e Métodos: Entrega de questionários constituídos por 4 perguntas relativas ao sorriso dos alunos, 6 imagens referentes a más oclusões distintas e 5 imagens de sorrisos, em que foi pedido aos alunos que avaliassem quanto a necessidade de tratamento ortodôntico nas primeiras seis imagens e escolhessem o sorriso mais estético nas outras cinco imagens. Resultados/Conclusão: 28% dos alunos são portadores de aparelho fixo e/ou removível, sendo que são as faixas etárias de 14 e 15 anos em que se encontram a maioria desses alunos. 68% dos alunos gosta do seu sorriso, sendo que a maioria são do género feminino. Os alunos consideram o diastema inter-incisivo como a má oclusão mais urgente no que toca a necessidade de tratamento ortodôntico (93%) e a mordida aberta como a menos urgente (57%). 85% dos alunos escolheram o sorriso nº4 (sorriso no qual se reduziu a visibilidade dos corredores bucais) como o mais estético. O sorriso gengival e sorriso baixo não foram considerados os mais estéticos por nenhum aluno

o contributo do enfermeiro especialista em enfermagem de reabilitação

O cuidado transicional traduz-se num conjunto de ações que assegura a continuidade de cuidados na transição entre diferentes níveis de cuidado. Este estudo teve por objetivos: Identificar elementos facilitadores/dificultadores das diferentes dimensões da continuidade de cuidados; identificar oportunidades/desafios do Enfermeiro Especialista em Enfermagem de Reabilitação no cuidado transicional, no contexto hospitalar e comunitário e propor um protocolo para o cuidado transicional à pessoa adulta/idosa internada com necessidade de cuidados de Enfermagem de Reabilitação. Para lhes dar resposta foi desenvolvida uma Revisão Integrativa da Literatura e um Focus Group. Da Revisão Integrativa resultaram doze estudos. Após análise de conteúdo emergiram as categorias: pessoa alvo de cuidados transicionais; família envolvida na transição de cuidados; profissionais de saúde; estratégias de ação e políticas de saúde. No Focus Group participaram seis Enfermeiros Especialistas em Enfermagem de Reabilitação, do hospital e comunidade. Para a análise de conteúdo recorreu-se ao Software WebQDA, emergindo quatro categorias: Promoção da continuidade de cuidados, Enfermeiro de prática avançada como gestor dos cuidados, Capacitação da pessoa e cuidador, Promoção da coordenação de cuidados. A coordenação e integração dos cuidados revela-se um desafio persistente. O presente estudo permitiu identificar estratégias que minimizam o risco da fragmentação de cuidados e fomentam a participação da pessoa no cuidado transicional. Garantir o cuidado transicional é imperativo para incrementar a qualidade dos cuidados, a satisfação dos profissionais, dos clientes, e o desenvolvimento de um sistema de saúde sustentável.Transitional care is a set of actions that ensure continuity of care in the transition between different levels of care. This study aimed to: Identify elements that facilitate/difficult the different dimensions of continuity of care; identify opportunities/challenges of the Specialist Nurse in Rehabilitation Nursing in transitional care, in the hospital and community context, and propose a protocol for transitional care to the adult/elderly person hospitalized in need of Rehabilitation Nursing care. To respond to them, an Integrative Literature Review and a Focus Group were developed. The Integrative Literature Review resulted in twelve studies. After content analysis, the following categories emerged: person in transitional care; family involved in the transition of care; Health professionals; action strategies and health policies. Six Specialist Nurses in Rehabilitation Nursing, from the hospital and the community participated in the Focus Group. For content analysis, the WebQDA Software was used. Four categories emerged: Promoting continuity of care, Advanced practice nurse as care manager, Empowerment of the person and caregiver, Promoting care coordination. The coordination and integration of care proves to be a persistent challenge. This study allowed us to identify strategies that minimize the risk of fragmentation of care and encourage the person's participation in transitional care. Ensuring transitional care is imperative to increase the quality of care, the satisfaction of professionals, clients, and the development of a sustainable health system

Ativação de neutrófilos de indivíduos saudáveis e imunocomprometidos por promastigotas de Leishmania spp.

Os neutrófilos são as primeiras células polimorfonucleares do sistema imunitário inato a chegar ao local de infeção, constituindo a primeira linha de defesa contra agentes invasores, como no caso do parasita Leishmania. Este parasita é causador da leishmaniose que tem sido reportada em mais de 98 países e que pode afetar animais e seres humanos. As diferentes espécies do parasita podem causar leishmaniose com diferentes apresentações clinicas, das quais salientamos a leishmaniose visceral e a leishmaniose cutânea. O presente trabalho teve como objetivo analisar a resposta imunitária de células polimórficas nucleares (PMN) de indivíduos com diferentes competências imunitárias quando expostas a parasitas de espécies viscerais (L. infantum) e cutâneas (L. amazonensis, L. shawi e L. guyanensis). A internalização parasitária foi confirmada por microscopia optica. A ativação celular foi avaliada através de técnicas laboratoriais que permitaram analisar os mecanismos oxidativos, nomeadamente a produção de ião superóxido, a exocitose de grânulos ricos em enzimas proteolíticas, como é o caso específico da elastase neutrofilica (NE) e da catepsina G (CatG) e a libertação de armadilhas extracelulares (NET). Verificou-se que as espécies de Leishmania induzem a exocitose de CatG e a libertação de NET, independentemente da competência imunitária dos indivíduos estudados. Contudo, idêntica situação não se verifica no caso do stress oxidativo ou da libertação de NE. Leishmania spp. estimulou o stress oxidativo, com produção do ião superóxido, nos PMN de indivíduos saudáveis enquanto os PMN de indivíduos imunocomprometidos apenas parece ficar ativado na presença de L. infantum e de L. amazonensis apontando para mecanismos de ativação diversos decorrentes quer da espécie do parasita quer do nível imunitário do hospedeiro. Situação similar ocorreu na exocitose de grânulos ricos em NE. L. infantum e L. shawi estimularam a libertação de NE por PMN de indivíduos saudáveis e imunocomprometidos. Porém, os PMN de indivíduos com comprometimento da imunidade também responderam aos parasitas da espécie L. amazonensis enquanto que L. guyanensis unicamente induziu a exocitose de NE nos PMN de indivíduos saudáveis. Estes resultados apontam para a existência de especificidades próprias na ativação destes mecanismos relativamente às espécies de Leishmania e ao estado imunitário do hospedeiro. Estudos complementares são necessários para esclarecer o processo de ativação, bem como identificar os eventuais antigénios parasitários (ou até ilhas CpG) que conduzem a ativação de PMN humanos.Neutrophils are the first polymorphonuclear cells of the innate immune system to reach the infection site, providing the first line of defense against invading pathogens, such as the Leishmania parasite. This parasite causes leishmaniasis that has been reported over 98 countries, affecting both animals and human beings. Different species of the parasite can cause leishmaniasis with diverse clinical presentations, as is the case of visceral leishmaniasis and cutaneous leishmaniasis. The present study aimed to evaluate the immune response of polymorphic nuclear cells (PMN) of individuals with different immune competence when exposed to visceral (L. infantum) and cutaneous parasitic species (L. amazonensis, L. guyanensis and L. shawi). Uptake of parasites by PMN was confirmed by optical microscopy. Laboratory techniques were used to evaluate the PMN activation by assessing oxidative mechanisms, namely the production of ion superoxide exocytosis, exocytosis of granules rich in proteolytic enzymes, as is the specific case of neutrophil elastase (NE) and cathepsin G (CatG) and the release of extracellular traps (NET). It was found that the species of Leishmania induce CatG exocytosis and NET release, regardless of the immune competence of the studied subjects. On the contrary, in the case of oxidative stress or the release of NE some differences were observed between PMN from healthy and immuncompromised individuals. All species of Leishmania induced oxidative stress, with production of superoxide ion in PMN of healthy individuals. However, PMN of immunocompromised individuals just seems to be activated in the presence of L. infantum and L. amazonensis parasites, pointing to the possible existence of more than one activation mechanism in association with the immune competence of the host that can be specifically primed by a particular parasite species. A similar situation was observed in the exocytosis of granules rich in NE. L. infantum and L. shawi stimulated the release of NE by PMN isolated from healthy and immunocompromised individuals. However, PMN from individuals with impaired immunity also appeared to respond to L. amazonensis parasites while L. guyanensis only induced PMN from healthy individuals to exocytosis NE. These findings suggest that the presence of specific features in the activation of these particular mechanisms might be related to the species of Leishmania and also to the immune status of the host. Additional studies are needed to clarify the activation process and identify parasitic antigens (or even CpG islands) that direct cell activation

Scaffolds for Peripheral Nerve Regeneration, the Importance of In Vitro and In Vivo Studies for the Development of Cell-Based Therapies and Biomaterials: State of the Art

Human adult peripheral nerve injuries are a high incidence clinical problem that greatly affects patients’ quality of life. Although peripheral nervous system has intrinsic regenerative capacity, this occurs in an incomplete or poorly functional manner. When a nerve fiber loses its continuity with consequent damage of the basal lamina tubes, axon spontaneous regeneration is disorganized and mismatched. These phenomena translate in an inadequate nerve functional recovery and consequent musculoskeletal incapacity. Nerve grafts still remain the gold standard in peripheral injuries treatment. However, this approach contains its disadvantages such as the necessity of primary surgery to harvest the autografts, loss of a functional nerve, donor site morbidity and longer surgery procedures. Therefore, biomaterials and tissue engineering can provide efficient resources and alternatives to nerve injury repair not only by the development of biocompatible structures but also, introducing neurotrophic factors and cellular systems to stimulate optimum clinical outcome. In this chapter, a comprehensive state-of-the art picture of tissue-engineered nerve grafts scaffolds, their application in nerve regeneration along with latest advances in peripheral nerve repair and future perspectives will be discussed, including our own large experience in this field of knowledge

Crianças com Epilepsia do Lobo Temporal e Rendimento Escolar

A epilepsia é uma das doenças mais prevalentes na infância implicando como muitas outras riscos a nível psíquico e cognitivo da criança, o que torna pertinente o estudo da relação entre dificuldades de aprendizagem a nível da iniciação à leitura e matemática e a existência de epilepsia do lobo temporal. OBJETIVO: Avaliar e relacionar se crianças com Diagnóstico de Epilepsia do Lobo Temporal apresentam mais dificuldades no seu desempenho académico, especialmente nas áreas predominantes de Português e Matemática. MÉTODO: A amostra foi composta por 20 crianças de ambos os sexos, com idades compreendidas entre os 8 e os 13 anos, do 1º e 2º ciclo, pertencentes ao Agrupamento de Escolas José Saraiva e Agrupamento de Escolas Rainha Santa Isabel de Leiria. As crianças foram divididas em dois drupos distintos, sendo o grupo experimental (G1), composto por 10 crianças com Diagnóstico de Epilepsia do Lobo Temporal, e o grupo de controlo (G2), por 10 crianças sem Diagnóstico de Epilepsia e de outras patologias que pudessem comprometer o seu desenvolvimento cognitivo. Através de um questionário sóciodemográfico foram recolhidos dados relativos à gravidez, ao desenvolvimento da criança, à sua história educacional e ao historial clínico de ambos os grupos. A avaliação das crianças foi realizada através da aplicação da WISC-III, do Teste de Atenção d2, do Teste de Figuras Complexas de Rey e do Teste de Avaliação da Fluência e Precisão de Leitura – O Rei. O rendimento académico foi assumido como correspondendo ao nível das notas de Português e Matemática. CONCLUSÃO: A análise dos resultados permite concluir que a presença de Epilepsia do Lobo Temporal na criança, repercute-se negativamente no rendimento escolar da mesma. Há diferenças estatisticamente significativas nos Q.I.´s em todos os domínios da escala. Podemos ainda verificar que as crianças com Epilepsia do Lobo Temporal apresentam piores notas em Português e Matemática, bem como dificuldades de memória, atenção e leitura. / Epilepsy is one of the most prevalent diseases in childhood, involving, as many others, risks to the psychic and cognitive development of children. In this way it becomes pertinent to study the relationship between learning difficulties - in terms of reading and mathematical skills - and the existence of temporal lobe epilepsy. AIM: To evaluate whether children with Diagnosis of Temporal Lobe Epilepsy present more difficulties in their academic performance. The main focus is turned to the areas of Portuguese and Mathematics. MATERIAL AND METHODS: The sample included 20 children of both sexes, aged between 8 and 13 years, from the 1st and 2nd cycle, belonging to the José Saraiva and Rainha Santa Isabel schools, from Leiria. The children were divided into two distinct groups: the experimental group (G1) consisted of 10 children with diagnosis of Temporal Lobe Epilepsy, and the control group (G2) of 10 children without the diagnosis of epilepsy (as well as other conditions that could compromise their cognitive development). Using a sociodemographic questionnaire, data regarding to pregnancy, child development, educational history and clinical history were collected. The evaluation of the children was performed by applying the WISC-III, the d2 Test of Attention, Rey’s Complex Figure Test and Evaluation of Reading Fluency and Accuracy. The academic performance was taken as corresponding to the grades of Portuguese and Mathematics. CONCLUSION: The results support the conclusion that the presence of Temporal Lobe Epilepsy in children has a negative impact on their school performance. There are statistically significant differences in IQs in all areas of the scale. We can also see that children with Temporal Lobe Epilepsy have worse grades in Mathematics and Portuguese, as well as difficulties in memory, attention and reading