O efeito das nanopartículas de ZnO nas células germinativas masculinas

Nowadays, a new concept of nanotechnology, “the nanomedicine” has been developed. Certain nanoparticles offer an exceptional set of characteristics that improve the diagnosis and treatment quality and efficacy on medicine. Zinc Oxide Nanoparticles (ZnO NPs) are a type of metal oxide nanoparticles with an extensive use, for example, in drug delivery systems, bioimaging and cancer therapy. Several authors have focused on biosafety studies of ZnO NPs, as their size and surface area favour the entrance and accumulation in organism, which can induce toxic effects. ZnO NPs have been identified, as a dose and time dependent cytotoxic inducer in testis and in some male germ cells, like spermatozoa and spermatocyte. In this way, it is important to understand the consequences of ZnO NPs exposure on the first cell stage of spermatogenesis, the spermatogonia. Thus, the aim of this work was to evaluate the effects of ZnO NPs on spermatogonia. GC-1 spg cell line derived from spermatogonia of mouse testes was treated with different concentrations of ZnO NPs, namely 0, 1, 5, 8, 10 and 20 μg/ml for 6 hours and 12 hours. The study was divided into two stages. Firstly, cytotoxicity resulting from exposure to ZnO NPs was evaluated through cell viability assays, intracellular ROS detection, progression of apoptosis/necrosis analysis and levels of DNA damage. At the end, cytoskeleton protein levels (acetylated α-tubulin, β-tubulin, β-actin and F-actin) and the nuclear intern protein Sun1 were assessed. According with results, higher concentrations of ZnO NPs have a toxic effect in GC-1: viability decreased, ROS intracellular levels production, DNA damage and cell death ratio increase. Further, at cytoskeleton and nucleoskeleton level, significant changes were verified. In conclusion, ZnO NPs induce cytotoxic effects on GC-1 cells in a time and dose-dependent manner. Short time exposure and low concentration of zinc oxide nanoparticles do not induce cytotoxicity on spermatogonia.Atualmente, um novo conceito de nanotecnologia, “a nanomedicina” foi desenvolvido. Certas nanopartículas oferecem um conjunto excecional de características que melhoram a qualidade e a eficácia do diagnóstico e dos tratamentos na medicina. Nanopartículas de óxido de zinco (NPs de ZnO) são um tipo de nanopartículas de óxido de metal muito usadas, por exemplo, em sistemas de administração de fármacos, em bioimagem e no tratamento do cancro. Alguns autores têm-se concentrado no estudo da biossegurança das NPs de ZnO, uma vez que o seu tamanho e área de superfície permitema entrada e acumulação no organismo, o que pode induzir efeitos tóxicos. As NPs de ZnO foram identificadas, como indutoras de citotoxicidade dependente da dose e do tempo de exposição no testículo e em algumas células germinativas masculinas como os espermatozóides e os espermatócitos. Desta forma é importante conhecer as consequências da exposição a NPs de ZnO no primeiro estadio celular da espermatogénese, a espermatogónia. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos das NPs de ZnO na espermatogónia. A linha celular GC-1 spg derivada das espermatogónias de testículos de ratinho foi tratada com diferentes concentrações de ZnO NPs, nomeadamente 0, 1, 5, 8, 10 e 20 μg/ml durante 6 horas e 12 horas. O estudo foi dividido em duas etapas. Inicialmente, a citotoxicidade resultante da exposição a NPs de ZnO foi avaliada através de ensaios de viabilidade, deteção intracelular de ROS, análise da progressão da apoptose/necrose e os níveis de dano no DNA. No final, foram avaliados os níveis de proteínas do citoesqueleto (α-tubulina acetilada, β-tubulina, β-actina e F-actina) e da proteína nuclear interna Sun1. De acordo com os resultados, concentrações elevadas de NPs de ZnO têm um efeito tóxico em GC-1: a viabilidade decresce, a produção intracelular de ROS, o dano no DNA e os níveis de apoptose e necrose aumentam. Também ao nível do citoesqueleto e do nucleoesqueleto foram verificadas alterações significativas. Em suma, as NPs de ZnO induzem efeitos citotóxicos em células GC-1 de modo dependente da dose e do tempo. Curtos períodos de exposição e baixas concentrações de NPs de ZnO não induzem citotoxicidade em espermatogónias.Mestrado em Biomedicina Molecula

Corneal Tissue Engineering: New Applications for Corneal Stromal Stem Cells

The WHO estimates 10 million people in the World are blinded by corneal disease. For many conditions, transplantation of a donor cornea may restore vision. However, there is a global shortage of suitable tissue and a high risk of rejection. The potential of stem cell therapies and tissue engineering approaches to address this significant unmet clinical need was investigated. Limbal epithelial stem cells (LESC) maintain the epithelium, the outermost layer of the cornea, and can be successfully transplanted to restore vision. However, when scarring occurs, transplantation of corneal stroma is required. Human corneal stromal stem cells (CSSC) are involved in stroma maintenance and have previously been shown to restore transparency in cloudy mouse corneas without rejection. This study investigated the development of a surgeon friendly tissue equivalent (TE) for the therapeutic delivery of CSSC and LESCs. For the first time, human corneal rims were rendered transparent for imaging under the iDISCO protocol. CSSC were successfully isolated and characterised with mesenchymal stem cell (MSC) properties confirmed. RAFT-TE, a potential artificial ocular surface, has been extensively investigated by our group using research grade collagen (First Link; not suitable for clinical use). In this thesis, a comparative study was performed to show that Koken collagen (Good Manufacturing Practice compliant) is a suitable replacement for research grade collagen as it did not compromise RAFT-TE properties. Next, co-culture conditions for LESC and CSSC in RAFT-TE were optimised. First, the idea of co-delivering CSSC together with LESCS to the surface of RAFT-TE as a mixed population was trialled. This resulted in unexpected epithelial cell peeling. To overcome this challenge, CSSC were successfully cultured for the first time inside Koken RAFT-TE. CSSC formed cell clusters, remodelled the matrix, and migrated to the surface of the TE. It was also shown that they can be induced to differentiate towards the keratocyte lineage inside the TE. This work highlights the importance of considering clinical manufacturing standards early in the process of development. Overall, it provides valuable insights to develop personalised autologous therapies and off the shelf allogeneic strategies for restoring vision in patients with corneal blindness

Autoexame da cavidade oral: a importância no diagnóstico precoce

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas MonizAo longo dos anos tem existido um aumento de lesões não infeciosas, nomeadamente o cancro oral, e não só em Portugal como em todo o mundo. Como consequência tem existido um aumento do encargo social, pessoal e de toda a comunidade em si. É de consenso, que essas patologias são na sua maioria encontradas em estágios avançados, assim sendo o prognóstico torna-se menos positivo. O autoexame poderá ser um método de diagnóstico precoce eficaz, quando feito com a informação correta. Este estudo tem como objetivo perceber a importância dada ao autoexame da cavidade oral, por parte dos pacientes, em consultas de triagem da Clínica Egas Moniz. Bem como, fazer uma comparação entre a presença de lesões e hábitos nefastos, tais como: o consumo de álcool e tabaco. Este trabalho é obtido através de 118 questionários e observações clínicas. Os resultados demonstram que a informação relativa ao autoexame ainda não chegou à população de forma adequada e que há uma percentagem consideravelmente de indivíduos com lesão oral e com hábitos como o tabaco e o álcool

Estudos de desidratação de queijo

A utilização da ciência tem vindo a ser uma tendência para o desenvolvimento de novos produtos e de novas formas de obter o mesmo produto, por processos menos onerosos, aumentando o desempenho financeiro das empresas. No setor alimentar, alguns processos de desidratação são utilizados para garantir a qualidade dos produtos. Através deste processo, é também possível criar novos produtos. No presente trabalho é analisado o queijo, em particular os extremos da bola de queijo, cuja transformação é efetuada através de vários processos de desidratação, nomeadamente ar quente, liofilização e micro ondas. O intuito é a criação de um novo produto (snack) com base nestes excedentes e avaliar qual dos processos é o mais vantajoso. A avaliação dos métodos de desidratação supra citados prende-se com o tempo e custos para a criação deste novo produto. A secagem em micro ondas tem-se destacado na secagem de produtos alimentares pois é um processo mais rápido, implicando menores custos. O valor nutricional, textura e cor são fatores importante para o produto em causa. Para os três processos de desidratação referidos foram utilizadas temperaturas, potências e tempos diferentes. Para a desidratação por ar quente foram utilizadas temperaturas de 43 ºC e 52 ºC a uma velocidade constante do ar de 1,2 m/s. No processo de liofilização foram utilizados três tempos de secagem: 6 horas, 12 horas e 24 horas. O processo de micro ondas foi o que teve maior enfoque neste estudo contando com cinco potências diferente: 350W, 500W, 650W, 750W e 850W. Os tempos de secagem para este processo foram variáveis de acordo com a potência utilizada. Foi utilizado um fator comum para todos os ensaios: o valor da atividade da água (aw), cujo valor deve estar compreendido entre 0,3 e 0,4, conferindo segurança alimentar ao produto. Realizou-se também a avaliação da cor e da textura do produto obtido pelos três processos e uma análise nutricional para o processo de ar quente a 52 ºC e para o processo de micro ondas com potências de 750W e 850W. Foi ainda realizada uma prova sensorial, com provadores habituados à prova de queijo para estimar a opinião final dos consumidores. Os resultados obtidos permitiram constatar que a temperatura desempenha um papel fulcral no tempo de secagem, bem como na dureza do produto obtido. O aumento de potência do micro ondas potencia a diminuição do tempo de secagem. A potência utilizada altera o valor da textura do produto. A potência de 850W resultou num menor tempo de secagem e os parâmetros de cor foram mais preservados, tornando esta condição interessante para a secagem do produto.The science is becoming more often a tendency to develop new products or even to explore new ways of getting the same product using more effective and cheapest processes, improving businesses income by creating new products. In the food industry some drying processes are used to guarantee the quality of the product. By using these processes it is also possible to create new products. In this work the cheese will be analysed, more precisely the ball cheese edges whose transformation will be made by using multiple drying, methods such as hot-air drying, freeze drying and micro waves drying. The purpose is to create a new product (a snack) based on the cheese industry ball edges, and to assess which process is better. The previously mentioned drying methods will be analysed based on time and costs for the creation of the new product. The micro wave drying is becoming more used in the food industry because it’s faster with lower costs. The nutritional value, texture and colours are also important factors for this product. For the three drying processes different temperatures, times and powers were used. For hot-air drying temperatures of 43 ºC and 52 ºC were used and air speed of 1,2m/s. In the freeze drying process three drying times were used: 6 hours, 16 hours and 24 hours. The microwave drying process was the most focused process in this study by using 5 different microwave power: 350W, 500W, 650W, 750W and 850W. The drying times for this process was variable according to the power used. In all processes tthere was used a common factor: the water activity value (aw), which value should be between 0.3 and 0.4, assuring the food safety of the product. Some evaluations were performed analysing the colour and texture of the product obtained by each process, and a nutritional analysis for the hot-air drying processes carried out at 52 ºC and for the microwave processes with the 750W and 850W powers. A sensory test was also made, with a panel used to taste cheese in order to evaluate the final opinion of the consumers. The results showed that the temperature is relevant for the drying time, as well as it is important for the hardness of the obtained product. The microwave power increase induces the reduction of the drying time. The power used alters the texture of the resulting product. The 850W power reduced the drying time, and the colour parameters where better preserved, showing that this power is interesting for the product dehydration

Characterization of potential drug-drug interactions with vitamin K antagonists and its influence on blood clotting

info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Aplicação de nanotecnologia na remediação ambiental: uso de nanopartículas de ferro zero valente (NZVI) em materiais contaminados

Realizou-se um ensaio laboratorial para avaliação do efeito da aplicação de nanotecnologia na descontaminação de solos e aluviões com elevados teores de metais pesados (Zn, Cu, Cr, Co, Cd, Pb, Ni) e de As. Recorreu-se à injecção de uma suspensão de nanopartículas de ferro zero valente (nZVI) com 3 concentrações distintas (1 g/L, 3g/L e 7g/L). Para a maioria dos elementos a retenção pelas nZVI foi proporcional à concentração das suspensões injectadas e a evolução foi semelhante. Os metais foram imobilizados por mecanismos de adsorção na camada superficial de óxidos de ferro que reveste as nanopartículas e/ou por mecanismos de complexação, co-precipitação e redução química. Após 60 dias de injecção as nZVI perderam a reactividade, tendo as espécies retidas sido dessorvidas e passado de novo para a fase solúvel, situação que se observou ao fim de 120 dias. A avaliação da eficiência das nZVI na diminuição do índice de contaminação destes materiais foi positiva, embora tenha ocorrido uma perda de reactividade após 60 dias de injecção. A baixa permeabilidade da maioria dos materiais dificulta a injecção e a difusão das nZVI, pelo que, uma técnica mais eficaz será a utilização de macro partículas de ferro zero valente, mais estáveis e como enchimento de barreiras reactivas